Штамм @ @ -65-продуцент @ -амилазы
ШТАММ BACILLUS SUBTILIS 65 (коллекция Центрального Музея промышпенньк микроорганизмов института ВНИИгенетика, коллекционный номер ЦМПМ В-238 7) - ПРОДУЦЕНТ об-АМИЛАЗЫ.
СООЭ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (l% (И) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
H АВТОРСКОМ У СВИДЕ1 ЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕКНЬЙ КОМИТЕТ СССР
ГЮ ДЕДАМ ИЭОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3346635/28-13 (25) 3530331/28-13 (22) 16. 10. 81 (23) 20.09.82 (46) 30.04.84. Бюл. И 16 (72) Э.С.Стапчинскене, И.И.Жалакявичене, Д.Ю.Канапенене, М.И.Милятинер, Л.А..Ингиляртене, М.В.Пяткявичюте, А-А.И.Аленис, А.С.Виджюнас,И.И.Кюдулас и А.Л.Юргулис (71) Вильнюсский опытно-промышленныи завод ферментных препаратов (53) 663. 15 (088.8} (56) 1 Авторское свидетельство СССР
В 653902, кл. С 12 К 1/02, 1977.
2. Авторское свидетельство СССР
У 1001681, кл. С 12 N 15/00, 1981.
3(д) С 12 Н 9/28 15/00 С 12 R 1/125. (54) (57) 3ИТАИМ BACILLUS SUBTILIS 65 (коллекция Центрального Музея промышленных микроорганизмов института
"ВНИИгенетика", «оллекционный номер
ЦМПМ В-2387) — ПРОДУЦЕНТ (- АИИЛАЗЫ.
Культура Bacillus subtilis-65 получена из штамма Вас. subtilis
SK-52 в результате ступенчатой селекции при действии 250 мкг/мл, N-метил-N-нитро-N-нитрозогуанидина
I в фосфатном буфере рН 5,0.
Штамм Bacillus subtilis-65 õðàнится во Всесоюзной коллекции института "ВНИИГенетика" под номером
ЦМ ПМ В-2387 и характеризуется
55
1 1089
Изобретение относится к производству ферментов и представляет собой новый штамм Bacillus subtilis
65, используемый для биосинтеза
4.-амилазы. 5
Как продуценты ф. -амилазы известны многие микроорганизмы. Ферменты амилолитического комплекса, продуцируемые бактериями рода Вас Имя имеют промышпенную ценность.. 10
Так известен штамм Bacillus subtilis SK 52 — продуцент 0 -амилазы.
Активность продуцента в производст" венных условиях составляет в среднем 190 ед/мл АС, в колбах26 ед/мл АС $1).
Наиболее близким к предлагаемому является штамм и продуцент
aL-амилазы BacigIus subtilis RAобладающий активностью в ферментерах — 20
401,2 ед-мл АС П2
Недостатками штаммов Baci P fus
subtilis SK-52 и Bacillus subtilis
RA является колониально-морфологическая изменчивость. Оба штамма 25 выщенляют колониально-морфологический вариант М, который вообще не . синтезирует ob -амилазу. Особенно высокой морфологической изменчивостью отличается штамм Bac>Eius З0
subtifis RA в результате которой у штаммов наблюдается снижение амилолитической активности и вырождение штаммов, кроме того колебание амилолитической активности отдельных особей в популяции. Коэффициент изменчивости штамма Bacillus
subtilis SK-52 составляет 38,5Х, штамма Bacillus subtigis RA—
4 1,07, тогда как штамма Baciifus 40
subtilis-65 коэффициент изменчивости составляет 167., что говорит о генетической стабильности штамма.
Цель изобретения — получение 45 штамма, обладающего высокой активностью в условиях глубинного культивирования.
118 следующими морфологическими, культуральными и физиологическим приз-, наками, Морфологические признаки. Культура Bacillus subtilis-65 является палочкой размером (1,7-3,0) х (4,0—
0,6) мк, выращенная на богатой среде, имеет вид толстых, больших палочек, иногда расположенных в цепочках. Палочки подвижные с помощью перетрихиальных жгутиков, граммположительные. Культура образует
Цилиндрические или эллипсоидные споры, размером (1,0-1,5)«(0,6-0,9)мк.
Культурально-физиологические признаки. На мясо-пептонном агаре после
24 ч инкубации в термостате при о
37 С культура образует плоские. сухие колонии плотной консистенции с характерно белым зернистым налетом, легко снимающиеся петлей с arapa.
Диаметр — 2-5 мм. Края почти ровные или слегка изрезаны. Других типов колоний не отмечено.
На ломтике картофеля рост обильный в виде серовато-белой сухой толстой морщинистой пленки. На поверхности мясо-пептонного бульона культура 65 образует тонкую пленку желтовато-белого цвета, бульон остается прозрачным.
Штамм Bacillus subtilis 65 строгий аэроб с оптимальной температурой роста 37 С при рН 6,2-7,0.
Культура усваивает глюкозу, сахарозу, фруктозу, арабинозу> гидролизует крахмал, пентонизирует молоко, разжимает желатину, нитраты восстанавливает до нитритов, на среде .Кларка образует ацетилметилкарбонил.
Пример. Для выращивания штамма В. subtilis 65 продуцента (6 -амилазы используют производственную среду средующего состава, г/л:
Крахмал картофельный 239
Кукурузный экстракт 12,43
Дрожжи пивные 2,19
Лактоза 2,87
Медь сернокислая 0,0036
Аммоний фосфорнокислый двухзамещенный 8,4
Натрий хлористый 0,28
Магний сернокислый
0,14
10891
Количество опыАмилолитическая активность
Способ культивирования
Штамм тов
348,0
375,5
Bacillus subtilis 65
553,5
Bacillus subtilis SK-52 В ферментере
ВасдИиз subtilis RA
Bacillus subtiIis 65
3033, 2
3700
5562,5
Составитель И.Привалова
Редактор Н.Ковалева Техред А.Бабинец Корректор С.Шекмар
Заказ 2871/23 Тираж 522 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Калий сернокислый 2,87
Кальций хлористый 0,45
Стерильно приготовленная и засеян- 5 ная штаммом Вас. Ius subtifis 65 инкубируется в термостате при 37 С на качалке при 180 об/мин, а также в полупроизводственных условиях в ферментерах емкостью 3 м
Через.48 ч роста в культуральной жидкости определяют амилазную активность по методу БЕР. Контрольными штаммами служат производственный 15
Bacillus subtilis SK-52 В колбах
Bacillus subtilis RA
18 4 штамм ВасдИиз subtilis SK. — 52 и BaciIPus subtifis RA.
Результаты испытаний приведены в таблице.
Как видно из таблицы Вас. subtilis 65 отличается амилолитической активностью. Амилолитическая активность в полупроизводственных условиях по сравнению со штаммом Вас.
subti2is SK-52 увеличивается на
18,3 и на 15Х по сравнению с Bacillus зиЪсдБз RA.
Ожидаемый годовой эффект от внедрения ВасН7из subtilis 65 составляет приблизительно 150 15,30 руб.
