Способ определения сенсибилизации к аллергенам

 

Изобретение относится к медицине, в частности к аллергологии, и может быть использовано для выявления сенсибилизации организма к аллергенам. Целью является упрощение и повышение точности способа. Способ заключается в том, что из крови больного выделяют лимфоциты и определяют их спонтанную хемилюминесценцию и хемилюминесценцию после 10 - 20 мин инкубации с 20 мкл р-ра аллергена (0,01 - 0,05 мкг/мл) и при возрастании уровня хемилюминесценции на 11% и более после инкубации с аллергеном диагностируют сенсибилизацию к данному аллергену. Изобретение позволяет с точностью 100% в течение 40 мин. проводить выявление сенсибилизации к аллергену. 2 табл.

СООЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (1) G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСХОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4318304/28-14 (22) 20,10,87 (46) 07,06,90, Бюл, 9 21 (71) Киевский медицинский институт . им, акад. A.À.Áîãoìîëüöà (72) Г.Б.Афонина, В.Г.Бордоиос, I0.È,Ãóáñêèé и Л.И,Скрипка (53) 612.015(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

N - !21,0791, кл. A 61 В 10/00, 02.01.84. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ К АЛЛЕРГЕНАМ (57) Изобретение относится к медицине, в частности к аллергологии, и может быть использовано для выявления сенI

Изобретение относится к медицине

В а именно к аллергологии, и может быть использовано для выявления сенсибилизации организма к аллергенам, Целью изобретения является упрощение и повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Лимфоциты вьделяют из 2 мл гепаринизированной крови (20 ед/мл) на градиенте плотности 1,077 г/см по методу Бойум (Boyum), Лимфоциты двукратно отмывают в растворе Хенкса без индикатора, центрифугируя 5 мин при

1500 об/мин, и под считыв ают число клеток в камере Горяева. Раствором Хенкса доводят концентрацию клеток до 1 01,5 млн/мл и помещают в пластиковые кюветы по 1 мл суспензин клеток, Выдерживают 5 мин в биостате хемилюминометра (ХЛМ1Ц-01) при 37 С . Измеряют

„„SU „„1569705 А 1

2 сибилизации организма к аллергенам.

Целью является упрощение и повьппение точности способа. Способ заключается в том, что иэ крови больного вьделяют лимфоциты и определяют их спонтанную хемилюминесценцию и хемилюминесценцию после 10-20 мин инкубации с 20мкл

:р-ра аллергена (0,01-0,05 мкг/мл) и при возрастании уровня хемилюминесценции íà 11Х и более после инкубации с аллергеном диагностируют сенсибилиэацию к данному аллергену, Изобретение позволяет с точностью 100Х в течение 40 мин проводить выявление сенсибилизации к аллергену, 2 табл. уровень спонтанной хемилюминесценции (ХЛ) клеток за 500 с в импульсах в секунду, вносят в пробу 20 мкл раствора аллергена в конечной концентрации 0,01-0,05 мкг/мл, разведенного ,на растворе Хеикса или физрастворе, инкубируют 10-20 мин B биостате при

37 С и измеряют ХЛ в течение 500 с, о

При возрастании показателя ХЛ на 117.

; и более после инкубации с аллергеном диагностируют сенсибилиэацию к данному аллергену.

Пример 1. Больной М, Поступил в клинику с жалобами на приступы затруднения дыхания до 3-4 раз в сутки, кашель с трудноотделяемой мокротой, слабость, недомогание. В результате клинико-лабораторного обследования установлен диагноз: бронхиальная астма I ст,, течение средней тяжести, фаза обострения, хронический бронхит, дыхательная недостаточность Х ст. ХеЭ 15У 705 4

Т а б л и ц а 1

Показатели

Аллергены

Стафило- Гем,стреп- Пыпьца Домашняя кокк тококк тимофе- пыль евки Ф 282

Прирост уровня ХЛ, 7

Кожные пробы

Отрица- Отрицательная тельная

1,05 0,91

0,97 милюминометрия лимфоцитов по предлагаемому способу показала сенсибилиэацию

° ° ольного к стафилококковому аллергену табл,l), 5

Как видно из данных таблицы, прирост уровня ХЛ на lIX наблюдался на стафилококковый аллерген, чтоподтверждается результатами кожных проб и

ИИМЛ. Прирост уровня ХЛ на 7Х не сопровождается изменением кожных проб

И ИИМЛ, что свидетельствует об отсутствии сенсибилизации. После проведеНия курса специфической десенсибилизирующей терапии этот больной выписан из клиники в удовлетворительном состоянии

Пример 2. Больной Г. ПостуПил в клинику с жалобами на сухой кашель без мокроты, носящий приступообразный характер, периодическую заложенность носа, недомогание. На основании клинико-лабораторного обследонания больному поставлен диагноз: хро-35

Нический обструктивный бронхит в фазе обострения, ЛСН I ст. Сенсибилизация к бытовым аллергенам. ХемилюминометПия лимфоцитов крови по предлагаемому способу выявила сенсибилизацию к ал- 3р бергену пыльцы тимофеевки и библиотечной пыли Р 133, при этом использовались различные дозы каждого аллергена

0,01-0,05:, 0,005; 0,1 мкг/мл (табл.2).

Специфическая десенсибилизирующая терапия привела к улучшению состояния больного и выписке его из клиники (положительный результат способа).

Пример 3, Больной П. Посту- 40 пил в клинику с жалобами на слабость, потливость, периодические высыпания на коже, боли в области сердца, ХЛ по предлагаемому способу с набором аллергенов показала повышение показателя на б7. на стафилококковый аллерген и на 77 на аллерген кишечной палочки (отрицательный результат). Кожные пробы также отрицательные, У больного обнаружены положительные ревмапробы.

При дальнейшем клинико-лабораторном обследовании установлен диагноз: ревматизм, активная фаза, I ст, активности. Курс противоревматической терапии привел к улучшению состояния больного и выписке его иэ клиники.

Всего обследовано 25 больных с сенсибилиэацией к стафилококковому аллергену, аллеpreну библиотечной пыли и др. Изобретение позволяет увеличить точность выявления сенсибилизации на 78X — 100Х, а также упростить способ за счет уменьшения числа реактивов, этапов исследования, отсутствия необходимости применения токсичных реактивов и уменьшения до

40 мин времени исследования.

Формула изобретения

Способ определения сенсибилизации к аллергенам путем инкубации лейкоцитов с аллергеном и беэ него с последующим физико-химическим исследованием образцов, о т л и ч а ю щ и й— с я тем, что, с целью упрощения и повышения точности способа, выделяют фракцию лимфоцитов, измеряют их хемилюминесценцию и при увеличении уровня хемилюминесценции после инкубации с аллергеном на 11Х и более по сравнению с исходной определяют сенсибилизацию к аллергену, 1569705

Таблиц.а Й

Аллергены

Показатели

ДомашГеи.

Бытов ая

Стафилококк стрепт, пыль № 133 няя пыль № 282

Отрица- ++++ тельная

О тр ица--- О трицательная тельная

Редактор И.Иулла

Заказ 1444 Тираж 512 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãîðîä, ул. Гагарина, 101

Прирост

Е

ИИИЛ

Кожные пробы

Пыльца тимоф еевки

6 3 l 9 4 22

0,97 1,05 0,71 0,94 0,57

Составитель О.Филатов

Техред M,Äèäûê Корректор Л.Патай