Комбинированное противомикробное средство для лечения гнойных ран

Изобретение относится к области фармацевтики и касается лекарственного препарата в виде мази для лечения гнойных ран. Изобретение заключается в том, что средство в качестве действующего начала содержит комбинацию антибактериального средства диоксидина, средства, ускоряющего процессы клеточной регенерации - метилурацила и местноанестезирующего средства - лидоксаина гидрохлорида, в качестве основы - полиэтиленоксида 400 и 1500 при соотношении соответственно 1:4:2:(3,5-3,6):1. Изобретение обеспечивает использование лекарственного средства для лечения гнойных ран в 1 фазе раневого процесса и позволяет минимизировать возможные побочные действия как за счет использования компонентов с более низкой токсичностью, так и за счет изменения соотношения компонентов. 3 табл.

 

Изобретение относится к области медицины, в частности, к противомикробным препаратам, и касается нового лекарственного средства (состава) в виде мази, содержащей в качестве действующего начала композицию из трех известных препаратов, а именно диоксидина (2,3-ди/гидроксиметил/хиноксалин-1,4-диоксида) - антибактериального препарата широкого спектра действия (Машковский М.Д., Лекарственные средства, Москва: ООО "Издательство Новая Волна", 2000 г., т.II, с.298), метилурацила (2,4-диоксо-6-метилтетрагидропиримидина) - препарата, ускоряющего процессы клеточной регенерации и способствующего заживлению ран (там же, т.II, с.160) и лидокаина гидрохлорида (2-диэтиламино-2¹,6¹-ацетоксилидида гидрохлорида, моногидрата) - препарата, обладающего местноанестезирующим действием (там же, т.I, с.294).

Заявляемая композиция обладает антимикробным, дегридратирующим и местным обезболивающим действием и может быть использована при лечении гнойных ран у взрослых людей в I фазе (гнойно-некротической) раневого процесса.

В настоящее время для лечения у взрослых гнойных ран в I фазе (гнойно-некротической) раневого процесса используются различные комбинированные препараты, обеспечивающие комплексное воздействие на пораженные зоны за счет специфического действия каждого из компонентов комбинированного препарата. При этом остается актуальной задача создания лекарственных средств, обладающих улучшенными свойствами по сравнению с известными и одновременно более доступными для производства и, в конечном итоге, для потребителя.

Наиболее близким к заявляемому является лекарственное средство мазь "Диоксиколь", содержащая в 100 г: диоксидина 1 г, тримекаина и метилурацила по 4 г и полиэтиленоксида до 100 г.

"Диоксиколь" применяют местно у взрослых при гнойных ранах в I фазе (гнойно-некротической) раневого процесса (там же, т.II, стр.299).

Задачей изобретения являлось создание лекарственного препарата аналогичного типа действия, который позволил бы минимизировать возможные побочные действия как за счет использования компонентов, обладающих более низкой токсичностью, так и за счет изменения соотношения компонентов в комбинированном препарате.

Задача решена тем, что в качестве антимикробного препарата для лечения гнойных ран предлагается комбинированное средство, содержащее диоксидин, метилурацил и лидокаин.

Отличительной особенностью предлагаемого лекарственного средства является замена тримекаина на лидокаин, который стабилизирует мембрану нервной клетки путем угнетения тока ионов, необходимого для процессов возбуждения и проведения импульсов, что обеспечивает местноанестезирующее действие - быстрое, глубокое и длительное.

В заявляемой композиции в 100 г мази содержится диоксидина 1 г, метилурацила 1 г, лидокаина гидрохлорида 2 г и полиэтиленоксида до 100 г.

Преимуществом заявляемой композиции перед используемой - мазью "Диоксиколь" - является то, что в качестве анестетика используется лидокаин, который менее токсичен, чем тримекаин.

В частности, приводятся данные о том, что максимальная общая доза лидокаина для инфильтрационной анестезии при применении 0,5% раствора составляет 3 г, в то время как для тримекаина эта доза не должна превышать 2 г (там же, т.I, стр.294 и 296). Это различие важно в связи с длительными сроками лечения гнойных ран.

Кроме того, лидокаин по сравнению с тримекаином используется в заявляемой композиции в 2 раза меньшей концентрации, что обеспечивает лучшую переносимость заявляемого средства по сравнению с прототипом.

Преимуществом заявляемого изобретения является так же то, что в качестве анестетика используется современное, доступное и более дешевое средство, чем тримекаин (стоимость лидокаина гидрохлорида 17-18 долл/кг, стоимость тримекаина 185 долл/кг; Медицина. Информационный бюллетень, М.: ЗАО "Информационное агентство Мобиле", 2003 г. №14).

Следует особо подчеркнуть, что в отличие от тримекаина лидокаин широко используется в мировой медицинской практике не только в анестезиологии, но и в кардиологии. Безусловно, это связано с более ценными фармакотерапевтическими свойствами лидокаина.

