Способ получения комплексных соединений псевдопримицина

 

Сущность изобретения: продукт - комплексное соединение псевдопримицина формулы MHj Н NHjX®. Тон сн} сн сн, он он он он 3 R он где R. - СлНд, CsHii, C6Hi3, R2 о-арабиноза, X - S04 , СНзСОО Вых, 40-46%. Реагент 1: - Н, ОН, H,NX© CH3CHj Условия реакции: осуществляют транслактонизацию одним из соединений: гидроокись или органическая или неорганическая соль щелочного металла, четвертичная соль аммония, ионообменная смола, органическое основание, выбранное из группы: ( или пиридин, в среде НаО и/или органического растворителя, с последующим , в случае необходимости, добавлением СНзСООН, и полученную при этом смесь подвергают разделению с помощью хроматографии . 3 табл. Ё

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕНЮЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ нн, н

I е с-и н,йх е

O„i OH M OH ннг н с-й е сннгхе,г он снг снг сн>! о снсн 0н 0н снсн г яг

Он (11 ннг н

I с-н нн хв (21) 4614310/04 (22) 13.06.89 (46) 30,07.93. Бюл. N. 28 . (31) 3036/88 (32) 14.06.88 (33) HU (71) Хиноин Дьедьсер ЕШ Ведьесети Термекек Дьяра РТ (HU) (72) Дьюла Декани, Юдит Франк, Иштван

Пелцер, Габор Кулчар и Енико Шрейнер(НО) (56) Nature, 1954, 174, р.1105. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСНЫХ

СОЕДИНЕНИЙ ПСЕВДОПРИМИЦИНА (57) Сущность изобретения: продукт — комплексное соединение псевдопримицина формулы

Изобретение относится к способу получения комплексных соединений псевдопримицина общей формулы з I где и — бутил, пентил. гексил; г

Ф и — водород, гидроксил или о-арабино2 за;

Х вЂ” сульфат или ацетат-ион, который позволяет получить примицин с лучшей растворимостью.

Известно, что примицин представляет собой макролидный антибиотик, проявляющий антибактериальную активность, и он. 5Q„„1831471 АЗ (st)s С 07 С 11/00, С 07 D 313/00 где R. —. CaHs, CsH>1, С6Н1з, R — Н, ОН. о-арабиноза, Х вЂ” SO<, СНЗСОО .

Вых, 40 — 46ф,. Реагент 1: с он он

Условия реакции: осуществляют транслактониэацию одним иэ соединений: гидроокись или органическая или неорганическая соль щелочного металла, четвертичная соль аммония, ионообменная смола, органическое основание, выбранное из группы: (СгН5)2ЙН или пиридин, в среде Н20 и/или органического растворителя, с последующим, в случае необходимости, добавлением

СНЗСООН, и полученную при этом смесь подвергают разделению с помощью хроматографии. 3 табл. является активным ингредиентом известного геля EBR1MYCIN, он проявляет сильную

R антибактериальную активность и против него еще не было выработано устойчивости. В настоящее время его применяют только в виде спиртового геля и используют только для наружного применения.

Псевдопримицин. полученный данным способом, проявляет антибактериальную активность и может быть использован для . приготовлений фармацевтических составов, содержащих активный ингредиент в более высокой дозе. Против них пока еще не выработано устойчивости.

Настоящий способ заключается в том, что комплексное соединение примицина формулы (П) 1831471

О,.С ОН ин ч 1 С")

О

9 рейхе сг< г

СИЗ СН3 СН, яг

ОН в которой R, R и Х так же, как указано, 1 2 подвергают реакции транслактониэации обработкой соединением, выбранным из группы: гидроокись, или органическая, или. неорганическая соль щелочного металла, четвертичная соль аммония, ионнообменная смола, органическое основание, такое., как диэтиламин или пиридин, в среде воды и/или органического растворителя с последующим, в случае необходимости, добавлением уксусной кислоты, и полученную при этом смесь подвергают разделению с помощью хроматографии.

