Способ приготовления сухого бактериального препарата для производства молочнокислых продуктов

 

Область использования: в молочной промышленности, в частности в микробиологической , при приготовлении сухого бактериального препарата для производства молочно-кислых продуктов. Сущность изобретения: культ ивируют Lactobaclllus acldophilus 317/402, замораживают в течение 2-2.5 ч при (-40Н 50)°С, высушивают в течение 22-24 ч при конечной температуре 37-39°С. 9 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

n>)s А 23 С 9/12

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 4898466/13 (22) 16.01.91 (46) 30.06.92. Бюл. N. 24 (71) Ереванский молодежный центр "Маштоц (72) С, С. Агамалян, P. А. Аракелян, Jl. А. . Ерзинкян, P.À. Мадоян, С.А. Маликоян и

Н.М. Оганесян (56) 637.146 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

ЬЬ 604207, кл. С 12 N 1/20, 1976, Ленцнер. Лактобактерин в профилактике и лечении дисбактериозов кишечника., Тезисы докладов IV Всероссийского сьезда эпидемиологов и микробиологов. 1978, с.

123-125.

Изобретение относится к микробиологической и пищевой промышленности и может быть использовано в медицине при лечении дисбактериозов и других желудочно-кишечных заболеваний, а также при производстве кисло-молочных продуктов, Известны различные сухие бактериальные закваски и способы их приготовления с использованием ацидофильных молочнокислых бактерий.

Влажность известных. сухих заквасок

10 и ниже,.их можно хранить 5-6 мес. притемпературе не выше 10 С.

Известный стандартный сухой препарат лактобактерин выпускается Горьковским заводом в виде таблеток и широко. применяется для профилактики и лечения дисбактериозов кишечника. В состав сухого

„„5U„, 1745096 А3 (54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ СУХОГО

БАКТЕРИАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА.ДЛЯ ПРОИЗ ВОДСТВА МОЛ ОЧ НОКИ СЛ ЫХ П РОДУКТОВ (57) Область использования: в молочной промышленности, в частности в микробиологической, при приготовлении сухого бактериального препарата для производства молочно-кислых продуктов. Сущность изобретения: культивируют Lactobaclllus

acldophilus 317/402, замораживают в течение 2 — 2,5 ч при -40)+50) С, высушивают в течение 22-24 ч при конечной температуре

37-39 С. 9 табл. лактобактерина входят штаммы молочнокислых бактерий L, fermentf 90Г-S4 и L. Ф

plantarum 8R А3. Сухой лактобактерин гото- (Л вится из микробной суспензии путем лиофи- С) лизации из замороженного состояния.

Замораживание осуществляется при -40 С О, в,течение 5-6 ч. Конечная температура высушивания 42 С, Известный препарат разработан в Горьковском НИИЗМ (Tapacoea, 1969) и в Пермском НИИВС (Красик, 1972).

Срок годности препарата 6 — 12 мес. Кбличество живых клеток в 1 г препарата через 6 мес. хранения составляет 3,3 — 3,5 млн„а через 12 мес. 2,1-2,2 млн.

Таким образом, лактобактерин не подлежит длительному хранению, причем активность клеток в результате хранения

1745096 значительно падает и снижаются антагонистические свойства препарата.

Цель изобретения — удлинение срока хранения и повышение качества препарата.

Сущность предлагаемого способа заключается в следующем, Для приготовления сухого препарата молоко эаквашивают молочно-кислыми бактериями L. acldophllus шт. 317(402 "Наринэ", замораживают жидкий препарат в течение 2-2,5 ч при (-40)(-50) С и высушивают в течение 22-24 ч при конечной температуре 37-39 С.

Пример 1. Приготовление жидкого препарата. Молоко жирностью 3,0+0,2% стерилизуют 15 мин при 1 ати, остужают до

39 С. заквашивают 1,5-2%-ной свежей маточной закваской чистых культур молочнокислых бактерий L. acldophllus u выдерживают в термостате при 3? С в течение 6 — 7 ч. Скввшенное молоко выдерживают 2 — 3 ч в холодильнике при 5-8 С.

