Способ количественного определения желчных кислот

 

Изобретение касается аналитической химии, в частности количественного определения желчных кислот, играющих важную физиологическую роль в организме человека и животных Цель - повышение чувствительности и упрощение анализа Его ведут обработкой пробы смесью радамина 6Ж и монооктилфенилового эфира полиэтиленгликоля-30 (молярное соотношение 1:(16-24) с последующим фотометрированием раствора . В этом случае достигается повышение чувствительности в 30 раз (с 24,4 до 0,8 мг/л) и сокращение времени анализа с 70- 75 до 2-3 мин, что позволяет использовать способ в качестве экспресс-метода 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 01 N 21/78

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ1

0 4 (Л

4 (Л

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4718932/04 (22) 11.07.89 (46) 07.09,91. Бюл. № 33 (71) Киевский гасударственный университет им, Т. Г. Шевченко (72) А. Т. Пилипенко, С. А, Доленко, О; А.

Запорожец, Л, А, Юшко, В. В. Сарнацкая, В.

Г, Николаев и С. А. Куличенко (53) 543.42,063(088.8) (56) Blader Ceipidor U. Curir1i R., D ascenzo

G., Tomasstti Ш Jhermochim, acta, 1981, 46, N. 3, с. 269 — 278, Рипатти П. О. Попова P. А., Коган Т. Б.

Вопросы мед. химии. 1969, 15, ¹ б6,, сc, 630-633. (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖЕЛЧНЫХ КИСЛОТ

Изобретение относится к аналитической химии органических соединений и может быть использовано для количественного определения желчных кислот, являющихся важнейшей составной частью желчи и играющих большую физиологическую роль, Целью изобретения является повышение чувствительности определения и упрощение способа.

Пример 1. Определение желчных кислот (ЖК) предлагаемым способом.

В градуированную пробирку помещают

1 мл глицинового буферного раствора с рН=10,0, 1 3 мл водного оастворародамина у 6Ж (Р6Ж) 2,5.1 0 4 М, 0,5 мл 1,3 10 М рас твора монооктилового эфира полиэтиленгликоля-30 (МОФЭП-30) и аликвотную часть анализируемого раствора. содержащую 5400 мкг желчной кислоты, Доводят раствор до 6 мл дистиллированной водой и измеряют его оптическую плотность на спектрофо 43„„1675750 А1 (57) Изобретение касается аналитической химии, в частности количественного определения желчных кислот, играющих важную физиологическую роль в организме человека и животных. Цель — повышение чувствительности и упрощение анализа. Его ведут обработкой пробы смесью радамина 6Ж и манооктилфен ила ваго эфи ра пол иэтиленгликоля-30 (малярное соотношение 1:(16 — 24) с последующим фотометрированием раствора, В этом случае достигается повышение чувствительности в 30 раз (с 24,4 до 0,8 мг/л) и сокращение времени анализа с 70—

75 до 2-3 мин, что позволяет использовать способ в качестве экспресс-метода. 3 табл. тометре при Л =550 нм в кювете l=1 см относительно раствора сравнения, не содержащего желчных кислот. Содержание желчных кислот в анализируемом растворе определяют по градуировочному графику. Построение градуировочного графика проводят аналогично с использованием стандартного раствора определяемой желчной кислоты, Результаты количественного определения различных желчных кислот приведены в табл. 1.

Таким образом, результаты, представленные в табл. 1, показывают, что предлагаемым способом возможно проводить определение ЖК при их содержании 5 — 300 мкг в 6 мл конечного объема или 0,8-50 мг/л с относительной погрешностью 0,6 — 9,1%.

Среднее время единичного определения желчных кислот 2-3 мин.

