Штамм вируса гриппа гкв n 2263, используемый для приготовления диагностических препаратов

 

Использование: медицина, вирусология , приготовление диагностических препаратов . Сущность изобретения: штамм выруса гриппа ГКВ №2263 А/Чимкент/48/90 представляет собой дрейф-вариант прототипного штамма А/Сычуань/2/87 (НН 32). Он хорошо репродуцируется в системе куриного эмбриона при 37°С в течение 48 ч до инфекционного титра 5 ед ЭИДбо/0,2 мл. Штамм хорошо агглютинирует эритроциты кур, в низких титрах эритроциты морской свинки и белых крыс, практически не элюирует с куриных эритроцитов, слабопатогенен для белых мышей, обладает низкой генаагглютинирующей активностью и высокой иммуногенностью. Был выявлен оригинальный антигенный компонент, специфичный только для данного штамма. 5 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4899584/13 (22) 04.01.91 (46) 23,08.92. Бюл. М 31 (71) Институт микробиологии и вирусологии

АН КазССР (72) М.Х. Саятов, P.Ó. Бейсембаева, И.Л, Колыванова, E.È. Исаева и Р.Б. Кайсарбекова (56) Беляков В.Д„Голиков Д.Б. и др. И Вестник AMH СССР. 1983, hL 5, с. 23 — 28.

Апп Microbiology, 1975, 126 В, р. 461-470. (54) ШТАММ ВИРУСА ГРИППА ГКВ %2263, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ

ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ (57) Использование: медицина, вирусология, приготовление диагностических препаратов. Сущность изобретения: штамм

Изобретение относится к вирусологии и может быть использовано для получения диагн, стикума вируса гриппа.

В последние годы вирусы гриппа всех сероподтипов, в том числе и A(H3N2) характеризуются резко выраженной гетерогенностью, Нарастачие гетерогенности вирусов

A(H3N2) может предшествовать появлению нового антигенного варианта, В связи с этим прогностическое значение может иметь установление направленности процесса изменчивости антигенной структуры возбудителя, а также оперативное выявление новых антигенных вариантов. Изоляты эпидемий 1990 г, В Казахской CCP относились к сероподтипу A(H3N2) и s основном были близки международным референс — штаммам А(Сычуань) 2/78, А (Гуандонг) 39/89.

Предлагаемый штамм А(Чимкент) 48/90 представляет собой дрейфвариант прото Ы 1756353 А1 (51)ю С 12 N 7/00, А 61 К 39/145 выруса гриппа ГКВ %2263 А/Чимкент/48/90 представляет собой дрейф-вариант прототипного ш амма А/Сычуань/2/87 (HH 32).

Он хорошо репродуцируется в системе куриного эмбриона при 370С в течение 48 ч до инфекционного титра 5 ед ЭИД5о/0,2 мл.

Штамм хорошо агглютинирует эритроциты кур, в низких титрах эритроциты морской свинки и белых крыс, практически не элюирует с куриных эритроцитов, слабопатогенен для белых мышей, обладает низкой генаагглютинирующей активностью и высокой иммуногенностью. Бйл выявлен оригинальный антигенный компонент, специфичный только для данного штамма, 5 табл. типного штамма А (Сычуань) 2/87. Штамм выделен из носоглоточного смыва больного человека на развивающихся куриных эмбрионах в январе 1990 г, во время эпидемической вспышки гриппа в городе г, Чимкентке (Казахская ССР) и хранится в коллекции Института вирусологии им. Д,И. Сд

Ивановского AMH СССР (депонент М 2263), Ql

Целью изобретения является получение (А) штамма вируса гриппа А (Чимкент) 48/90 (H3N2), обладающего специфической имму- ) и ногенностью, позволяющей испольэовать

его для приготовления диагностических препаратов при идентификации вновь выделенных вирусов.