Молочно-кислые бактерии 1.

acldophllus шт. 317/402 по морфологическим, биохимическим и культуральным свойствам отличаются от известных 1 .

acidophilus. Это граммположительные бактерии, обладающие высокой ферментативной активностью, устойчивые к высоким концентрациям фенола, антибиотическим и химиотерапевтическим препаратам, восстанавливающие молоко, содержащее до

0,3% метиленовой сини, обладающие высокими антимикробными, высоковитаминсинтезирующими и кислотообразующими способностями. Высокоактивные ацидофильные палочки обладают высокими лечебно-профилактическими и органолептическими свойствами.

Пример 2. Приготовление сухого препарата. Жидкую закваску перемешивают, в стерильных условиях разливают в стеклянные склянки, которые закрывают резиновыми пробками, а сверху металлическими колпачками для соблюдения стерильности, и замораживают при -50 С в течение 2 — 2 5 ч, После замораживания снимают металлические колпачки и резиновые пробки, склянки закрывают стерильными ватными пробками и под вакуумом жидкий замороженный препарат высушивают в течение 22-24 ч при начальной температуре сушки -30 С и окончательной 37-39 С, Влажность сухого препарата 2-2,5Я„1

r сухого препарата содержит 3 — 3,2 млрд. живых клеток. Сухой препарат хранится в холодильнике при 6-8 С, Срок хранения 2 года.

Обоснование технологических пара,метров получения сухого. препарата приведено в табл. 1-4.

Влияние продолжительности замораживания жидкого препарата при температуре -50 С на выживаемость клеток в сухом препарате показано в табл. 1.

Из данных табл. 1 видно, что оптимальное время замораживания 2-2,5 ч. Время замораживания, указанное в прототипе. губительно влияет на выживаемость клеток.

Влияние температуры замораживания на выживаемость клеток в сухом препарате (продолжительность замораживания 2 ч) по5

10 казано в табл. 2.

Иэ данных табл. 2 видно, что оптимальная температура замораживания -50 С.

Влияние продолжительности высушивания на антимикробные свойства и выживаемость клеток сухого препарата (окончательная температура высушивания

37 — 39 .С) показано в табл. 3.

Как видно из приведенных данных, оптимальное время высушивания 22 — 24 ч.

20 тельная гибель клеток

30 клеток; антимикробные свойства.

40 При изучении микроскопической карти45

Влияние окончательной температуры высушивания на влажность и количество клеток сухого препарата показано в табл. 4.

Из данных табл, 4 видно, что оптимальная температура высушивания 37-39 С, когда выживаемость клеток максимальная, При конечной температуре высушивания, указанной в прототипе, наблюдается эначиИсследование сухого препарата.

Для определения качества сухого препарата изучались следующие основные признаки: бактериальная чистота (по микроскопическому препарату); продолжительность свертывания молока в зависимости от количества сухого препарата и сроков

его хранения; характер сгустка; кислотность сквашиваемого молока; количество живых ны сухого препарата в поле зрения обнаруживались короткие и длинные палочки молочно-кислых бактерий L. acidophilus. Повторные микроорганизмы не обнаружены, В табл. 5 приводятся данные по свертыванию молока, заквашенного сухой культурой при разных сроках хранения, В результате заквашивания во всех вариантах получается однородный сгусток с тягучей консистенцией, с приятным кисломолочным вкусом и ароматом.

Кислотность сгустка, полученного в результате сквашивания молока сухой культурой, колеблется в пределах от 110,до 180 Т в зависимости от свежести сухого препарата. Так, сухая закваска сразу после изготовления свертывает молоко эа 8-9 ч, а кислотность сгустка составляет 110-120 Т.

