Способ определения антиоксидантной активности липидов крови

 

Изобретение относится к биохимии и предназначено для оценки суммарной окислительной стабильности липидов крови„ Цель изобретения - повышение точности и сокращение времени определения. Способ заключается в стабилизации крови цитратом натрия, разделении плазмы и эритроцитов центрифугированием , экстрагировании липндов из плазмы или эритроцитов смесью гептана и изопропилового спирта, отделении гептанового экстракта, его сушке сульфатом натрия, внесении в экстракт раствора азобисизобутиронитрила в гептане в количестве, обеспечивающем концентрацию ингибитора в экстракте 0,0095-0,0105 мг/мл, насыщении кислородом и определении количества поглощенного кислорода с последующим расчетом периода индукции и скорости окисления о Изобретение позволяет сократить время анализа в 2 раза и повысить точность определения в 2-5 раз о 2 табл. с е сл

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

COUI

РЕСПУБЛИК (gg)g С 01 N 33/49 33/92

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГННТ СССР (21) 4610347/14 (22) 28,11,88 (46) 23,04.9 f. Бюл, Р 15 (71) Институт физико-органической химии АН БССР и Минский государственный медицинский институт (72). Т.П.Кенигсберг, В.М.Иоин, Н.Г.Арико и В.Е.Агабеков (53) 612.015(088.8) (56) Ушкалова В.Н., Иоанидис Н.В.

Вопросы медицинской химии. 1986, У 6; с. 129-131. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ JIHIIHPOB КРОВИ (57) Изобретение относится к биохимии и предназначено для оценки суммарной окислительной стабильности липидов крови. Цель изобретения — повышение точности и сокращение времеИзобретение относится к биохимии, а именно к способам определения антиоксидантной активности биологических жидкостей, и может быть использовано для определения антиоксидантной активности липидов крови.

Цель изобретения — повьппение точности и сокращение времени определения.

Способ осуществляется следующим образом.

Пельную кровь стабилизируют раствором цитрата натрия, разделяют,плазму и эритроциты путем центрифугирования, Порцию крови или эритроцитов смешивают со смесью гептана и изопропилового спирта 1:1 (по обьему), ÄÄSUÄÄ 1 44033 А 1 ни определения. Способ заключается в стабилизации крови цитратом натрия, разделении плазмы и эритроцитов центрифугированием, экстрагировании липидов из плазмы или эритроцитов смесью гептана и изопропилового спирта, отделении гептанового экстракта, его сушке сульфатом натрия, внесении в экстракт раствора азобисизобутиронитрила в гептане в количестве, обеспечивающем концентрацию ингибитора в экстракте 0,0095-0,0105 мг/мл, насыщении кислородом и определении количества поглощенного кислорода с последующим расчетом периода индукции и скорости скисления„ Изобретение позволяет сократить время анализа в

2 раза и повысить точность определения в 2-5 раз. 2 табл.

Cb центрифугируют и выдерживают для рас- р слоения фаз. Гептановый экстракт су- р шат безводным сульфатом натрия. К

1,5 мл гептанового экстракта, эквивалентного 0,03 мл плазмы, добавляют 0,5 мл раствора азобисизобутиронитрила (АИБН) в гептане концентрацией 0,038-0,042 мг/мл, что обеспечивает в итоге концентрацию инициатора в экстракте 0,0095-0,0105 мгlмл. Раствор насьпцают кислородом, термостатируют при 60 0,2 С и измеряют коли- Ъ чество поглощенного кислорода во вре» мени (t) манометрически, Кинетическую кривую поглощения кислорода представляют в координатах (0,) -(v)

f hi f при этом кривая трансформируется в

1644033 ломаную линию, .состоящую из двух участков. По тангенсу угла наклона левого участка ломаной находят величину обратной максимальной скорости

-I 5 окисления (Vgg )

Перпендикуляр, опущенный,из точки излома на ось абсцисс, отсекает на ней отрезок, численно. равный обратной, величине. периода индукции (С д, . Po значениям Vy и ь н„А определяют V«

r и "ннд °

Отличительной особенностью способа является то, что азобисизобутиронитрил вводят в гептановый экстракт 1 и в виде раствора в гептане в количестве, обеспечивающем концентрацию инициатора в экстракте 0,0095»

0,0105 мг/мл. Это позволяет сократить время анализа в 2 раза и повысить. точность определения с 2-10 до

О, 9-1, 4 .

Пример 1. 1,5 мл экстракта плазмы крови донора (регистрационный номер Минской станции переливания крови 0200047) смешивают с 0,5 мл раствора АИБН в гептане концентрацией

0,034 и 0,038 мг/мл, что обеспечивает в итоге концентрацию инициатора в экстракте 0,0085 и 0,0095 мг/мл..

