Индикатор для определения наличия микроорганизмов в воде
Использование: определение наличия микроорганизмов в воде. Сущность: индикатор содержит 2,3,5-трифенилтетрззолий хлористый, этанол, нитро-тетразолий синий и воду. 2 табл.
COIO3 СОВЕТСКИХ . СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО CCCP (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4909738/13 (22) 07.02,91. (46) 15.01.93. Бюл. ¹ 2 (71) Научно-исследовательский институт "Сапфир" (72) А.P.ÏàBëoâà и С.П, Кореневская (56) Контроль и содержание микроорганизмов в деионизированной воде, Технологическая инструкцияя 7605411 2520300003, M., НИИ "Сапфир", утверждена 05.04.90..Изобретение относится к микробиологическому контролю и может быть использовано в микробиологии, микроэлектронике, биотехнологии для контроля, содержания бактерий в деминерализованной воде. В настоящее время для определения микроорганизмов в воде используют способ выращивания колоний бактерий на мембранных фильтрах, через которые пропускаIoT определенный объем контролируемой воды. Мембранный фильтр помещают в питательную среду и после инкубации в течение не менее 24 ч проводят подсчет количества колоний бактерий, выросших на фильтре. Это значение характеризует содержание бактерий в контролируемой воде, Для выявления колоний микроорганизмов используют индикатор — вещество, окрашивающее колонии бактерий. Известен состав индикатора, включающий бриллиантовый зеленый, бромтимоловый синий, генциан фиолетовый и другие. Однако укаэанные индикаторы не выявляют микроорганизмы, живущие в деминерализованной воде. „„5U 1788013 At (54) ИНДИКАТОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАЛИЧИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ H ВОДЕ (57) Использование: определение наличия микроорганизмов в воде. Сущность: индикатор содержит 2,3,5-трифенилтетраэолий хлористый, этанол, нитро-тетразолий синий и воду. 2 табл. Для определения микроорганизмов в деминералиэованной воде известны индикаторы фирм "М П!роге" США и "German" ФРГ, окрашивающие микроорганизмы в красный цвет, Недостаток указанного индикатора в том, что время на определение колоний микроорганизмов (время инкубации) не менее 24 ч, Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является индикатор, содержащий 2,3,5-трифенилтетразолий хлористый (TTX) 0,005-0,01%, этанол ректификат 20-40%, остальное — дистиллированная вода, окрашивающий микроорганизмы в красный цвет. Время инкубации не менее 24 ч. Указанный индикатор выбран в качестве прототипа. Целью изобретения является уменьшение времени проведения анализа за счет сокращения времени инкубации. Указанная цель достигается тем, что в качестве индикатора для определения наличия микроорганизмов в воде используется смесь, содержащая 2,3,5-трифенилтетразо1788013 таблица 1 Сравнительные дзинь!е результатов испытаний индикатора при различных соотношениях ингредиентов 1Р серии опытов Состав индикатора, Время инкубации, ч Результат анализа Итоговый результат по графам 6 и 7 (дости!хение постав ленной цел!л) "V"-цель достигнута, цель не достигнута 2,3,5трлфен. тетразолий (ттх) Нитротетразолий (н-ст) Зтанол ректификат Дистил" лирова.!ная вода 36 24 24 24 24 г4 О,001 о,ooi7 0,00?5 0,0033 0,005 о,о06 1.1 1,2 1,3 1 .4 1.5 1,6 1г 1г 12 12 12 Слабое окрашивание колоний Хорошее окраш. Остальн. !! ll !! Il Яркое окраш, Окрашивание подла>яки подсчет затруднен ?.1 0,001 12 !! Колонии не окрашены 2.2 г.3 . 2.4 г,5 2,6 о,ooi7 0,0025 0,0033 о!005 48 48 48 «l! 12 12 12 1г «ll» Очень слабое окрашивание колоний Очень слабое окрашивание колоний Очень слабое окрашивяние колоний 1г „. I !. 36 о,оо6 О,ОО1 1г «!\» 0,001 3,1 i8 18 17 17 12 1г 12 12 1г 0,001 о,ooi 0,001 О,ОО1 0,001 0,0017 0,0025 о,оозз 0,005 0,006 зг 3.3 3,4 3.5 3 ° 6 «!!» «Il» Слабое окраш. подло!нки лий хлористый, этанол и воду дистиллированную. Сущность изобретения .