Штамм бактерий lастовасillus асidорнilus, используемый для приготовления бакпрепарата для нормализации микрофлоры при нарушении микробиоценоза влагалища

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к производству лечебных препаратов - зубиотиков. Для приготовления бакпрепарата используют штамм бактерий LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS ЦМПМ В-3325. Цель изобретения - повышение адгезивной способности бактерий. Повышенная адгезивная способность штамма способствует ускорению нормализации микрофлоры при нарушении микробиоценоза влагалища. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (19) (11) 1 5 А1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А8ТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 3922964/28-13 (22) 28,06,85 (46) 07.07.89. Бюл. Ф 25 (71) 2-й Московский государственный медицинский институт им.H,È.Пирогова (72) В,M.Коршунов, Н,Н.Володин, H.Ï.Èâàíîâà, Л,И.Кафарская и Б.В.Пинегин (53) 615.371 (088,8) (56) Тарасова Н.Б., Соколова К,Я.

Новый препарат лактобактерин для профилактики и лечения дисбактериозов кишечника. — В кн.: Материалы

XI Всесоюзного съезда эпидемиологов, микробиологов и инфекционистов, Тбн.иси, 1970, с.40, Патент США )" 3639666, кл, А 61 Х 3/08, С 12 К 3/08, 1970.

Изобретение относится к медицинской микробиологии, и частности к производству лечебньгх препаратов эубиотиков.

Целью изобретения является повышение адгеэивной способности бактерий, входящих в состав бакпрепарата.

Штамм бактерий 1.ассоЬасдllus acidophiIus получен из исходного штамма АЛ-28 путем селекции, Штамм депонирован в центральном Музее промышледных микроорганизмов института чВНИИгенетика под номером ЦМПМ

В-3325 и характеризуется следующими признаками, Культурально-морф«логические признаки. Клетки палочков»дной формы, длинные и тонкие, неспорообраэую(цие, (61) 4 С 12 N 1/20, А 61 К 31/47//

//(С 12 N 1/20, С 12 К 1:23) 2 (5u) ШТАММ БАКТЕPHA LACTOBACILLUS

АСIDOPHILUS ° ИСПОЛЬЗУЕМЬ1Й ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ БАКПРЕПАРАТА ДЛЯ НОРМАЛИЗАЦИИ М11КРОФЛОРЫ ПРИ НАРУШЕНИИ МИКРОБИОПЕНОЗА ВЛ тАЛИ)ЦА (57) Изобретение относится к медицинской микробиолс гии, в частности к производств. лечебных препаратов убиотиков. Для приготовления бакпрепарата испсчьэуют штамм бактерий

Lactobacillus a<:idophi1us ЦМПМ В-3325.

1 „ель изобретения — повышение адгезиви 1й способности бактерий. Повышенная а,;гезивная способность штамма способ=твует ускорению нормализации микрофчорн при нарушении микробиоценоэа ф влагалища. 2 табл, грампо(ожителт ные, располагаются беспорялочно. На плотной среде MPC образуют круглые колонии, профиль выпуклый, белые, гомогенные, легко снимаются петлей с поверхности агара, края ровные, непрозрачные, без блеска.

Пигмента не образует, В жидкой среде

МРС растет диффузно по всей пробирке (кроме зоны аэробиоза в верхних слоях питательной среды), на дне образуется осадок, легко разбивающийся при встря- хивании.

Обезжиренное молоко — на вторые сутки после посева молоко свертывается с образованием плотного сгустка и отделением сыворотки, На жидкой синтетической среде H,Haenel в виде равномерного помутнения и небольшого

1491885

2 г

200 мг

200 мг

2 г

5 г

20 r

37,9 г

10,0 г

К<НРО<

NgS0, Цистеин (HC1)

Цитрат аммония

Ацетат натрия

Глюкоза

Мп804

Пептон

Лрожженой автовизат (Di1 >) 50

5,0 r осадка; количество жизнеспособных

5 8 клеток при этом достигает 10 — 10 кл. /

/мл. Первые пассажи штамма дают обильный рост на жидкой среде Блаурокка для 5 бифидобактерий; в последующих пересевах рост штамма может истощаться. В полужидком (0,7K) агаре Блаурокка (при посеве в пробирки с 9 мп среды) образует слегка выпуклые дисковидные 1р колонии.

Физиолого-биохимические свойстна.

Анаэробны, на твердой среде растут после замены воздуха СО . Максимальный рост при 37 5 С. Оптимум рН 6,2- 15

6,4.

Сбраживает сахарозу, мальтозу, галактоэу, фруктоэу, лактоэу, раффинозу; не сбраживает ликсоэу, ксилозу, маннит, рамноэу, дульцит, цитруллин, 20 рибоэу, сорбит, Кислотообразование при выращивании в обезжиренном молоке 90 Т (по о Г ер неру) .

