Замещенные имиды, способ снижения уровней фно и ингибирования фосфодиэстеразы и фармацевтическая композиция

 

Описываются новые замещенные имиды общей формулы I, где Y представляет или m равно 0-3; R⁵ представляет о-фенилен, незамещенный или замещенный одним или несколькими заместителями, каждый из которых, независимо, выбран из нитро, С_1-4 алкила, амина, карбамоила, замещенного алкилом с_1-3 атомами углерода, ацетокси, карбокси, гидрокси, амино, замещенного алкилом с_1-3 атомами углерода или двухвалентный остаток пиридина, пирролидина, имидазола, нафталина или тиофена; R⁶ представляет -СО-, -СН₂-, -СН₂СО-, SO₂; R⁷ - фенил, замещенный двумя заместителями, независимо выбранными из неразветвленного или циклического С₁-С₁₀ алкокси; n означает 0, 1, 2 или 3, способ снижения уровней ФНОα, способ ингибирования фосфодиэстеразы и фармацевтическая композиция. Данные соединения являются ингибиторами фактора некроза опухоли α и фосфодиэстеразы и могут быть использованы для борьбы с кахексией, эндотоксическим шоком, репликацией ретровирусов, астмой и воспалительными состояниями. 5 с.п.ф-лы.

Предпосылки создания изобретения Изобретение относится к способу снижения уровней ФНОα у млекопитающего и к соединениям и композициям, полезным для этого.

ФНОα или фактор некроза опухоли α является цитокином, который высвобождается прежде всего моноядерными фагоцитами в ответ на различные иммуностимуляторы. При введении животным или людям он вызывает воспаление, лихорадку, сердечнососудистые эффекты, кровоизлияние, коагуляцию или реакции острой фазы, подобные тем, которые наблюдают при острых инфекциях и шоковых состояниях.

Избыточное или нерегулируемое продуцирование ФНОα ответственно в ряде болезненных состояний. Они включают эндотоксемию и/или синдром токсического шока {Tracey et al., Nature 330, 662-664 (1987) и Hinshaw et al., Circ. Shock 30, 279-292 (1990)} ; кахексию или истощение {Dezube et al., Lancet, 335(8690), 662(1990)} ; и респираторный дистресс-синдром у взрослых (ARDS), где концентрация ФНОα, превышающая 12000 пг/мл, обнаруживается в пульмонарных материалах, полученных путем аспирации, у пациентов с ARDS {Millar et al. . Lancet 2(8665), 712-714 (1989)}. Систематическое вливание рекомбинатного ФНОα также приводит к изменениям, обычно наблюдаемым при ARDS {Ferrai-Baliviera et al.. Arch. Surg. 124(12), 1400-1405 (1989)}.

ФНОα, по-видимому, участвует в заболеваниях, связанных с резорбцией костей, включая артрит, при котором, что определено, лейкоциты, когда они активированы, проявляют активность в отношении резорбции костей, и данные подтверждают, что ФНОα вносит вклад в эту активность {Bertolini et al.. Nature 319, 516-518(1986) и Johnson et al.. Endocrinology 124(3), 1424-1427 (1989)} . Определено, что ФНОα стимулирует резорбцию кости и ингибирует образование кости in vitro и in vivo путем стимуляции образования и активирования остекластов в сочетании с ингибированием функции остеобластов. Хотя ФНСα может участвовать во многих заболеваниях, связанных с резорбцией костей, включая артрит, наиболее тяжело преодолимой связью с заболеванием является связь между продуцированием ФНОα опухолями или тканями хозяина и связанной со злокачественным заболеванием гиперкальцемией {Calci. Tissue Int (US) 46(Suppl. ), S3-10 (1990)} . В случае реакции хозяина на пересадку ткани повышенные уровни ФНОα в сыворотке связаны с основными осложнениями после острых аллогенных пересадок костного мозга { Holler et al.. Blood, 75(4), 1011-1016 (1990)}.

Церебральная малярия является сверхострым неврологическим летальным синдромом, связанным с высокими уровнями ФНОα в крови и наиболее тяжелыми осложнениями, которые имеют место у больных малярией. Уровни ФНОα в сыворотке прямо коррелируют с тяжестью заболевания и с прогнозом для пациентов с острыми приступами малярии { Grau et al., N. Engl. J. Med. 320(24), 1586-1591 (1989)}.

ФНОα также играет определенную роль в области хронических пульмонарных воспалительных заболеваний. Осаждение частиц окиси кремния ведет к силикозу, заболеванию с прогрессирующей недостаточностью дыхания, вызванному фиброзной реакцией. Антитела к ФНОα полностью блокируют вызванный окисью кремния фиброз легких у мышей {Pignet et al., Nature, 344:245-247 (1990). Высокие уровни продуцирования ФНОα (в сыворотке и в изолированных макрофагах) продемонстрированы на животных моделях фиброза, вызванного окисью кремния и асбестом { Bissonnette et al., Inflammation 13(3), 329-339 (1989)}. Альвеолярные макрофаги от пациентов с пульмонарным саркоидозом, как обнаружено, спонтанно выделяют большие количества ФНОα по сравнению с макрофагами от нормальных доноров {Baughman et al., J. Lab. Clin. Med. 115(1), 36-42 (1990)}.

ФНОα также участвует в воспалительной реакции, которая следует после реперфузии, называемой реперфузионным повреждением, и является главной причиной повреждения тканей после прекращения притока крови {Vedder et al., PNAS 87, 2643-2646 (1990)}. ФНОα также изменяет свойства клеток эндотелия и имеет различные про-коагуляционные активности, такие как вызывание увеличения фактора про-коагуляционной активности тканей и подавление пути метаболизма антикоагуляционного белка С, а также регулируемое снижение экспрессии тромбомодулина { Sherry et al., J. Cell Biol. 107, 1269-1277 (1988)}. ФНОα имеет про-воспалительную активность, которая вместе с его ранним продуцированием (во время начальной стадии воспалительного заболевания) делает его возможным медиатором повреждения ткани при различных важных расстройствах, включающих, но не ограниченных ими, инфаркт миокарда, инсульт и циркуляторный шок. Особую важность может иметь индуцированная ФНОα экспрессия адгезионных молекул, таких как межклеточная адгезионная молекула (МКАМ) или адгезионная молекула эндотелиальных лейкоцитов на клетках эндотелия (ЭЛАМ) { Munro et al.. Am. J. Path 135(1), 121-132 (1989)}.

