Стабилизатор эритроцитов

 

Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к усовершенствованию реагентов для диагностики вирусных и бактериальных инфекций, индикации возбудителей из объектов внешней среды и биологических материалов. Целью изобретения является расширение арсенала реагентов для стабилизации эритроцитов при постановке реакции непрямой гемагглютинации (РНТА). ПОСТАВЛЕННАЯ ЦЕЛЬ ДОСТИГАЕТСЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЖЕЛЧИ. ПРИ ЭТОМ ОПТИМАЛЬНОЙ ЯВЛЯЕТСЯ ЕЕ 1% КОНЦЕНТРАЦИЯ НА ФИЗИОЛОГИЧЕСКОМ РАСТВОРЕ. 3 ТАБЛ.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТ0РСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPblTHRM

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4640249/30-13 (27) 23 ° 01 а89 (46) 07.12,90, Бюл, № 45 (71) Институт микробиологии и виру» сологии АН КазССР и Институт эпиде миологии, микробиологии и инфекционных болезней Министерства здравоохранения КазССР (72) Т.Б.,Кирющенко, Р.У.Бейсембаева, .П.Н .Архипов,.М Х.Ñàÿòoâ, .С.С,Багашева и.С ЕАсанова (53) 578:612.017.1(088.8) (56) Гайдамович.С.Я. и др. Реакция агглютинации сенсибилизированных антителами эритроцитов вирусом колорадской клещевой лихорадки. - Вопросы вирусологии, 1974, ¹ 2,.с ° 168-.

172.

Саятов.М.Х. и др. Эффективный ста билизатор для приготовления анти» тельных эритроцитарных диагностикумов к вирусам гриппа А и.В - Вопро» сы вирусологии, 1986, № 6, .с. 674679, Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к усовершенствованию реагентов для диагнос тики вирусных и бактериальных инфекций, индикации возбудителей из объек тов внешней среды и биологических материалов.

Целью изобретения является расширение арсенала реагентов для стаби лизации эритроцитов при постановке реакции непрямой гемагглютинации (РНГА).

„„SU„„1611342 А 1 (gg)g А 61. К 39/12, С 12 11 7/00

2 (54) СТАБИЛИЗАТОР ЭРИТРОЦИТОВ (57) Изобретение относится к медици» не и биологии, в частности к усовершенствованию реагентов для диагностики вирусных и бактериальных инфекций, индикации возбудителей из объектов внешней среды и биологических материалов. Целью изобретения является расширение арсенала реагентов для стабилизации эритроцитов при постановке реакции непрямой гемагглютинации (РНТА). Поставленная цель достигается использованием желчи.

При этом оптимальной является ее

1%ная концентрация на физиологическом растворе, 3 табл.

Пример 1, К трем порциям по

100 мл физиологического раствора до- бавляют 0,5, 1,0 и 2,0 мл желчи соответственно из аптечной упаковки Стабилизирующий раствор готовят перед употреблением. Затем по общепринятой методике ставят РНГА, используя

Уобразные панели микротитратора . "Такачи", Панели оставляют при комнатной температуре (18-22 С) до оседания эритроцитов в контролях.

Максимальное количество выявляемого

1611342

Пример 2. К 100 мл физиологического раствора добавляют мл желчи из аптечной упаковки, - По общепринятой методике ставят РНГА, ис™ пользуя U-образные панели микротитратора Такачи, Результаты реакции 20 . учитывают поспе инкубации панелеи в условиях разных температур: 18 22, 3-5 и 35-37 С.

Результаты, представленные в табл. 2, показывают, что наибольшая 25 чувствительность РНГА проявляется при инкубации панелей при комнатнои температуре (18 22 С) и температуре

3 50С. Однако при 3-5 С время учета реакции удлиняется по сравнению с инкубацией при 18-2? С на 30-40 мин, что существенно важно при выполнении задач по индикации вирусов,. При 35 37 С отмечалось снижение чувствительности РНГА на 1-2 порядка, Пример 3. Проверка специ-. фичности индикации вирусов по предлагаемому способу. РНГА ставят, используя в качестве стабилизатора физиологический раствор .желчи в кон- 40 центрации 1,07. при 18".2? Ñ«

В табл,3 показана специфичность предлагаемого способа индикации вирусов гриппа и арбовирусов в биологических материалах. Антительные эритроцитарные диагностикумы взаимодейств и:т только с гомологичными вирусными антигенами и совершенно не реагируют с гетеролотичными«

Применение желчи в качестве стабилизатора эритроцитов при постановке реакции непрямой гемагглютинации« антигена вирусов гриппа и арбовируСов в исследуемом материале достигается при 17.-ной концентрации желчи. При 0,5/ной концентрации желчи наблюдается спонтанная агглютинация эритроцитарных диагностикумов, а использование 2,0Х-ной концентрации приводит к снижению титра выявляемог нтигена«

Влияние концентрации желчи на

1 чувствительность РНГА показано в табл.: 1.

