2-(3 @ -хлор-1 @ ,2 @ ,4 @ -триазолил-5 @ -азо)-1,8- диоксинафталин-3,6-дисульфокислоты динатриевая соль в качестве реагента для обнаружения белков
Изобретение касается гетероциклических веществ, в частности ди-NA-соли 2-(3<SP POS="POST">1</SP>-хлор-1<SP POS="POST">1</SP>,2<SP POS="POST">1</SP>,4<SP POS="POST">1</SP>-триазолил-5<SP POS="POST">1</SP>-азо)-1,8-диоксинафталин-3,6-дисульфокислоты, применяемой в качестве реагента для обнаружения белков. Цель - создание нового более эффективного реагента для указанного назначения. Синтез ведут диазотированием 3-хлор-5-амино-1,2,4-триазола NANO<SB POS="POST">2</SB> в среде воды в присутствии HCL с последующей обработкой выделенного диазосоединения ди-NA-солью хромотроповой кислоты при 0-2°С. Выход 61,1%, брутто-ф-ла NA<SB POS="POST">2</SB>C<SB POS="POST">12</SB>H<SB POS="POST">6</SB>S<SB POS="POST">2</SB>CLN<SB POS="POST">5</SB>O<SB POS="POST">8</SB><SP POS="POST">.</SP>6H<SB POS="POST">2</SB>O. Этот реагент для окрашивания белков в полиакриламидных гелях обеспечивает необходимое окрашивание при концентрации белков 10<SP POS="POST">-5</SP> - 10<SP POS="POST">-6</SP> М и не требует отмывки геля от избытка красителя, как в известном случае. 1 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н АВТОРСИОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ.:»
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР (21) 4405606/31-04 (22) 29.02.88 (46) 07.10.89. Вюл. Р 37 (7 1) Институт химии им. В.И.Никитина (72) М.Юсупов, Т.П.Копиця, Н.В.Скребцова, В.К.Буриченко и Ф.А.Мурадова (53) 547.792.3 07(088..8) (56) Raymand S., Иапд V.J. Preparation and properties of acrylamide gel
for use electrophoresis. — Anal.
Biochem. 1960, v. 1, Р 2, р. 391-396. (54) 2-(3 -ХЛОР-1,2,4 -ТРИАЗОЛИЛ5 -АЗО)-1,8-ДИОКСИНАФТАЛИН-3,6-ДИСУЛЬФОКИСЛОТЫ ДИНАТРИЕВАЯ СОЛЬ В КАЧЕСТВЕ РЕАГЕНТА ДЛЧ ОБНАРУЖЕНИЧ БЕЛКОВ (57) Изобретение касается гетероциклических веществ, в частности ди-Na соли 2-(3 -хлор-1,2,4 -триаэолилИзобретение относится к новому химическому азосоединению, а именно2-(3 -хлор-1,2,4 -триазолил-5 -аэо)1,8-диоксинафталин-3,6-дисульфбкислоты динатриевой соли формулы
ОН OH
1ГЪN=NЯ Я-1
I чаО В 503 0 в качестве реагента для обнаружения белков.
Целью изобретения является поиск новых реагентов для обнаружения белков в ряду азосоединений, обладающих улучшенными свойствами, как то: упрощение техники проведения анализа обнаружения белков, сокращение стадии отмывки реагента.
„„SU„„1512970 А1 (51)4 С 07 D 249/14, G 01 N 27/26
f 5 -азо)-1,8-диоксинафталин-3,6-дисульфокислоты, применяемой в качестве реагента для обнаружения белков.
Цель — создание нового более эффективного реагента для указанного на- значения. Синтез ведут диазотированием З-хлор-5-амино-1,2,4-триаэола
NaN0 в среде воды в присутствии НСl с последующей обработкой выделенного диазосоединения ди-Na-солью хромотроповой кислоты при 0 — 2 С. Выход
61,1Х, брутто-ф-ла Na C, HgS С1М О s х6Н О. Этот реагент для окрашивания белков в полиакриламидных гелях обеспечивает необходимое окрашивание при концентрации белков 10 -10 И и не требует отмывки геля от избытка красителя, как в известном случае.