Далее известно, что ФНОα является сильнодействующим активатором репликации ретровируса, включая активацию ВИЧ-1. {Dun et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 86, 5974-5978 (1989); Poll et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 87, 782-785 (1990); Monto et al.. Blood 79, 2670 (1990); Clouse et al., J. Immunol. 142, 431-438 (1989); Poll et al., AIDS Res. Hum. Retrovirus, 191-197 (1992)}. СПИД является результатом инфицирования Т-лимфоцитов вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ). Идентифицированы, по крайней мере, три типа или штамма ВИЧ, то есть ВИЧ-1, ВИЧ-2 и ВИЧ-3. Как следствие ВИЧ-инфицирования, медиируемый Т-клетками иммунитет ослабляется, и у инфицируемых индивидуумов имеют место острые инфекции, вызванные условно-патогенными микроорганизмами и/или необычные новообразования. Вход ВИЧ в Т-лимфоциты требует активации Т-лимфоцита. Другие вирусы, такие как ВИЧ-1 и ВИЧ-2, инфицируют Т-лимфоциты после активации Т-клеток, и экспрессия и/или репликация белков таких вирусов медиируется или поддерживается с помощью активации таких Т-клеток. Как только активированный Т-лимфоцит инфицируется ВИЧ, Т-лимфоцит необходимо продолжать поддерживать в активированном состоянии, чтобы сделать возможным экспрессию гена ВИЧ и/или репликацию ВИЧ. Цитокины, в частности ФНОα, участвуют в медиируемой активированными Т-клетками экспрессии белка ВИЧ и/или репликации вируса, играя определенную роль при поддержании активации Т-лимфоцитов. Следовательно, вмешательство в активность цитокина, такое как путем предотвращения или ингибирования продуцирования цитокина, особенно ФНОα, у ВИЧ инфицированного индивидуума помогает при ограничении поддержания активации Т-лимфоцитов, вызванной ВИЧ инфекцией.

Моноциты, макрофаги и родственные клетки, такие как клетки Купфера и глиальные клетки, также участвуют, в сохранении ВИЧ инфекции. Эти клетки подобно Т-клеткам, являются мишенями для репликации вируса, и уровень репликации вируса зависит от состояния активации клеток {Rosenberg et al., The Immunopathogenesis of HIV Infection, Advances in Immunology, 57 (1989)}. Цитокины, такие как ФНОα, как показано, активируют репликацию ВИЧ в моноцитах и/или макрофагах { Poli et al. Proc. Natl. Acad. Sci., 87, 782-784 (1990)} , следовательно, предотвращение или ингибирование продуцирования или активности цитокинов помогает при ограничении развития ВИЧ, как показано выше для Т-клеток.

Дополнительные исследования идентифицировали ФНОα как общий фактор в активировании ВИЧ in vitro и описали ясный механизм действия через ядерный регуляторный белок, обнаруженный в цитоплазме клеток (Osborn, et al., PNAS 86, 2336-2340). Это доказательство показывает, что снижение синтеза ФНОα может иметь противовирусное действие при ВИЧ инфекциях путем замедления транскрипции и, таким образом, продуцирования вируса.

Репликация вируса СПИД латентного ВИЧ в линиях Т-клеток и макрофагов может быть индуцирована ФНОα (Folks et al., PNAS 86, 2365-2368 (1989). Молекулярный механизм индуцирующей активности вируса, предположительно осуществляется способностью ФНОα активировать регуляторный белок гена (NFkB), обнаруженный в цитоплазме клеток, который способствует репликации ВИЧ посредством связывания с регуляторной последовательностью генов вируса (LTR) (Osborn, et al., PNAS 86, 2336-2340 (1989)}. Роль ФНОα при связанной со СПИД кахексией объясняют повышенными уровнями ФНОα в сыворотке и высокими уровнями спонтанного продуцирования ФНОα в моноцитах периферической крови пациентов {Wright et al., J. Immunol. 141(1), 99-104 (1988)}.

ФНОα играет различную роль в других вирусных инфекциях, таких как вирус цитомегалии (СМВ), вирус гриппа, аденовирус и семейство вирусов герпеса, по причинам, подобным тем, которые указаны.

Предотвращение или ингибирование продуцирования или действия ФНОα (например, путем лечения с помощью соединений по настоящему изобретению) является, следовательно, предсказуемым действенной терапевтической стратегией для многих воспалительных, инфекционных, иммунологических или злокачественных заболеваний. Они включают, но не ограниченны ими, септический шок, сепсис, эндотоксический шок, гемодинамический шок и синдром сепсиса, постишемическое реперфузионное повреждение, малярию, микобактериальную инфекцию, менингит, псориаз, застойное заболевание сердца, фиброзное заболевание, кахексию, отторжение пересаженных тканей, рак, аутоиммунное заболевание, инфекции, вызванные условно-патогенными микроорганизмами при СПИДе, ревматоидный артрит, ревматоидный спондилит, остеоартрит, другие артритные заболевания, болезнь Крона, язвенный колит, рассеянный склероз, системную красную волчанку, ENL при проказе, радиационное поражение и альвеолярное повреждение при гипероксигенации. Попытки, направленные на подавление действия ФНОα, включают от использования стероидов, таких как дексаметазон и преднизолон, до использования как поликлональных, так и моноклональных антител { Beutler et al., Science 234, 470-474 (1985); WO 92/11383}.