Идентификацию гемагглютинина вновь выделенного штамма проводили согласно рекомендациям ВО3 в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с использованием набора иммунных сывороток к эталонным штаммам вирусов гриппа сероподтипов

1756353

A(I-IINI), A(H2M2), А(НЗМ2) и серотипа В.

Идентификацию нейраминидазы осуществляли в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) с антительнйми эритроцитарными диагностикумами к рекомбинатным вирусам Р-17 (I-IeqIN2) и P-19 (НерЮ!), Антигенную структуру гемагглютинина изучали в

РТГА с набором поликлональных иммунных сывороток к эталоннйм штаммам вируса

А(НЗМ2). Дополйительно проводился тонкий иммунологический анализ изолята в

РТГА с моноклональными антителами к вирусу А (Филиппины) 2/82 и моноспецифическими энтителами к отдельным антигенным детерминантам гемагглютинина подтипэ

Н3, Результаты изучения антигенной структуры представлены в таблицах 1 — 5.

В РТГА с поликлональными референссыворотками штамм А (Чимкент) 48/90 до

1/4 — 1/16 гомологичного титра взаимодействует с сыворотками к эталонам А (Филиппины) 2/82, А (Кен) 1/84, А (СССР) 2/85, А (Ленинград) 360/86, А (Виктория) 7/87, А (Сычуань) 2/87.

Применение моноклонэльиых антител к вирусу группа А(Филиппины) 2/82 позволило выявить антигенное своеобразие нового штамма, Эпитопы его опознавались 6 из 13 использованных моноклональных антител.

Использование в иммунологическом анализе моноспецифических (монорецепторных) антител к отдельным детерминантам гемагглютинина, полученных методом специфической иммуноэдсорбции, дало возможность получить в РТГА объективную оценку антигенной новизны гемагглютинина. В составе гемагглютинина вируса А (Чимкент) 48/90 имеются общие детерминанты с актуальным референс-штаммом А (Сычуань) 2/87 — Н3.14, Н3,16, и, что особенно важно, был выявлен качественно новый оригинальный антигенный компонент, характеризующий специфичность нашего штамма (штаммоспецифическая детерминанта). Эти данные подтверждены при иммуноадсорбционном анализе крысиной сыворотки к вирусу А (Чимкент) 48/90, которая реагировала с вирусом А (Сычуань) 2/87 до 1/4 гомологичного титра.

Адаптационные свойства. Выделенный от человека вирус А (Чимкент) 48/90 репродуцируется в системе куриных эмбрионов при оптимальной температуре (37 С) до инфекционного титра 5 Ig ЭИД о/0,2 мл, Штамм обладает низкой гемагглютинирующей активностью(1:32-1:128) и высокой иммуиогеиной (титр в РТГА 1:640 — 1:1280).

Свойство агглютииации, Вирус обладает узким спектром гемагглютинирующей ак10

50 тивности. Он хорошо агглютинирует эритроциты кур (1:32-1;128), слабее — морских свинок (1:16-1;32); в низки:: титрах агглютинирует эритроциты белых мышей (1:4-1:8) и совершенно не взаимодействует с эритроцитами лошади, овцы, свиньи, крупного рогатого скота и белых мышей.

Терморезистентность (Тм-признак).

Предлагаемый вирус обладает термостойким гемагглютинином. Гемагглютинирующая активность его сохранялась после прогревания при 56"С в течение 4 ч и утрачивалась при 62 С за 1 ч.

Ингибиторочувствительность, Исследуемый штамм проявляет чувствительность к термолабилным Р -ингибиторам сывороток белых мышей, кролика, овцы., крупного рогатого скотг. резистентен по отношению к сывораточным ингибиторам лошади, мооских свинок, свиней, кур, белых крыс, Адсорбционно-элюирующая активность. Новый штамм обладает высокой адсорбирующей способностью по отношению к эритроцитам кур (90-95%) и практически не злюирует с эритроцитом.

