Способ дифференциальной диагностики хронического лимфолейкоза и злокачественной неходжкинской лимфомы

 

Изобретение относится к медицине , в частности онкологии и иммунологии и может быть использовано для дифференциальной диагностики хронического лимфолечкоэа (ХЛЛ) и злокачественной неходжкинской лимфомы (ЗИЛ). Цель изобретения - ускорение и упрощение способа. Выделяют лимфоциты больного, добавляют к ним сыворотку от пациентов с системной красной волчанкой, содержащую ауто-лимфоцитотоксические антитела, проводят лнмф1 дитотоксический тест и при наличии положительной реакции диагностируют злокачественную неходжкинскую лимфому в стадии лейкемизации, а при отрицательной - хронический лимфолейкоз. Способ отличается от известного способа, основанного на применении гистологического метода исследования (трепанобиоптата костного мозга), меньшей трудоемкостью и укорочением времени проведения исследования с трех суток до 5 ч. Предлагаемый способ по данным 53 гистологических и иммунологических исследований показал в 94,4% совпадение результатов с диагнозом ЗНЛ и в 88,6% - с ХЛЛ. 1 табл. i

(51) 5

OlllMGAHNE ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А В"ГОРО-(ОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ гос дюстнкнный номиткт иО ИВОБРетЕниям и ОтнРь тиям пРи Гинт сссР МЗИЗВЗЫ».»ЩФЖМИВВ (46) 23,! .,90, Бил. М 47 (21) 4254175/"8=14 (22) 29.05.87 (/1) Центральный научно-исследовательский институт гематологии и переливания крози (72) Е„А.Зотнков„ Л.Г,Ковалева, Л.Л.Головкина и И.Г.Севастьянова (53) 615.373(083.8) (56) Капланская И,Б. Костный мозг по данным трепанобиопсии при неходжкинских лимфомах, Канд.дисс.„ И., 1983. (54) СПОСОБ ДНФЕ1ЕНЦИЛПЬНОЙ ДИАГНОСТИ1И XPOHH×EÑÊOÃO ЛИМФОЛЕЙКОЗА И ЗЛО1ИЧЕСТВЕННОЙ НЕХОДЖКИНСКОЙ ХЦ4МФОМЫ

В СТЛДИИ ЛЕЙКЕИИЗЛЛИИ (57) Изобретение относится к медицн не, в частности онкологии и иммуноло.гии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики хронического лимфолейкоэа (ХЛЛ) и злокачественной неходжкинской лимфомы (ЗНЛ). Цель изобретения - ускорение

Изобретение относится к медицине, в частности к дифференциальной диагностике двух гематологических заболе» ваний хронического лимфолейкоза (XJi31) и злокачественной лимфоцитарно-пролимфоцитарной н нолимфоцитарнолимфобластной неходжкинской лимфомы (ЗНЛ) в стадии лейкемиэации (IV ст.}.

Целью изобретения является уско.рение и упрощение способа.

Способ осуцествляется следующим образом. Лимфоциты вьщеляют из дефибринированной крови больного путем центрифугирования ее на градиенте

„„SU„„1477086 А1 и упрощение способа. Вьщеляют лимфо питы больного, добавляют к ним сыворотку от пациентов с системной крас» ной волчанкой, содержащую ауто-лимфоцитотоксические антитела, проводят лимф .,цитотоксический тест и при наличии положительной реакции диагно.тируют злокачественную нехоцжкинскую лимфому в стадии .лейкемиэации, а при отрицательной - хронический лимфолейкоэ. Способ отличается от известного способа, основанного на применении гистологического метода исследования (трепанобиоптата каст» ного мозга), меньюей трудоемкостью и укорочением времени проведения ис- а следования с трех суток до 5 ч.

Предлагаемый способ по данным 53 гистологических и иммунологических ис следований показал в 94,4Е совгаде" ние результатов с диагнозом ЗНЛ и в .88,6X - с ХЛЛ. 1 табл.