Сухая культура через 2 года хранения свер1745096 тывает молоко в течение 22 — 24 ч и поднимает кислотность до 180 Т. С возрастом сухая закваска становится менее активной, в результатее чего продолжительность свертывания увеличивается, а кислотность сгустка 5 повышается.

Одним из основных признаков качества сухого препарата является количество живых клеток в нем. Количество живых клеток в 1 r препарата при хранении в течение О, 3, 10

6, 9, 12 и 24 мес. составляет 3,0-3,2; 2,4-2;5;

2,1-2,2; 1.9-2,0; 1,7-1,8 и 1,0-1,1 млрд. соответственно;

Антимикробная активность сухого пре. парата по отношению к тест-культурам .Е. 15 со!!. Staph. aureus. Klebslella, $а!топе!!а . typhlmlnIum весьма высока (см. табл, 6).

Сравнительное изучение всех основных признаков известного (лвктобактерин) и предложенного препаратов показывает, что 20 количество живых клеток в лактобактерине. значительно ниже, чем в предложенном сухом препарате (см. табл. 7).

Кроме того, выживаемость клеток в . предложенном препарате значительно вы- 25 ше (почти в 600 — 800 раэ), чем в известном.

При исследовании антимикробных свойств известного и предложенного препаратов обнаружено, что лактобактерин по отношению к Staph. aureus антимикробных 30 свойств не проявляет, а по отношению к

Е coll значительно менее активен чем предложенный препарат.

В табл. 8 приведены полученные результатыы. 35

Испытания жидкого и сухого препарата

Наринэ при лечении дисбактериоэа кишеч-. ника у лиц, подвергшихся воздействию малых доз ионизирую щей радиации, проводились на базе Института медицин- 40 ской радиологии МЗ Армении. Под наблюдением находились 74 муж- . чины с дисбактериозом кишечника, принимавших участие в иквидации последствий аварии на ЧАЭС, в возрасте от 28 до 50 лет, .45 постоянно проживающих на территории республики Армения, которые были распределены на три группы.

I группа — 44 "ликвидатора" с дисбактериозом I è II степени, получавшие в качестве 50 лечения кисло-молочный продукт Наринэ по

1 0-1,5 л в день за 4-6 приемов. !! группа — 10 "ликвидаторов" с дисбактериоэом! и II степени, получавшие 15-20 раз в сутки сухой лактобактерин производ- 55 . ства Горьковского НИИЭМ МЗ РСФСР. !! группа — 20 "ликвидаторов" с дисбактериозом и Ilстепени,,получавшие сухую лиофилизированную микробную массу живых антагонистически активных молочнокислых бактерий штамма 317/402 Наринэ.

Во флакон с сухой массой добавляют стакан кипяченой остуженной воды и перемешивают. Препарат принимают внутрь 4 раза по

5,0 г в сутки по назначению врача.

Изучение кишечной микрофлоры больных производили до и после лечения, а также в процессе лечения на 15- и 20-е сутки с учетом методических рекомендаций.

У обследованных больных до начала лечения были выявлены следующие изменения в кишечной микрофлоре: отсутствие анаэробной микрофлоры бифидо- и лактобактерий (менее 10 в 1 r кала) в 100% случаев, уменьшение количества кишечных палочек до 10 -10 у 39 больных (52,7%), увеличение условно-патогенной микрофлоры, в частности энтеробактерий, у 30 боль. ных (40,5%), патогенного стафилококка у 32 больных (43,2%). Из энтеробактерий высеивались энтеробактер, клебсиелла, лактозоотрицательные и гемолитические эшерихии.

В группе I к концу лечения в 70,45% (31 человек) случаев наблюдалась нормализация в составе микрофлоры. У 16 (36,4%) больных Д перешел в Д . При этом отмечено уменьшение кОнцентрации условно-патогенной микрофлоры (клебсиелла, энтеробактер, лактозоотрицательные и ге- . молитические.эшерихии) до 10 -10 и увели2 4 чение концентрации полноценных кишечных палочек. Восстановление количества бифидо- и лактобактерий не отмечал.ось, Как показали исследования, в подавляющем большинстве случаев коррекция дис- . бактериоза с помощью кисло-молочного продукта Наринэ достигалась в течение 15—

20 дней. Так, у 23 (52,2%) больных с Д положительный эффект наступил на 15-20-й день, а у 16 (36,3%) больных, имевших Д,— на 25 — 30-й день.