С помощью хроматографического разделения получают компоненты комплексногосоединения псевдопримицина,подобные компонентам примицина, то есть А1, А2, Аз, 81, 82, ВЗ, С1, С2, СЗ.

Компоненты комплексного соединения псевдопримицина формулы I являются; — псевдопримицин — A1, в котором R

1 обозначаетбутил, Р обозначаетО-арабинозу и Х такой же, как указано выше: — псевдопримицин — А2, в котором R

1 обозначает пентил, R обозначает О-араби2 нозу и Х такой же. как указано выше; — псевдопримицин — Аз, в котором R

1 обозначает гексил, R обозначает О-араби2 нозу и Х такой же. как указано выше; — псевдопримицин — 81, е котором R

1 обозначает бутил, R обозначает водород, Х такой же, как упомянуто выше; — псевдопримицин — 82, в котором R

1 обозначает пентил. R обозначает водород, Х такой же, как упомянуто выше; — псевдопримицин — Вз, в котором R

1 обозначает гексил, R обозначает водород, Х такой же, как упомянуто выше; — псевдопримицин — С1, в котором R

1 обозначает бутил, R обозначает гидроксил, Х такой же. как упомянуто выше; — псевдопримицин — С2, в котором R

1 обозначает пентил, R2 обозначает гидроксил, Х такой же, как упомянуто выше; — псевдопримицин — Сз, в котором R

1 обозначает гексил, R обозначает гидроксил, Х такой же, как упомянуто выше, также как и их соли присоединения кислот, Значения Rf, характерные для компонентов псевдопримицина, таковы:

A1Rf 0,30 B1Rf=0,55 С1Rf=0.36

А2 Rf 0,32 82 Rf " 0,57 С2 Rf = 0.38

Аз Rf = 0,34 Вз Rf = 0,59 Сз Rf - 0,40

Растворимость комплексного соединения псевдопримицина или его компонентов согласно изобретению намного лучше, чем растворимость исходного комплексного соединения примицина и/или его компонентов. Например, примицинацетат практически нерастворим в воде, этаноле, метаноле, в то время как растворимость псевдопримицинацетата в воде составляет

10 5 г/10 мл, в этаноле 5 г/10 мл и в метаноле

10 г/10 мл, что означает значительное улучшение растворимости.

Улучшение растворимости отдельных компонентов псевдопримицина таково же, 15 что и указанное выше в случае с комплексным соединением псевдопримицина, то есть, например, растворимость псевдопримицин—

А1 — ацетата в воде и в этаноле составляет

5г/10мл, а в метаноле — 10 г/10 мл. В соответ20 ствии с этим, комплексное соединение псевдопримицина и/или его компоненты пригодны для получения фармацевтических средств, содержащих более высокие дозы активного ингредиента.

Дальнейшим выгодным свойством псевдопримицина и его компонентов является выдающаяся желатинизирующая способность; в водной среде образование геля начинается немедленно на пределе раство30 римости, а в среде органического растворителя стабильный гель образуется после нескольких часов стояния, Указанная способность к желатинизации может быть выгодно использована при приготовлении определенных фармацевтических средств, например гелей, мазей и т.д.

Соли псевдопримицина и/или его компонентов могут быть превращены в сво"0 бодные соединения, при необходимости, и/или они могут быть превращены в другую соль.

Аналогично исходному комплексному соединению примицина и/или его компо45 нентам, псевдопримициновое комплексное соединение и/или его компоненты также проявляют антибиотичную активность, прежде всего против грамположительных бактерий, но в более высокой дозе они так50 же эффективны против грамотрицательных бактерий.

