Штамм энтерококков sтrертососсus fаесiuм, используемый для приготовления бактерийных препаратов
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для изготовления бактерийных лечебных препаратов, применяющихся с целью профилактики и лечения дисбактериозов кишечника. Целью изобретения является штамм STREPTOCOCCUS FAECIUM ВКПМ NB-4054 , обладающий высокой антагонистической активностью, эффективный для коррекции кишечной микрофлоры. Штамм обладает естественной не плазмидной устойчивостью к антибиотикам. Для получения препарата штамм засевают на жидкую среду Калины. Выросшую 1-суточную культуру энтерококков центрифугируют при 3,5 тыс. об/мин при 4°С в течение 20 мин. Осадок ресуспендируют в кипяченой воде или физиологическом растворе до концентрации 1<SP POS="POST">.</SP>10<SP POS="POST">9</SP> клеток в<SP POS="POST">1</SP>/мл. 0,5 мл такой суспензии составляет 1 дозу препарата для взрослого человека. Штамм безвреден, эффективен при использовании для коррекции микрофлоры кишечника при дисбактериозах. 3 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
COLlHAËИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН
„.Яц „„и872д
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР (21) 4360302/28-13 (22) 08.01.88 (46) 30.07.89. Бюл. № 28 (71) 2-й Московский государственный медицинский институт (72) В.М.Коршунов, Н.П.Иванова, Т.А.Логадырь и Б.А.Ефимов (53) 615.37 (088.8) (56) Патент CUA № 3713836, кл. А 23 К 1/00, 1973.
Руководство по вакцинному и сывороточному делу./Под ред. П.Н.Бургасова. N.: 1978, с. 88-101,,(54) ШТАММ ЗНТЕРОКОККОВ БТЕЕРТОСОССНБ
FAECIUI1 ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ БАКТЕРИЙНЫХ ПРЕПАРАТОВ (57) Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для изготовления бактерийных лечеб ных препаратов, применяющихся с
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при
:изготовлении бактерийных лечебных . препаратов, применяющихся для профи-"
:лактики и лечения дисбактериозов ки ,шечника.
Целью изобретения является штамм
Streptococcus faecium УДС-86, обла дающий высокой антагонистической, .кислотообразующей активностью, естественной не плаэмидной устойчивостью к антибиотикам, эффективный для коррекции кишечной микрофлоры.
Штамм Streptococcus faecium УДС-86 выделен иэ кишечника здорового человека и депонирован в коллекции (51)4 С 12 N 1/20, А 61 К 39/09 // (С 12 N 1/20, С 12 R 1:46) целью профилактики и лечения дисбактериозов кишечника. Целью изобретения является штамм Streptococcus
faecium BKIIM ¹ В-4054, обладающий высокой антагонистической активностью, эффективный для коррекции кишечной микрофлоры. Штамм обладает естественной не плазмидной устойчивостью к акнтибиотикам. Для получения препарата штамм засевают на жидкую среду Калины. Выросшую 1-суточную культуру энтерококков центрифугируют при 3,5 тыс. об/мин при
4 С в течение 20 мин. Осадок ресуспендируют в кипяченой воде или физио.логическом растворе до концентрации
1 х 10 клеток в 1 мл. 0,5 мл такой суспензии составляет 1 дозу препарата для взрослого человека. Штамм безвреден, эффективен при использовании для коррекции микрофлоры кишечника при дисбактериозах. 3 табл.
@hi культур промышленных микроорганизмов цр
ВНИИгенетика под номером В-4054.
Штамм Streptococcus faecium ВКПМ . В-4054 характеризуется следующими
3вииЬ свойствами, Культурально-морфологические свойства. Клетки кокковидной формы, располагаются в мазке попарно или короткими цепочками, грамположительны,спор и капсул не образуют.
