Средство для определения перекиси водорода в биологических жидкостях

 

Изобретение относится к средствам экспресс-анализа перекиси водорода . Цель изобретения - удлинение срока хранения средства. Средство представляет собой индикаторные полоски бумаги, на которые нанесены индикатор окисления, стабилизатор ДЛЯ загциты индикаторов от быстрого окисления, пероксидаза, буферный раствор с рН 5,0-5,5, комплексообразователь для связывания ионов тяжелых металлов, загуститель для предотвращения выцветания индикаторной бумажки и смачиватель. Индикаторная бумага проявляет в пределах концентрации глюкозы 30 - 2000 мг на 10 мл мочи возрастаюп15то по интенсивности зеленую окраску. 3 з.п. ф-лы. § сг с

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

C0UHAËИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК! б ь !

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К llATEHTY

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЦТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 2599514/28-14 (2?) 07.04.78 (31) P ?7160607 (32) 09.04.77 .(33) DE (46) 07.02.89. Бюл. К - 5 (71) Берингер Каннхайм ГмбХ (DF) (72) Вальтер Риттерсдорф, Хуго Тидеманн, Вольфганг Вернер (DE) и Ханс

Вилингер (АТ) (53) 616.07(088.8) (56) Патент

Цель изобретения — удлинение срока хранения средства, связывание ионов тяжелых металлов, препятствование эффекту вымывания и увеличение скорости проникновения водного тестового раствора.

Изобретение представляет собой индикаторные полоски бумаги (фильтровальная бумага, целлюлоза или искус„.80„„1457819 Аз

511 4 0 01 N 33/48 (54) ГРЕДСТВО ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЕРЕКИСИ ВОДОРОДА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ (57) Изобретение относится к средствам экспресс-анализа перекиси водорода. Цель изобретения — удлинение срока хранения средства. Гредство представляет собой индикаторные полоски бумаги, на которые нанесены индикатор окисления, стабилизатор для защиты индикаторов от быстрого окисления, пероксидаза, буферный раствор с рН 5,0-5,5, комплексообразователь для связывания ионов тяжелых металлов, загуститель для предотвращения выцветания индикаторной бумажки и смачиватель. Индикаторная бумага проявляет в пределах концентрации глюкозы 30 — ?000 мг на 10 мл мочи возрастающую по интенсивности зеленую окраску. 3 з.п. ф-лы. ственный нетканый материал), на которые нанесены: индикатор окисления (соединения бензидинового ряда, гетероциклические азины, а также гваяковая кислота), глубина окраски которого является мерой определяемого вещества и количество которого составляет 3-10-кратный избыток количества субстрата, т.е. 0,05 — 1 г на

100 мм раствора; стабилизатор общей

II формулы Ар-NH-NH-Г-NH для защиты индикаторов окисления от быстрого

1457819 окисления, т.е. для увеличения сох- . ранности средств, например 1-арилсемикарбаэид, н котором арильная группа заменена на метилфенил/оксиметил5 фенил или хлорфенил в качестве 0,0050,9 г на 100 мл; пероксидаза (75 U/мг), катализатор реакции, в количестве 0,1-0,2 r на 100 мл раствора; буферный раствор с рН 5,0-5,5 в количестве 0,05"0,5 r на 100 мл раствора; комплексообразователь (натрийметафосфат или соль этилендиаминтетрауксусная кислота) в количестве

0,05-0,5 r на 100 мл,цля связывания ионов тяжелых металлов, присутствие которых может дать ложнопротиноположную реакцию; загуститель (метилцеллюлоза или желатин, или полининилпирролидин) в количестве 0,5-5 r на

100 мл для предотвращения ныцветания поверхности индикаторной бумажки; смачиватель н количестве 0,1-0,5 г на 100 мл.

В качестве смачивающих веществ 25 применяют органические сульфаты или сульфонаты с длинными цепями, такие как натрийдодецилбензолсульфонат, диоктилнатрийсульфосукцинат или натрийлаурилсульфат, которые наносят на gp индикаторную бумажку для увеличения скорости проникновения водного тестого раствора.

Пример l. Опыт для доказательства скрытой крови в кале.

Фильтровальную бумагу (Шляйхерн йолль 597, N- F-Ird) последовательно пройитынают следующими растворами.

Раствор Х: 0,34 M КЛОДТА буфер

5,5 10 мл; поливинилпирролидон 300 мг; 40 дистиллированная вода до 100 мл.

Раствор II: гваяковая кислота

АЕ . = 260 130 мг; 1-фенилсеми/CIIe карбазид 65 мг; ацетон до 100 мл.

