Способ определения нефротического синдрома при незначительных морфологических изменениях в клубочках у детей

 

Изобретение относится к медицине , в частности, к педиатрии. Целью изобретения является снижение травматичности и ускорение способа. Для этого у больного проводят забор крови из локтевой вены натощак. Выделяют из нее лимфоциты по методу Воут и определяют в них радиолигандным методом количество глюкокортикоидных рецепторов и при их значении 0,46 N моль/мг белка и более определяют нефротический синдром при незначительных морфологических изменениях в клубочках. Скорость диагностики с помощью данного способа увеличивается в 10 раз, так как исследование проводится в течение 1 дня, тогда как в прототипе требуется 10 дней. Способ позволяет с достоверностью 95% ставить правильный диагноз, а также он является атравматичным.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (191 (И) (5D 4 G 01 И 33/60

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЬ1ТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4197965/28-14 (22) 20.02.87 (46) 15.09.89, Бюл, У 34 (71) Научно-исследовательский институт педиатрии АМН СССР (72) В.И,Наумова, В.Н.Ляшко, И,Н.Потапова и Т.В.Сергеева (53) 616.07(088.8) (56) Simon N.D. Rosenberg M. Medical

Treatmeut of glomerular Diseases.

Мес1. Kli n. Amer. — 1978, 62, 6, 1157-1181. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НЕФРОТИЧЕСКОГО СИНДРОМА НРИ НЕЗНАЧИТЕЛБНЫХ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЯХ В КЛУБОЧКАХ

У ДЕТЕЙ (57) Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии. Целью изобретения является снижение травмаИзобретение огносится к медицине, в частности к педиатрии (раздел нефрологии).

Цель изобретения — снижение травматичности и ускорение способа.

Способ осуществляется следующим образом..

Кровь (20 мл) забирают из локтевой вены натощак, добавляют гепарин

40 ед на 1 мл крови, Транспортируют а в лабораторию при 20-22 С, опыт необходимо начинать не позже 1 ч после взятия крови, Кровь разводят в отношении 1:2 раствором Версена (рН

7,25) при комнатной температуре, Лимфоциты выделяют по методу Воут. После центрифугирования в течение 30 мин при 400 я лимфоциты отсасывают и отм|вают 3 раза в растворе Хенкса, за2 тичности и ускорение способа. Для этого у больного проводят забор кровИ из локтевой вены натощак. Выделяют из нее лимфоциты по методу Воут и определяют в них радиолигандным методом количество глюкокортикоидных рецепторов и при их значении 0,46 пмоль/мг белка и более определяют нефротичес.кий синдром при незначительных морфологических изменениях в клубочках.

Скорость диагностики с помощью данного способа увеличивается в 10 раз, так как исследование проводится в течение дня, тогда как в прототипе требуется 10 дн. Способ позволяет с достоверностью 95Х ставить правильный диагноз, а также он является атравматичным буференного Hepes (рН 7,35), при

400 е по 10 мин, В мазках с окраской озур-эозином выход лимфоцитов составляет 89-95Х. Готовят разведение меченного ЗН-дексаметазона в растворе

Хенкса с Hepes от 1 до 10 нм в объеме 5 мл, Используют меченый дексаметозон фирмы "Amersham" (Англия) с активностью 19,1 мкКи/мМ. В нескольких параллельных разведениях меченого гормона добавляют 500-кратный из быток немеченного дексаметозона (фирма "Sigma", США), Во все разведения и контроль добавляют по 0,3 мл тщательно ресуснендированной лимфоцитарной взвеси клеток в растворе Хенкса с

Hepes, после чего пробы инкубируют при 37 С через 45 мин. Через каждые

15 мин пробы встряхивают, 3 1508164

В дальнейшем опьг; продотгкают при

4 С. После центрифугирования в течение 5 мин при 400 8 из супернатанта отливают по О 5 мл во флакончики со9

5 держащие по 10 мл диоксанового сцинтилпятора, для определения свободной радиоактивности, Остальной супернатант сливают и осажденные лимфоциты отмывают дважды от свободной радиоактивности раствором Хенк : а (pH 7,4 о при 4 С). В полученные интактные лимфоциты добавляют по 0,5 мл дистиллированной воды, затем клетки разрушают ультразвуком. Учитывая, что количество белка во всех пробах примерно одинаковое (проверено в нескольких опытах),. белок определяют только в контроле по методу Р1огез„

Пробы сливают в сцинтилляционные фла-" 20 кончики, радиоактивность измеряют на счетчике фирмы "Intertechnique (Франция).