@ha 3 вью плотности 1,077. В-лимфоциты выделяли получением розеток Т-лимфоцитов с О© бараньими эритроцитами и последующим 4Й

1 удалением их с помощью градиентного центрифугироваиия.

В каждую лунку микропланшеты Тарасаки с заранее раскапанными по

1 мкл сыворотками-реактивами добавля . + ют по 1 мкл взвеси В-лимфоцитов боль»: ных с концентрацией 2х10 мл в физио6 логическом растворе, растворе Хэнкса„ среде .199.

Содержимое лунок перемешивают е и помещают в холодильник при + 4- С

1477086 па 1 ч. Далее в лунки добавляют по

5 мкл комплемента и оставляют на

1 ч 45 мин при комнатной температуре, В качестве комплемента используют смесь сывороток 8-10 кроликов, нетоксичных в отношении лимфоцитов человека. Далее содержимое планшет встряхивают и добавляют по 1-2 мкл 1-2%-ного-трипанового синего, 10

Результаты оценивают положитель но при количестве мертвых клеток от

25% и вьппе, исходя из 4+ системы более чем с одной сывороткой, В качестве контроля одновременно с испытуемым образцом В-лимфоцитов больного реакцию проводят с В-лимфоцитами здоровых лиц. Реакция с В-лимфоцита ми здоровых лиц должна показывать по ложительный результат. При трактовке 20 результатов неббходимо учитывать, что лимфоциты больных хроническим лейкозом, как правило, не реагировали ,с аутолимфоцитотоксинами, в то время как лимфоциты больных злокачес-.венной неходжкичской лимфомой показывают положительный результат, Выполнение исследования занимает 4-5 ч.

II р и м е р 1. Больной В.К.Ф.

Дефибринированную;кровь больного развели в 2 раза средой 199, наслоили на градиент плотности и центрифугировали ?5 мин при 1500 oG/ìèí. Слой лимфоцитов, располагающиися на границе градиента и плазмы (интерфазу), собрали .и один раз отмыли средой

199. Клетки ресуспендировали в среде

199 с концентрацией 5000 в 1 мм

Один объем приготовленной взвеси лимфоцитов соединили с равным объе мом 0,5%-ной взвеси эритроцитов бара на, обраббтанных раствором нейрами нидазы, и смесь клеток инкубировали в течение 10 мин при температуре

37 С, после чего центрифугировали в течение 5 мин при 1000 об/мин и поме-; о щали в холодильник при 4 С на 1 ч, Затем осадок осторожно ресуспендиро." вали путем покачивания пробирки. Пос ле просчета Е-роэеткообраэующих клеток под микроскопом взвесь клеток наслоили на градиент плотности и центрифугировали при 1500 об/мин в течение 10 мин. Лимфоциты, находяшиеся в интерфазе, собирали, один

I раз отмывали и испольэовали в про " лонгированном варианте лимфоцитоток сической пробы.

В-лимфоциты больного реагировали с 7 из 8 тестовых сывороток следую- . щим образом, с одной сывороткой. — на 25% "мертвых клеток"; с тремя сыворотками — на 60%

1t мертвых клеток", с тремя сыворотками — на 100%

1I мертвых клеток".

Проведенное иммунологическое исследование свидетельствовало в пользу диагноза злокачественной неходжкинской лимфомы.

Клинически отмечался. очень быстрьпЪ темп развития заболевания. B течение двух лет резко увеличились размеры лимфоуэлов во всех периферических группах (до 5-7 см в диаметре),появились большие конгломераты мезенте- :. риальных и бронхопульмональных лимфо.узлов, увеличились печень и селезен-. ка. В периферической крови - тромбоцитопения (130,0 10 /л), лейкоциты

97,0 10 /л, лимфобласты 1%, пролимфоциты 4%, лимфоциты 92%. В пунктате костного мозга 52,б% лимфоидных элементов (лимфобласты 0,6%, пролимфоциты 1,6%, лимфоциты 50,4%). В трепанобиоптате: трехростковый состав кроветворных элементов. На этом фоне большое количество диффузно-узловатых разрастаний лимфоидных элементов в основном типа малых лимфоцитов с . примесью пролимфоцитов и лимфобластов. В пунктате лимфоузла — лимфоидная гиперплазия с преобладанием пролимфоцитов и лимфобластов.