Спектры активности комплексного соединения псевдопримицина и его компонентов против полирезистентных фатогенных

55 штаммов человека приведены ниже:

Испытанные штаммы;

1) Bacillus subtills

2) ВасИЬз cereus

3) ВасИЬв Ilchenlfornus

4) Staphitococcus aureus

1831471

5) Staphllococcus epidermus

6) штаммы микрокока

7) Sporosarcina ureae

Испытанные соединения:

l) Псевдопримицин-ацетат. . 5

II) Псевдопримицин — А1 — ацетат

ill) Псевдопримицин — Аз — ацетат

IV) Псевдопримицин — В1 — ацетат

\/) Псевдопримицин — Вз — ацетат

И) Псевдопримицин — C> — ацетат 10

Токсичность комплексного соединения псевдопримицина и его компонентов согласно изобретению была испытана на . самках и самцах мышей, полученные результаты сведены в табл.2, 15

Пример 1. 60,0 г (53,23 ммоль) примицин-сульфата и 8,5 г (26,94 ммоль) гидроокиси бария, содержащих 8 кристаллизационных вод, суспендируют в смеси 20

800 мл метанола и 200 мл воды, и через

2,5 ч кипячения добавляют 20 мл уксусной кислоты и продолжают кипячение в течение

30 мин. После этого отфильтровывают горячий сульфат бария, фильтрат -выпаривают, 25 маслянистый остаток растворяют в 100 мл метанола, и 200 мл этилформиата добавляют по каплям при перемешивании к раствору в течение примерно 20 минут, при комнатной температуре. После этого от- 30 фильтровывают необразовавшийся примицин-ацетат, выпаривают фильтрат в вакууме, измельчают твердый остаток со.

100 мл диэтилового эфира, фильтруют и сушат в вакууме белый твердый порошок при 35

70 С, Продукт представляет собой псевдопримицин-ацетат, выход: 43,3%, Т. пл.

106 С; удельное вращение: + 35О (в метанольном растворе 0.2%).

Пример 2. 60,0 г (52,77 ммоль) прими- 40 цинсульфата суспендируют в 800 мл метанола и добавляют к этому 2,14 г (53,5 ммоль) гидроокиси натрия, растворенного в 200 мл . воды. Суспензию кипятят 2,5 часа при перемешивании, после этого к горячей реакци- 45 онной смеси добавляют 20 мл уксусной кислоты, продолжают перемешивание в течение 30 минут и выпаривают в вакууме.

Остаток растворяют в 100 мл метанола и к раствору добавляют 200 мл этилформиата 50 при перемешивании в течение примерно

20 мин. Непрореагировавший примицинацетат отфильтровывают, выпаривают фильтрат в вакууме. остаток измельчают со смесью 450 мл диэтилового эфира и 9 мл 55 .воды,.полученную таким образом суспензию фильтруют, полученный материал высушивают при 70 С в вакууме. Продукт представляет собой 25 г (41,6%) псевдопримицин-ацетата, Т.пл.: .106ОC.

Пример 3. 60,0 r (53,23 ммоль) примицинсульфата суспендируют в 200 мл воды, содержащей 2,9 г (27,35 ммоль) гидроокиси натрия, добавляют 800 мл метанола и кипятят 2,5 ч при перемешивании. После этого к раствору добавляют 20 мл уксусной кислоты и кипятят в течение еще 30 мин, Реакционную смесь выпаривают в .вакууме, остаток растворяют в 100 мл метанола, отфильтровывают нерастворимый материал (сульфат натрия) и добавляют по каплям 200 мл этилформиата к раствору при перемешивании в течение примерно 20 минут и отфильтровывают осажденный непрореагировавший примицин-ацетат. К фильтрату по каплям добавляют 33,5 мл 2Н гидрохлорида при перемешивании, отфильтровывают полученный псевдопримицин-сульфат и сушат в вакууме. Получают 24.5 r (40,8%) псевдопримицин-сульфата в виде белого порошка, Т.пл.; 127 С, удельное вращение: +26,5 (в

MeTaHQnbHoM растворе 0,2%).