Заявляемый препарат представляет собой мазь от светло-желтого с зеленоватым оттенком до желтого с зеленоватым оттенком цвета, рН которой находится в пределах 5,0-6,0.

Состав препарата, г (мас.%):

Диоксидин	1
Метилурацил	4
Лидокаина гидрохлорид	2
Полиэтиленоксид 400	73,8
Полиэтиленоксид 1500	19.2

Способ приготовления заявляемого препарата

Диоксидин, метилурацил и полиэтиленоксид 400, взятые в соотношениях 1:4:(4,5-5,5), интенсивно перемешивают до равномерной консистенции и подвергают растиранию до размера частиц не более 100 мкм.

Оставшийся от рассчитанного количества полиэтиленоксид 400 нагревают с полиэтиленоксидом 1500 (их соотношение составляет (3,5-3,6):1) при температуре 50±5°С до получения прозрачной основы, охлаждают ее до 40-45°С, вносят лидокаина гидрохлорид и перемешивают до его полного растворения (25-30 минут).

В полученный раствор лидокаина гидрохлорида в полиэтиленоксидной основе, охлажденный до температуры 30±5°C, вносят концентрат диоксидина с метилурацилом и перемешивают массу до однородной консистенции.

Получают мазь светло-желтого с зеленоватым оттенком цвета, имеющую значение рН 5,0-6,0 и соответствующую требованиям ГФ Х I, вып.2, с.145.

Пример получения мази.

В емкость, снабженную мешалкой, загружают 50 г полиэтиленоксида 400, 10 г диоксидина, 40 г метилурацила и массу интенсивно перемешивают до получения однородной консистенции. Полученный концентрат растирают до получения размера частиц в основном не более 100 мкм.

В другую емкость загружают 688 г полиэтиленоксида 400, 192 г полиэтиленоксида 1500, массу нагревают до температуры 50-55°С и перемешивают до получения прозрачной полиэтиленоксидной основы.

В полученную основу вносят 20 г лидокаина гидрохлорида и массу перемешивают до его полного растворения, поддерживая температуру 40-45°С. После полного растворения лидокаина гидрохлорида раствор охлаждают до температуры 28-30°С, добавляют к нему концентрат диоксидина и метилурацила и массу перемешивают до получения массы однородной консистенции.

Материалы и методы

Проведено изучение антимикробной активности заявляемого средства в опытах in vivo и in vitro в сравнении с мазью Диоксиколь.

В опытах in vitro антимикробная активность изучена в отношении тест-штаммов аэробных бактерий и грибов: Staphylococcus aureus ATCC 6538-Р, Staphylococcus aureus Гуре, Staphylococcus aureus Smith, Staphylococcus aureus 178, Bacillus subtilis ATCC 6633, Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Proteus vulgaris ATTCC 6896, C-albicans 885-653 и анаэробных: Bacteroides fragilis 323, Bacteroides dist-sonis 255[82, B.melaninogenicus 9337, B.asaccharolyticus 1092, Fusobacterium nucleatum 143, Peptostreptococcus anaerobius 891, Clostridium septicum 286, Clostridium noyji t.А 302 NCTC 2908.

Определение антимикробного действия проводили методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде [1, 2].

Для изучения активности препаратов в отношении аэробных бактерий в жидкой питательной среде использовали среду Хотгингера. Начальная концентрация мазей в первом разведении составляла от 0,5% до 0,007% в последующих. В пробирки с разведениями препаратов вносили инокулят бактерий, приготовленный по стандарту мутности в физиологическом растворе. Микробная нагрузка составляла 1.10⁵ КОЕ/мл. Бактерии инкубировали при 37°С в течение 18-24 часов. Активность препаратов учитывали визуально по отсутствию видимого роста, результаты выражали в МПК в мкг/мл.

Активность препаратов в отношении анаэробных бактерий изучали методом 2-кратных серийных разведений в жидкой питательной среде "Schaedler anaerobe broth" (фирма "Oxoid") [3], определяя минимальные подавляющие концентрации препаратов (МПК) Микробная нагрузка составляла 1×10⁸ КОЕ/мл.

Бактерии инкубировали при 35°С в течение 48 часов. Анаэробные условия создавали, помещая исследуемые объекты в анаэробную станцию ("Jouan"), заполненную газовой смесью СО₂ - 10%, Н₂ - 10%, N₂ - 80%. Результаты учитывали через 48 часов инкубирования.

Изучение химиотерапевтической активности в опытах in vivo проводили на модели локализованного гнойно-некротического процесса (внутрикожное заражение). В эксперименте использованы штаммы золотистого стафилококка - S.aureus Гуре и S.aureus 178 (штамм, устойчивый к метициллину); грамотрицательных бактерий - Ps.aerugmosa 165 и E.coli 25922.