Быстрый темп развития заболевания в сочетании с выраженным омоложением лимфоидных клеток в лимфоуэлах и с узловатым ростом лимфоидных элементов в костном мозге позволил предположить наличие лимфосаркомы, что и было подтверждено иммунологическими исследованиями, приведенными вьппе, Пример 2. Больной Д.Г.Н. Дефибринированную кровь больного развели

1Г2 раза средой 199, наслойли на градиент плотности и цеитрифугировали

25 мин при 1500 об/мин. Слой лимфоцитов, располагающийся на границе градиента и плазмы (интерфазу), соб.рали и один раз отмыли средой 199.

Клетки ресуспендировали в среде 199 с концентрацией 5000 в 1 мм . Один

3 объем приготовленной взвеси лимфоцитов соединили с равным объемом 0,5%1477086 сическнми антптелаип подтвердило

Способ показывает высокое совпадение с результатаии клинического и гистологического диагноза (таблица).

Ф о р мула изобретения ество больных, следованных огиче ульта шим с иагн

94,4

88,6

17

18

ЗНЛ

ХЛЛ

Составитель И.Башкаев

Техред И.Дидык, Корректор С.Шекмар

Редактор Л. Павлова

Заказ 4333 Тираж 510 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-,издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 ной взвеси эрптрс цптов барана, обработанных раствором нейраминидаэы, и смесь клеток инкубиронали в течение 10 мин при температуре 37 С, после чего центрифугировали в течение 5 иин при 1000 об/мин и поместили в холодильник при 4 С на 1 ч. Затем осадок осторожно ресуспендировали путем покачивания пробирки. После 1п подсчета E-розеткообраэующих клеток под микроскопом взвесь клеток наслои« ли на градиент плотности и центрифугировали прн 1500 сб/мин в течение

10 иин. Лиифоциты, находящиеся в 15 интерфаэе, собрали, один раэ отмыли и испольэовали в пролонгированном варианте лиифоцитотоксической пробы, В-лимфоциты больного не реагировали с сыворотками, содержащими ауто- 20 лимфоцитотоксические антитела. Иимунологический диагноз - ХЛЛ.

Клинически у больного наблюдали иикрополиадению, умеренные гепатои спленомегалию. В периферической крови — лейкоцитоз 40,0х10 /л, лиифоцитоэ 90%. В пунктате костного мозга

38,8% лиифоидных элементов (лимфобласты 1,2%, пролимфоциты 0,3%, лимфоциты 37%). В трепанобиоптате: интер"ЭО стициальная инфильтрация лимфоидными злеиентами типа малых лимфоцитов.

Клинический диагноз: хронический лимфолейкоз II стадии, медленный теип развитиЯ.. И унологическое исс едо" 35 вание - отсутствие реагирования лимфйщтов больного с аутолимфоцитотокдиагноз.

Предлагаемый иммунологический способ позволяет осуществить экспрессдифференциальную диагностику за 45 ч. Он прост в выполнении, дополняет существующий диагностический метод.

i .,вменение предлагаемого экспрессиетода дифференциальной диагHocTHKH оказывает существенное влияние на выбор характера "ерапии и своевременность ее начала.

Способ дифференциальной диагностики хронического лимфолейкоэа и злока" чественной неходжкпнской лимфомы в стадии лейкеиизацин, включающий исследование лимфоцктов больных, о тл и ч а ю m и и с я тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, к лимфоцитам больного добавляют сы» воротку от пациентов с системной красной волчанкой, содержащую ауто» лимфоцитотоксические антитела, IIpO водят лимфоцитотоксический тест и при наличии положительной реакции диагностируют злокачественную не-. ходжкинскую лимфому в стадии лейкемизации, а при отрицательной - хрони-, ческий лимфолейкоэ.