2,7-бис-(3 @ -карбокси-1 @ ,2 @ ,4 @ -триазол-5 @ -азо)-1- окси-8-аминонафталин-3,6-дисульфокислота в качестве реагента для обнаружения белков в полиакриламидных гелях

 

Изобретение относится к области органической химии, в частности к новому химическому азосоединению ряда триазола - 2,7-бис-(3 -карбокси-1/,2 4 -триазол 5 -азо)- 1-окси-8-аминонафталин-3.6-дисульфокислоте (БКТААК), которая может быть использована в качестве реагента для обнаружения белков в полиакрилэмидных гелях. БКТААК требует в 90 раз меньше времени для обнаружения белков и в 10 раз меньше расхода уксусной кислоты для отмывания красителя по сравнению с известными красителями амидочерным 10Б или кумасси голубым R 250. 1 табл.

СОЮЭ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕ ННЫЙ КОМИТЕ Т г10 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Ы (21) 4638857/05 (22) 19.01.89 (46) 07.09.91. 6юл, N. 33 (71) Институт химии им. В.И.Никитина (72) M.К)супов, T.Ï.Êîïèöÿ, И,В.Игнатова и

В.К. Буриче н ко (53) 547.556.433 (088.8) (56) Патент Польши

N 144250, кл. С 07 С 143/70, опублик. 1988.

Biochimia, 1960, ч,1, р. 39.

Biochimia. 1975, v. 631, ¹ 2, р, 595-602. (54) 2,7-Бис-(3 -КАРБОКСИ-1,2,4 -ТРИАЗОЛ-5 -АЗО)-1-ОКСИ-8-АМИНОНАФТАЛ И Н-3,6-ДИСУЛ Ь ФО КИСЛОТА В

КАЧЕСТВЕ РЕАГЕНТА ДЛЯ ОБНАРУЖЕИзобретение относится к области органической химии, в частности к новому химическому аэосоединению ряда

1,2,4-триазола, конкретно 2,7-бис-(3 -карбокси-1,2,4 -триаэол-5 -азо)-1-окси-8-амиI / / нонафталин-3,6-дисульФпкислоте (БКТААК), н щ (ф 11

НО Ь ЬОЗН и — с — соон

-с нн-н которая может быть использована в качестве реагента для ускоренного обнаружения белков в полиакриламидных гелях, Цель изобретения — синтез 2,7-бис-(3

-карбокси-1,2,4 -триазол-5-азо)-1-окси-8аминонафталин-З,б-дисульфокислоты и ее использование в качестве красителя для белков.

Поставленная цель достигается синтезом нового бисаэосоединения 1,2,4-триаэола (6KTAAK)) и применением его в качестве реагента для обнаружения белков.

БЫ„„1675308 Аl

s С 09 В 39/00. G 01 N 33/52

НИЯ БЕЛКОВ В ПОЛИАКРИЛАМИДНЫХ

ГЕЛЯХ (57) Изобретение относится к области органической химии, в частности к новому химическому азосоединению ряда триазола—

2,7-бис-(3 -карбокси-1,2,4 -триазол-5 -аэо)1-окси-8-аминонафтал и н-3, б-дисул ьфок ислоте (БКТААК), которая может быть использована в качестве реагента для обнаружения белков в полиакрилаMèäных гелях.

БКТААК требует в 90 раз меньше времени для обнаружения белков и в 10 раэ меньше расхода уксусной кислоты для отмывания красителя по сравнени1о с известными красителями амидочерным 10Б или кумасси голубым R 250. 1 табл.

БКТААК получают азосочетанием дизотриазолкарбоновой кислоты с аш-кислотой в две стадии: сначала аш-кислоту обрабатывают в кислой ср -.де иэбылгком диаэотриазолкарбоновои кислоты, высаждают продукт и сочетают с диазотриаэолклрбоновой кислотой в щелочной среде.

БКТААК взаимодействует с белками. Реакцию БКТААК с белками можно использовать для обнаружения белков в полииакриламидных гелях.

Пример 1. 3,2 г (0,01 M) аш-кислоты растворяют при слабом нагревании в 200 мл дистиллированнои воды. Смесь быстро охлаждают, интенсивно перемешивая, и по каплям добавляют охлажденный раствор

2,1 г(0,015 М) диаэотрилзолкарбоновой кислоты в смеси 22 мл концентрированной HCI и 7,5 мл воды. Все это делается при охлаждении льдом

Реакционную смесь ост, вляют при кîM натной температуре на 10-12 ч. С ."есь окрашивается в темно-красный цвет.