Пример 4. 30,0 г (26,38 ммоль) примицин-ацетата суспендируют в 900 мл смеси

2:1 метанола и воды, добавляют 10 г сухой ионообменной смолы Amberlite IRA-401 (форма ОН) и смесь перемешивают в течение 4 ч при 60 С. После этого смолу отфильтровывают, добавляют 10 мл уксусной кислоты и 100 мл бутанола к фильтрату и раствор выпаривают в вакууме. Остаток растворяют в 50 Мп метанола и при сильном перемешивании добавляют по каплям в течение 15 минут 100 мл этилформиата к раствору при комнатной температуре, Осажденный непрореагировавший примицин-ацетат отфильтровывают, фильтрат выпаривают в вакууме и остаточный материал размалывают с диэтиловым эфиром. Суспензию фильтруют, твердый материал сушат в вакууме при 700Ñ. Продукт представляет собой 14,0 г (46,6%) псевдоп римицин-ацетата, т,пл,: 106 С.

Пример 5. К раствору натрий-метилата, приготовленному из 0,31 г (13,48 ммоль) металлического натрия и 50 мл метанола в условиях безводной реакции, добавляют

15,0 г (13,19 ммоль) примицин-ацетата, полученную суспензию сильно перемешивают в течение одного часа, после этого добавляют 10 мл уксусной кислоты и реакционную смесь выпаривают под вакуумом.

Остаток растворяют в 250 мл метанола при легком нагреве и добавляют по каплям 50 мл этилформиата к раствору при комнатной температуре за 10 минут. Отфильтровывают непрореагировавший примицин-сульфат, фильтрат выпаривают в вакууме, остаток измельчают со смесью 112 мл диэтилового эфира и 2,2 мл воды, суспензию фильтруют

1831471 и высушивают под вакуумом твердый материал при 70 С. Продукт представляет собой

7,0 г (46,67) псевдопримицин-ацетата, T.ïë.: 106 С.

Пример 6. 15,0 г (13,10 ммоль) примицин-ацетата суспендируют в 50 мл метанола, добавляют 1,56 г(13,48 ммоль) фенолята натрия и сильно перемешивают суспензию в течение одного часа при 60 С. К полученному раствору добавляют 10 мл уксусной кислоты и выпаривают растворитель при пониженном давлении. Остаток растворяют в

250 мл метанола при легком нагреве и добавляют 500 мл этилформиата по каплям в течение примерно 20 мин к раствору при перемешивании. Непрореагировавший примицин-ацетат отфильтровывают, фильтрат выпаривают в вакууме, остаток измельчают со смесью 112 мл диэтилового эфира и 2,2 мл воды, после чего полученную таким образом суспензию фильтруют, твердый материал сушат под вакуумом при 70 С.

Продукт представляет собой 7,0 г (46,6ф>) псевдопримицин-ацетата. Т.пл.: 106 С.

Пример 7. 6,0 г (5,27 ммоль) примицин-ацетата суспендируют в 400 мл н-бутанола и к нему добавляют 0,49 г (6 0 ммоль) ацетата натрия. Реакционную смесь кипятят при перемешивании в течение одного часа, после этого растворитель выпаривают и растворяют осадок в 10 мл метанола. К полученному таким образом раствору добавляют 20 мл этилформиата по каплям в течение примерно 20 мин при комнатной температуре при перемешивании, после чего отфильтровывают непрореагировавший примицин-ацетат, фильтрат выпаривают при пониженном давлении и остаток измельчают в ЗО мл ацетонитрила. Полученную таким образом суспензию фильтруют и твердый материал высушивают при 70 С под вакуумом. Продукт представляет собой

2.8 r (46,6® псевдопримицин-ацетата, Т.пл.:

106оС

Пример 8. 6,0 г (5,27 ммоль) примицин-ацетата суспендируют в 400 мл н-бутанола и к этому добавляют 6,0 ммоль неорганического реактива, слабо растворимого в метаноле (например, хлорид натрия, сульфат натрия, сульфит натрия, бикарбонат натрия, фосфат железа (!И), нитрат калия, нитрат натрия, бромид калия, фторид калия, окись магния, цианид натрия, диводородфосфат натрия, сульфид железа (П!) и

T.ä.). Реакционную смесь кипятят при перемешивании в течение одного часа, добавляют 5 мл уксусной кислоты к нему, после чего растворитель выпаривают в вакууме. Остаточный твердый материал растворяют при

55 примицин-ацетата кипятят в течение 3,5 ч в

400 мл пиридина, после чего полученный таким образом раствор выпаривают под вакуумом. Осадок промывают 2х50 мл зтанола, после чего этанол отгоняют и остаток растворяют в 100 мл метанола и к полученнагреве в 10 мл метанола, нераствориншийся материал отфильтровывают и к фильтрату добавляют 20 мл этилформиата по каплям при перемешивании в течение примерно 20

5 минут при комнатной температуре. Непрореагировавший примицин-ацетат отфильтровывают, фильтрат выпаривают в вакууме и остаток измельчают с диэтиловым эфиром.

