Штамм бактерий еsснеriснiа coli, предназначенный для идентификации r--плазмид

 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для идентификации R-плазмид у природных штаммов энтеробактерий, а также в эпидемиологических исследованиях в качестве эпидемиологического маркера. Целью изобретения является расширение диапазона идентификации природных R-плАзМид. Штамм получен путем трансформации в стандартный штамм E.COLI K12J53 плАзМиды PKMR 242-2. Плазмида первоначально обнаружена в штамме SHIGELLA SONNEI и пОлучилА ОбОзНАчЕНиЕ PKMR 242-2. Плазмида наделяет клетку-хозяина устойчивостью к тетрациклину и хлорамфениколу (200 мкг/мл), является конъюгативной, частота передачи 1,5х10<SP POS="POST">-5</SP>. pKMR 242-2 не наделяет клетки-хозяина чувствительностью к фагам, специфическим в отношении 1пс-групп F,I,N,P, способна ингибировать фертильность (FI<SP POS="POST">+</SP>). Молекулярная масса плазмидной ДНК 50Х10<SP POS="POST">6</SP> MD. Изученная плазмида относится к группе несовместимости X.

COIO3 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5Ð 4

° ф1

ОЛИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМ У СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4266259/28-13 (22) 22,06,87 (46) 15,05.89. Бюл. ¹ 18 (71) Ижевский медицинский институт и Кубанский медицинский институт им, Красной Армии (72) А,И.Коротяев и З.В,Шишкина (53) 576.851.48(088.8) (56) J. of Bacteriol. 1970, v.104, р.34-44. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLIs

ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ

R-ПЛАЗМИД (57) Изобретение относится к микробиологиии и може т б ыть исполь зов ано для идентификации R-плазмид у природных штаммов энтеробактерий, а также в эпидемиологических исследованиях в качестве эпидемиологического маркера.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для идентификации R-плазмид у природных штаммов энтеробактерий, а также в эпидемиологических исследованиях в качестве эпидемиологического маркера.

Цель изобретения — расширение диапазона идентификации природных Rплазмид, Сущностью изобретения является выявление R-плазмиды, принадлежащей к группе несовместимости Х, Плазмида была обнаружена у штамма S.sonnei, выделенного от больного острой дизентерией, и получила обо значение pKMR 242-2, Учитывая пато- .

ÄÄSUÄÄ 1479516 А1

Целью изобретения является расширение диапазона идентификации природных

R-плаэмид, Штамм получен путем трансформации в стандартный штамм Е.coli

K12I53 плазмиды pKMR 242-2, Плазмида первоначально обнаружена в штамме Shigella sonnei и получила обозначение pKMR 242-2, Плаэмида наделяет клетку-хозяина устойчивостью к тетрациклину и хлорамфениколу (200мкг/мл) является конъюгативной, частота передачи 1 5 ° 10 . pKMR 242-2 не наделяет клетки-хозяина чувствительностью к

C фагам, специфическим в отношении

1пс-групп F, Е,N,Р, способна ингибировать фертильность (г 1+) . Молекуляр6 Е ная масса плазмидной ДНК 50.10 mD.

Изученная плазмида относится к группе несовместимости Х.

Э б генность данного штамма, плазмиду передали в штамм Е.coli KI2I53Nal путем конъюгационного скрещивания, CO

Штамм депонирован в Центральном музее СЛ промышленных микроорганизмов инс титу" та ВНИИгенетика, коллекционный номер С5

В-3351, Штамм с плазмидой может быть использован для идентификации R-плазмид в эпидемиологических исследова- . ниях и в генно-инженерных работах, Свойства, выявленной плазмиды установлены с использованием генетических, физико-химических и микробиологических методик . Возможность использования плазмиды для идентификации

R-плазмид у диких штаммов энтеробактерий апробирована в случае идентифи1479516 кации R-факторов, обнаруженных у дизентерийных больегий, выделенных от больных, Морфологические признаки.

