Способ моделирования паркинсонизма

 

Изобретение относится к медицине, а именно к нервным болезням. Цель - повышение воспроизводимости способа. С этой целью животному билатерально в черную субстанцию мозга вводят раствор дельта-сон индуцирующего пептида в дозе 5-10 нмоль. Применение способа позволяет повысить воспроизводимость модели паркинсонизма на 55% по сравнению с прототипом.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)4 G 09 В 23 28

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCKOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4336389/28-14 (22) 30.11.87 (46) 07.09 ° 89. Бюл. М - 33 (71) Одесский медицинский институт им. Н.И.Пирогова (72) Л.С.Годлевский, A.À.Шандра и А.М.Мазарати (53) 615.475(088.8) (56) Крыжановский Г. H. Детерминантные структуры в патологии нервной системы.- M.: Медицина, 1980, с, 36-41.

Изобретение относится к медицине, а именно к нервным болезням.

Цель изобретения — повышение воспроизводимости способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Крысу под гексеналовым наркозом (100 мг/кг) фиксируют в стереотаксическом аппарате, затем производят срединный разрез кожных покровов черепа, удаляют надкостницу, бормашиной высверливают трег>анационнь>е отверстия и вводят направляющую канюлю (внешний диаметр 0,5 мм) по координатам (AP = -5,3, L 2>5; H =, 8,0).

Фиксацию канюль осуществляют с помощью быстротвердеющей зубоврачебной пластмассы типа "Норакрил . Прооперированное животное в течение 10-14 дней находится при обычном содержании и кормпении. Для адаптации животного к условиям эксперимента и предстоящей внутримозговой инъекции препарата его ежедневно в течение 5 мин держат в руках. На 1О-14-й день после операции

„;SU,, 1506471 А1

2 (54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ПАРКИНСОНИЗМА (57) Изобретение относится к медицине, а именно к нервным болезням. Цель— повышение воспроизводимости способа.

С этой целью животному билатерально в черную субстанцию мозга вводят раствор дельта-сон индуцирующего пептида в дозе 5-10 нмоль. Применение способа позволяет повысить воспроизводимость модели паркинсонизма на 557 по сравнению с прототипом. через имплантированную канюлю с помощью микроинъектора производят введение раствора дельта-сон индуцирующего пептида. При этом в течение

2-3 мин вводят 1-3 мкл раствора (510 нмоль в физиологическом растворе), после введения еще в течение 2-3 мин канюлю оставляют на месте для более полной диффузии препарата и предотвращения его обратного вытекания.

После извлечения канюли крысу помещают в прозрачную камеру для визуальной регистрации изменений.

Пример 1. Крысе-самцу линии

Вистар массой 275 г под гексеналовым наркозом (100 мг/кг) стереотаксически билатерально имплантируют канюли (наружный диаметр 0,5 мм) в зону черной субстанции (AP = -5,3, L 2,5;

H = 8,0). Канюли фиксируют с помощью быстротвердеющей зубоврачебной пластмассы "Норакрил". Через 10 дней после операции (в течение всего времени животное находилось в обычных услови" ях содержания и кормле><ия) в условиях

1506471 свободного поведения крысы с помощью микроинъектора билатерально вводят свежеприготовленный раствор дельтасон индуцирующего пептида в дозе

5,0 нмоль в 1 мкл физиологического раствора. При этом каждое введение осуществляют в течение 2,5 мин и после прекращения введения канюли продолжают оставаться на месте в течение 3 мин, Затем крысу помещают в прозрачную камеру (40 х 60 х 30 см) для визуальной регистрации поведенческих изменений. Через 5 минут после

10 инъекции у крысы отмечается замирание, в течение 2,5 мин у животного развивается флексорная установка туловища — голова прижимается к передним лапам, развивается характерная горбатость, задние конечности рас- 20 ставлены в стороны и выдвинуты вперед. Длинник затылок-основание хвоста составляет 11,8 см (до введения пептида в состоянии покоя 13,5 см).

При пассивном отведении конечности 25 ощущается значительное сопротивление.

Частота сердечных сокращений снижается с 410 до 350 в минуту, а частота дыхания — со 112 до 82 в минуту, Определение двигательной активности ме- 30 тодом прямой актометрии (подсчет числа колебаний сейсмодатчика установленного в подвижном полу за 2 мин) показало снижение этого показателя с 817 до 130; отмечается также снижение горизонтального и вертикального поведения в открытом поле: число пересеченных квадратов до введения ДСИП составляло 21 за 2 мин, после введения — 1, а число вертикальных стоек - 40 соответственно 8 и О. У крысы развивается птоз, движения вибрисс отсутствуют. В период непродолжительной локомоции, провоцируемой болевым раздражением, наблюдается скованность 45 движений, уменьшение длины шага, Таким образом, у крысы воспроизведен остро формирующийся акинетикоригидный паркинсонический синдром.