Вместо 1-фенилсемикарраэида может использоваться метилфенилсемикарбазид, оксиметилфенилсемикарбаэид или хлорфенилсемикарбазид в зквимолярном 50 количестве.

Индикаторные бумажки, изготовленные в.соответствии с указанным способом, стабильны в отношении воздействия света и воздуха. С целью идентификации крови кал наносят на индикаторную бумажку, дают ему подсохнуть и проявляют с обратной стороны с помощью перекисно-водородного раствора н спирте. При наличии патологического количества крови на индикаторной бумажке возникает по кругу отходящая от анализируемой пробы лучисто-голубая зона.

Пример 2. Идентификация крови в кале. ильтрональную бумагу (натман

Р 1) последовательно подвергают пропитке следующими растворами и высушивают.

Раствор Х: 0,34 M К.ЭДТА буфер рН 5,0 10 мл; диоктилнатрийсульфосукцинат 500 мл; метиловый спирт 20 мл; дистиллированная вода 80 мл.

I I

Раствор ХХ: 3,3 -5 5 -тетраметилбенэидин 400 мг; 1-фенилсемикарбаэид 100 мг; ацетон 100 мл.

После "проянления" нанесннного на индикаторную бумажку анализируемого вещества с помошью спиртового раствора перекиси водорода определяют патологические количества крови н кале по появлению вокруг аналйзи" руемого образца зеленой окраски. Та- кая индикаторная бумажка стабильна в отношении воздействия света и окисления воздухом.

Индикаторная бумажка, изготавливаемая по указанной рецептуре, но беэ 1-арилсемикарбаэида приобретает под, воздействием света и воздуха в течение короткого времени голубовато-зеленую окраску, не пригодную для диагностических целей.

Il p и м е р 3. Индентификация крови в кале. ильтровальную бумагу (Шляйхер и бюлль 597 NF-Хпй) поочередно подвергают пропитке следующими растворами и высушивают.

Раствор Х: соответствует раствору из примера 2.

Раствор II: 1--(P-этилоензтиаэолон (2)) -2-fl-Àåíèë-3-метил-4-этил1,2,4-триазолон (5)) -азин 100 мг;

l.-фенилсемикарбаэид 70 мг; ацетон

100 мл.

Такая индикаторная бумажка, но без l-арилсемикарбазида, меняет свою окраску уже в ходе реакции так, что н кале здоровых лиц может возникнуть неправильная положительная реакция, Пример 4. Идентификация крови в моче, н лимфе.

Фильтровальная бумага (Йляйхер и 16олль 23 HY) подвергается последо1457819 вательно пропитке следующими растворами, а также высушивается.

Раствор I: 1,2 М натрийцитратный буАер рН 5,25 35 мл; этилендиаминтетрауксусная кислота, двунатриевая соль О,1 г; диоктилнатрийсульАосукt ционат 0,5 г; 2,5-диметилгексан?,5-дигидропероксид (приблизительно

7ОХ) 1,6 г; фосАорно-кислый триморфолид 12,7 г; этанол 30 мл; дистиллиронанная вода до 100 мл.

Раствор II: 3,3,5,5 -тетраметилI I бензин 0,3 г; Аенантридин 0,2 г;

1-Аенилсемикарбазид 0,05 г; метанол: толуол (40:60) до 100 мл.

Индикаторная бумага такого рода практически не испытывает воздействия света и воздуха. Индикаторная бумага без 1-семикарбазида приобретает зеленую окраску после 5-10-минутной экспозиции на свету. Аналогичными неприятными свойствами обладает индикаторная бумага, которая пропитана вместо l-арилсемикарбазида, соответствующего предлагаемому изобретению, экнимолярными количествами аминогуанидина или семикарбазида, внеденного н раствор.

1-Фенилсемикарбазид может быть заменен эквимолярными количествами

1-(парахлорфенил)-семикарбазида, 1-(р-толила)"семикарбазида, 1-(р-метоксифенил)-семикарбазида, что не меняет свойств указанных индикаторных бумаг.

С помощью индикаторных бумаг, полученных в соответствии с указанным примером, кровь н моче и лимАе может быть идентифицирована с достаточной точностью и чувствительностью.

Пример 5. Индикаторные бумаги для идентификации глюкозы в моче.

Фильтрональную бумагу (1 1ляйхер, 1 1юлль, 2312) подвергают пропитке н высущиванию с помощью следующих растворов, Раствор I: глюкозооксидаза (55 П/мг) 500 мг; пероксидаза (75 U/ìã) 200 мг; тетразин 100 мг; дистиллированная вода 100 мл.