Ядерный фактор kB (NFkB) представляет собой плейотропный активатор транскрипции (Lenardo et al., Cell 1989, 58, 227-29). NFkB участвует в качестве активатора транскрипции в различных заболеваниях и воспалительных состояниях и считается, что он регулирует уровни цитокина, включая, но, не ограничиваясь им, ФНОα, а также является активатором транскрипции ВИЧ (Dbaibo et al. , J. Biol. Chem. 1993, 17762-66; Dun et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 1989, 86, 5974-78; Bachelerie et al. Nature 1991, 350, 709-12; Boswas et al. J. Acquired Immune Deficiency Syndrome 1993, 6, 778-786; Suzuki et al. Biochem. and Biophys. Res. Comm. 1993, 193, 227-83; Suzuki et al. Biochem. and Biophys. Res Comm. 1992, 189, 1709-15; Suzuki et al. Biochem. Mol. Bio. Int. 1993, 31(4), 693-700; Shakhov et al. 1990, 171, 35-47; and Staal et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1990, 87, 9943-47). Таким образом, ингибирование связывания NFkB может регулировать транскрипцию гена (генов) цитокина и через эту модуляцию или другие механизмы может быть полезной для ингибирования множества болезненных состояний. Предлагаемые соединения могут ингибировать действие NFkB в ядре и таким образом быть полезными для лечения различных заболеваний, включая, но не ограничиваясь ими, ревматоидный артрит, ревматоидный спондилит, остеоартрит, другие артритные состояния, септический шок, сепсис, эндотоксический шок, заболевание хозяина в ответ на пересадку ткани, гипотрофию, болезнь Крона, язвенный колит, множественный склероз, системную красную волчанку, ENL при проказе, ВИЧ, СПИД и условно-патогенные инфекции при СПИДе.

Уровни ФНОα, и NFkB подвержены влиянию реципрокальной обратной связи. Как отмечено выше, соединения по настоящему изобретению влияют на уровни как ФНОα, так и NFkB. В настоящее время неизвестно, однако, каким образом соединения по настоящему изобретению регулируют уровни ФHOα, NFkB или их обоих.

Многие клеточные функции могут медиироваться уровнями аденозин-3',5'-циклического монофосфата (цАМФ). Такие клеточные функции могут вносить вклад в воспалительные состояния и заболевания, включая астму, воспаление и другие состояния (Lows and Cheng, Drugs of the Future, 17(9), 799-807, 1992). Показано, что повышение уровня цАМФ в воспалительных лейкоцитах ингибирует их активацию и последующее высвобождение медиаторов воспаления. Повышенные уровни цАМФ также ведут к релаксации гладких мышц дыхательных путей.

Первичный клеточный механизм для инактивации цАМФ представляет собой расщепление цАМФ семейством изоферментов, называемых циклические нуклеотидные фосфодиэстеразы (ФДЭ). Существует семь известных членов семейства ФДЭ. Замечено, например, что ингибирование ФДЭ типа IV является в частности эффективным как для ингибирования высвобождения медиатора воспаления, так и для релаксации гладких мышц дыхательных путей. Таким образом, соединения, которые специфически ингибируют ФДЭ IV, должны осуществлять желаемое ингибирование воспаления и релаксацию гладких мышц дыхательных путей с минимумом нежелательных побочных эффектов, таких как сердечно-сосудистые и противотромбоцитные эффекты. Используемые в настоящее время ингибиторы ФДЭ IV не обладают селективным действием в приемлемых терапевтических дозах.

Соединения настоящего изобретения полезны для ингибирования фосфодиэстераз, в частности, ФДЭ III и ФДЭ IV, и при лечении медиируемых ими болезненных состояний. Подробное описание изобретения Настоящее изобретение основывается на открытии того, что класс неполипептидных имидов, более полно описанных здесь, проявляет ингибирование действия ФНОα.

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы: в которой Y представляет или m равно 0-3; R⁵ представляет: (i) о-фенилен, незамещенный или замещенный одним или несколькими заместителями, каждый из которых независимо выбран из нитро, циано, трифторметила, карбэтокси, карбометокси, карбопропокси, ацетила, карбамоила, карбамоила, замещенного алкилом с 1-3 атомами углерода, ацетокси, карбокси, гидрокси, амино, амино, замещенной алкилом с 1-3 атомами углерода, алкилом с 1-4 атомами углерода, алкокси с 1-4 атомами углерода или галогеном; (ii) двухвалентный остаток пиридина, пирролидина, имидизола, нафталина или тиофена, где двухвалентые связи находятся у смежных атомов углерода в кольце; (iii) двухвалентный циклоалкил с 4-10 атомами углерода, незамещенный или замещенный одним или несколькими заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, включающей нитро, циано, трифторметил, карбэтокси, карбометокси, карбопропокси, ацетил, карбамоил, ацетокси, карбокси, гидрокси, амино, замещенную амино, алкил с 1-10 атомами углерода, алкокси с 1-10 атомами углерода, фенил или галоген; (iv) ди-замещенный винилен, замещенный нитро, циано, трифторметилом, карбэтокси, карбометокси, карбопропокси, ацетилом, карбамоилом, карбамоилом, замещенным алкилом с 1-3 атомами углерода, ацетокси, карбокси, гидрокси, амино, амино, замещенную алкилом с 1-3 атомами углерода, алкилом с 1-4 атомами углерода, алкокси с 1-4 атомами углерода, или галогеном; или (v) этилен, незамещенный или замещенный 1-2 заместителями, каждый из которых независимо выбран из нитро, циано, трифторметила, карбэтокси, карбометокси, карбопропокси, ацетила, карбамоила, карбамоила, замещенного алкилом с 1-3 атомами углерода, ацетокси, карбокси, гидрокси, амино, амино, замещенной алкилом с 1-3 атомами углерода, алкилом с 1-4 атомами углерода, алкокси с 1-4 атомами углерода или галогеном; R⁶ представляет -СО-, -СН₂-, -СН₂СО- или -SO₂; R⁷ представляет (i) неразветвленный или разветвленный алкил с 1-12 атомами углерода; (ii) циклический или бициклический алкил с 4-12 атомами углерода; (iii) пиридил; (iv) фенил, замещенный одним или несколькими заместителями, каждый из которых независимо выбран из нитро, циано, трифторметила, карбэтокси, карбометокси, карбопропокси, ацетила, карбамоила, ацетокси, карбокси, гидрокси, амино, неразветвленного, разветвленного, циклического или бициклического алкила с 1-10 атомами углерода, неразветвленного, разветвленного, циклического или бициклического алкокси с 1-10 атомами углерода, CH₂R, где R является циклическим или бициклическим алкилом с 1-10 атомами углерода или галогеном; (v) бензил, замещенный одним или тремя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, включающей нитро, циано, трифторметил, карбэтокси, карбометокси, карбопропокси, ацетил, карбамоил, ацетокси, карбокси, гидрокси, амино, алкил с 1-4 атомами углерода, алкокси с 1-10 атомами углерода или галоген; (vi) нафтил; или (vii) бензилокси;
и,
где n имеет значение 0, 1, 2 или 3.