Специфическое связывание рассчитывают как разницу между общим свя- 25 зыванием и связыванием в присутствии

500-кратного избытка немеченного гормона. По полученным данным строят ,график Scatheherd. Результаты выра-жают в пикомолях на 1 мг белка. 30

При исследовании глюкокортикоид=. ных рецепторов в лимфоцитах крови у больных гломерулонефритом удалось установить) что их количес. Во при неэна чительных морфологических изменениях в клубочках существен "o выше, чем при других иорфологических типах гломерулонефрита, У больных с незначительными морфологическими изменениями в клубочках

В (максимальное количество мест связывания меченого дексаметазона с рецепторами) имело значение

0,46 пмоль/мг белка и более.

П,р и м е р 1, Больной П. Клинический диагноз: острый гломеруло.нефрит, затяжное течение, нефротическая форма, Заболел в возрасте 11 лет, "среди полного здоровья" появились отеки. лица, туловища, конечностей„ асцит, протеинурия 3,3Х. При обследовании через 3 мес от начала болезни в нефрологическом отделении НИИ педиатрии АИН СССР заболевание проявля55 лось небольшими отеками, протеинурией. до 4 г (сутки, гипер Ы -глобулиномией до 18,7Х при общем белке крови

6,36 г%, гиперхолестеринемией (до

320 мг7.) . Осадок мочи нормал -.ный, с 1, 115/70- 100/60 мм рт, ст.

Количество глюкокортикоидных рецепторов в лимфоцитах крови

0„.46 пмоль/мг белка.

1IpH ис с че jicH янин биоп та а почки подтверждены назначите.-.ью:е изменения в клубочка . Л -.сн: предниэолоном в до;..е 60 и-/сут в течение 47 дн привело к развитию полной. ремиссии заболевания — в моче белок отсутствует„ протеинограмма и холестерин крови нормальные.

Г1 р и м е р 2. Больной К. Клинический диагноз: хрониче кий гломерулонефрит, нефротическая форма, функции почек сохранены. Заболел в возрасте 3 лет, после повторной пневмонии, заболевание началось отеками голеней, прот".инурией 6,67 IlpH нормальном .артериальном давлении и нормальном осадке мочи. В дальнейшем заболевание проявлялось рецидивирующим нефро гическим синдромом (протеинурия до

33 г/л, общий белок крови 43,5 г/л, гииерлипидем.".я). При обследовании в нефрологическом отделении НИИ педиатрии ЛМН СССР выражен отечный синдром, протеинурия до 9,9 г/сут, общий белок крови 47,8 г/л,Альбуминн 46„37,e!. -гло-" булины 22,5%, холестерин до 642 мг7..

Артериальное давление 80/40-110/60 мм рт.ст. Осадок мочи нормальный, функции почек сохранены. "креатинин крови

0„5 мг%, КОК 84 мл/мин, уд,вес мочи до 1022, Количество рецепторов в лимфоцитах 0„9 пмоль/мг белка,. при иссле,цовании биоптата почки выявлен гломерулит с незначительными морфологическими изменениями. В результате предниэолонотерапии по 50 мг/сут B течение 4 нед с последующей прерывистой терапией в течение 8 нед развилась полная ремиссия заболевания, Эффект изобретения — ускорение диагноза незначительных морфологических изменений в клубочках у больных с нефротическим синдромом, что позволяет ускорить назначение терапии и предсказать ее эффективность.

Предлагаемый способ диагностики полностью атравматичен,(забор крови из вены), в то время как прототин (биопсия почки) имее" следующие осложнения: необходимы повторные биопсии в

15Х из-за того, что не был получен материал; летальный исход вследствие большой периренальной гематомы и нарКорректор Т.Малец

Заказ 5536/48 Тираж 789 Подписное

ВНКИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãîðoä, ул . Гагарина, 101

5 15081 коэной асфиксии — 0,1 ; макрогематурия — н 9 ; почечная колика — в 0,51 забрюшинная гематома — 0,41 ; коллапс — в 0,1 анурия — в 0,03 ; кишечная непроходимость — в 0,03 ., Скорость диагностики увеличивается в 1О раз, так как исследование глюкокортикоидных рецепторов проводится в течение дня, тогда как фиксация ткани, взятой при биопсии, заливка в парафин, специальные окраски требуют как минимум 10 дн.

Предлагаемый способ радиолигандно- 15 го исследования глюкокортикоидных рецепторов в лимфоцитах периферической крови позволяет -поставить диагноз неСоставитель Л.шилина

Редактор М.Келемеш Техред М,Моргентал

64 6 значительных морфологических измене-. ний в клубочках с достоверностью 95%. формула изобретения

Способ опр еделения нефротического синдрома при незначительных морфологических изменениях в клубочках у детей путем исследования биологического материала, отличающийся тем, что, с целью снижения травматичности и ускорения способа, определяют в лимфоцитах крови радиолигандным методом количество глюкокортикоидных рецепторов и при их значении

0,46 пмоль на 1 мг белка и более определяют нефротический синдром при незначительных морфологических изменениях в клубочках.