Способ контроля питательных сред, используемых для вибриоцинотипирования холерных вибрионов

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при оценке качества питательных сред, используемых для вибриоцинотипирования холерных вибрионов. Цель изобретения - повышение точности способа. Для проведения контроля питательных сред используют три тест-штамма VIBRIO CHOLERAL ELTOR NN КМ-13, КМ-14 и КМ-15. Тест-штаммы высевают на исследуемую среду, посев инкубируют и затем подсевают индикаторные культуры энтеробактерий. Посевы инкубируют и определяют спектр ингибирующей активности всех тест-штаммов в отношении индикаторных культур. По характеру спектра определяют пригодность исследуемой среды для вибриоцинотипирования холерных вибрионов. 4 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 С 12 N 1/20//(С 12 N 1/20, С 12 R 1:63) Ю Ч" (jdi i: Л, ;, i.": 1й-:

ЙОТ!.: 1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

flQ ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21 ) 43771 25/30-13 (22) 1 0.02.88 (46) 07.02.90. Бюл. Р 5 (71) Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт (72) Л.В.Иванова, Л.Г.Воронежская и А.Г.Сомова (53) 576.8.093.1(088,8) (56) Инструкция по бактериологическому контролю диагностических питательных сред для холерного вибриона.

Саратов, 1983. (54) СПОСОБ КОНТРОЛЯ ПИТАТЕЛЬНЫХ

СРЕД, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ДЛЯ ВИБРИОЦИНОТИПИРОВАНИЯ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть ис-, пользовано при оценке качества питательных сред,. используемых для вибриоцинотипирования холерных вибрионов.

Цель изобретения — повышение точности способа.

Для осуществления способа используют в качестве тест-штаммов культуры бактерий Vibrio cholerae eltor

P-10588, P-9952 и P-10117, которые депонированы под номерами КИ-13, КИ-14 и KN-1 5 соответственно и.характеризуются следующими признаками.

Культурально-морфологические.и физиолого-биохимические признаки.

Грамотрицательные полиморфные изогиспользовано при оценке качества питательных сред, используемых для виб" риоцинотипирования холерных вибрионов. Цель изобретения — повышение точности способа. Для проведения контроля питательных сред используют три тест-штамма Vibrio cholerae

eltor КИ-13, КМ-14 и KN-15. Тестштаммы высевают на исследуемую среду, посев инкубируют и затем подсевают индикаторные культуры энтеробактерий. Посевы инкубируют и определяют спектр ингибирующей активносf ти всех тест-штаммов в отношении индикаторных культур, По характеру спектра определяют пригодность иссле- д (3 дуемой среды для вибриоцинотипирования холерных вибрионов. 4 табл. нутые палочки. Относятся к I группе

Хейберга.

Расщепляют глюкозу в среде Хьюлейфсона с образованием кислоты без газа в аэробных и анаэробных условиях. Образуют ацетилметилкарбинол.

Оксидазопозитивные, обладают лизин- и орнитин-декарбоксилазой. Не имеют .аргининдигидролазы. Образуют индол. Не образуют сероводород.

Итаммы КМ-13 и KM-14 агглютинируются до титра сыворотками "О" и Инаба" и не агглютинируются сывороткой "Огава". Штамм К-15 агглютинируется до титра сыворотками "011 и "Огава" и не агглютинкруется сывороткой

"Инаба". Все штаммы чувствительны к

1541 251

4 фагам "Эльтор" и не чувствительны к фагам "С".

Штаммы КМ-14 и КМ-15 хорошо рас" тут на агаре с полимиксином (50 ед/мл), штамм КМ-13 на этой среде образует единичные колонии и обладает широким спектром вибриоциногенной активности, штамм КМ-14— умеренным спектром, штамм КМ-1 5— узким спектром, Способ осуществляют следующим

; .образом.

Суточные бульонные культуры каждого тест-штамма КМ-13, КМ-1 4 и

KM-15 засевают полосой на середины трех подсушенных пластинок 1,5Х-ното питательного агара с цитратно-фосфатным буфером. Посевы инкубируют при

37 С в течение 48-72 ч. По истечении срока инкубации посевы тест-штаммов подвергают холодовому шоку, затем обрабатывают хлороформом. К полосам выросших тест-штаммов подсевают бульонные культуры индикаторных штаммов 25 энтеробактерий: 1 — Shigella flexneri 3189; 2 — Shigella flexneri 38/40;

3 — Shigella dysenteriae 43; 4—

Shigella sonnei М 2/2 (22); 5 — Shigella sonnei М-56 (31); 6 — Shigella

sonnei 17(2); 7 — Escherichia coli

С(1 ); 8 — Escherichia coli G(l );

9 — Escherichia coli К-12; 1 0 - Vibrio cholerae 54I (54); 11 - Vibrio

cholerae 296/.1 (20); 12 — Vibrio

cholerae 24 Shein 1077.

Посевы инкубируют в течение 18 ч °

Чувс твительность индикаторных культур к вибриоцииам регистрируют по отсутствию их роста на полосе или эа пределами роста тест-штаммов.