Первый предпочтительный подкласс включает соединения, в которых:
Y представляет ;
R⁵ представляет о-фенилен, замещенный или незамещенный;
R⁶ представляет -СО- или -СН₂-;
R⁷ представляет арил; и n равно 1.

Типичные соединения настоящего изобретения включают:
R⁶
-CO-
-CO-
-CH₂CO-
-СН₂СО-
-СО-
-СН₂СО-
-СО-
-СН₂СО-
-СО-
-СО-
-СН₂-
-CH₂-
-СН₂-
R⁷
3,4-диметоксифенил
3-этокси-4-метоксифенил
3,4-диметоксифенил
3-этокси-4-метоксифенил
3-пропокси-4-метоксифенил
3-пропокси-4-метоксифенил
3-циклопентокси-4-метоксифенил (циклопентокси = циклический С₅Н₉О-)
3-циклопентокси-4-метоксифенил
3,4-диметилфенил
3-этокси-4-цианофенил
3,4-диметоксифенил
3-этокси-4-метоксифенил
3,4-диметилфенил
Термин алкил, используемый здесь, означает одновалентную насыщенную разветвленную или неразветвленную углеводородную цепь. Если не указано иначе, такие цепи могут содержать от 1 до 18 атомов углерода. Представителями таких алкильных групп являются метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, изопентил, неопентил, трет-пентил, гексил, изогексил, гептил, октил, нонил, децил, ундецил, додецил, тридецил, тетрадецил, пентадецил, гексадецил, гептадецил, октадецил и тому подобные. Если алкил квалифицируется как "низший", алкильная группа будет включать от 1 до 6 атомов углерода. То же количество атомов углерода содержится в группах, обозначенных как "алкан" и к производным, обозначенным "алкокси".

Термин циклоалкил (или циклический алкил), используемый здесь, означает одновалентную насыщенную циклическую углеводородную цепь. Если не указано иного, такие цепи могут содержать от 1 до 18 атомов углерода. Представителями таких циклоалкильных групп являются метил, этил, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, циклононил, циклодецил, циклоундецил, циклододецил, циклотридецил, циклотетрадецил, циклопентадецил, циклогексадецил, циклогептадецил, циклооктадецил, циклические терпены и тому подобные. Если группа квалифицируется как "низшая", циклоалкильная группа будет включать от 3 до 6 атомов углерода. То же количество атомов углерода содержится в группе, обозначенной как "циклоалкан" и в такой, как "циклоалкокси".

Соединения могут быть использованы под наблюдением квалифицированных профессионалов для ингибирования нежелательных действий ФНОα и/или фосфодиэстеразы. Соединения могут вводиться перорально, ректально или парентерально, сами по себе или в сочетании с другими терапевтическими агентами, включая антибиотики, стероиды и тому подобные, млекопитающему, нуждающемуся в лечении. Дозированные формы для перорального введения включают таблетки, капсулы, драже и прессованные фармацевтические формы подобного рода. Для парентерального введения, которое включает внутримышечный, ректальный, внутривенный и внутриартериальный способы введения, могут быть использованы изотонические солевые растворы, содержащие 20-100 миллиграмм/миллилитр. Ректальное введение может быть осуществлено путем использования суппозиториев, полученных с обычными носителями, такими как масло какао.

Режимы дозировки должны выбираться в соответствии с конкретными показаниями, возрастом, весом и общим физическим состоянием пациента, и желаемой реакцией, но в целом дозы находятся в пределах от около 1 до около 1000 миллиграмм/день, по потребности, при одноразовом или многоразовом ежедневном введении. Как правило, начальный режим лечения может быть скопирован с того, который известен как эффективный при воздействии соединений по настоящему изобретению на активность ФНОα при других опосредуемых ФНОα болезненных состояниях. У подвергающихся лечению индивидуумов регулярно проверяют количество Т-клеток и соотношения Т4/Т8, и/или проводятся измерения виремии, такие как уровни обратной транскриптазы или белков вирусов, и/или проверяются на наличие проблем, связанных с развитием опосредуемых цитокином заболеваний, таких как кахексия или дегенерация мышц. Если не наблюдается никаких эффектов, следующих за нормальным режимом лечения, тогда количество вводимого агента, влияющего на активность цитокинов, увеличивается, например, на пятьдесят процентов в неделю.

Соединения по настоящему изобретению также могут быть использованы местным образом при лечении или профилактике местных болезненных состояний, опосредуемых или усиливаемых избыточным продуцированием ФНОα, таких как вирусные инфекции, например, инфекции, вызванные вирусами герпеса, или вирусный конъюктивит, псориаз, другие расстройства и заболевания кожи и тому подобные.

Соединения также могут быть использованы для ветеринарного лечения млекопитающих, отличных от людей, нуждающихся в предотвращении или ингибировании продуцирования ФНОα. Опосредуемые ФНОα заболевания для лечения, терапевтически или профилактически, у животных включают болезненные состояния, такие как те, которые описаны выше, но особенно - вирусные инфекции. Примеры включают кошачий вирус иммунодефицита, лошадиный вирус инфекционной анемии, козий вирус артрита, вирус visna и вирус maedi, а также другие лентивирусы.

Некоторые из этих соединений имеют центр хиральности и могут существовать в виде оптических изомеров. Как рацематы этих изомеров, так и сами по себе индивидуальные изомеры, а также диастереоизомеры, где существуют два хиральных центра, включены в объем настоящего изобретения. Рацематы могут быть использованы как таковые или могут быть разделены на индивидуальные изомеры механически как, например, с помощью хроматографии, используя хиральный абсорбент. Альтернативно, индивидуальные изомеры могут быть получены в хиральной форме или выделены химически из смеси путем образования солей с хиральной кислотой, такой как индивидуальные энантиомеры 10-камфарсульфоновой кислоты, камфарной кислоты, альфа-бром-камфарной кислоты, метоксиуксусной кислоты, винной кислоты, диацетилвинной кислоты, малеиновой кислоты, пирролидон-5-карбоновой кислоты и тому подобные, а затем высвобождения одного или обоих разделенных оснований, необязательно с повторением процесса так, чтобы получить один или оба изомера, по существу свободных от другого, то есть в форме, имеющей оптическую чистоту > 95%.

