Способ проведения иммуноанализа

 

Изобретение относится к иммунологическому анализу и может быть использовано в биологии, медицине и сельском хозяйстве для определения биологически активных веществ. Целью изобретения является повышение чувствительности диссоционно-усиленного лантанидного флуоресцентного иммуноанализа. Для этого твердая фаза предварительно обрабатывается перед внесением специфического конъюгата антитела или антигена, меченного хелатом лантанида, буферным раствором, содержащим поликарбоновую кислоту (10<SP POS="POST">-3</SP> - 10<SP POS="POST">-5</SP> М/л) и ионы кальция (10<SP POS="POST">-2</SP> - 10<SP POS="POST">-4</SP> М/л). 2 табл.

СОЮЗ СожТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСГ1У6ЛИК щ) С 91 К 33/53

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

Г!О и306Ретенияч и ОткРытиям

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4401353/31-13 (22) 31. 03.88 (46) 30. 12.90. Бюл. М 48 (71) Институт биохимии им, А,Н. Баха и Институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи (72) А.П. Савицкий, И.В. Пономарева, К.Л, Наханина и,В.С. Архипова (53) 543.9(088.8) (56) С1in. Chem, 1983, ч, 29, р, 60-64. (54) СПОСОБ ПРОВЕДЕНИЯ ИММУНОАНАЛИЭА (57) Изобретение относится к иммунологическому анализу и может быть нспольИзобретение относится к иммуноанализу, в частности к способам проведения диссоционно-усиленного лантанидного <рлуоресцентного иммуноанализа, и может быть использовано в медицине, биологии, "сельском хозяйстве.

Целью изобретения является повышение чувствительности диссоционноусиленного лантанидного флуоресцентного иммуноанализа, Пример 1. Определение моноклональных антиинсулиновых антител.

На полистироловые планшеты адсорбируют инсулин (1О мкг/мл) из 0,1 M кароонатного буфера, рН 9,2 в течение ночи при комнатной температуре.

Трижды отмывают раствором (9 г/л

NaC1 и 0,5 г/л NANO,). Насыщают поверхность планшеты бычьим сывороточным альбумином (5 г/л) из О, 1 М карбонатного буфера, рН 9,2 — 2 ч при

37ОС. После 3-кратного отмывания

„SU, 1617381 A 1

2 зовано в биологии, медицине и сельском хозяйстве для определения биологически активных веществ. Целью изобретения является повышение чувствительности диссоционно-усиленного лантанидного флуоресцентного иммуноаналиэа. Для этого твердая фаза предварительно обрабатывается перед внесением специфического коньюгата антитела или антигена, меченного хелатом лантанида, буферным раствором, содержащим полнкарбоновую кислоту (10

10- М/л) и ионы кальция (10

10 М/л). 2 табл. наносят моноклональные антиинсулииовые антитела Е о(2,5 мкг/мл) в буфере — 50 М/л трис-НС1 (рН 7, 7 при 25 ), 9 г/л NaCl, 100 мкл/л

Твина-20, 10 М/л хлорида кальция и 10 з этнлендиаминтетрауксусной о кислоты, инкубируют 30 мин при 37 C.

Лунки трижды промывают и вносят ме, ченные хелатом европия кроличьи антитела против глобулинов мыши о (КАИ вЂ” Eu), инкубируют 1 ч при 37 С.

После 3-кратной отмывки в лунки добавляется усиливающий раствор (Pдикетон), перемешивают на шенкере в течение !О мин, затем измеряют флуо.ресценцию европия íà "Arcus 1230" флуорометре (ЬКВ).

В табл. 1 представлены данные

ВАМ-Ец по отношению сигнал опыта/ сигнал контроля при использовании ,различных концентраций поликарбоновы кислот и хлорида кальция.

1617381

Формула и з о б р е т е н и я

Та блица!

Концентрация поликарбоновых кислот и хлори-да кальция, М/л сигнал опыта

Отношение при RAN-Eu сигнал контроля

Ф мкг на лунку

6 2 0,66 0,22 0,073 0,024

10 3

1 0-3

10-4 .10 3

10-з

10 2

10-

10 3

16,3 81 „3 05,8 82,6 77,9 25,7

17;6 65,6 75,3 70,5 47 l6,3

16,7 62,2 74,1 66,8 55,2 20,4

ЭДТА

СаС1

ДТРА

СаС1

ЭДТА

СаС1т

ЭДТА

Сас1

1.8,1 52,4 64,3 48,8 29,8 14,7

Таблица 2

6 2 0,66 0,22 0,073 0,024

RAN-Eu мкг на лунку

16 9 68 7 76 4 71 5 48 4 1á 4

Сигнал контроля

Составитель А. Горбатов

Техред Л.Сердюкова Корректор М. Пожо

Редактор М. Циткина

Заказ 4117 Тираж 511 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва„ Ж-35., Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óèropoä, ул. Гагарина,101

Пример 2. Способ осуществляют согласно примеру 1, но в качестве соли кальция используют 10 M нитрата кальция, а в качестве поликарбоновой кислоты - 10 М циклогенсандиаминтетрауксусную кислоту.

Данные йо осуществлению примера 2 представлены в табл. 2.

Таким образом, предварительная обработка твердой фазы поликарбоновой кислотой и солью кальция перед нанесением специфического коньюгата позволяет увеличить соотношение ! сигнал опыта в 1 5-2 раза и, есигнал контроля довательно, повысить чувствительность определения при проведении иммуноанализа.

Способ проведения иммуноанализа включающий приготовление иммуносорбента, инкубацию иммуносорбента с анализируемыми пробами, внесение специфического конъюгата, антигена или антитела, меченного хелатом лантанида, добавление усиливающего раствора, считывание результатов, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности, инкубацию проводят в буферном растворе, содержащем ионы кальция и поликарбоновую кислоту в концелтра= ции 10-2 — 10 М/л и 10" -10 "М, 1ã. соответственно,