Пример 2, Обоснование необходимости использования смеси Р6Ж и МОФЭП-30

1675t 50

Таблица 1

Введено ЖК, мк

ЖК

Отно гре

5,27

30.5

70,6

99,3

20.3

101

201

298

40,4

80,7

149

296 !.... °

300 холевая ихолевая левая при определении ЖК предлагаемым способом, Введение ЖК, в молекулах которых содержатся 2-3 оксигруппы (холевая, дезоксихолевая кислоты), в водные растворы Р6Ж в отсутствии МОФЭП-30 не приводит к изменению характера спекгров поглощения растворов, что определяет принципиальную невозможность определения этих ЖК, Данные, представленные в табл. 2, показывают принципиальную невозможность определения холевой и дезоксихолевой кислот предлагаемым способом при использовании в качестве цветореагента Р6Ж в отсутсте,ие

МОФЭП-30. Определение выполняют аналогично примеру 1 без введения раствсра

МОФЭ П-30.

Пример 3, Обоснование предлагаемого соотношения концентраций Р6Ж и

МОФЭП-ЗО.

Данные. представленные в табл, 1, показывают возможность определения ЖК предлагаемым способом при малярном соотношении концентраций Р6Ж:МОФЭП30=1:20, В табл. 3 приведены результаты определения ЖК при других значениях соотношения концентраций Р6Ж и МОФЭП-30 предлагаемого интервала, а также при значениях РбЖ:МОФЗП-ЗО, выходящих за предлагаемый интервал. Определение выполняют аналогично примеру 1 с использованием постояннои концентрации Р6Ж и переменной концентрации МОФЭП-30.

Данные, представленные в табл. 3, показывают воэможность реализации цели изобретения при использовании в качестве цветореагента смеси РбЖ-МОФЭП--30 в широком интервале значений соотношения концентраций последних. Максимальная чувствительность способа реализуется при иг.пользовании РбЖ и МОФЗГ1-30, взятых в малярном соотношении 1:(16 — 24). Выход за

5 указанный интервал приводит к уменьшению чувствительности способа. Так, при соотношении РбЖ:МОФЭП-30 равном 1;(16 — 24) возможно количественное определение дезоксихолевой кислоты при ее содержании

10 20 мкг и более в анализируемом растворе, при других соотношениях Р6Ж вЂ” МОФЭП-30 предел обнаружения деэоксихолевой кислоты составляет 40 мкг и более. Качественно подобные результаты наблюдаются при оп15 ределении холевой и литохолевой кислот.

Таким образом, использование предлагаемого способа определения ЖК дает положительный эффект по сравнению с известным способом, выражающийся в по20 вышении чувствительности способа определения в 30 раз (минимально определяемая концентрация ЖК в пробе 0,8 мг/л вместо

24.4 мг/л по прототипу); упрощении способа определения и повышении его экспресс25 ности минимум в 25 раэ (время единичного определения ЖК 2-3 мин вместо 70 — 75 мин по прототипу).

Формула изобретения

30 Способ количественного определения желчных кислот путем обработки анализируемой пробы химическим реагентом с последующим фотометрированием раствора, отличающийся тем, что, с целью

35 повышения чувствительности определения и его упрощения, в качестве реагента используют смесь родамина 6Ж и монооктилфенилового эфира полиэтиленгликоля 30, при их молярном соотношении 1:(16-24).

1675750

Таблица 2

Т а бл иц а 3

РбЖ:МОФЭП-30 Введено, Найдено, Относительмкг мкг ная погрешность,7

ЖК

Дезокси- 1:8 холевая

1:16

1:24

1:32

1:40

1:12

Холевая

1:16

1:24,1: 32

1:40

50 !

Не определяется

tt

102 5,6

297 2,1

20,4 8,7

49,4 2,9

101 2,3

199 0,7

19,7 8,5

49,7 2,2

100 0,6

396- 1,4

Не определяется

50,2 7,1

198 0,8

399 f 7

Не определяется

lI

II

196 3 5.

403 1,5

39,6 9,0

80,2 3,0

151 0,8

298 2,3

40,5 8,8

79,9 2,1

150 0,6

301 . 1 9

Не определяется

80,3 9,0

151 1,3

302 1,8

Не о пределяе тс я