При росте в мясо-пептонном бульо- 1 не с глюкозой и дрожжевым экстрактом, (МПБ) дают равномерное помутнение и осадок. На плотной среде (кровяной агар, мясо-пептонный агар) растут в виденепрозрачных сероватых колонний
1 л
10 r
20 г
20 r
3 1497211 с ровными краями диаметром 1-2 мм.
Колонии легко снимаются с агара, равномерно эмульгируются в физиологическом растворе хлористого натрия.
На среде Калины растут в виде голубых непрозрачных колоний с равными краями.
Физиологические свойства. Аэробы, при культивировании в МПБ при 37 С через 18-20 ч после посева в 1 мл среды вырастает 5 х 10З вЂ” 1 х 10 живых клеток. По мере роста культуры снижается рН среды, кислотность по
Тернеру за 24 ч культивирования дос- 15 тигает 250-270 T.
Биохимические свойства. Сбраживает мальтозу, целлобиозу, сахарозу, лактозу, маннит, салицин, маннозу, 1-арабинозу, не сбраживает Д-араби- 20 нозу, сорбит, рафинозу, рамнозу, глицерин, ксилозу, инозит, дульцит.
Штамм хорошо растет на средах с добавлением желчи.
Не дает гемолиза при росте на кро- 25 вяном агаре.
Устойчивость штамма Streptococcus
faecium ВКПМ NB-4054 к антибиотикам.
Минимальная ингибирующая концентра,ция, мкг/мл: линкомицин 1,0, левоми- 30 цетин 10,0, нитроксолин 100,0; гентамицин 4,0, нистатин 100,0; олеандомицин 1000,0, полимиксин 5000„0, канамицин 10000,0, клафоран 1000,0, ампициллин 1.,0.
Штамм обладает антагонистической
:активностью по отношению к стафилококку, К. lebsiella, К. coli 0«, > .S. dublini Sh. Zonnae, Pr. mirab.
Состав сред для выращивания : 40
Str. faecium ВКПМ NB-4054:
Мясо-пептонный бульон
Глюкоза
Дрожжевой экстракт 45 рН 7,0-7,4
Стерилизация 30 мин при 0,5 атм. I
Среда Brain Heart Jnfusion (Difcd)
Среда Brain Heart Jnfusion (Difco) с добавлением 2 агара.
Мясо-пептонный бульон 1 л
Глюкоза 10 г
Дрожжевой экстракт
55 с добавлением 2 агата.
Среда Калины, Кровяной агар.
Лабораторная проверка показала непатогенность Str. faecium BKIIH
NB-4054 для экспериментальных животных (мышей, крыс, морских свинок)., а также для людей.
Пример 1. Получение бактерийного препарата на основе Streptococcus faecium BKIIN NB-4054.
Штамм засевают на жидкую среду
Калины. Выросшую 1-суточную культуру энтерококков центрифугируют при
3,5 тыс. об/мин при 4 С в течение
20 мин. Осадок ресуспендируют в кипяченой и остуженной до комнатной температуры воде или физиологическом растворе хлористого натрия до концентрации 1 х 10 кл/мл. 0 5 мл такой суспензии составляет 1 дозу препарата для взрослого человека при использовании его для коррекции микрофлоры.
Препарат из энтерококков может быть получен в лиофилизированном виде .(ампулы, флаконы, таблетки) °
Пример 2. Изучение влияния
Str. faecium BKIIM NB-4054 на микрофлору кишечника мышей при химиотерапевтическом дисбактеризе.
Мьппи линии СВА быди разделены на две группы: опытную и контрольную.
Животным обеих групп вводят интрагастрально ампиокс в дозе 4 мг/мышь в течение 5 дней. Опытной группе с
1»го по 10-й день от начала эксперимента вводят интрагастрально энтерококк (штамм ВКПМ NB-4054) в количестве 5 х 108:клеток на мьппь. Животные контрольной группы вместо штамма энтерококков получают физиологический раствор в соответствующем объеме.
