Способ изготовления аллергена вви для диагностики лептоспироза свиней

 

Использование: ветеринарная иммунология . Сущность изобретения: изготовление аллергена ВВИ для диагностики лептоспироза заключается в выращивании лептоспир серогрупп L.Pomona, L.Tarassoyl, L.lcterohacmorrhagiae, L.Canlcola, L.Saxkoebing, LGrippotyphosa на водно-сывороточной питательной среде. Дезинтеграцию проводят при частоте 20 кГц, мощности 100 Вт в течение 20 мин, дезинтеграт автоклавируют при 1 атм в течение 20 мин. Отделение аллергена осуществляют центрифугированием при 25000 об/мин.в течение 30 мин, полученную надостадочную жидкость фильтруют.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 А 61 К 39/00, 39/118

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4917634/13 (22) 17.12.90 (46) 23,02.93. Бюл. М 7 (71) Витебский ветеринарный институт (72) В.А.Кирпиченок (56) "Лабораторные исследования в ветеринарии", Бактериальные инфекции. Справочник/Сост. Б,И,Антонов и др., Агропромиздат, 1986, с. 352. нЛептоспирози тезисы докладов I/l Всесоюзн. науч, конф. по лептоспирозу, ок-. тябрь, 1975, г, Баку, с. 200-201, (54) СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ АЛЛЕРГЕНА ВВИ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ЛЕПТОСПИРОЗА У СВИНЕЙ

Изобретение относится к области ветеринарной иммунологии, в частности к способам получения биологических препаратов и может быть использовано при изготовлении аллергенов для постановки внутрикожной аллергической реакции у животных с целью определения специфической гиперчувствительности замедленного типа к возбудителюю лептоспироза, Известен способ серологической диагностики лептоспироза у свиней с помощью реакции микроагглютинации (PMA).

Недостатком известного метода является то, что он трудоемок. требует постоянного поддержания в лаборатории живых лептоспирозных культур, что представляет определенную угрозу здоровью лабораторных специалистов.

Известен также способ изготовления лептоспирозного аллергена озвучиванием культур лептоспир 3 серогрупп и его приме„„. Ж„„1796190 А1 (57) Использование: ветеринарная иммунология. Сущность изобретения: изготовление аллергена ВВИ для диагностики лептоспироза заключается в выращивании лептоспир серогрупп L.Pomona, L..Tarassoyl, (.lctегоhacmorrhaglae, 1 .Сап!со!а, L,Saxkoebing, L.Grippotyphosa на водно-сывороточной питательной среде, Дезинтеграцию проводят при частоте 20 кГц, мощности

100 Вт в течение 20 мин, дезинтеграт автоклавируют при 1 атм в течение 20 мин. Отделение аллергена осуществляют центрифугированием при 25000 об/мин, в течение 30 мин, полученную надостадочную жидкость фильтруют. нением для диагностики лептоспироза свиней.

Цель изобретения — повышение качества аллергена.

Способ осуществляется следующим образом.

Лептоспиры серогрупп помона, тарасови, гриппотифоза, иктерогеморрагия, кани- 0 кола и сакскебинг каждый отдельно, выращивают в бутылях с водно-сывороточ- Чо ной питательной средой рН s пределах 7,2- С)

7,4, Инкубирование посевов проводится в термостате при 2830 Се течение 7-10дней. )ч

Вначале макроскопически в проходящем свете, а затем микроскопически отбирают бутыли с нужной концентрацией лептоспир (50-100 микробных тел в поле зрения микроскопа), Отобранные культуры разных серо групп смешивают в одной емкости.

Полученную смесь лептоспирозных культур подвергают воздействию ультразвукового диспергатора УЗДП-1 при частоте 20 кГц, 1796190

1,lctегоhacrnorrhaglae, 1 .Canicoia, L.Saxkoebing, 1,Grippotyphosa на водно-сывороточной питательной среде, дезинтеграцию проводят при частоте 20 кГц, мощности

100 Вт в течение 20 мин, дезинтеграт автоклавируют при 1 атм в течение 20 мин, отделение аллергена осуществляют центрифугированием при 25000 об/мин в течение 30 мин, полученную надосадочную жидкость фил ьтруют.

Формула изобретения

Способ изготовления аллергена ВВИ для диагностики лептоспироза свиней, включающий выращивание культур лептоспир, их дезинтеграцию ультразвуком, отделение полученного аллергена от микробной массы, отличающийся тем,что,сцелью повышения качества аллергена, проводят выращивание лептоспир, серогрупп

Е. Pomona, 1.Tarassovi, Составитель Я. Иммиев

Техред М.Моргентал Корректор Н, Бучок

Редактор И, Иванова

Заказ 608 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 мощности 100 Вт/см ультразвуковых волн з в течение 20 мин. После озвучивания лептоспирозный дезинтеграт подвергают автоклавированию при 1 атм в течение 20 мин, затем его центрифугируют при 25000 об/мин в течение 30 мин, надостадочную часть фильтруют через стерилизующий фильтр, разливают в ампулы, запаивают и вновь автоклавируют.

Контроль аллергена проводят на стерильность, безвредность. активность и специфичность.

Для проверки на стерильность берут 5 ампул аллергена и из них делают высевы на

МПА, МПБ, МППБ, среду Сабура. За посевами наблюдают 15 дней, все они должны быть стерильными. Безвредность аллергена проверяют на пяти белых мышах, им вВодят внутрибрюшинно по 0,3 см аллергена. За животными наблюдают 15 дней, в течение 20 которых они должны оставаться живыми.

Сенсибилизирующие и антигенные свойства изучают на подсвинках, серонегативных к возбудителю лептоспироза.

Аллерген вводят внутрикожно B дозе

0,2 см в область наружной поверхности ушной раковины, Учет реакции проводят через

24 ч. У всех животных местная реакция должна быть отрицательной. Через 30 дней после начала опытов у данных животных исследуют сыворотку крови на наличие антител к возбудителю лептоспироэа в РМА и одновременно повторно производят внутрикожное введение аллергена в дозе 0,2 см . При исследовании результаты должны быть отрицательные, Специфичность препарата проверяют на неиммунных подсвинках,, зараженных за три недели до опыта внутрибрюшинно вирулентными культурами лептоспир и имеющим в сыворотке крови по РМА антитела к возбудителям лептоспироэа в титре 1:100 и выше.

Аллерген вводят подопытным животным внутрикожно в дозе 0,2 см в области э наружной поверхности ушной раковины.

Реакцию учитывают через 24 ч, у подопытных животных положительная реакция в месте введения аллергена сопровождается образованием гиперемированной отечности величиной 2,0х2,0 — 2,5х2,5 см .

У здоровых свиней аллергическая реакция отсутствует или может сопровождаться образованием плотного узелка величиной

0,3х0,3 — 0,5х0,5 см,