Полученную таким образом суспензию

10 фильтруют и твердый материал высушивают в вакууме при 70 С. Продукт представляет собой 2,8 r (46,6%) псевдопримицин-ацетата, Т.пл.: 106 С.

Пример 9. 60,0 r (5,27 ммоль) прими15 цин-ацетата суспендируют в 400 мл н-бутанола, к этому добавляют 1,О r (3,1 ммоль) тетрабутиламмонийбромида, кипятят в те.чение двух часов, после чего добавляют к этому 5,0 мл уксусной кислоты и рас вори20 тель выпаривают в вакууме. Твердый остаток измельчают с 30 мл хлороформа, полученную суспензию фильтруют, твердый материал растворяют в 10 мл метанола при нагреве, после чего при комнатной темпера-

25 туре добавляют 20 мл этилформиата к раствору по каплям при перемешивании в течение примерно 20 мин. Непрореагировавший примицин-ацетат отфильтровывают, фильтрат выпаривают в вакууме и

30 остаток измельчают с диэтилавым эфиром.

Полученную суспензию фильтруют и сушат в вакууме при 70 С. Продукт представляет собой 2,8 r (46,6 ) псевдопримицин-ацетата, Т.пл,: 106 С.

35 Пример 10. 6.0 r (5,27 ммоль) прицимин-ацетата суспендируют в смеси 360 мл н-бутанола и 60 мл диэтиламина и кипятят при перемешивании в течение 4,5 ч. После этого реакционную смесь концентрируют

40 до ее половины в вакууме, добавляют 5 мл уксусной кислоты и растворитель.выпаривают в вакууме. Остаток растворяют в 10 мл метанола и к полученному раствору добавляют по каплям при перемешивании при

45 комнатной температуре 20 мл этилформиата в течение примерно 20 мин. Непрореагировавший примицин-ацетат отфильтровывают, фильтрат выпаривают, остаток измельчают с диэтиловым эфиром, суспензию

50 фильтруют и твердый материал высушивают в вакууме при 70 С. Продукт представляет собой 2,8 г (46,6 ) псевдопримицин-ацетата, Т.пл.: 106 С.

Пример 11. 60,0 г (52,77 ммоль) 1831471

10 ному таким образом раствору по каплям при перемешивании добавляют 200 мл этилформиата при комнатной температуре в течение примерно 20 мин. Непрореагировавший примицин-ацетат отфильтровывают, фильтрат выпаривают под вакуумом и остаток измельчают с диэтиловым эфиром, полученную суспензию фильтруют и сушат твердый материал в вакууме при 70 С, Продукт представляет собой 25 г (41,6ь) псевдопримицин-ацетата, T,пл.; 106 С.

Пример 12, 1,0 г (0,89 ммоль) примицин — A> — сульфата (приготовленного согласно патенту ВНР N 196425) и 0,14 г (0,45 ммоль) гидроокиси бария, содержащей

8 кристаллизационных вод, суспендируют в смеси 13,5 мл метанола и 3,5 мл воды. Реакционную смесь кипятят при перемешивании в течение 2,5 часов, и после добавления

0,4 мл уксусной кислоты, перемешивание продолжают в течение 30 мин. После этого сульфат бария, полученный во время реакции, отфильтровывают, фильтрат выпаривают, маслянистый остаток растворяют в 1,6 мл метанола и к полученному раствору добавляют по каплям при перемешивании 3,4 мл этилформиата при комнатной температуре в течение примерно 20 мин. Непрореагировавший примицин-ацетат отфильтровывают, фильтрат выпаривают в вакууме, полученную суспензию фильтруют и белый твердый материал сушат под вакуумом при 70 С, Продукт представляет собой 0,43 г (43® псевдопримицин — А1 -- ацетата, T.ïë.;

108ОС.