Пример 4, Проверка эффек™ .тивности и преимущества предла аемого способа модификации РНГА. Стаби» лизирующие растворы готовят известным и предлагаемым способами.

Приготовление стабилизирующего раствора по обычному методу. Готовят

0,15 М одно- и двухзамещенные фосфатные буферные растворы. Затем готовят из них фосфатный буферный раствор рИ 7,2 под контролем рН-метра. После этого к 90 мл физиологического раствора добавляют 10 мл фосфатного буферного раствора (рН 7,2) и 100 Mr сухого бычьего сывороточного альбумина.

Приготовление стабилизирующего раствора по предлагаемому способу„

К 100 мл физиологического раствора добавляют 1 мл желчи их аптечнои упаковки.

Результаты подготовки ингредиентов реакции показывают значительное преимущество во времени, используемых средствах и простоте подготовки ингредиентов реакции по предлагаемому способу, Эффективность индикации вирусного антигена предлагаемым способом не уступает известному.

Пример 5, Предлагаемый способ индикации используют с целью индикации вирусов в имитированных пробах. Для исследования поступило

20 проб. С помощью предлагаемого спо" соба вирусные антигены обнаруживают

s I00X случаях, Предлагаемый метод удобен в применении, экономичен и не требует дефицитных и дорогостоящих препаратов. дополнительного оборудования (рН-метра), а также про» ведения дополнительных операций по приготовлению забуференного раствора и его подтитровки до рН 7,2, Кроме того, предлагаемый способ легко воспроизводим в условиях быстрого раз вертывания лабораторий в полевых условиях. Способ эффективен и рентабелен,, формула и з о б р е т е н и я

)611342

Таблицa1

Вируссодержащи материал

1,0

2,0

0,5

10240

2560

СА

5120

1280

10240

2560

СА

1024

5!2

СА

512

256

СА

СА

128

512 Здесь и в последующих таблицах титры даны

1 в обратных величинах.

СА - спонтанная агглютинация. !

Т аблица 2

Вируссодержащий материал

35-37

3-5

5120

10240

10240

2560

5120

5120

5120

10240

10240

512

1024

1024

256

512

512

5)2

128

512

Вируссодержащий материал

КГЛ

СД гвиппа

А/H)NI:А/H3N2:В

Клещевой энцефалит (КЭ)

Крымской геморрогической

10240 0

Клещевой энцефалит (K3)

Крымской ге» моррогической лихорадки (КГЛ)

Лихорадка долины Сыр-Дарьи (ЛДСД)

А/СССР/090/77 (H)NI)

А/Филиппины/

/2/82 ()13N2)

В/Сингапур/

/222/79

Клещевой энце» фалит (КЗ)

Крымской геморрогической лихорадки (КГЛ)

Лихорадка долины Сыр-Дарьи (ЛДСД)

А/СССР/090/77 (Н 1111)

А/Филиппины/

/2/82 (H3N2)

В/Сингапур/

/222/79

Титр РИГА при концентрации желчи, ь о условиях температур, С

Таблица 3

Титр РНГА с эритроцитарными диагностикумами к вирусам

I 811342

Продолжение табл 3 ритроцитарными диагносрусам лихорадки (КГЛ) 0

Лихорадка доли ны СырДарьи (ЛДСД) 0

А/СССР/090/77 (Н I N1) 0

А/Филиппины/

/2/82 (H3N2) 0

В/Сингапур/

/222/79 0

5120 0

10240 0

1024 0

512 0

0 512!

Составитель С. Светлышев

Техред JI.0лийнык Корректор М,Максимишинец

Pедактор . И, Горная

Заказ 3783

Тираж 552 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская. наб., д. 4/5

Произзодственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,)01