Способ определения сенсибилизации к эпихлоргидрину

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения сенсибилизации к эпихлоргидрину в профилактических учреждениях. Целью изобретения является повышение точности способа. Сущность: используют коньюгат эпихлоргидрина и человеческого сывороточного альбумина, состоящий из 14 моль М-(2-гидрокси-3-хлора) пропиленовых групп на 1 моль альбумина человека (М.М. 67 кДа), ставят реакцию властной трансформации с меченым 3Н-тимидином с лимфоцитами периферической крови и при увеличении числа импульсов в 5-10 раз по сравнению с контролем определяют наличие сенсибилизации к эпихлоргидрину.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (я}5 G 01 N 33/60---ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4841526/14 (22) 19.06.90 (46) 23.72.92. Бюл. (в 47 (71) Киевский медицинский институт им. акад. А.А.Богомольца (72) Л.А.Куюн, А.M.Øåâ÷åíêo, А.П.Яворовский, В.Г.Бордонос, M.И.Веремей и И.А.Парпалей (56) Алексеева О.Г. Аллергия к промышленным химическим соединениям. М.: Медицина, 1978, с, 272, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ К ЭПИХЛОРГИДРИНУ (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии и гигиене труда и профессиональной патологии, и может быть использовано для выявления сенсибилизации организма обследуемых к эпихлоргидрину в профилактических учреждениях.

Известны способы определения сенсибилизации к эпоксидным смолам и их аллергенным компонентам путем накожных аппликаций нативных смол, их растворов в органических растворителях и их аллергенных компонентов (M.Ï.Ïóøêàpü. Основные вопросы гигиены труда при производстве и применении компаундов на основе эпоксидных смол. Эпихлоргидрин, его токсиколого-гигиеническая характеристика и значение в гигиенической регламентации новых эпоксидных смол.

Способы, описанные в вышеуказанных работах, недостаточно специфичны и надежны, особенно при определении сенсисенсибилизации к эпихлоргидрину в профилактических учреждениях. Целью изобретения является повышение точности способа.

Сущность; используют коньюгат эпихлоргидрина и человеческого сывороточного альбумина, состоящий из 14 моль N-(2-гидрокси-3-хлора) пропиленовых групп на 1 моль альбумина человека (М.M. 67 кДа), ставят реакцию бластной трансформации с меченым Н-тимидином с лимфоцитами пез риферической крови и при увеличении числа импульсов в 5-10 раз по сравнению с контролем определяют наличие сенсибилизации к эпихлоргидрину. билизации у лиц, подвергшихся ингаляционному воздействию летучих продуктов эпоксидных смол. Кроме того, при их применении существует опасность провоцирования клинических проявлений сенсибилизации, усиления и генерализации имеющегося аллергоза.

Известен способ выявления сенсибилизации к эпихлоргидрину, предложенный

О.Г.Алексеевой, Л.А.Дуевой (Аллергия к промышленным химическим соединениям. — М.:

Медицина, 1978, 272 с.). В предложенном способе для определения сенсибилизации к эпихлоргидрину используется классический метод реакции специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) периферической крови, в котором в опытные пробирки добавляли рабочую дозу эпихлоргидрина. Уче реакции проводился морфологически путем подсчета числа лейкоцитов в камере Горяева в опытной пробе (с добавлением эпихлоргид1783441 рина) и контрольной пробах с физраствором воде. Оно содержит 2,94 хлора, 14,4

P и последующего вычисления показателя . азота. Средняямолекулярнаямасса67кД .