Предотвращение или ингибирование продуцирования ФНОα с помощью соединений настоящего изобретения может быть подходящим образом исследовано с использованием способов, известных в данной области. Например, анализ ингибирования ФНОα в стимулированных ЛПС РВМС проводят следующим образом:
Выделение РВМС: РВМС от нормальных доноров получают с помощью центрифугирования в градиенте плотности по Ficoll-Hypaque. Клетки культивируют в RPMI, обогащенной 10% АВ+сыворотки, 2 мМ L-глютамина, 100 ед./мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина.

Суспензии РВМС: лекарства растворяют в ДМСО (Sigma Chemical), последующие разбавления проводят в обогащенной RPMI. Конечная концентрация ДМСО в присутствии или в отсутствие лекарства в суспензиях РВМС составляет 0,25 мас. %. Лекарства исследуют при полулогарифмических разбавлениях, начиная от 50 мкг/мл. Лекарства добавляют к РВМС (10⁶ клеток/мл) в 96-луночных планшетах за один час перед добавлением ЛПС.

Стимулирование клеток: РВМС (10⁶ клеток/мл) в присутствии или в отсутствие лекарства стимулируют обработкой 1 мкг/мл ЛПС от Salmonella minnesota R595 (List Biological Labs. Campbell, CA). Клетки затем инкубируют при 37^oС в течение 18-20 часов. Супернатанты собирают и сразу же анализируют на содержание ФНОα или хранят замороженными при -70^oС (в течение не более, чем 4 дней) перед анализом.

Определение ФНОα: концентрацию ФНОα в супернатанте определяют с помощью наборов для ФНОα человека ELISA (ENDOGEN, Boston, MA) в соответствии с указаниями производителя.

Соединения могут быть получены, используя способы, известные в целом для получения нитрилов. Общие схемы реакций проиллюстрированы формулами

или



где Х является СO₂Н, СОNH₂ или CN.

Следующие далее примеры служат для дальнейшей иллюстрации настоящего изобретения, но не должны рассматриваться как ограничения его объема, который определяется исключительно следующей далее формулой изобретения.

Пример 1
3-Фталимидо-3-(3,4-диэтоксифенил)пропионитрил
К охлажденной на ледяной бане перемешиваемой суспензии 3-фталимидо-3-(3,4-диэтоксифенил)пропионамида (0,96 г, 2,5 ммоль) и 4-метилморфолина (0,66 мл, 6 ммоль) в ДМФ (9 мл) в атмосфере азота добавляют по каплям тионилхлорид (0,35 мл, 4,8 ммоль). Происходит небольшое выделение тепла, после чего смесь перемешивают при 0-5^oС в течение 30 минут и при комнатной температуре в течение 2 часов. Прохождение реакции контролируют с помощью ВЭЖХ (колонка Waters Nova-Pak/C-18/3,9•150 мм, 4 микрона, 1 мл/мин, 240 нм, 50/50 СН₃CN/Н₃РO₄ 0,1% (водн.)). Реакционную смесь выливают в смесь NаНСО₃ (8,5 мл) и льда (40 г) и перемешивают до тех пор, пока лед не растает. Смесь фильтруют, и твердый продукт промывают обильными количествами H₂O. Влажный твердый продукт растворяют в СН₂Сl₂ (25 мл), органический слой отделяют и сушат над MgSO₄ и концентрируют в вакууме до вязкого полутвердого продукта. Твердый продукт очищают дважды с помощью колоночной флэш-хроматографии (силикагель, 3% этилацетат/метиленхлорид) с получением твердого продукта, который сушат в вакууме (50^oС, <1 мм) с получением 0,5 г (55%) продукта в виде бледно-желтого твердого продукта; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,91-7,65 (м, 4Н), 7,12-6,98 (м, 2Н), 6,90-6,78 (м, 1Н), 5,61 (дд, J=6,4, 10,3 Гц, 1Н), 4,19-3,96 (м, 4Н), 3,83 (дд, J=10,3, 16,8 Гц, 1Н), 3,26 (дд, J=6,4, 16,8 Гц, 1Н), 1,55-1,30 (м, 6Н); ¹³С ЯМР (СDСl₃) δ 167,7, 149,2, 148,9, 134,3, 131,5, 129,1, 123,6, 120,2, 116,9, 113,2, 112,9, 64,7, 64,5, 51,1, 21,1 14,7; ВЭЖХ 98,4%. Элементный анализ. Рассчитано для C₂₁H₂₀N₂O₄, теоретически: С, 69,22; Н, 5,53; N, 7,69. Найдено: С, 69,06; Н, 5,48; N, 7,58.

Пример 2
3-Фталимидо-3-(3,4-диметоксифенил)пропионитрил
К охлажденной на ледяной бане перемешиваемой суспензии 3-фталимидо-3-(3,4-диметоксифенил)пропионамида (1,77 г, 5,00 ммоль) и 4-метилморфолина (1,3 мл, 12 ммоль) в ДМФ (17 мл) в атмосфере N₂ добавляют шприцом по каплям тионилхлорид (0,7 мл, 9,6 ммоль). Происходит небольшое выделение тепла, и через 30 минут охлаждающую баню удаляют, реакционную смесь перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь выливают в смесь NaHC0₃ (17 г) и 75 мл воды со льдом и перемешивают до тех пор, пока лед не растает. Суспензию фильтруют, и твердый продукт промывают обильными количествами Н₂O. Влажный твердый продукт растворяют в CH₂Cl₂ (50 мл), органический слой отделяют, сушат над Na₂SO₄ и концентрируют в вакууме до получения оранжевого твердого продукта. Твердый продукт очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии (силикагель, 5,95 EtOAc/CH₂Cl₂, 50-мм указанная выше колонка) с получением 1,32 г (79%) продукта в виде белого твердого вещества ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,9-7,6 (м, 4Н), 7,10 (м, 2Н), 6,83 (м, 1Н), 5,64 (дд, J= 6,5, 10,2 Гц, 1Н), 3,88 (с, 3Н), 3,85 (с, 3Н), 3,82 (дд, 1Н), 3,30 (дд, J= 6,5, 16,8 Гц, 1Н); ¹³С ЯМР (СDСl₃) δ 167,7, 149,5, 149,2, 134,4, 131,5, 129,1, 123,6, 120,1, 116,9, 111,1, 110,7, 56,0, 55,9, 51,1, 21,1. Элементный анализ. Рассчитано для C₁₉H₁₆N₂O₄-0,18 Н₂O, теоретически: С, 76,2; Н, 4,85; N, 8,25. Найдено: С, 67,23; Н, 4,79; N, 8,27.