У подавляющего большинства больных положительные изменения в состоянии кишечной микрофлоры и коррекции дисбактериозов совпадали с положительной динамикой клинических данных, У пяти (11,3%) больных с Д степень дисбактериоза в процессе лечения не изменилась.

В группе !! у семи (70 ) больных было выявлено Д, а у трех (30%) — Д2. Положительная динамика у больных этой группы отмечена на 30-е сутки, у трех(30%) больных с Д и у одного (10%) больного с Дъ У остал ьных шести (60%) больных коррекция не наблюдалась.

Таким образом, кисло-молочный продукт Наринэ восстанавливает анаэробную защитную флору (бифидо- и лактобактерии) в укороченные сроки, подавляет рост энте1745096

Таблица 1

Таблица 2 робактерий и патогенного стафилококка, повышает активность нормальной кишечной палочки. . Основываясь на положительном эффекте воздействия кисло-молочного продукта

Наринэ на микрофлору кишечника у лиц, подвергшихся воздействию малых доз . ионизирующей радиации, задались целью получить лиофилизированный препарат данного продукта и изучить его корректирующие свойства.

8 группе III у 10 (50$) больных с Д на

15-й день исследования наблюдалось уменьшение условно-патогенной микрофлоры, в частности протеуса мирабилис, энтеробактера, клебсиеллы, до 10-10, . увеличение. числа, полноценных кишечных палочек до 10 -10, но восстановления бифидо- и лактобактерий не отмечалось, т.е.

Дъ перешел в Д . У этих больных коррекция дисбактериоза выявлена на 20-й день исследования. У восьми (40 ) больных с Д1 положительный эффект наступил на 15-20-й день, а у двух (10ф) больных с Д степень дисбактериоза в процессе лечения не изменилась,.У большинства больных положительные изменения а состоянии кишечной микрофлоры и коррекция дисбактериозов совпадали с положительной динамикой клинических испытаний.

Таким образом, на микрофлору кишеч.ника лиц, подвергшихся воздействию малых доз ионизирующей радиации. в одинаковой степени положительно воздействуют на кисло-молочный продукт Наринэ, так и его лиофилизированный препарат (см, табл. 9).

5 При сравнительном изучении молочнокислых бактерий штамм 317/402 и лактобактерина установлена эффективность штаима для коррекции дисбиотических изменений в микрофлоре кишечника, Срок коррекции

10 дисбактериоза с помощью молочно-кислых бактерий штамма 317/402 зависел от степени тяжести дисбиотических изменений.

Предлагаемый сухой препарат может храниться до двух лет, по сравнению с лак15 тебактерином он обладает более высокими антимикробными свойствами, при его ис. пользовании выживаемость клеток лучше и молоко свертывается быстрее.

Формула изобретения

Способ приготовления сухого бактериального препарата для производства молочно-кислых продуктов, предусматривающий культивирование молочно-кислых бактерий

25 Lactobaclllus acldophllus, замораживание и высушивание, о т л и ч а.ю шийся тем, что, с целью удлинения срока хранения и повышения качества препарата из

Lactobaclllus acldophllus, используют

30 штамм 317/402, замораживание осуществляют в течение 2-2,5 ч при (-40)+50) С, высушивание проводят в течение 22-24 ч при конечной температуре 37-39 С.

1745096

Таблица 3

Таблица 4

Таблица 5

Т.аблица 6

Таблица 7

1745096

Таблица 8

Табаит1а 9 и р и и е ч е н и е. -t - 10 (степень раэеерения).

Редактор M.Áàíäóðà Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор Э.Лончакова

Заказ 2203 Тираж . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101