Лабораторная проверка показала 25 непатогенность L,acidophilus А-4 для экспериментальных животных и людей.

Пример 1, Штамм лактобактерий выращивают на жидкой среде MPC (pH 6,2-6,4) в течение 36 ч в термо- 30 стате в бактериологических пробирках, содержащих не менее 0-10,мп среды. о

Оптимальная температура 37,5 С. Посевная дозы 1 мл 36-часовой культуры, После этого взвесь микроорганизмов 5 центрифугируют при 300 об/мин в течение 15 мин. Осадок ресуспендируют в консерванте и полученную смесь разливают по ампулам,а затем подвергают лиофильному высушиванию.

Консервант — СЖ, содержащий 10Х сахарозы и 1Х желатина, рН 6,0.

После лиофильного высушивания в одной ампуле, содержащей 1 дозу препарата, должно содержаться не менее 45

10 жизнеспособных .клеток.

Состав среды МРС для выращивания лактобактерий:

Печен< вый

100,0 мл

1,0 мл отвар

Твин-80

Дистиллированная вода Ло 500,0 мл

Гидролиэат молока 500,0 мл рН 6,2

Стерилизация 20 мин при 0,5 атм.

На основе лиофильно высушенного препарата могут быть приготовлены вагинальные свечи.

Биомассу бактерий, содержащую

3 10 клеток, смешивают с 30 r масла какао и 2,0 r ланолина. Полученную гомогенную массу раскатывают и выкладывают в специальный металлический дозатор, с помощью которого из исходного количества биомассы может быть получено 30 свечей. Свечи хранят в целлофановых обертках н холодильнике, Кроме того, препарат можно применять

per vaginum с помощью тампонов или инстиляций. Содержимое ампулы при этом разводят 1-2 мл кипяченой или дистиллированной воды, а также физиологическим раствором.

Пример 2. Изучение влияния лактобактерий на нормализацию нагинальной микрофлоры у женщин.

Поц наблюдением находилось 16 женцин различного возраста с вагинальным дисбактериозом: уровень лактобактерий составлял от 10 до менее 102 кл./

/г, В то же время количество стафилококков составляло 10 -10 кл./г, дрок6 7 жей 1Ñ -10 кл. /г и энтеробактерий

4 5

10З кл./r 8 женщин получали Местно ежедневно в течение 10 дней по 1> ю 10 кл./г L,acidophilus Другие 8

9 женщин бактерийный препарат не получали. На 12-й день после начала лечения у женщин, получавших .Ь. асidophi1us, количество лактобактерий повысилось до 10 -10 кл./г (т,е. в 10 раз

7 8 5 и более). Число стафилококков, дрожжей и энтеробактерий, наоборот, снизилось в 100, 10 и 1О раз соответственно. У женщин, не получавших местно в процессе лечения L.auidophilus, выраженность вагинального дисбактериоэа н этот период наблюдения сохранялась на прежнем уровне.

Результаты приведены в табл.1 и 2.

Формула и з о б р е т е н и я

Штамм бактерий Lactobauillus acidophilus ЦМПМ В-3325 (Центральный Музей промышленных микроорганизмов институ»

1491885 е та "ВНИИгенетика"), используемый дня лизации микрофлоры при нарушении микприготовления бакпрепарата для норма- робиоценоза влагалища.

Т а 6 л и ц а 1

ИинимальЗона задержки роста на твердой среде,мм

Тест штамма

Антибиотик

Штамм

L. f ermentum (известный) Штамм

L. aeidophilus

А-4

16

1 6

50000

1000

Невиграмон

Гентамицин

Канамицин

Левомицетин

13

13

10000

0,5

0,5

Полимиксин

Линкомицин

Алепиокс

Ампицилин

Таблица2

Показатели адгезивности

Штамм лактобактерий

Эритроциты I гр, крови человека

Эпителиоциты из вл а г ал ища женщины ндекс фб дгеИндекс адгеэивности

Степень адгеэивности зивности

5,2

2,1

9,0

19,7

8,8

49,2

3,5

1э7

19,0

Степень адгеэивности — процент клеток (эритроцитов эпителиоцитов), на которых находились две и более лактобактерии. бб

Индекс адгезивности — среднее число лактобактерий на 1 клетку (эритроцит или эпителиоцит), взаимодействующую с лактобактериями, ные ингибирующие концентрации, мкг/мл, ед/мл

Исходный

L,acidophilus Ал-28

Штамм L. aci"

dophilus

ЦМПИ 8-3325

Штамм L.fermentum (известный) Е,coll 0

S,dublen С96

Kl.pneumoniae К 412

Pr,mirabilis 771

Staph,a1bus