Пример 3
3-(3'-Нитрофталимидо)-3-(3'-этокси-4'-метоксифенил) пропионитрил
Перемешиваемую суспензию 3-нитрофталевого ангидрида (0,24 г, 1,13 ммоль) и 3-амино-3-(3'-этокси-4'-метоксифенил)-пропионитрила (0,25 г, 1,13 ммоль) в 6 мл уксусной кислоты нагревают с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 12 часов. Уксусную кислоту удаляют в вакууме с получением оранжевой смолы, которую растворяют в метилен-хлориде (10 мл) и промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (2•10 мл). Органический слой отделяют и водный слой экстрагируют метиленхлоридом (10 мл). Объединенные органические экстракты сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме с получением желтого масла. Сырой продукт очищают колоночной хроматографией (силикагель, 5% этилацетат/метиленхлорид) и полученный твердый продукт сушат в вакууме (60^oС, <1 мм) с получением 0,25 г (56%) продукта в виде желтого твердого вещества: т. пл. 155,5-157^oС; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 8,20-8,09 (м, 2Н), 8,02-7,86 (м, 1Н), 7,15-7,02 (м, 2Н), 6,88-6,76 (м, 1Н), 5,64 (дд, J=6,3, 10,6 Гц, 1Н), 4,09 (кв, J=7 Гц, 2Н), 3,85 (с, 3Н), 3,84 (дд, J=10,6, 16,7 Гц, 1Н), 3,26 (дд, J= 6,3, 16,7 Гц, 1Н), 1,46 (т, J=7 Гц, 3Н); ¹³С ЯМР (СDСl₃) δ 165,3, 162,3, 150,1, 148,7, 144,9, 135,7, 133,5, 129,0, 128,1, 127,4, 123,2, 120,3, 116,6, 112,1, 111,5, 64,6, 55,9, 51,9, 20,9, 14,7; Элементный анализ. Рассчитано для С₂₀Н₁₇N₃О₆, теоретически: С, 60,76; Н, 4,33; N, 10,63. Найдено: С, 60,59; Н, 4,22; N, 10,65.

Пример 4
3-(3'-Аминофталимидо)-3-(3'-этокси-4'-метоксифенил)-пропионитрил
К раствору 3-(3'-нитрофталимидо)-3-(3'-этокси-4'-метоксифенил)пропионитрила (0,2 г, 0,5 ммоль) в 30 мл этил-ацетата добавляют 0,05 г катализатора, 10% палладия на угле. Смесь гидрогенируют в аппарате Парра-Шейкера при 55-60 фунт/кв. дюйм (3,41-3,72 кг/кв. см) водорода в течение ночи. Реакционную смесь фильтруют через целит, фильтрат концентрируют в вакууме с получением желтого масла. Сырой продукт очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии (силикагель, 3% этилацетат/метиленхлорид). Полученный желтый твердый продукт затем сушат в вакууме (60^oС, <1 мм) с получением 0,09 г (50%) продукта; т. пл. 171-172,5^oС; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,47-7,35 (м, 1Н), 7,19-7,00 (м, 3Н), 6,90-6,29 (м, 2Н), 5,56 (дд, J=6,6, 10 Гц, 1Н), 5,24 (с, 2Н), 4,09 (кв, J=7 Гц, 2Н), 3,84 (с, 3Н), 3,77 (дд, J=10, 16,8 Гц, 1Н), 3,27 (дд, J= 6,6, 16,8 Гц, 1Н), 1,45 (т, J=7 Гц, 3Н); ¹³С ЯМР (СDСl₃) δ 169,4, 167,9, 149,6, 148,5, 145,5, 135,5, 132,1, 129,4, 121,3, 120,0, 117,1, 113,0, 112,2, 111,4, 110,6, 64,5, 55,9, 50,7, 21,1, 14,7; ВЭЖХ (колонка Waters Nova-Pak C₁₈, 3,9•150 мм, 4 микрона, 1 мл/мин, 240 нм, 40,60, СН₃СN/0,1% Н₃РO₄ (водн. ) 4,5 мин, 100%; Элементный анализ. Рассчитано для С₂₀Н₁₉O₄, теоретически: С, 65,74; Н, 5,24; N, 11,50. Найдено: С, 65,54; Н, 5,23; N, 11,23.

Пример 5
3-Фталимидо-3-(3'-этокси-4'-метоксифенил)пропионитрил
Оксалилхлорид (0,49 мл, 5,64 ммоль) добавляют по каплям к охлажденному на ледяной бане перемешиваемому раствору ДМФ (0,48 мл, 6,16 ммоль) в ацетонитриле (10 мл). Немедленно образуется белый осадок, с сопутствующим выделением газа. Смесь перемешивают в течение 30 минут при 2-3^oС, затем медленно добавляют раствор 3-фталимидо-3-(3'-этокси-4'-метоксифенил)пропионамида (1,89 г, 5,13 ммоль) в ДМФ (15 мл). Через 10 минут добавляют пиридин, смесь перемешивают в течение 30 минут при 2-3^oС. Реакционную смесь затем выливают в 60 мл льда и перемешивают в течение 20 минут. Суспензию фильтруют, твердый продукт промывают водой, сушат на воздухе и затем сушат в вакууме (60^oС, <1 мм.рт.ст) с получением 1,7 г (95%) продукта в виде белого твердого вещества: т. пл. 135-137^oС; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,86-7,71 (м, 4Н), 7,08-7,05 (м, 2Н), 6,84-6,81 (м, 1Н), 5,63 (дд, J=6,5, 10,3 Гц, 1Н), 4,11 (кв, J=7 Гц, 2Н), 3,88-3,77 (м, 1Н), 3,84 (с, 3Н), 3,32-3,23 (м, 1Н), 1,45 (т, J=7 Гц, 3Н); ¹³С ЯМР (DMSO-d₆) δ 167,4, 149,0, 147,8, 134,9, 130,8, 129,2, 123,5, 119,4, 118,2, 112,1, 111,7, 63,8, 55,4, 50,0, 20,5, 14,6. Элементный анализ. Рассчитано для C₂₀H₁₈N₂O₄, теоретически: С, 68,56; Н, 5,18; N, 8,00. Найдено: С, 68,46; Н, 5,37; N, 8,02.