Клетки имеют вид прямых палочек:: :. величиной 1,5-3,0 х 0,3-0 5 мкм, слабо подвижныg перитрихи, спор и капсул не образуют, грамотрицательны, Культуральные признаки. На мясопептонном агаре колонии слегка выпуклые, полупрозрачные, с ровными краями, диаметр колоний 1-3 мм, на кровяном МПА круглые колонии без зоны гемолиза, полупрозрачные, на среде 15

Энда круглые колонии, окрашенные в темно-красный цвет с металлическим блеском, на голодной среде с метионином и пролином плоские, полупрозрачные колонии размером 1-3 мм (ауксо- 20 троф по метионину и пролину),на мясопептонном бульоне образует равномер" ное помутнение и осадок.

Физиологические признаки. Е,coli

В-3351 не образует оксидаэу, расщеп- 25 ляет глюкозу с образованием кислоты и газа, ферментирует арабинозу, лактозу, мальтозу, манноэу, сорбит, ксилозу, восстанавливает нитраты в нитриты, дает положительную реакцию 30 с метиловым красным, не ферментирует сахарозу, дульцит, мнозит, не усваивает цитрата натрия, не обладает уреаэной активностью, не образует ацетилметилкарбинола.

Г енетические особенности. Штамм

В-3351 freer хромосомную устойчивость к налидиксовой кислоте, ауксотроф по метионину и пролину, Плазмида наделяет клетку-хозяина устойчи- 40 востью к тетрациклину и хлорамфениколу (200 мкг/мл), является конъюгативной, Частота передачи 1,5 10

Плазмида pKMR 242-2 не наделяют клетки-хозяина чувствительностью к до норспецифическим фагам MS2, fd, fl, Я, j 2,If1, IRe, PR4, имеет Pi -фенотип.

Физико-химические свойства, Молекулярная масса плаэмидной ДНК

50 10 шЭ.

Пример. Отношение вновь выявленных плаэмид к группе несовместимости Х изучали по методу Datta, Перенос второй плазмиды в клетки микроорганизмов, несущих одну (резидентную) плазмиду, осуществляли при помощи канъюгационного скрещивания. Селекцию трансконъюгантов проводили на среде Энда па хромосомному маркеру реципиента и неперекрывающимся маркерам данорной плазмиды, На среде Энда с антибиотиками расчищали до 10 клонов-потомков, а затем не менее 30 клонов проверяли на свойства, характерные для каждой из плазмид, В том случае, если произошла элиминация резидентной плазмиды, проводили повторную проверку в противоположном направлении.

При скрещивании штамма Е,cols

C600 Rif с плаэмидой R6K ApSm со штаммом Е,coli I 53Nal, несущим исследуемую плазмиду с фенотипом ApSmTc создавали селективную среду ApNal . Установить произошла ли элиминация како й-либ о пла змиды ок а э ало сь нев о змо жным, так как вводимая и резидентная плазмиды имеют сходный фенотип, Чтобы провести этот опыт в качестве известной плазмиды использовали штамм, несущий плаэмиду pKMR 242-2 с фенотипом TcCm, Скрещивали штамм Е.coli

С 600 Rif с плаэмидой pIQCR 242-2

TcCm со штаммом Е.coli I53Nal, несущим исследуемую плаэмиду с фенотипом

ApSmTc, Для селекции трансконъюгантов создавали селективную среду Энда с антибиотиками TcCmNal Получили трансконъюганты с фенотипом TcCmNal, т.е. фенотип резидентной плазмиды утратился вследствие элиминации ее, Следовательно эти две плаэмиды являются несовместимыми.

Таким образом, использование данного штамма позволяет установить принадлежность исследуемых R-плазмид к группе несовместимости Х.

Формула изобретения

Штамм бактерий Escherichia coli

ВКП М В-3351, нреднаэначенный для идентификации R-плазмид.