заключается в том, что он дополнительно содержит нитротетразолий синий при следующем соотношении ингредиентов,, 2,3,5-трифенилтетразолий хлористый 0,0017 — 0,005 нитро-тетразолий синий 0,0012 — 0,0025 зтанол ректификат 5-19 дистиллированная вода остальное Пример. В приготовленный по прописи питательный агар РПА или ДПА добавляют 6 мл раствора предлагаемого индикатора при соотношении ингредиентов индикатора: ТТХ 0,00257, нитро-СТ 0,ОО17 to; зтанол ректификат 12 Р; остальное — дистиллированная вода. Полученный питательный агар с введенным индикатором наливают в стерильные чашки Петри, помеща1от в них фильтр, через который предварительно профильтровали пробу воды, и инкубировали при температуре 37Р0,5оС. Через 14 ч появилось четкое, хорошее окрашивание колоний бактерий без окрашивания подложки, Подсчет колоний микроорганизмов проводили с помощью бинокулярной лупы пятикратного увеличения, Результаты указаны в табл.1 (серия опытов 5.3), Аналогично описанному в примере провели серии испытаний индикатор;. при различных соотношениях ингредиентов и их данные также указаны в табл.1, Достижение поставленной цели иллю5 стрируется также многими данными табл.2, где показано, что для одной и той же анализируемой деминерализованной воды при использовании в качестве индикатора фирменного состава "МПИроге", TTX и смеси 10 TTX с нитро-СТ (предлагаемый индикатор) при практически совпадающем количестве обнаруженных колоний время инкубации уменьшается значительно (на 7 — 10 ч) в случае использования предлагаемого индика15 тора. Формула изобретения Индикатор для определeíèè наличия микроорганизмов в воде, содержащий 2,3,520 трифенилтетразолий хлористый, зтанол,дистиллированную воду,.отличающийся тем, что, с целью сокращения сроков определения, дополнительно он содержит нитро-тетраэолий синий при следующем 25 соотношении ингредиентов, об. j,: 2,3,5-трифенилтетразолий хлористый 0,0017-0,005 нитро-тетразолий синий 0,0012 — 0,0025 30 зтанол ректификат 5 — 19 дистиллированная вода остальное, 6 ! !Р(34аджЕНИЕ табл,1 1788013 Состав инд<лкаторл, Я серии опытов Время инкубации, ч Результат анализа 2,3,5трифен. тетразопий (ТТХ) Иитротетраэолий (Н-СТ) Зтлнол Дистиллированная ректификат вода 4.1 0,001 0,0017 0,0012 12 Очень слабое окраш, колоний Слабое окраш. колоний остал. 4.3 4,4 4.5 4.6 0,0025 0,0033 0,005 0,006 II 1! 1! II II II II Слабое акраш. 17 17 16 5.1 0,001 0,0017 0,0017 0,0017 17 5,2 l6 5.3 5.4 5.5 0,0025 0,0033 0,005 12 12 12! 14 5.6 0,006 0,001 14 0,0025 16 остап. 0,0017 0,0025 0,0025 0,0033 0,005 6.3 6.4 6.5 0,0025 0,0025 0,0025 l2 12 12! I 14 6.6 0,006 0,001 12 0,0025 0,0033 7.1 12 ос лп. 7.2 7,3 7 4 7.5 О, 001 7 0,0025 0,0033 0,005 0,0033 0,0033 0,0033 0,0033 12 \2 12 12! II 11 II! 7 ! 14 Яркое акраш. подложки, подсчет затрудн. 7.6 8.1 0,006 0,0033 0,0033 0,0017! л! 12 Очень слабое окраш, колоний астлпьн. 8.2 0,0033 0,0017 Слл бое акра ши в . колоний Хорошее окрлш. колоний 8.3 о,оо33 0,0017 1Ý 8.4 8.5 8.6 8.7 14 ! 1G 2.3 0,0033 0,0033 0,0033 0,0033 0,0017 0,0017 0,0017 0,0017 11 11 II 10 ! 16 8.8 0,0033 0,001 20 остлльн, 20 0,006 14 9,2 0,001 9 ° 3 9.4 9.5! 14 0,001 0,006 ll Слабое окраш, 0,0033 0,001 подложки Слабое окраш. 9,6 0,006 О, 001 17 подложки П р и м е ч а н и е. 1. 8 графе 8 табл. 1 энлкон "он отмечено соотношение ингреди" ентав индикатора, при котором достигнута поставленная цель, т.е. времл инкубации меньше 24 ч и подсчет колоний микроорганизмов возможен, 2, Знаком "-" отмечено соотношение ингредиентов индикатора, при катарам не достигнута поставленная цель, т.к. время инкубации 24 или более часов или подсчет колоний микроорганизмов невозможен из-зл очень слабого окрлшиван!лд колоний или иэ-за слабого или яркого окрашивания подложки, на фоне которого нельзя подсчитать колонии микроорганизмов. 0,0017 0,001 0,0033 0,0033 Слабое окраш, колоний и слабое окрлш. подложки Очень слабое окраш. колоний Хорошее окраш, колоний Яркое окрлш, колоний Слабое окраш. подложки Очень слабое окраш, колоний Хорошее акрлш. колоний Яркое окраш, коп<ний Слабое окраш. подложки Яркое окрлш, подложки Яркое окраш. колоний Яркое околш, колоний Очень слабое окрлш.колоний Яркое окрлш. подложк!! Яркое окраш, подложки 8TOt-OBbtIt PB зультат по графам 6 и 7 (достижение поставленной цели) Bv"-цель достигнута, цель не достигнута 1788013 Таблица 2 Рост микроорганизмов при анализе деминерализованной воды на разных питательных средах и с различными индикаторами, Составитель А.Павлова Техред M. Моргентал Корректор Н,Ревская Редактор Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Заказ 49 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета f10 изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