Растн ор II: 3, 3, 5, 5 -тетраметилбензидин 600 мг; 1-фенилсемикарбазид 50 мг; натрийлаурилАаркозинат 100 мг; дистиллированная вода 100 мл.

Изготовленная таким образом бумага является стабильной н отношении воздейстния света, воздуха, а также влаги воздуха и проявляет в пределах концентрации глюкозы 30 — 2000 мг на

10 мл мочи возрастающую по интенсинности зеленую индикаторную окрашивающую реакцию.

Пример 6. Индикаторная бумага для идентификации глюкозы в мо» че.

10 Фильтровальная бумага (Шляйхер, йолль, 2316) подвергается обработке пропиткой и высушиванию с помощью раствора следующего состава: динат-! риеная соль ?,? "азиноди- jl -этилхино15 линон (?)-дисульфоновой кислоты (6)j 100 мг; l-фенилсемикарбазид

50 мг, поливинилпирролидон ?50 мг; глюкозооксидаза (50 U/мг) 400 мг; пероксидаза (75 U/мг) 100 мг, 0,4 И

2О натрийцитратный буАер рН 5,0 100 мл.

Изготовленная таким образом индикаторная бумага позволяет определять концентрацию глюкозы н моче, начиная с 50 мг/10 мл за счет изменения ок25 раски при, увеличении интенсивности фиолетового цвета.

Формула изобретения

30 1. Средство для определения перекиси водорода н биологических жидкостях, содержащее нанесенные на впитывающую подложку пероксидазу, бубуАерный раствор с рН 5,0-5,5, индикатор окисления, выбранный из группы: бензидин, гетероциклический азин или гваяконая кислота, а также стабилизатор и дистиллированную воду, о т л и ч а.ю щ е е с я тем, что, с целью удлинения срока хранения, оно содержит l-арилсемикарбазид, н котором арильная группа может быть замещена на метилфенил, аксиметилфенил или хлорАенил, при следую45 щем соотношении компонентов, г:

Пероксидаза. 0,1-0,2

БуАерный раствор с рН 5,0-5,5 0,05-0,5

1-Арилсемикарбазид 0,005-0,9 указанный индикатор окисления 0,05-1,0

Дистиллирован.ная вода До 100 мл

?. Средство по и . 1, о т л и ч аю щ е е с я тем, что, с целью связывания ионов тяжелых металлов, оно дополнительно содержит комплексообразователь, выбранный из группы:

457819.

0,05-li0

0,05-0,5

0,005-0,9

0,1-0,5

25 ватель

Указанный индикатор окисления

Дистиллированная вода

0,05-1,0

До 100 мл

Составитель Л. Конюхова

Техред Л.Олийнык Корректор М. Демчик

Редактор И. Горная

Заказ 7495/59 Тираж 788 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета йо изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно †полиграфическ предприятие, r Ужгород, ул. Проектная, 4

7 1 натрийметафосфат или соль этилендиа-. минтетрауксусной кислоты при следую щем соотношении компонентов, r:

Пероксидаза 0,1.-0,2

Буферный раствор с рН 5,0-5,5 0,05-0,5

1-Арилсемикарбаэид 0,005-0,9

Укаэанный комплексообразователь

Указанный индикатор окисления 0,05-1,0

Дистиллированная вода До 100 мл

3. Средство по и. l о т л ич а ю щ е е с я тем, что, с целью препятствования эффекта выпивания, оно дополнительно содержит эагуститель, выбранный иэ группы: желатин, метнлцеллюлоза или поливинилпирролидон, при следующем соотношении компонентов, г:

Перок сида за О, 1-0, 2

Буферный раствор с рН 5,0-5,5 0,05-0,5

1-Арилсемикарбаэид 0,005-0,9

Указанный загуститель 0,5-5,0

Указанный индикатор окисления

Дистиллированная вода До 100 мл .

4. Средство по п. 1, о т л ич а ю щ е е с я тем, что, с целью

10 повышения качества целевого продукта за счет увеличения скорости проникновения водного тестового раствЬра в средство, оно дополнительно содержит смачиватель, выбранный иэ

15 группы: натрийдодецилбензолсульфонат, диоктилнатрийсульфосукцинат, натрийлаурилсульфонат, при следующем соотношении компонентов, г:

Пероксидаза 0,1-0,2

20 Буферный раствор с рН 5,0-5,5 О, 05-0, 5

1-Арилсемикарбазид

Указанный смачи