В результате изучения микрофлоры толстого кишечника на 1-й и 6-й день после отмены антибиотика было отмечено,.что пероральное введение животным штамма энтерококков обеспечивает эффективную нормализацию микрофлоры: уровень энтеробактерий на
6-й день составил lg 8,573+0,452 кл/г материала, в контрольной rpynne1g10,028+0, 111 кл/г, в то же время у животных опытной группы увеличивается содержание лактобактерий в толстом кишечнике — lg 8, 176 +
+ 0,048 кл/г, в то время как у животных контрольной 1 DvlIIIbI их число в основном не превьппает lg 6,948 +
+0,054 кл/г °, 5
14
Результаты представлены в табл. 1.
Пример 3„ Влияние препарата энтерококков Streptococcus faecium на восстановление микрофлоры кишечника при химиотерапевтическом дисбактериозе, обусловленном применением высоких терапевтических доз ампиокса.
Две группы мышей линии СВА (опытная и контрольная в течение 5 дней интрагастрально получают антибиотик в дозе 20 мг/мышь в сутки. Животным опытной группы с 1-го по 10-й день от начала эксперимента интрагастрально вводят штамм энтерококков BIGIM
NB-4054 в количестве 5 х 10 клеток
8 на мышь. Животные контрольной группы вместо энтерококка получают физиологический раствор.
На 1-й и 6-й день после отмены ампиокса изучают микрофлору толстого кишечника. Полученные результаты свидетельствуют, что пероральное вве:дение животным штамма энтерококков
BKIIM NB-4054 также обеспечивает нормализацию микрофлоры: уровень энтеробактерий в толстом кишечнике на
6-й день после отмены антибиотика у опытных животных составил 1g 8,874+
+0,111 кл/г, в контрольной группе—
1g 9,702+0,167 кл/г, увеличивается . содержание лактобактерий в толстом кишечнике у животных опытной группы—
1g 8,018+0,121 кл/г, у животных контрольной группы их число снижается и не превышает 1g 6,932+0,286 кл/г.
Количество энтерококков у животных опытной группы на 6-ой день после отмены антибиотика составляет
1g 8,013+0,092 кл/г, что в 10 раз превышает количество энтеробактерий у животных контрольной группы
1g 7,430+0,191 кл/г.
Результаты представлены в табл.2.
Пример 4. Влияние энтерококков на микрофлору кишечника при постлучевом дисбактериозе.
Беспородных мышей облучают. в дозе
700 P. После облучения животных разделяют на две группы. Животные опытной группы получают взвесь антерококков интрагастрально через день в количестве 5 х 10 клеток на мышь на
97211
Таким образом, штамм энтерококков Streptococcus faecium ВКПИ NB4054 обладает полезными свойствами, эффективен при использовании для коррекции микрофлоры кишечника при дисбактериозах, безвреден и может быть использован в практическом здравоохранении в качестве бактерийного препарата.
Формула изобретения
Штамм энтерококков Streptococcus
faecium BKIIM NB-4054, используемый для изготовления бактерийных препаратов. протяжении 15 дней. Животные контрольной группы вместо бактерийной взвеси получают физраствор.
На. 10-й день после облучения излучают микрофлору тонкого и толстого кишечника, опытной и контрольной группы животных.
Результаты приведены в табл.3.
1р Применение штамма энтерококка у облученных животных приводит к коррекции дисбиотических изменений, развившихся у животных после облучения: снижению количества энтеробактерий
15 и стафилококков по сравнению с животными контрольной группы и увеличению у них количества лактобактерий. На 10-й день после облучения у животных контрольной группы в
2р толстом кишечнике количество энтеро-:: бактерий, энтерококков, стафилокок9i ков, лактобактерий составляет 10
107 — 108" 10 — 108 ° 10 — 100 кл/г соответственно, у животных опытной
25 группы количество энтеробактерий снижается до 10 -10 кл/г, стафилококков
7 9 до 10 -10 кл/г (что соответствует
4 5 показателям нормофлоры), количество энтерококков увеличивается до 10
8 д0 109 кл/г: лактобактерий до 10 кл/г.
