Способ оценки биологической активности препаратов из комплекса нуклеотидов

 

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии. Целью является повышение точности способа. Цель достигается тем, что исследования проводят на мутантных по пигментной дистрофии сетчатки крысах линии CAMPBELL. Крысам вводят испытуемое вещество, в частности препарат ЭНКАД. Далее готовят электронно-микроскопические препараты сетчатки и под микроскопом считают в наружном сегменте фоторецепторов наличие мембранных скоплений дисков. Если в опытной партии крыс скопления дисков увеличивается на 10% и более по отношению к контролю, препарат оценивается как обладающий активностью для лечения пигментной дистрофии сетчатки.

665 А1

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (51)5 G 01 N I/28 А 61 В 10/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H А BTOPCHOIVIY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4291509/28-14 (22) 28.07.87 (46) 07.10.90. Бюл. N - 37 (71) Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца и Институт биологии развития им. Н.К.Кольцова (72) О, Г.Строева, И. П.Хорошилова, В.А,Поплинская и И.Г.Панова (53) 616-0. 88. 9 (088, 8) (56) Yates C., Dewar А., Wilson Н., Wirterbur А,, Read ng H, Histological

and biochemical atudying of a new

strain of dystrophic rats Exp Eye

Res, 1974, ч, 18, р. 119-133.

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Способ осуществляют следующи . образомом.

Новорожденным крысам линии Campbell с наследственной дистрофией сетчатки под кожу живота вводят 0,1 мм

3,5%-ного раствора ЭНКАДа, что составляет 3,5 мг вещества (производного ну-. клеотида) ежедневно в течение 6 или

8 дн. На 7-й или 9-й день соответст- венно животных умерщвляют путем декапитации. Глазные яблоки фиксируют в

2%-ном глютаральдегиде на фосфатном

2 (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ БИОГ!ОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТОВ ИЗ КОМПЛЕКСА

НУКЛЕОТИДОВ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии. Целью изобретения является. повышение точности способа. Цель достигается тем, что исследования проводят на мутантных по пигментной дистрофии сетчатки крысах линии Campbell. Крысам вводят испытуемое вещество, в частности препарат

ЭНКАД. Далее готовят электронно-микроскопические препараты сетчатки и под микроскопом считают в наружном сегменте фотор ец епторов наличие мембранных скоплений дисков. Если в опытной партии кры- скопления дисков увеличиваются на 10% и бппее по отношению к контролю, препарат оценивается как обладающий активностью для лечения пигментной дистрофии счетчики.. буфере, задний сектор. Затем глаз разрезают на фрагменты, площадью около

I мм, фиксируют в 2%-ном глютарапьдегиде в течение 3,5 ч. Промывают в

0,2 M растворе сахарозы на том же буфере в 1%-ном растворе четырехокиси осмия в течение 1 ч. Затем обеэвожи-. вают в спиртах восходящей крепости (30-, 50, 70, 96, 100 ) и заливают в ар алдит.

Ультратонкие- срезы, содержащие пигментный эпителий и наружные слои сетчатки, контрастируют 3%-ным уранилацетатом и нитратом свинца по Рейнольдсу, исследуют в электронном микроскопе. Проводят морфометрию очагов

1597665

Фор мул а из обретения

Составитель Л. Стебаева

Техред M.Õoäaíè÷

Редактор А. !Чандор

Корректор Т,Малец

3 ак аз 3046 Тираж 507- Подписное

ВНКИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Прои.-водственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãîðoä, ул. Гагарина,101 мембраногенеза на 7-й и 9-й день после рождения в контроле и опыте, Подсчет очагов мембраногенеза проводят, в полях зрения. 3а очаг мембра1 ногенеза принимают единичные мембраны или скопление мембранных дисков, которые определяют между апикальным отростком пигментного эпителия и в субретинальном пространстве» Оценку мем- 10 браногенеэ а проводят по четырехбальной системе, отражающей 4 категории у слов ной площади поля зрения, з анимаемой дисками: от сут стви е мембр ан в пол е эр ения (категория О); мембранные комплексы, занимающие около 1/3 поля зрения и меньше *(категория 1); мембранные комплексы, занимающие

1/2 поля зрения (категория 2);. мембранные комплексы, занимающие около 2/3 поля зрения и больше (категория 3) °

Для оценки величины стимулирующе- 25

ro эффекта ЭНКАЦа используется формула

R= — —: 1001

Son Sк а а к где R — величина, отражающая эффективность стимулирующего действия испытуемого препарата, 7;

Б — общая площадь, з анимаемая юп мембранными дисками фоторецепторных клеток в опыте;

Ь вЂ” общая площадь занимаемая к

В мембранными дисками в контроле.

Общая площадь вычисляется путем суммирования произ ведений условно вы40 раженной площади полей, занятых дисками в каждой категории, Пример 1. Крысам введено 1 мп 45

3,57.-ного раствора ЭНКАДа 1 раз в день в течение 6 дн (серия У 1), Да- лее готовили ультрамикроскопические срезы сетчатки. На ср езах просматривали.

200 полей зрения. В.контроле крысам введен физиологический раствор, При просчете выявлено, что в опытной пробе скопление мембранных дисков увеличено на 137 от нормл, что дает возможность определить ЭНКАД, как обладающий фармакологической активностью при ретинальной дистрофии, Пример 2. Крысам введено

0,1 мм 3,57.-ного раствора ЭНКАДА 1 раз в день в течение 9 дн (серия Р 3) . . При электронной микроскопии в сетчатке в опыте отмечалось формирование соединительных ресничек, тесно, контактирующих с плаэматической мембраной пигментного эпителия и располагающихся между апикальными отростками, Мембранные диски наружных сегментов при обзорном исследовании выявились лишь в отдельных полях в виде единичных скоплений.

При просчете выявлено, что в опытной пробе скопление мембранных дисков не увеличивается по отношению к норме, В связи с этим излученная партия ЭНКАДа не является активной. Пре.парат потерял активность °

Изобретение позволяет повысить точность определения фармакологической активности препаратов комплекса нуклеотидов, применяемых для лечения пи гмент ной дистрофии сетчатки.

Способ оценки биологической активности препаратов из комплекса нуклеотидов путем офтальмологического исследова"ия, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, исследования проводят на мутантных крысах Campbell при этом в сетчатке дополнительно в наружных сегментах фоторецепторов определяют наличие скоплений мембранных дисков и при увеличение их количества на 107 и более от нормы оценивают препарат как ак т и вный.