Штамм бактерий viвriо сноlеrае еlтоr inава - продуцент @ - амилазы

 

Изобретение относится к биотехнологии , а именно к получению штаммов-продуцентов ферментов. Цель изобретения - получение высокоактивного штамма Vibrio cholerae eltor Inaba KM-170(B15)- продуцента холерной а-амилазы. Морфологические свойства: подвижные, грамотрицательные, аспорогенные, полиморфные палочки, прямые или слегка изогнутые, с одним полярно расположенным жгутиком. Культуральные свойства: на плотных питательных средах растут в виде прозрачных круглых колоний, с ровными краями. В жидких средах вызывают равномерное помутнение, образуют на поверхности пленку. Физиологические свойства: оксидазоположительные, ферментируют и окисляют глюкозу до кислоты и газа, не ферментируют маннит, относятся к 1 группе Хейберга, имеют декарбоксилазу лизина и орнитина, не растут в 1 %-ной пелтонной воде с добавлением 7 и 10% хлорида натрия, обладают протеолитической активностью . Агглютинируются холерными диагностическими сыворотками 0, Инаба и не агглютинируются сывороткой Огава. Лизируются холерными бактериофагами эльтор, ХДФ 3,4,5 и не лизируются классическим холерным бактериофагом. Активность - амилазы в 1 мл миллиардовой культуральной жидкости после отделения фрагментов клеток Vibrio eltor B15 составляет 113,2 ед АС/мл, что в 22,2 раза выше известного производственного штамма Vibrio cholerae 569В, удельная активность 9,6 ед. АС/мг белка. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК ((st)s С 12 N 9/28, 1/20

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4815124/13 (22) 16.04.90 (46) 15.04.92, Бюл, ¹ 14 (71) Всесоюзный научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" (72) Ю.Ю.Елисеев, Т,B,Áóãoðêoâà и А,К.Адамов (53) 577.15(088.8) (56) Грачева И.М, Технология ферментных препаратов. М,, ВО: Агропромиздат, 1987, с.

170-173.

Авторское свидетельство СССР № 15?3025, кл. С 12 N 9/28, 1988.

- (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ VIBRIO CHOLERAE

E LTOR INABA — П РОДУ ЦЕ НТ а -АМ ИЛАЗЫ (57) Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению штаммов-продуцентов ферментов. Цель изобретения— получение высокоактивного штамма Vibrio

cholerae eltor Inaba КМ вЂ” 170 (В15) — и родуцента холерной а-амилазы, Морфологические свойства: подвижные, грамотрицател ьные, аспорогенные, полиморфные палочки, прямые или слегка изогнутые, с одним полярно

Изобретение относится к микробиологии, а именно к получению штамма холерного вибриона биовара серовара Инаба, продуцирующего фермент а -амилазу.

Известны штаммы грибных и бактериальных культур, продуцирующие а -амилазу.

Наиболее близким по технической сущности является штамм Vibrio cholerae eltor

569В, образующий холерную а- амилазу с активностью 4,1 ед АС/мл, Недостатком известного штамма является низкий уровень активности а-амилазы.,,5U„„1726514 А1 расположенным жгутиком, Культуральные свойства: на плотных питательных средах растут в виде прозрачных круглых колоний, с ровными краями. B жидких средах вызывают равномерное помутнение, образуют на поверхности пленку. Физиологические свойства: оксидазоположительные, ферментируют и окисляют глюкозу до кислоты и газа, не ферментируют маннит, относятся к 1 группе Хейберга, имеют декарбоксилазу лизина и орнитина, не растут в 1%-ной пептонной воде с добавлением 7 и 10% хлорида натрия, обладают протеолитической активностью, Агглютинируются холерными диагностическими сыворотками О, Инаба и не агглютинируются сывороткой Огава. Лизируются холерными бактериофагами эльтор, ХДФ 3,4,5 и не лизируются классическим холерным бактериофагом. Активность— амилазы в 1 мл миллиардовой культуральной жидкости после отделения фрагментов клеток Vibrio е!сог В15 составляет 113,2 ед

АС/мл, что в 22,2 раза выше известного производственного штамма Vibrio cholerae

569В, удельная активность 9,6 ед. АС/мг белка, 1 табл.

Цель изобретения — получение высокоактивного штамма-продуцента а- амилазы, Штамм V, cholerae eltor КМ-170 получен путем отбора чистых культур бактерий, способных к биосинтезу а-амилазы.

Штамм депонирован в коллекции музея живых культур Всесоюзного научно-исследовательского противочумного института

"Микроб" под номером КМ вЂ” 170 (В15).

Штамм Кcholerae eltor Inada КМ-170 характеризуется следующими признаками, 1726514

Удельная активность а — амилазы в надосадке культурной жидкости после отделения фрагментов клеток вибрионов

Белок мг / мл

Активность фермента ед AC / мл

Надосадок культурной жидкости после отделения фрагментов клеток виб ионов

Удельная активность ед АС / мг белка

12,1

12,8

116,2

4,1

Vibrio cholerae eltor B 15

Vibrio cholerae eltor 569 В

9,6

0,32

35

Саста вител ь T. Мал ьцев а

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор И.Муска

Редактор Н.Горват

Заказ 1249 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Уж ород. ул.Гагарина, 101

Культурал ьно-морфологические и ризнаки. Подвижные, слегка изогнутые палочки, спор и капсул не образуют, грамотрицател ьные, На плотном агаре образуют гладкие, круглые, прозрачные с ровными краями колонии диаметром 2-2,5 мм. В жидких средах вызывает равномерное помутнение, образует на поверхности пленку.

Физиологические признаки. Оксидазоположительный, относится к 1 группе Хейберга, ферментирует глюкозу до кислоты без газа, не ферментирует маннит, декарбоксилирует лизин и орнитин, не растет в

1 ф,-ной пептонной воде с добавлением 7 и

10 Р хлорида натрия. Агглютинируется холерными сыворотками О, Инаба, не агглютинируется сывороткой Огава, Лизируется холерным бактериофагом эльтор, ХДФ 3, ХДФ 4, ХДФ 5, не лизируется холерным бактериофа гам, Пример. Культуру штамма V. cholerae

eltor Inaba КМ-10 высевают в 1 g,— Hóþ пептонную воду, рН 7,6 в дозе 10 кл/мл и б выращивают на качалке при 37 С в течение

17 ч. Концентрация микробных клеток при этом равнялась 58 — 60 млрд„концентрация белка в надосадке культуральной жидкости после отделения клеток штамма Кcholerae

5 eltor inaba КМ вЂ” 17012,1 мгlмл, общее количество белка составляло 2420 мг (при объеме 200 мл), удельная активность 9,6 ед.

АС/мг белка. После отделения фрагментов клеток вибрионов центрифугированием при

10 4000 — 6000 g в течение 25 — 30 мин, активность а-амилазы равнялась 116,2 ед

АС/мл, т.е. почти в 30 раз превосходит г амилазу у прототипа (таблица), Штамм К cholerae eltor Inaba КМ вЂ” 170

15 стабилен при хранении.

Использование штамма К cholerae

eltor Inaba КМ-170 возможно для получения очищенных препаратов Q-амилазы для изу20 чения их роли в иммунитете при холере и создания на их основе противохолерных вакцин, Формула изобретения

Штамм бактерий Vibrio cholerae eltor

25 Inaba KM-170 — продуцент а-амилазы.