Пример 13, Разделение компонентов псевдопримицина колоночной хроматографией

1. Хроматографическое разделение:

Разделяемая проба: 6,8 г псевдопримицин-ацетата (приготовлен согласно любому из примеров 1.2. 4 — 11), растворен в 30 мл элюента.

Колонка: И3,6 см, длина 90 см, упакована силикагелем (Kleselgel 60, фирма Мерк; размер частиц: 0,063 — 0,100 мм), суспендированным в элюенте, Элюент: нижняя фаза смеси хлороформа: метанола: уксусной кислоты = 9;6; 3:4, стабилизированная с помощью 1 объемного метанола.

Скорость протока: 1,75 мл/смесь.

Объем собранных фракций: 10 мл.

Содержание активного ингредиента фракций было проанализировано с помощью ТСХ.

2) Испытание с помощью ТСХ.

Испытание осуществляют на пластине иэ Kleselgei 60 Р254 (Мерк) с использованием

10 мкл пробы.

* Удельное вращение было определено в 0,2 g-ном растворе метанола.

35 Полученные данным способом целевые продукты значительно лучше растворимы. Данные по растворимости сведены в табл.3.

Вследствие значительно лучшей рас40 творимости псевдопримициновый комплекс может применяться в кремах, водных растворах, глазных каплях, антисептических растворах и других фармацевтических средствах. Исходный же примициновый

45 комплекс нерастворим в воде и в большинстве органических растворителей; — псевдопримицин обладает гелеобразующей способностью; — может применяться в более высоких

50 дозах, чем примицин; — разделение компонентов осуществляется значительно легче; — индивидуальные компоненты псевдопримицина обладают такой же улучшенной

55 растворимостью.

Формула изобретения

Способ получения комплексных соединений псевдопримицина общей формулы

В качестве элюента используют смесь хлороформа: метанола: муравьиной кислоты: воды: формальдегида = 130:53:6,9:3:3, и проявление осуществляют с помощью хлор5 толуидина или этанола, содержащего 1 фосфоромолибденовой кислоты.

Комбинируют хроматографически идентичные фракции, разбавленные в 10 мл метанола и выпариваемые под вакуумом.

10 Твердый остаток измельчают.с диэтиловым эфиром, фильтруют и твердый белый порошок сушат под вакуумом при 70 С.

В результате получают следующие компоненты:

15 Компо- Масса, Выход, Т.пл., а2 *, нент г С

ПсевдопримицинА -ацетат 1,60 23,5 108 + 38,4

20 Псевдо™римицинАз-ацетат 0,30 4,4 110 +52,1

Псевдопримицин25 С1-ацетат 0,98 14,4 104 + 42,2

ПсевдопримицинВ>-ацетат 0,45 6,6 103 + 50,0

Псевдои римицинВз-ацетат 0 10 1,4 103 + 45,0

1831471

9R cH> OH 0H сн ОН он

R сн, сн, сн, он он сн он за; нн, н

I ф с-N нн2 y+

ОН сн, сн, Таблица 1

Таблица 2

Таблица 3 где R1 — бутил, пентил, гексил;

R2 — водород, гидроксил или О-арабиноХ вЂ” сульфат или эцетат-ион, отличающийся тем, что комплексное соединение примицина формулы о он он сн CH Й а где R1, Rz и Х имеют указанные значения, подвергают реакции транслактонизации обработкой соединением, выбранным из группы: гидроокись или органическая, или

5 неорганическая соль щелочного металла, четвертичная соль аммония, ионообменная смола, органическое основание такое, как диэтиламин или пиридин, в среде. воды и/или органического растворителя с после10 дующим, в случае необходимости, добавлением уксусной, кислоты, и полученную при этом смесь подвергают разделению с помощью хроматографии.