Пример 6
1-(1'-Оксоизоиндолин)-1-(3',4'-диметоксифенил)пропионитрил
К охлажденной на льду перемешиваемой суспензии 1-(1'-оксоизоиндолин)-1-(3', 4'-диметоксифенил)пропионамида (1,7 г, 5,0 ммоль) и 4-метилморфолина (1,3 мл, 12 ммоль) в ДМФ (20 мл) в атмосфере N₂ по каплям через шприц добавляют тионил-хлорид (0,7 мл, 9,6 ммоль). Происходит небольшое выделение тепла, через 1 час охлаждающую баню удаляют, реакционную смесь перемешивают в течение 1 часа при комнатной температуре. Реакционную смесь выливают на 100 мл льда и перемешивают до тех пор, пока лед не растает. Суспензию фильтруют, твердый продукт промывают обильными количествами воды. Твердый продукт очищают дважды с помощью колоночной флэш-хроматографии (силикагель, 1,9 и 24,76, EtOAc/CH₂Cl₂). Полученное твердое вещество сушат в вакууме с получением 0,97 г (60%) продукта в виде оранжево-желтого твердого вещества: т. пл. 119-121^oС; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,94-7,85 (м, 1Н), 7,61-7,30 (м, 3Н), 7,05-6,85 (м, 3Н), 5,73 (т, J=7, 1H), 4,46 (д, J=16,7 Гц, 1H), 4,19 (д, J= 16,7 Гц, 1H), 3,89 (с, 3Н), 3,86 (с, 3Н), 3,23 (м, 2Н); ¹³С ЯМР (СDСl₃) δ 168,5, 149,5, 149,4, 141,1, 131,9, 131,8, 128,7, 128,2, 123,9, 122,9, 119,1, 117,4 111,2, 111,0, 56,0, 55,9, 51,6, 47,3, 21,1; Элементный анализ. Рассчитано для C₁₉H₁₈N₂O_3, теоретически: С, 70,79; Н, 5,63; N, 8,69. Найдено: С, 70,26; Н, 5,56; N, 8,47.

Пример 7
1-(1'-Оксоизоиндолин)-1-(3'-этокси-4'-метоксифенил)-пропионитрил
К охлажденной на льду перемешиваемой суспензии 1-(1'-оксоизоиндолин)-1-(3'-этокси-4'-метоксифенил)пропионамида (1,0 г, 2,8 ммоль) и 4-метилморфолина (0,75 мл, 6,8 ммоль) в ДМФ (10 мл) в атмосфере N₂ по каплям через шприц добавляют тионилхлорид (0,4 мл, 5,5 ммоль). Происходит небольшое выделение тепла, через 1 час охлаждающую баню удаляют, реакционную смесь перемешивают в течение 1 часа при комнатной температуре. Реакционную смесь выливают в 100 мл льда и перемешивают до тех пор, пока лед не растает. Суспензию фильтруют, твердый продукт промывают обильными количествами воды. Твердый продукт очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии (силикагель, 1,5/8,5 EtOAc/CH₂Cl₂). Полученное твердое вещество сушат в вакууме с получением 0,57 г (60%) продукта в виде твердого вещества светло-серого цвета: т.пл. 125-125,5^oС; ; ¹H ЯМР (СDСl₃) δ 7,88 (д, J=7 Гц, 1Н), 7,60-7,30 (м, 3Н), 7,05-6,80 (м, 3Н), 5,71 (т, J=6,9 Гц, 1Н), 4,45 (д, J=14 Гц, 1Н), 4,20-4,00 (м, 3Н), 3,87 (с, 3Н), 3,23 (м, 2Н), 1,44 (т, J=7 Гц, 3Н),; ¹³С ЯМР (СDСl₃) δ 168,5, 149,7, 148,8, 141,2, 131,9, 131,8, 128,6, 128,2, 123,9, 122,9, 119,2, 117,4, 112,4, 111,5, 64,6, 55,9, 51,6, 47,3, 21,1, 14,6; Элементный анализ. Рассчитано для C₂₀H₂₀N₂O₃,
теоретически: С, 71,41; Н, 5,99; N, 8,33. Найдено: С, 71,11; Н, 5,91; N, 8,17.

Пример 8
Таблетки, включающие, каждая, 50 миллиграмм активного ингредиента, могут быть получены следующим способом:
Состав (для 1000 таблеток), г:
Активный ингредиент - 50,0
Лактоза - 50,7
Пшеничный крахмал - 7,5
Полиэтиленгликоль 6000 - 5,0
Тальк - 5,0
Стеарат магния - 1,8
Деминерализованная вода - По потребности
Твердые ингредиенты сначала пропускают через сито с отверстиями шириной 0,6 мм. Активный ингредиент, лактозу, тальк, стеарат магния и половину крахмала затем перемешивают. Другую половину крахмала суспендируют в 40 мл воды, в эту суспензию добавляют к кипящему раствору полиэтиленгликоля в 100 мл воды. Полученную пасту добавляют к порошкообразным веществам, смесь гранулируют, если это необходимо, с добавлением воды. Гранулят сушат в течение ночи при 35^oС, пропускают через сито с отверстиями шириной 1,2 мм и прессуют с получением таблеток диаметром приблизительно 6 мм, которые являются выпуклыми с обеих сторон.

