Способ определения содержания продуктов деградации фибрина в плазме

 

Изобретение относится к медицине, в частности к способам определения компоИзобретение относится к медицине и может быть использовано научно-исследовательскими и клинико-диагностическими лабораториями для изучения состояния гемостаза при различных воздействиях, а также у больных. Цель изобретения - повышение точности способа. Поставленная цель достигается тем, что для повышения точности, упрощения и сокращения длительности анализа фибриноген отделяют центрифугированием с ускорением 8000д,ПДФ осаждают с таким же ускорением, растворяют в 1 н растворе едкого натра, а также тем, что для количественного определения ПДФ применяют прямую спектрофотометрию раствора, используя для пересчета эмпирическую таб лицу зависимости содержания в плазме ПДФ в мг.% от светопропускания проб. Содержание ПДФ в плазме определяют следующим образом. В центрифужный патрон вносят 6,5 мл 0,14 М раствора хлорида натрия и 2,5 мл насыщенного раствора сульфата аммония, нентов и продуктов свертывания крови, и позволяет определить содержание продуктов деградации фибрина (ПДФ) в плазме. С целью повышения точности, упрощения и сокращения длительности определения фибриноген предварительно удаляют из плазмы центрифугированием с ускорением 8000 д, затем ПДФ осаждают с таким же ускорением, осадок растворяют в 1 н. растворе едкого натрия и содержание ПДФ определяют спектрофотометрически при 280 нм с последующим пересчетом на мг.%. Применение способа позволит повысить точность определения ПДФ в 2,8 раза по сравнению с прототипом. смешивают и к смеси добавляют 1 мл исследуемой плазмы, которая стабилизирована с помощью 3,8%-ного раствора цитрата натрия , содержащего 1,3% аминокапроновой кислоты, смешивают при 3-5°С в течение 15-20 мин. Центрифугируют 30 мин при 8000д, осадок переносят в другой патрон и выдерживают на водяной бане при 58°С 30 мин, затем центрифугируют 30 мин при 8000д. Надосадок отбросить, осадок два раза промывают 2 мл 0,14 М раствора хлорида натрия, центрифугируют при 8000д по 15 мин каждый раз. После промывания осадок растворяют в 3 мл 1 н раствора едкого натра нагреванием на кипящей водяной бане в течение 5 мин. Раствор охлаждают и определяют при 280 нм светопропускание. С помощью приведенной таблицы находят соответствующуюполученнуюзначению светопоглощения концентрацию ПДФ в исследуемой плазме. ° П р и м е р. У донора взяли кровь в шприц, содержащий 0,3 мл стабилизирую S е Os СЛ О 00 СЛ СЛ

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (st)s 6 01 N 33/52, 33/48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР .," Ч;) И 1 т

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4208236/14 (22) 10.03.87 (46) 30.06.91, Бюл. ЬЬ 24 (71) Тюменский государственный медицинский институт (72) А.Ш.Бышевский, И.А,Мухачева и

В.M. Шафер (53) 612.015(088.8) г (56) Nanniga Guest. — ТговЬоз. Diathes..

halmorr., 1967, V.17, N. 3/1, р.440. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ПРОДУКТОВ ДЕГРАДАЦИИ ФИБРИНА В ПЛАЗМЕ (57) Изобретение относится к медицине, в частности к способам определения компоИзобретение относится к медицине и может быть использовано научно-исследовательскими и клинико-диагностическими лабораториями для изучения состояния геостаза при различных воздействиях, а такж у больных.

Цель изобретения — повышение точности способа.

Поставленная цель достигается тем, что для повышения точности, упрощения и сокращения длительности анализа фибриноген отделяют центрифугированием с ускорением 8000g,ПДФ осаждают с таким же ускорением, растворяют в 1 н растворе едкого натра, а также тем, что для количественного определения ПДФ применяют прямую спектрофотометрию раствора, используя для пересчета эмпирическую таблицу зависимости содержания в плазме

ПДФ в мг.% от светопропускания проб.

Содержание ПДФ в плазме определяют следующим образом.

В центрифужный патрон вносят 6,5 мл

0,14 М раствора хлорида натрия и 2,5 мл и гсыщенного раствора сульфата аммония, „„. Ж „„1659855 А1 нентов и продуктов свертывания крови, и позволяет определить содержание продуктов деградации фибрина (ПДФ) в плазме. С целью повышения точности, упрощения и сокращения длительности определения фибриноген предварительно удалян т иэ плазмы центрифугированием с ускорением

8000 g, затем ПДФ осаждают с таким же ускорением, осадок растворяют в 1 н. растворе едкого натрия и содержание ПДФ определяют спектрофотометрически при

280 нм с последующим пересчетом на мг.%.