1 табл.
Пример 1. 3 1 г (О 02 моль) р
З-хлор-5-амино-1,2,4-триазола растворяют в 16 мл НС1 (1: 1) и 1,4 r (О, 02 моль) N aNO р ас тво ряют в 3, О мл воды. Растворы охлаждают до 0-2 С.
Затем к раствору З-хлор-5-амино-1,2,4 триазола приливают при интенсивном {, ) перемешивании раствор NaNOq. Полученное диазосоединение отделяют на воронке Бюхнера, сушат на воздухе. Выход продукта 0,8 г. Получившийся в ходе реакции 3-хлор-5-диазо- ф, 1,2,4-триазол представляет собой порошок бледно-желтого цвета, легкий, рыхлый, обладает взрывчатой способностью, Для реакции аэосоединения 1,820 r (О 005 моль) динатриевой соли хромотроповой кислоты растворяют в 10 мл
Ф о р м у л а изобретения
2-(3 -Хлор-1,2, 4 -триазолил-5 азо) -1,8-диоксинафталин-3,6-дисульфокислоты динатриевая соль формулы он он )- ц-
М-ИН
NaG„S $0фа в качестве, реагента для обнаружения белков..
Расход 7%-ной уксусной кислоты, мл
Время отмывани фона красителя ч
Краситель
Соединение Х
Амидовый черный
10Б
Кумасси голубой
R-250
200,-300
200-300
15-20
Составитель Г.Коннова
Техред А.Кравчук Корректор Э.Лончакова
Редактор И.Горная
Заказ 6036/24 Тираж 352 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по-изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, R-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,103
3 151297 воды при нагревании. Раствор охлаждают смесью льда и соли до 0-2 С и приливают к нему при перемешивании
0,840 г (0,005 моль) 3-хлор-5-диазо1,2,4-триазола в 15 мл воды, следя за тем, чтобы температура реакционной смеси .ие превышала +2 С. После прибавления диазосоеДинения перемешивание продолжают в течение часа.
Выпадает осадок ярко-красного цвета.
Смесь оставляют на 36-18 ч. Затем выпавший осадок отделяют. Продукт сушат на воздухе. Выход 1,5 r (61,1X), Для анализа вещество перекристаллизо-15 вывают из смеси этанол:вода=2:1.
Результаты элементного анализа:
Найдено,X: С 24,03; Н 3,25.
Вычислено, %: С 23,94; Н 3,02.
Результаты, неоднократно проведен- 20 ных анализов показывают, что азосоединение выделяется в виде кристаллогидрата с шестью молекулами воды и отвечает общей формуле
Na C Пример 2. Электрофорез белков (рибонуклеазы, гиСтона) в полиакриламидном геле (ПААГ) проводят в трубках диаметром 5 мм и высотой 100 мм. После электрофореза гели окрашива- 30 ют 0,2%-ным раствором динатриевой соли 2-(3 -хлор-1,2,4 -триазолил5 -азо) -1,8-диоксинафталин-3,6-дисульфокислоты в смеси этанол — водауксусная кислота (5:5:1). Параллельно для сравнения гели окрашивают 0,2%-ными растворами амидового черного 10Б и кумасси голубого К-250 в смеси этанол - вода — уксусная кислота (5:5:1) . Время отмывания красителей с гелей и расход растворителя даны в таблице. Применение реагента (I) для скрашивания белков в полиакриламидных гелях позволяет определять белки при концентрации 10 -10 М и не требует отмывки геля от избытка красителя, что очень удобно при серийном анализе белков. В случае известных красителей: амидового черного 10Б и кумасси голубого R-250, необходимо длительное время для отмывания красителя с полиакриламидного геля и большой расход уксусной кислоты, что значительно удлиняет время анализа белков.
