Способ диагностики аутоаллергических заболеваний

 

Изобретение относится к клинической иммунологии, в частности к способам диагностики хронических воспалительных заболеваний внутренних органов с аутоиммунным механизмом патогенеза . Целью изобретения является повышение точности диагностики и упрощение способа. У больных берут кровь, выделяют лимфоциты, отмывают в среде центрифугированием, ресуспендируюти доводят концентрацию клеток до I lO /мл, инкубируют с эритроцитами барана в присутствии тканевого антигена в количестве 0,1 мл, содержащем 1,5% белка, при температуре в течение I ч. После чего определяют количество розеткообразуюпщх клеток. При увеличении розеткообразукщих клеток .по сравнению с контролем (без антигена) диагностируют аутоаллерги- ..ческое заболевание. S (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

ÄÄSUÄÄ1467514 (5l)4 О О! Х 33/53

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H A ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4119208/28-14 (2?) 11.07,86 (46) 23 ° 03.89. Бюл, 1! - 11 (71) Крымский медицинский институт (72) А,М.Братчик, С.С.Обернихин, А,А,Хренов, А,В,Пуртов и В,Н,Зорин (53) 615.373(088.8) (56) Чернушенко Е,Ф., Косогорова Л.С,, Голубка Т,В, и др, В кн,: Аутоиммунные процессы и их роль в клинике внутренних болезней, — Киев: Здоровье, 1985, с.151-152, (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АУТОАЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ (.57) Изобретение относится к клинической иммунологии, в частности к способам диагностики хронических восИзобретение относится к клинической иммунологии, в частности к способам диагностики хронических воспалительных заболеваний внутренних органов с аутоиммунным механизмом патоген.ез а.

Цель изобретения — повышение точности диагностики и упрощение спосо-, ба, Способ осуществляют следующим образомм.

Для исследования берут 10 мл периферической крови из локтевой вены в пробирку с гепарином (20 ед/мл) . После отстаивания в течение 1 ч при

37 С из пробирки производят забор плазмы и разводят средой 199 в соотношении 1 . 2, Разведенную плазму осторожно наслаивают на градиент плотноспалительных заболеваний внутренних органов с аутоиммунным механизмом патогенеза. Целью изобретения является повышение точности диагностики и упрощение способа, У больных берут кровь, выделяют лимфоциты, отмывают в среде центрифугированием, ресуспендируют и доводят концентрацию клеток до 1 10 /мл, инкубируют с эритроцитами барана в присутствии тканевого антигена в количестве 0>1 мл, содержащем 1,57 белка, при температуре 4 С в течение 1 ч, После чего определяют количе ство розеткообразующих клеток.

При увеличении розеткообразующих клеток по сравнению с контролем (без а анти гена) диагностируют аутоалл ер ги,ческое заболевание, 2 ти 1,078 г/смэ фиколл-верографина и центрифугируют 30 мин при 1500 об/мин.

После центрифугирования пастеровской пипеткой отбирают лимфоцитарное кольцо на границе разделения фаз фиколл- верографин, Полученные клетки трижды отмывают средой 199 при 1000 об/жн в .,течение 10 мин, В камере Горяева производят подсчет клеток для определения концентрации взвеси с последующим доведением ее до 1-10 в 1 мл,.

В первую пробир ку вводя т О, 25 мл клеточной взвеси указ анной концентрации, О, 25 мл О, 57-ного раствора эритроцитов барана и О, 1 мл водно-соле-, вой вытяжки из тканевых антигенов, содержащей 1,57 белка (опыт), Центрифугируют при комнатной температуре

5 мин при 1000 об/мин с последующей

Формул а из о бр етения

Способ диагностики . аутоаллергических эабол.еваний, включающий забор крови у больных, выделение лимфоцитов, инкубацию их с антигеном и эритроцитами барана, определение роэеткообразующих клеток и при уменьшении количества розеткообразующих клеток по отношению к контролю диагностируют аутоаплергические заболевания, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и упрощенияспособа, инкубацию лимфоцитов, антигена и эритроцитов барана осуществляют одновременно, при этом анти ген используют в объеме 0,1 мп и концентрации белка 1,5Х, вченко

Корректор Л. Пилипенко

Заказ 1192/43 Тираж 788 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 з

14675 инкубацией в холодильнике при 4 С в течение 1 ч. После инкубации осадок ресуспендируют и в камере .Горяева определяют процент клеток образовав1

5 ших розетки с тремя и более эритроцитаья барана, По разнице Т-POK в контроле и опыте судят о сенсибилизации

Т-лимфоцитов к вводимому антигену.

Пример. Больной К:, 36 лет, поступил в клинику с диагнозом хронический обструктивный бронхит в фазе обострения, При проведении предла1 гаемого способа с введением в реакцию роэеткообразования 0,1 мп водно-соле- 15 вой вытяжки из неизмененной ткани легкого, содержащей 1,57 белка, были получены следующие результаты: контро Т-POK 60X, .oraaT Т-POK 377., Таким образом, 237 Т-лимфоцитов сенси- 2р билиэированы к нормальной легочной ткани, При введении в реакцию розеткообраэования 0,1 мл водно-солевой вытяжки иэ неизменной ткани печени, содержащей 1,57 белка, были получены 25 следующие результаты; контроль T-POK

607. q опыт Т-PQK 45X, т. е. выявлена сенсибилизация 15X T-лимфоцитов к неизменной ткани печени, При целенаправленном клиническом обследовании у 30 больного К, был выявлен хронический персистирующий гепатит, При проведении предлагаемого способа с лимфоци-. таьи больного К, и водно-солевыми вытяжками из других органов и тканей сенсибилизации Т-лимфоцитов не выявлено, Т-лимфоциты здоровых людей не снижали роэеткообраэующих свойств при проведении предлагаемого способа, Таким образом, предлагаемый способ позволяет с высокой степенью достоверности определять степень аутосенсибилизации T-лимфоцитов и при использовании набора стандартных анти-. 45 генов диагностировать патологический процесс на ранних стадиях, а также при латентном течении.

Из сравнения известного способа (7 POK (больные).15,8+3,2 и Ж POK (здоровые) 5,2+2,5, соответсвенно

Составитель В.Лито

Редактор Н.Тупица Техред И.Верес

14

4 ра0,05), и предлагаемого способа (% POK (больные) 14, !+0,4 и 7 POK (здоровые) 2,0+0,45, соответственно

p(0,001) видно, что предлагаемый способ более достоверен, так как показатель достоверности различий между данными практически здоровых и больных людей максимален — р<0,001; в то время как при известном способе он составляет лишь p(0,05, что обеспечивает большую точность диагностики °

Кроме того при параллельном сравнении из ве стно го и предлагаемо го способов выявлено преимущество последнего в скорости исполнения.исследований. Время исследования при известном способе 132,8+0,6 мин, при предлагаемом способе 113,3 0,5 мин (р 0,001).

Следовательно, на проведение исследования по предлагаемому способу требуется в 1,2 раза меньше времени, .чем при исследовании по известному способу, Так как известный способ не удалось воспроизвести в 6 случаях из

25 (247), а предлагаемый способ воспроизводится во всех 1007 случаев, можно сделать вывод, что предлагаемый способ более точен по сравнению с известным,