Штамм, выделенный от человека (А/Чимкент/48/90}, предназначен для производства гриппозного антигенэ, который может быть использован при серологической диагностике гриппа. С этой целью штамм размножают путем зараже" èÿ 10 — 11 дневных куриных эмбрионов в аллантоисную полость.

Пример, Лабораторные животные— белые крысы. Схема иммунизации. Иммунные сыворотки получают в результате 4кратной внутрибрюшинной иммунизации белых крыс вируссодер>кащей аллантоисной жидкостью с недельным интервалом, Животных обескровливают через 10 дней последней иммунизации. Иммунную сыворотку освобождают от неспецифических ингибиторов обработкой отечественным препаратом нейраминидазы нехолерного вибриона.

Титр иммунной сыворотки предлагаемого препарата в РТГА с гомологичным антигеном составляет (1:640) — (1:1280), с гетерологичными антигенами вируса гриппа человека реакция отрицательна.

Таким образом, предлагаемый штамм вируса гриппа А (Чимкент) 48/90 сероподтипа А(НЗК2), изолированный от человека, и приготовленные на его основе диагностические препараты должны найти применение в вирусологической практике при идентификации вновь выделенных штаммов вируса гриппа и изучении лолуля1756353

Формула изобретения ционного иммунитета населения с целью надзора за распространением вируса гриппа в природе и процессом антигенной изменчивости возбудителей гриппозной инфекции.

Штамм вируса гриппа A(H3342} ГКВ

М 2263, используемый для приготовления

5 диагностических препаратов.

Таблица 1

Исследование антигенной структуры гемагглютинина штамма вируса гриппа А(Чимкент) 48/90 в РТГА

Подти п гемагглютинина

Иммунные сыворотки к вирусам гом

П р и м е ч а н и е. десь и в последующих таблицах титры даны в обратных величинах, Таблица 2

Анализ в РТГА иммунной сыворотки к штамму вируса гриппа А(Чимкент) 48/90

А(сви,ья/Айова) 15/30

A(PR ) 8/34

A(CCCP ) 090/77

А(Сингапур ) 57

А(Гонконг ) 1/68

А(Порт — Чалмерс ) 1/73

А(Виктория ) 3/75

А(Техас) 1/77

А(Филиппины} 2/82

А(Кен ) 1/84

A(CCCP } 2/85

А(Ленинград) 360/86

А(Виктория ) 7/87

А(Сычуань ) 2/87

В(Сингапур) 222/79

Hl

Hl

Hl

Н2

Н3

НЗ

Н3

Н3

НЗ

Н3

Н3

НЗ

НЗ

НЗ

НЗ

640

<20

40 ао

<20

Таблица Д

Исследование антигенной структуры нейраминидазы штамма вируса гриппа А(Чимкент) 48/90 в РПГА с антительными эритроцитами диагностикумами

Таблица 4

Изучение антигенных взаимосвязей штамма вируса гриппа А(Чимкент} 48/90 с моноклональными антителами

Таблица5

Исследование состава антигенных детерминант гемагглютинина щтамма вируса гриппа А (цинкент) 48/90 методом специфической иммуноадсорбции

01тамм вируса

Антигенные детерминанты в цифровом обпэначении

Титр с РТГА с моноспецифическими антителами к антигеннын детерминантам

1-6, 9,12

14

16 истощения вирусом А(Сычуань)

2/87

«20

«20 .20

«20 «20 «20

«20 -20

80 «20

«20 «20 с20 «20

"-20 «20 с20 «20 «20 «20 «20 «20

А(Гонконг) 1/68

A(Texac) 1/77

А(филиппины) 2/82

А(Сычуань) 2/87

А(чимкент) 48/90 1,2. 3.

1.5 ° 7

7.8.11

8,14. 16

14. 16

2560 «20 «20 «20

1280 320 «20 20 с 20 640 320 «20 с20 «20 320 «20

«20

<20

Титр с РТГА с

BHTMCblB0POTKOH к вирусам А(цимкент) 48/90 до (пос пе

«20 20

80 «20

320 8п