В тонком кишечнике у животных, получавших энтерококки, на 10-й день не определяются стафилококки (<10 кл/г), снижается количество
35 энтеробактерий (до 10 -10 кл/г проS тив 10 кл/г в контрольной группе), . увеличивается (до 10 -10 кг/л) коли4 чество лактобактерий.
1497211
I со
С"!
С » л
Ю о !
» о
Е
Ql :(Э
Ю !
Г!
Ю л
OQ
» Г
Ю л
О л
4 л
-Ф
ОГ
С» л
Ю а
Э I !
» ((!
О
Е I
И I
03
И х х
Р
Н х
Х о !
» о
Е и
Ц о
+j
+! I
I и I
OQ 1
С»! I л л
+l л,О л
СО х о
Я
Э I
Э
И х х
У
Э
П х
И
Х о ьо
I д а о и ф о
C(j ф !" ф х о а
Е Э х сб х Е
Э х х
Э
1„ ф о х х
О
OO
СЧ л
С 1
Р»
Ю л
Cj.О л
Ю л
Ch
Cj л
Ch
Ю л
Ю.Е! 1
1 л I
l,О л!
+) +l О
Ю л
С »
Cj ! л !
Р» л
00 ч л л о о
1 о
Р х ! о
Ь4 х
8 х
° л и а3
Ч4
1
1Г
СЧ
С» л
Ю
С 1
Ю л
СЧ
СГ л
СС
OQ.
С» л
Ю а 1
Qj
М 1
Qj 1
lo 1 о а 1
Э 1
Е I х 1 л
+i
+I
+! 1
С ) и
СЧ л
СО
СЧ
Ю л
1
U и о
U о и а
Э н и
СО Г
С \ л
О\ л л
CO ф о с.
v ъ » о
I х
Е» х
< )
gj д И х х
I х
Е» х
С!)
6) д Х м
Э
Х о х
О !О
I х х х э
И а
V lO
Ц и о
И д х
Э
С ф о
И
И о
Ц о а
Э
E х
Qj
Е (ч о л д о ц х
1 х
Е» оа 1
Е Cj х х
Е»
С!) 3Г) х о
Е;g
Э о :( ф
М о х
И
Е х о
С х х
Qj
Е х х
Е о
A х ц
Э л о х и х
tf
Е о х
Й
6 о
1 х
1
1 Х
1 Х ! о х о
I pi
I Э 1
1 Е I
Х 1
) л 1
1 о а э:х ц
И Ql
5w е
О Р О Э л ф Э ф Я и хо и е.х о оах Ю Э ффоа o j: Qj и х ы- и о и и ф :х I Э Ql х В, Э СГ1 П Э Э Р Ql о е И л э о 2 х х ф E ф О, Д а Э I х и о х И х A д A ххх Э Э цЕ о х О О!О I о х Ql °вЂ” и и ы а О Р) Р1 и - v x j". еао О,х а >х е х хо о Х М и д э х Э х !:1 с» х OCj Qj с— 1 1 а х о х х Х 1 1 л Ро 1 э Х 1 3 Е 1 ф х I åj ОЭЕ сс! И а ! 1497211 СО м м л C) о CO л C) О CO С4 л Ю С 4 л Ю ха! Э E I Е I чэ I о Х I сб I ) I 1 1 l л C) +) 1 I сЧ 1 CO 1 сч 1 +! +) +! (4 м Ch л О Ю л CO л л х Х И о Х 1 о Е о ) о Е» ) 1 ! & I 1 Е о Е х х а .о о м Ю л Ю +1 С 4 О л » О1 Ю л Ю м С4 л C) (:У Ю х И A о Х I о а 1 Э 1 Ю л Ю +) м Ю л +! 1 1 л л 1 л I CO 1 Ю л +! I +) Ю м . » л л Г Ю л C) л.