СЛЛ в процентах по соответствующей Ее определяли после проведения электрокДа. формуле. Однако данный способ недоста- фореза в полиакриламидном геле в приточно точен, поскольку для постановки ре- 5 сутствии додецилсульфатайапоизвестной акции в качестве антигена используется методике (U.Ê.Laemmli. Cleavage of чистый эпихлоргидрин, являющийся по су- structural protein during the assembly the ществу гаптеном. Данный способ не обес- head of bagterlophage Т4//Nature, 1970,печивает достаточно надежного выявления V.227, -N 559. -P.680-685. Молекулярная сенсибилизации к эпихлоргидрину. Зача- 10 массаинтактногосывороточногоальбумина стую у обследуемых лиц получают отрица- 67 кДа. Интактный и модифицированный тельный результат на фоне имеющегося у белок после проведения электрофореза выних аллергоза(степень выявления аллергии ходит одной полосой. Полученные данные по данному способу составляет 70-81 ). свидетельствуют о том, что в процессе гидЗто связано с тем, что эпихлоргидрин явля- 15 роксипропилирования ковалентная струк-, ется гаптеном и приобретает свойства пол- тура белка сохраняется. ноценного антигена после. присоединения к С целью повышения точности определемолекуле белка-носителя.. ния сенсибилизации к эпихлоргидрину исЦелью изобретения является повыше- пользуют полученный вышеописанным ние точности за счет использования конъю- 20 способ коньюгат эпихлоргидрина и альбумигата эпихлоргидрина с альбумином на сыворотки человека в реакции бластсыворотки человека, полученном алкилиро- - ной трансформации с мечень з меченым, вания эпихлоргидрином донорского сыво- Н-тимидином с лимфоцитами периферичероточного альбумина по а -аминогруппе и ской крови обследуемых и при увеличении е-аминогруппам лизина (14 молей N (2-гид- 25 числа импульсов в 5-10 раз по сравнению с . рокси-3-хлор) пропиленовых групп на 1 контролем определяют сенсибилизацию к моль альбумина (М;м, — 67 кДа). эпихлоргидрину.

Способ получения коньюгата осуществ- Способ осуществляется следующим обляется следующим образом. Для получения разом. Из 10 мл стерильной перифериче. строгоспецифического коньюгатаэпихлор- 30 ской крови обследуемых пациентов и гидрина и альбумина сыворотки человека в доноров с гепарином путем центрифугирореакционной смеси берется соотношение вания в градиенте плотности фиколл-верогреагентов из расчета l моль эпихлоргидри- рафин (оптическая плотность — 1,077) на на 1 моль свободных аминогрупп в моле- выделяется взвесь стерильных лимфоцитОв. купе белка по схеме: 35 В боксе в сте ильны н ч-сн- o (ßû-cH-co-) -+ ьбсн -сн-сн -c р, с„н

58 2 i. 2.

О вносится- по 1,0 мл среды RPMI. которая

8 готовится из расчета в 100 мл бидистиллиросн -ин к ь . ванной воды растворяется навеска 1536 мг. и-сн;сн-снрн-сн-со-(нн-сн- о- 45 Среда RpMI также содержит Нерез 4,76 г/л, OH и cqHs -,40 l0 эмбриональной телячьей сыворотки,50 сн -NH-CHj-cH-cHt-cl ед/мп пенициллина и 50 ед/мл стрептомицина. В контрольные пробирки вносится по

Сывороточный альбумин человека со- 0,.1 мл взвеси лимфоцитов — 5,0х106 кледержит одну концевую аминогруппу и 55 ток/мп среды и 0,1 мп разведенного 1:100 остатков лизина с первичными аминогруп- 45 специфического антигена, Коньюгат эпи- пами в боковых цепях. Первичные аминог- хпоргидрина и апьбумина сыворотки челоруппы альбумина.(56 аминогрупп на 1 века вносится только в опытные образцы. макромолекулу белка) легко реагируют с Лимфоциты культивируются в термостате зпихлоргидрином с образованием N-гидро- притемперагуре37ОСвтечение24-48часов. ксихлорпропилированных производных 50 После этого в пробирки как в опытные, так апьбумина. - : " : " — и в контрольные вносится строго равное коРеакция проводится при температуре личество меченого Н-тимидина (О 025 мкл

18-25 С в водной среде с последующей от- íà 1 пробу). Через 24 часа после внесения гонкой воды в вакууме при температуре не метки содержимое каждой пробирки фильтпревышающей +35 С и сушкой в вакууме до 55 руется с помощью вакуумного насоса через постоянного веса. Полученный (2-гидро- специальньie миплипоровые фильтры, прокси-3-хлор) пропилированный альбумин мывается трихлоруксусной, дистиллированпредставляет собой светло-серое кристап- ной водой и фиксируется 96 этиловым пическое вещество. хорошо растворимое в спиртом. После этого с каждого фильтра, 1783441 содержащеголимфоцитыизотдельныхпро- контакта с химическими веществами не бирок, считывается число импульсов. Всего имеет. с помощью предложенного способа было Общий анализ крови: СОЭ 5 мм/час, обследовано 45 пациентов и 20 доноров. гемоглобин 150 г/л; лейкоциты 6,0х10 /л;

Точность выявления сенсибилизации к эпи- 5 лимфоциты 25%; юные 0; палочкоядерные хлоргидрину составляет 92%. 0;сегментоядерные.. 65%; эозинофилы 2%;

Способ подтверждается следующими моноциты 8%. примерами; РБТЛ: Число импульсов. Контроль—

Пример 1. Обследуемый К-к В.Д, 2849,5. Опыт — 3071.