Пример 9
Таблетки, включающие, каждая, 100 миллиграмм активного ингредиента, могут быть получены следующим способом:
Состав (для 1000 таблеток), г:
Активный ингредиент - 100,0
Лактоза - 100,0
Пшеничный крахмал - 47,0
Стеарат магния - 3,0
Все твердые ингредиенты сначала пропускают через сито с отверстиями шириной 0,6 мм. Активный ингредиент, лактозу, стеарат магния и половину крахмала затем перемешивают. Другую половину крахмала суспендируют в 40 мл воды, и эту суспензию добавляют к 100 мл кипящей воды. Полученную пасту добавляют к порошкообразным веществам, и смесь гранулируют, если это необходимо, с добавлением воды. Гранулят сушат в течение ночи при 35^oС, пропускают через сито с отверстиями шириной 1,2 мм и прессуют с получением таблеток диаметром приблизительно 6 мм, которые являются выпуклыми с обеих сторон.

Пример 10
Жевательные таблетки, включающие, каждая, 75 миллиграмм активного ингредиента, могут быть получены следующим способом:
Состав (для 1000 таблеток), г:
Активный ингредиент - 75,0
Маннит - 230,0
Лактоза - 150,0
Тальк - 21,0
Глицин - 12,5
Стеариновая кислота - 10,0
Сахарин - 1,5
5% Раствор желатина - По потребности
Все твердые ингредиенты сначала пропускают через сито с отверстиями шириной 0,25 мм. Маннит и лактозу смешивают, гранулируют с добавлением раствора желатина, пропускают через сито с отверстиями шириной 2 мм, сушат при 50^oС и снова пропускают через сито с отверстиями шириной 1,7 мм. Активный ингредиент, глицин и сахарин осторожно смешивают, добавляют маннит, гранулят лактозы, стеариновую кислоту и тальк, все перемешивают и прессуют с получением таблеток диаметром приблизительно 10 мм, которые являются выпуклыми с обеих сторон и имеют бороздку для разламывания на верхней стороне.

Пример 11
Таблетки, включающие, каждая, 10 миллиграмм активного ингредиента, могут быть получены следующим способом:
Состав (для 1000 таблеток), г:
Активный ингредиент - 10,0
Лактоза - 328,5
Кукурузный крахмал - 17,5
Полиэтиленгликоль 6000 - 5,0
Тальк - 25,0
Стеарат магния - 4,0
Деминерализованная вода - По потребности
Твердые ингредиенты сначала пропускают через сито с отверстиями шириной 0,6 мм. Затем активный ингредиент, лактозу, тальк, стеарат магния и половину крахмала перемешивают до однородности. Другую половину крахмала суспендируют в 65 мл воды, эту суспензию добавляют к кипящему раствору полиэтиленгликоля в 260 мл воды. Полученную пасту добавляют к порошкообразным веществам, все вместе смешивают и гранулируют, если это необходимо, и с добавлением воды. Гранулят сушат в течение ночи при 35^oС, пропускают через сито с отверстиями шириной 1,2 мм и прессуют с получением таблеток диаметром приблизительно 10 мм, которые являются выпуклыми с обеих сторон и имеют бороздку для разламывания на верхней стороне.

Пример 12
Желатиновые капсулы для сухого наполнения, каждая, содержащая 1000 миллиграмм активного ингредиента, могут быть получены следующим способом:
Состав (для 1000 таблеток), г:
Активный ингредиент - 100,0
Микрокристаллическая целлюлоза - 30,0
Лаурилсульфат натрия - 2,0
Стеарат магния - 8,0
Лаурилсульфат натрия просевают в активный ингредиент через сито с отверстиями шириной в 0,2 мм, и два компонента тщательно смешивают в течение 10 минут. Затем через сито с отверстиями шириной 0,9 мм добавляют микрокристаллическую целлюлозу, все вместе снова тщательно перемешивают в течение 10 минут. Наконец, стеарат магния добавляют через сито с отверстиями шириной 0,8 мм, после перемешивания в течение дополнительных 3 минут смесь вводят порциями по 140 миллиграмм каждая в (продолговатые) желатиновые капсулы с формой 0 для сухого наполнения.

Пример 13
0,2% раствор для инъекций или вливания может быть получен, например, следующим образом:
Состав, г:
Активный ингредиент - 5,0
Хлорид натрия - 22,5
Фосфатный буфер рН 7,4 - 300,0
Деминерализованная вода - До 2500,0 мл
Активный ингредиент растворяют в 1000 мл воды и фильтруют через микрофильтр или суспендируют в 1000 мл Н₂O. Добавляют буферный раствор, все вместе доводят до 2500 мл добавлением воды. Для приготовления стандартных дозированных единичных форм порции по 1,0 или 2,5 мл, каждая, вводят в стеклянные ампулы (каждая содержит соответственно 2,0 или 5,0 мг активного ингредиента).

Формула изобретения

1. Замещенные имиды

где Y представляет или -С(О)-(СН₂)_mCH₃, где m обозначает 0-3;
R⁵ представляет o-фенилен, незамещенный или замещенный одним или несколькими заместителями, каждый из которых независимо выбран из нитро, амино, С₁-С₄алкила, гидрокси, ацетокси, карбокси, аминогруппы, замещенной С₁-С₃ алкилом, карбамоила, замещенного С₁-С₃ алкилом, или двухвалентный остаток нафталина, пиридина, пирролидина имидазола или тиофена;
R⁶ представляет -СО-, -СН₂-, -СН₂СО- или -SO₂;
R⁷ представляет фенил, замещенный двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из неразветвленного или циклического С₁-С₁₀ алкокси, и
n имеет значение 0, 1, 2 или 3.

2. Способ снижения уровней ФНОα, который включает введение эффективного количества соединения формулы I по п. 1.

3. Фармацевтическая композиция, ингибирующая ФНОα, включающая количество соединения формулы I по п. 1, которое эффективно в единичной или многократной дозе для ингибирования ФНОα.

4. Способ ингибирования фосфодиэстеразы, который включает введение эффективного количества соединения формулы I по п. 1.

5. Фармацевтическая композиция, ингибирующая фосфодиэстеразу, включающая количество соединения формулы I по п. 1, которое эффективно в единичной или многократной дозе для ингибирования фосфодиэстеразы.