О л C) О Ю л +1 +! +) С»4 C) л л (У» »Л О С 4 л C) л CO C) л Ю о1 л л 1 х Ц и о х l и о И л х Э I о И 4 х ы е И . х х е е о Е )»»О о х aJ x Ц б I и о «д х Э А Е е И »:» х Х 1э о е х 1» 1О о х Е» э х 1 х о х 2 х Q) Е E о а ц v e 1 о х I E аФ 1- Ю »Б х А а о Ш Е» и Щ а cd а х х 1- О о х ы х a) o Z х о э А Э cd Е» х Э о Х и Э х х ! » о Ц о а ! a) х ° и М и 0l Ф о И A о И х A х а Г 4 И И td Х »а ых д хе 2 Ц х Х Е ою о ! » ц о о ы Х 2 х Э Р» х s х Х Ф х о х х о е и д хе Я a).. =! Е ° 4 и а Э е w Е о M x х и о о 44 V а Э lO н о CO л» о о х х х а о е М о х ах Э Ю 1 О a) а и Э И е Й х <б ) ех!л Р а I и E I есб) Е Х х х ц о а он a) х о z5 I" I Э )è> о О е 1 а л »Ц»4 е! х х ые Р Э Э Я O E O х ы л Д е о ж х и х,О м о 3х Р Р» Л а, е л >х 4 Э х ые Р хэ a) m о).о ы л Д е о д х и хам Д!1 I g 1О о И х Э х о $ О 1 1оаэ м х и 1497211 Э Э. ф Э оооо С44 Ч. Е а Ч. О о О о о 4» ° ° 4 кких «. .О оооо ° л В 4 В ». С41 W Л.Ос к c4 ««« ооооо ° ° ЛЛ 4 з ф ч Ч ххххх ооф оо В 4 ° В а Ch Ос Ос Ы lC о л юъ 4 с л л ООООО ° ° ° ° ° хххкх ФГ «м««« ООООО «««4444 О ОООО -4»4 .Л .3 Д Ь и ф и о л a ойдо В а В а В СЧ ф 4О СЛ Ь Л ° + ООООО + ч. + оо о хихих х «Эс«М ООООО ХФХ И СФ н о с сч 0 ° ° ° a ,) сЧ р л о сч е В В 1 В Л Ch 4 сО С 1 СЧ + ЧЭ сс ООО О ьь ььь ооооо ФС Ч оо о ххххх хх,x. ° Н о сч о о— а a4» с л - сим ХХХ Х о о сч о о э 1 а л сч сч со Э е о -о о ° ° 4 В В с» СЧ СЧ 4» l» И о Е Х Oj й»4 О ЬООО O O Э O ООООО Вс Э4 Ol 40 1» О ОООО о о о сч о * В В В Э а С 4С СЧ ОСООО 1 1 ° * В - сч с4 и оо- Ч В ° ° В Л а ос л м ф И И И о И о 4 44 ООООО Ю Ю \» 4CI IO ООООО 6 444 оо Э ° м ь оо Х Х И Х Э осчо о ° В ° В ° сЧ сч С сЧ сч о о м ао Л Э В Л * посл о о о о сч В * ° ° В 4 СЧ СЧ М х И о М D а Ol СФ ос ООООО - o î ос л л л э э л сч сч ос счоос Э а 1 В 1 СЧ 3 с ЧС 441 осч осчсо В a ° ° a Л M Ф ссс с O 44 аэа В оОооо а 44 а Л О ОООО х хи леечка В Э В Э В 4» С4С Ф Ссс 4» N N о а4 сч В В * ° a Л 9 СЧ 4 OC С С ОС сО Cl Л Ф °, a л э счсч с Ol I CC сл A l и О Э H ы CCl 1 3 >с К и е э о ь 5 и о4а э cow 6 сйоф с4ам! 11 и 3 IO 1 Ф Ь о х о а 2 Р ф и о а C4l Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х И Х Х Х Х Х Х И Х Х Х И Х И И Х ХФХ К И Х Х И Х Х И Х И И ИИХХИХХХКИХХ AD»4)$ ййов lC I 5 ) 