1934 г,р., мужчина, работаетв контакте 10 Таким образом, число импульсов в с эпихлоргидринсодержащими смолами в опытных образцах со специфическим анти-. течение 23 лет. Общий анализ крови: СОЭ 7 геном (с эпихлоргидрином) практически не мм/час, гемоглобин 134 г/л; лейкоциты превышает количества импульсов в конт10,4 10 /л; лимфоциты 32%; юные 1%; па- рольных образцах. Следовательно, у данно6 лочкоядерные 4%; сегментоядерные 48%, 15 го пациента не выявлена сенсибилизгция к эозинофилы 10%; моноциты 5%; эпихлоргидрину и эпоксидным смолам.

РБТЛ; Число импульсов. Контроль— Всего с помощью предлагаемого спосо5183. Опыт — 55324, ба обследовано 45 больных и 20 лиц, в проТаким образом, число импульсов, в цессе своей трудовой деятельности не опытных образцах повышено в 10 раз по 20 контактировавших с эпоксидными смолами сравнениюсконтрольными,следовательно, и эпихлоргидрином. Точность выявления у данного пациента выявлена сенсибилиза- сенсибилизации к эпихлоргидрину составция к эпихлоргидрину. ляет 92-95%, Тогда как по способу, описанПример 2. Обследуемый P-й B,Ï„Hoìó в качестве прототипа к данной заявке мужчина, 1940 r.р., работает в контакте с 25 О.Г. Алексеевой, Л;А. Дуевой, Алерргия к эпихлоргидринсодержащими смолами в те- промышленным химическим соединениям.— чение 5 лет. Больной предьявляет жалобы M. Медицина, 1978, -272 C., выявляемость на одышку, зуд кожи лица и рук, Предпола- (точность) определения сенсибилизации к гаемый диагноз — астматический бронхит, эпихлоргидрийу составляет не более 70-81%. аллергический дерматит. 30 Формула изобретения.

Общий анализ крови: СОЭ 4 мм/час, Способ определения сенсибилизации к гемоглобин 140 г/л; лейкоциты 6,8х10 /л; эпихлоргидрину путем добавления к лейколимфоциты 30%; юные T%; палочкоядер- цитам периферическойкровичеловекаэпиные 3%; сегментоядерные 44%," зозинофи- хлоргидрина с последующим учетом лы 9%; моноциты 13%. 35 результата, отличающийся тем, что, с

РБТЛ: Число импульсов. Контроль - целью повышения точности способа, из пе2525, Опыт — 24359. риферической крови выделяют лимфоциты, Таким образом, число импульсов в а эпихлоргидрин используют в коньюгате, опытных образцах со специфическим анти- полученном путем алкилирования эпихлоргеном превышает практически в 10 раз чис- 40 гидрином альбумина сыворотки человека по ло импульсов в контрольных пробах. а-аминогруппеие-аминогруппамлизина(14

Следовательно, у данного обследуемого вы- молей N-(2-гидрокси-3-хлор)пропиленовых явлена специфическая сенсибилизация к групп на 1 моль альбумина — M.м.67кДа,и эпихлоргидрину. учет результата ведут по реакции бластной з

45 трансформации лимфоцитов меченых Н-тиПример 3. (Контроль). Обследуемый мидином и при увеличении числа импульсов

P-а В.Г., мужчина 1938 г.р., работает сбор- в 5-10 раз по сравнению с контролем опрещиком-клепальщиком, профессионального деляют сенсибилизацию к эпихлоргидрину.

Составитель Л.Куюн

Редактор Т.Козлова Техред M.Ìoðãåíòàë Корректор Л.Ливринц

Заказ 4512 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, М(-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород. ул,Гагарина, 101