Применение способа позволит повысить точность определения ПДФ в 2,8 раза по сравнению с прототипом. смешивают и к смеси добавляют 1 мл исследуемой плазмы, которая стабилизирована с помощью 3,8%-ного раствора цитрата натрия, содержащего 1,3% аминокапроновой кислоты, смешивают при 3 — 50С в течение

15 — 20 мин. Центрифугируют 30 мин при

8000g, осадок переносят в другой патрон и 0с выдерживают на водяной бане при 58 С 30 (Я мин, затем центрифугируют 30 мин при }

8000g. Надосадок отбросить, осадок два ра- р за промывают 2 мл 0,14 M раствора хлорида у натрия, центрифугируют при 8000g по 15 мин каждый раз. После промывания осадок растворяют в 3 мя 1 н раствора едкого патра нагреванием на кипящей водяной бане в течение 5 мин. Ю

Раствор охлаждают и определяют при

280 нм светопропускание. С помощью приведенной таблицы находят соответствующую полученную значению светопоглощения концентрацию ПДФ в исследуемой плазме.

Пример. У донора взяли кровь в шприц, содержащий 0,3 мл стабилизирую1659855

Индивидуальная вариабельность, установленная путем определения содержания

ПДФ у 18 доноров, равна 9,2 + 1,1, следовательно, ошибка определения ((Q/M) ) 100 . при n = 18 составляет 11,9%.

Таким образом предлагаемый способ позволяет повысить точность определения

ПДФ в плазме в 2,9 раза по сравнению с прототипом.

Формула изобретения

Способ определения содержания продуктов деградации фибрина в плазме. включающий обработку плазмы крови сульфатом аммония с последующим центрифугированием,отличающийся тем,что,сцелью повышения точности, фибриноген, осадок, предварительно удаляют центрифугированием с ускорением 8000g, затем продукты деградации фибрина осаждают с тем же ускорением, осадок растворяют в 1 н. растворе едкого натра на кипящей бане, а затем содержание продуктов деградации фибрина определяют спектрофотометрически при

280 нм.

Пересчет показаний спектрофотометра в значениях светопоглощения при 280 нм на концентрацию ПДФ в плазме (при составлении таблицы учтено трехкратное разведение исследуемого белка в ходе анализа) .

MrO

СПяео

СПгва мг

59

58

57

56 щего раствора, до метки "3", получили плазму, В патрон внесли 6,5 мл 0,14 M раствора хлорида натрия, 2,5 мл насыщенного раствора сульфата аммония, смешали и добавили 1 мл исследуемой плазмы, оставили при 5

3 С на 20 мин. Затем смесь центрифугировали 30 мин с ускорением 8000g. Надосадок перенесли в другой патрон и установили на водяной бане при 37 С на 30 мин, затем центрифугировали при ускорении 8000g 30 10, мин. Надосадок отбросили, а к осадку добавили 2 мл 0,14 M раствора хлорида натрия, взвесили осадок и вновь центрифугировали

15 мин. Отбросили насадок, опять добавили

2 мл 0,14 М раствора хлорида натрия и цен- 15 трифугировали 15 мин. Надосадок отбросили, а осадок растворили в 3 мл 1 í. pac reaps едкого натрия на кипящей водяной бане в .течение 5 мин. Раствор охладили при ком: натной температуре и определили его све- 20 топропускание при 280 нм, которое оказалось равным 48,0%. Согласно таблице это светопропускание соответствует ПДФ—

З,ОО

3,15

3,30

3,45 3,60

3,75

3,90

4 01:, 4,20

4,35

4,50

4,65

4,80

4,95

5,10 .5,25

5,40

5,55

5,70

5,85

6,00

6,06

6,12

6,18

6,24

6,30

6 N;4

6,78

7,02

7,26

7,50

7,80

8,10

8,40

8,70

9,00

9,30

9,60

9,90

10,2О

10,50

10,80

11,10

11,40

11,70

12,00

12,75

13,50

14,25

15,О0

15,75

16,50

17,25

18,00

18,75

19,50

20,85

21,60

22,65

23,70

29

28

27

26

24

23

22

21

19

18

17

16

14

13

12

11

8

6

4

24,75

25,80 . 26,85

27,90

28,95

30,00

31,80

33,60

35,40

37,20

39,00

42,00

45,00

48,00

51,00

54,00

58,20

62,40

66,60

70,80

75,00

81,00

87,00

93,00

99,00

105,00

111,00

117,00

123,00

129,00