Пример 2. Крысе-самцу линии

Вистар массой 290 r под гексеналовым наркозом (100 мг/кг) стереотаксичес" ки билатерально имплантируют канюли (наружный диаметр 0,5 мм) в зону черной субстанции (AP = -5,3, L

2,5; Н = 8,0) ° Канюли фиксируют с помощью быстротвердеющей зубоврачебной пластмассы нНоракрил". Через

11 дней после операции (в течение этого времени животное находилось в обычных условиях содержания и кормления) в условиях свободного поведения крысы с помощью микроинъектора билатерально вводят свежеприготовленный раствор дельта-сон индуцирующего пептида в дозе 7,5 нмоль в 2 мкл физиологического раствора. При этом каждое введение осуществляют в течение 3 мин и после прекращения введения канюли продолжают оставаться на месте в течение 3 мин. Затем крысу помещают в прозрачную камеру (40 х х 60 х 30 см) для визуальной регистрации поведенческих изменений. Через

6 мин после иньекции у крысы отмечается замирание и в течение последующих 1,5 мин у животного развивается флексорная установка туловища — голова прижимается к передним конечностям, появляется характерная горбатость, задние конечности расставлены в стороны и выдвинуты вперед. Цлинник затылок — основание хвоста составляет 11,9 см (до введения пептида в состоянии покоя 13,4 см). Отмечается птоз, уменьшается движение вибрисс, При пассивном отведении праной передней конечности ощущается значительное сопротивление. Частота сердечных сокращений снижается с 385 до 310 в минуту, а частота дыхания с 98 до 84 в минуту. Определение двигательной активности методом прямой актометрии (подсчет числа колебаний сейсмодатчика, установленного в подвижном полу, за 2 мин) показало снижение этого показателя с 736 до 57; отмечается также сшякение горизонтального и вертикального поведения в открытом поле: число пересеченных квадратов до введения составляло 17 за 2 минуты, после введения — 3, а число вертикальных стоек — соответственно 4 и О. В период непродолжительной спонтанной локомоции, отмечаемой через 15,5 мин после введения пептида, у животного наблюдается скованность движений, уменьшение длины шага. Животное не реагирует на предьявление воды и пищи. Изучение электромиограмиы камбаловидной мышцы и

ЭЭГ-изменений показалЬ, что в период описанных поведенческих нарушений имеет место увеличение мышечного тонуса и развитие пароксизмальной синхронизированной активности в хвостатых ядрах мозга.

1506471

Формула и э о б р е т е н и я

Составитель А.Бобров

Техред <.Моргентал КоРРектоР Н,Борисова

Редактор В.Петрап

Заказ 5441/51 Тираж 469 Подписное

ВНИ1ШИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãoðoä, ул. Гагарина, 101

Таким образом, у крысы воспроизведен остро формирующийся акинетикоригидный паркинсонический синдром.

Пример 3. Крысе-самке линии

Вистар массой 280 г под гексеналовым наркозом (100 мг/кг) стереотаксически билатерально имплантируют канюли (наружный диаметр 0,5 мм) в зону черной субстанции (AP = -5,3; Ь = 2,5; Н =

= 8,0). Канюли фиксируют с помощью быстротвердеющей зубоврачебной пластмассы "Норакрил". Через 14 дней после операции в условиях свободного поведения животного (в течение всего зтого времени крыса находилась в обычных условиях содержания и корм; ения, с помощью микроинъектора билатерально вводят свежеприготовлснный раствор дельта-сон индуцирующего пептида в дозе 10,0 нмоль в 2 мкл физиологического раствора. При этом каждое введение осуществляют в течение 3 мин и после прекращения введения канюли продолжают оставаться на месте в течение 3 мин. Затем крысу помещают в прозрачную камеру (40 х 60 х 30 см) для визуальной регистрации поведенческих изменений. Через 8,5 мин после инъекции у крысы отмечается замирание, в течение 3 мин у животного развивается флексорная установка туловища — голова прижимается к передним лапам, отмечается характерная горбатость, задние конечности расставлены в стороны и выдвинуты вперед. Длинник затылок — основание хвоста составляет 11,2 см (до введения пептида в состоянии покоя 12,9 см), У крысы развивается птоз, движения вибрисс отсутствуют. Прп пассивном отведении левой передней конечности ощущается значительное сопротивление. Частота сердечных сокращений снижается с 349

5 до 297 в минуту а частота дыхания

Э с 102 до 89 в минуту. Определение двигательной активности методом прямой актометрии (подсчет числа колебаний сейсмодатчика, установленного в подвижном полу, эа 2 мин) показало снижение этого показателя с 895 до

107; отмечается снижение горизонтального и вертикального поведения в открытом поле: число пересеченных квадратов до введения составляло 27 за

2 мин, после введения - 7, а число вертикальных стоек — соответственно

5 и 1. В период непродолжительной локомоции, провоцируемой болевым раздражителем, наблюдается скованность движений, уменьшение длины шага. Животное не реагирует на предъявление воды и пищи.

Таким образом, у крысы воспроизве25 ден остро формирующийся акинетикоригидный паркинсонический синдром.

11рименение способа позволяет повысить воспроизводимость модели паркинсонизма на 557. по сравнению с из30 вестиым способом °

Способ моделирования паркинсонизма путем введения животному химического вещества, отличающийся тем, что, с целью повышения воспроизводимости способа, вводят раствор дельта-сон индуцирующего пептида в

4 0 дозе 5-10 нмоль билатерально в черную субстанцию мозга.