1675308

Краситель Время огмывания фона краси-., ход 7% ной ук теля лоты, м

БК1ААV,Ал)идо черный 105

К/масси (олубой Р-250

5 — 10 мин

15 — 20 ч

15ч

200- 300

200 -300 Б КТАЛК вЂ” 2, 7-Г.;()с -(7- ка р бокс и-1,2 .4 т риа эол-5-а за)-1-окси-8-амин о » афтал»» -3,6-/tl";óë üф(К»СЛО<П.

Сост;)пит е» ь Т, К;)л vHL) t

Те ред fvl.Ìoðãet<òa/3 Корректор В. Гирняк

I Е/3;»(тор Е. 117(iii,.3 о, ) Э,) () i ()

В111 . П)1 Госу,,7()",1

Г I i f) a >K Подписное

i.(»»()(О комитета по изобретениям и открытиям flpl1 ГКН1 СССР

113035. Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Ъ

17д7(е/»,cvltlt комбинат "Патент", г. Ужгород, ул Paf;if)i»i;3, 101

< 1ðê)(<эпОдгт I)(.ill<() Мо»оазокраситель высали)воют с помощью

ИОС!, Осадок 1)астооряк)т п 18 M/t 5%-ной

Na0I1, фильтру>ог рас7uot)» действие.1 ко»цен(р»1)оаа»)<ой IICI О(аждают и отделяют

Осадок ttf)cictt ejt«, Осадок повтор»о раство 5

I)!3tc)) в 10 мл 5%-ного раствора Г1а011, фильтру)О7 11 r. (tony«f.:t

)» I c i) ипilctë II)OÐPK

>.17», .)и пор(1»ями 2,1 г (0,015 М) диаэотр(1;:i лкпр )D»o)7oit кислоты. PeaKцион»ую 10 сл;ась oc); вляюг 1<а 2 сут г)ри комнатной температуре. Смесь 1<риобретает темно-зеленый ll,()eT. Ос;)док растпоря<ог п 5,-IIQM раст:Зоре f Ja0H ll ссажд;)!OI 6 li. HCI. Переосах.д;: от 3 ) р» раэ-, Г1ромыва<о) осадок 15

5-10 рпэ, кр.)с7аллиэопыппют пощесгво»э под»О-с»()ртопои с 1pcL1 (2:1).

Аэосое/Clif

IIDK7ça/ILI. ч)о всегда остается I

)< Djt»IСЯ п (3((1, )Е СО Il<.

Результаты 7;i(мпi< (<<ого анализа.

Наиде»О, %; С 23,12; I I 2,55; 1 1 18.75; ()с<а(OK 2f«/1 1, 30

Hi i «1cлeiio,,", : С 23,16; 11 2,77; f! 18,58; ос!пток 29,(3.

Из полy«et

r to)t(t!о ш,<пест» следуюп(yto формулу соедиt,eíL1ÿ CtcH70t tN1tS f!a4 81(20, молеку- 35 лярны 1 пес 82();

I; DOC,— С вЂ” )1

oil

t< =) I,А.-с, t1=N

11 -Nit t ) (. ! iuo>s эоз))((. Н вЂ” С вЂ” СОО)а 10

-- г.- 11 ()It)o

I/I I - t !

Пример 2. Использование БКТААК в качестве реагента для обнаружения белков в полиакриламидных гелях (ПААГ).

Электрофорез белков (гистонов, рибо»уклеазы, и др.) в полиакриламидных гелях проводили по методу Паниума и Чокли в

1рубках диаметром 5 мм и высотой 100 мм.

После электрофореза гели окрашивали

0,2%-ным раствором красителя БКТААК в смеси этанол:вода:СНзСООН в соотношении (5:5:1), а также для сравнения окрашивали и 0,2%-ным раствором амидо черного

10Б и кумасси голубого P-250. Гели окрашивали в течение 16 ч.

Применение БКТААК для обнаружения белков в полиакриламидных гелях поэооляэc опОеделять белки при концентрации 10109 М и»е требует многократной отмывки геля от избытка красителя, что очень удоб»о при серийных анализах белков.

В случае известных красителей — амидо черного 10Б и кумасси голубого P-250, требуется длительное время и большой расход уксусной кислоты для отмывки полиакриламидных гелей от избы) ка красителя, что значи (ел ьно удлиняе(время анализа белков.

В таблице приведены сравнителы<ые д»i»tie предлагаел<ого красителя с известным.

Формула изобретения

2,7-Бис-(3 -карбокси-1,2,4 -триаэол-5

/ / / /

-а зо)-1-о к си-8-ам и н он а фт ал и н-3,6-дисул ьф

Окислота формулы

HOOC- С - Л1 С-N= N

N — NH

íî„s sogt

Л/-- С вЂ” COOH — с If

NH — 3 1 в качестве реагента для обнаружения белков о полиакриламидныx гелях.