Насыщают пробу кислородом, термостатируют при 6020,2ОС 1 мин и измеряют количество поглощенного кислорода во времени при указанной темпес1. ратуре. Графически определяют ьцпд=

34,5+0,8 и 30,2+0,4 мин, Чп» =6,9 2;

+0,5 и 7,210,3 мм /мин соответственно для концентраций инициаторов 0,,0085 и 0,0095 мг/мл.

Таким образом,при концентрации

АИБН менее 0 0095 мг/мп увеличивается

40 длительность определения антиокислительной активности липидов в среднем на. 14 и возрастает ошибка анализа (с 1,3 до 2,3 для периода индукции).

Пример 2. 1,5 мл экстракта плазмы крови донора (регистрационный номер Минской станции переливания крови 0200047) смешивают с 0 5 мл раствора АИБН в .гептане концентрацией 0,042 и 0,046 мг/мл, что.обеспечивает в итоге концентрацию инициатора в гептановом экстракте 0,0105 и

0,0115 мг/мп.

Насыцают пробу кислородом, термостатируют при 6010,2 C 1 мин и изме 55 ряют количество поглощенного кислорода во времени при указанной температуре, Графически определяют Ь ряд=27, 110,3 с. и 26,410,9 мин, V<< =7,4+0,4 и 7,5 p +0,7 мм /мин соответственно для концентраций инициаторов 0,0105 и

0,0115 мг/мл.

Как вщ.но из приведенных данных,. увеличение концентрации инициатора (более 0,0-105 мг/мл) приводит к возрастанию ошибки определения ням и

Vyy,(с 1, 1 до 3,4% для периода индукции и с 5,4 до 9,3 для скорости окисления).

Использованием в предлагаемом способе указанных граничных значений концентраций инициатора (0 00950,0105 мг/мл) достигается ускорение аналйза при повьппении точности измерения.

Кроме того, в пределах указанных значений АИБН возможно получение воспроизводимых результатов, сравнимых в различных сериях эксперимента и получаемых разными исследователями. АИБН в гептане концентрацией

0,042 мг/мл обеспечивает в итоге концентрацию инициатора в гептановом экстракте 0,0105 мг/мл.

Насьпцают пробу кислородом, термостатируют при 60+0,2 С 1 мин и измеряют количество поглощенного кислорода по времени при указанной температуре. Графически определяют н,=

=27, 1+0,3 мин и Чо»=7,4+0,4 мм /мин.

Пример ы 3-6. Проводят опыты аналогично примеру 2 за тем исключением, что используют кровь доноров возрастной группы 29-39 лет и конечную концентрацию инициатора в экстракте 0,01 мг/мл.

Результаты определения антиоксидантной активности липидов плазмы доноров приведены в табл. 1, а статической обработки этих данных — в табл. 2 (х Бх).

Из приведенных данных видно, что по предлагаемому способу индукционный период сокращается в 1,96 раза, а скорость окисления возрастает в

8,15 раэ по сравнению с известным, что приводит в целом к значительному сокращению времени определения антиоксидантной активности, Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает сокращение времени определения антиоксидантной активности липидов крови и повьппение точностй метода, 1644033

Формула изобретения

Таблица 1

Л (ын 0 э муз /мин

Пример. Доноры

Регистрационный Воз- Пол номер Минской раст станции переливания крови

7,3 0,4

28,6+0,4

020047 31

1 ужской

37,710,5 4,6+0,3

5,0 0,3

4,2+0,2

27,4+0,3

21, 8+0,2

29,8Ы,3

5,4+0,2

Т аблица 2

Показатели по способу

Параметры предлагаемому известному

29,06+2,86

5,30 0,49

57,0+4 0

0,65 0 11

1, 15+0, 20 (от 0,92 до 1,40)

5,3+0,5 (от 3,7 до 5,5) (от 2 до 10) П р и м е ч а н и е: Результаты, полученные по предлагаемому способу, сравнивают с данными, установленными по известному способу у мужчин аналот гичной возрастной группы.

Составитель Н,Гуляева

Техред Л.Олийнык

Корректор М. Самборская

Редактор 8. Гунько

Заказ. 1237 Тираж 437 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101

Способ определения антиоксидантной активности липидов крови путем стабилизации крови, разделения плазмы и эритроцитов, экстрагирования липидов смесью гептана и изопропанола, отделения гептанового экстракта, его сушки, внесения в него азобисизобутиронитрила в органическом раство020015

020016

041896

015847 ( иид, мин

Vgg y MM / MHH

Ошибка одиночного измерения: ин рителе, насыщения экстракта кислородом и определения количества поглощенного кислорода с последукицим рас5 четом периода индукции и скорости окисления, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и сокращения времени определения, asoбисизобутиронитрил растворяют в гептане и используют в конечной концентрации в экстракте 0,0095-0,0105 мг/мп.