Спектр чувствительности устанавливают по табл.

Испытуемый агар считают пригодньи для вибриоцинотипироваиия при воспроизведении спектра ингибирующей активности тест-штаммов по отношенио

K индикаторным культурам в соответ" ствии с табл. 1, Пример 1. Контроль 1,5Х-на-. го arapa Мартена, рН 7,6, серия 15

50 на пригодность для вибриоцинотипирования. По результатам контроля тестштаммом P-l (прототип) агар этой се рии признан годным для диагностики холеры.

Первый день. Суточные агаровые культуры тест-штаммов КМ-13 (Р-10588).

КМ-14 (Р-9952) и КМ-15 (P-10117) saсевают в бульон Мартена, рН 7,6.

Второй день. К расплавленному и о остуженному до 45 С агару добавляют ингредиенты цитратно-фосфатного буфера из расчета на 100 мл по 2,0 мл

25Х-ного раствора двузамещенного фосфорио-кислого калия и лимонно-кислого натрия и 0 5 мл 0,6_#_-ного раствора хлористого аммония.

По одной капле суточных бульонных культур каждого иэ тест-штаммов наносят в край тщательно подсушенной пластинки взятого для исследования агара и дают стечь по середине пластинки в виде полосы, После подсыхания посевного материала чашки помещают в термостат при 37 С на 48 ч.

Четвертый день, Чашки Петри с выросшими на них культурами тест-штаммов переносят в холодильник при +4 С, о

Пятый день. Рост тест-штаммов на полосе посева счищают предметным стеклом, обрабатывают парами хлороформа I ч, а затем проветривают 12 ч. Суточные бульонные культуры индикаторов (по 4 культуры на каждую пластинку) подсевают перпендикулярно к полосе роста продуцента также в виде полос.

Шестой день. Учет результатов приведен в табл. 2, П р и и е р 2. Контроль агара

ВНИИВС, серия 8. Работа в первыйшестой дни проводится аналогично примеру 1, Учет результатов приведен в табл. 3. !

P р и м е р 3. Контроль агара дрожжевого, серия 3. Работа в первый-шестой дни проводится аналогично примеру I. Результаты приведены в табл. 4.

Использование предлагаемого способа позволяет повысить точность отбора сред, пригодных для вибриоцинотипирования холерных вибрионов, что невозможно при использовании известного способа, Формула изоб ретения

Способ контроля питательных сред, используемых для вибриоцинотипирования холерных вибрионов, включающий посев тест-штаммов на исследуемую питательную среду H инкубирование IIo севов, отличающийся тем, 1541251 что, с целью повышения точности способа, в качестве тест-штаммов используют культуры бактерий Vibrio

cholerae eltor, штаммы КИ-13, KN-14 и КМ-15, среду параллельно засевают каждым тест-штаммом, после инкубирования к тест-штаммам подсевают ин1

Таб лица 1 I

Спектр ингибирующей активНаличие зон ингнбиции роста индикаторных культур

Тест-штамм

3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 ности

Широкий

+ $ + + + + + + + + + Ф

Умеренный

+ + + + +

Узкий

Таблица 2

Тест-штамм Наличие зон ингибиции роста индикаторных культур

Заключение о пригодности агара для вибриоцинот ип иров ания

1 2 3 4 5

6 7 8 9 10 11 12

Годен

+ + + + + + + + + + + +

+ + + + — + +

+ + +

Vibrio cholerae eltor

КМ-1 3 (Р-10588)

Vibrio cholerae eltor

KM-1 4 (Р-9952)

Vibrio cholerae eltor

KN-1 5 (P-10117) Vibrio cholerae eltor

КИ-13 (P-10588 )

Vibrio

cholerae

eltor

КИ-14 (P-9952)

Vibrio

cholerae

eltor

КИ-1 5 (Р-10» 7) дикаторные культуры энтеробактерий

Ф I и холерных вибрионов, посевы инкуби" руют и определяют пригодность среды

5 для вибриоцинотипирования по спектру ингибирующей активности всех тест,штаммов в отношении индикаторных культур.

1 541 251

Таблица 3

ЗаключеТест-штамм.ние опри- годности для вибриоционо ти

10 11

8 9

4 5 6 7

1 2 3 пирования

Не годен

Таб лица 4:

Заключение

Тест-нтаммы о пригодности агара для вибрио цинотипирования

2 3 4 5 6

8 9

Редактор А. Мотыль

Заказ 264

Подписное

Тираж 490

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101

Vibrio

cholerae

e1tor

КМ-13 (P-10588)

Ч. cholerae

eltor

KN-14 (Р-9952)

V. cholerae

eltor

KN-1 5 (Р-10117) V. cholerae

eltor

КМ-1 3 (Р-10588)

V. cholerae

eltor

KN-14 (P-9952)

V. cholerae

eltor

KN-1 5 ,(Р-10117) Наличие soH ингибиции роста индикаторных культур

+ + + — + — + — + +

f.; аличие зон ингибиции роста индикаторных культур

+ — + Не годен

Составитель Г. Смирнова

Техред N.Ходанич Корректор О. Кравцова.