Для заражения животных использовали суточную культуру возбудителей, выращенную на агаре Хоттингера. Инфицирующая доза (ИД) составляла 1LD₁₀₀, что для Ps.aeruginosa соответствует 0,5×10⁷ КОЕ/мл, для кишечной палочки (1-3)×10⁸ КОЕ/мл, для стафилококка 8×10⁸ КОЕ/мл. Заражающую дозу вводили в объеме 0,05-0,1 мл. Через 24-48 часов после заражения на месте введения культуры развивался гнойно-некротический процесс.

В зависимости от величины и интенсивности поражения гнойно-некротические очаги подвергаются обратному развитию через 10 дней после заражения. Суммируя показатели пораженности каждой мыши в течение всего срока наблюдения, выводится средний показатель пораженности на одну мышь в каждой группе животных. За единицу принимается поражение, обозначенное +. Об эффективности испытуемого препарата судили: 1) по количеству животных, у которых гнойно-некротический процесс не развился; 2) на основании сравнения интенсивности поражений в группах леченых и контрольных животных.

При постановке химиотерапевтического опыта на указанных моделях наблюдение за подопытными животными продолжалось до момента полной ликвидации процесса в контрольной группе (в среднем 12-15 дней).

Заявляемое средство и мазь Диоксиколь наносили мышам на поряженные участки ежедневно в течение 10 дней.

Результаты исследований

Данные приведены в табл.1-3. В результате опытов in vitro установлено, что заявляемое средство проявляет активность в отношении аэробных (табл.1) и анаэробных (табл.2) бактерий, сравнимую с активностью мази Диоксиколь.

В опытах in vivo на моделях локализованного гнойно-некротического процесса белых мышей, вызванного внутрикожным введением стафилококка (S.aureus 178, S.aureus Гуре) и грамотрицательными бактериями (E.coli, P.aenigmosa) на фоне тяжелого гнойно-некротического процесса проводили сравнительное изучение заявляемого средства и мази Диоксиколь (таблица 3). Лечение начинали на 3-й день после заражения и проводили ежедневно в течение 10 дней.

При заражении животных S.aureus Гуре процесс развивается быстро, через 48 часов максимальная величина поражений третьей степени доходит до 1 см в диаметре. Как показано в таблице, оба образца обладают выраженным лечебным эффектом. При тяжело протекающем гнойно-некротическом процессе (индекс поражения в контроле = 26,1) эффективность заявляемого средства составила 53% и мази Диоксиколь 48%.

По заражении животных S.aureus 178 (полирезистентный штамм, устойчивый к метициллину) эффективность заявляемого средства увеличивается до 57% и мази Диоксиколь - 58%. Высокая активность мази в отношении устойчивого штамма золотистого стафилококка дает основание рекомендовать заявляемое средство при непереносимости к антибиотикам.

Заявляемое средство проявляет выраженный химиотерапевтический эффекит при гнойных процессах, вызванных синегнойной и кишечной палочками. Коэффициент терапевтической эффективности составляет 49-52% при гнойном процессе, вызванном кишечной палочкой и 51-53% - при синегнойной инфекции.

Для изучения безвредности заявляемого средства в субхроническом эксперименте на крысах проведено исследование его общетоксических свойств в сравнении мазью Диоксиколь.

Мазь наносили на эпилированный скарифицированный участок кожи на спине крысам в течение 1 месяца в дозе 4,0 г/кг, которая превышает рекомендуемую терапевтическую суточную дозу человека в 18 раз.

Ежедневные наблюдения показали, что аппликации заявляемого препарата и препарата сравнения в указанной дозе в течение 1 месяца не приводят к гибели животных и не влияют на их общее состояние и поведение.

В проведенных по окончании эксперимента клинических исследованиях было установлено, что состояние гомеостаза подопытных животных не претерпевало заметного изменения по сравнению с контролем: гематологические и биохимические показатели крови находились в пределах физиологической нормы.

Патоморфологическое исследование не выявило следов повреждающего воздействия препаратов на структуру внутренних органов.

Визуальное обследование кожи подопытных животных не выявило каких-либо изменений (покраснения, шелушения, нарушения эластичности), свидетельствующих о наличии раздражающего действия препарата. У контрольных и подопытных крыс в месте воздействия на коже обнаружены лишь следы скарификации.

При анализе микроструктуры кожи крыс воспалительных инфильтратов в дерме и изменений в эпидермисе не наблюдалось.

Гистологическое исследование показало, что препараты не вызывают изменений в соотношении толщины слоев и сдвигов в интенсивности пролиферативно-десквамативных процессов в эпидермисе. Поверхностный слой эпидермиса с признаками структурно-функциональной активности, пронизан выводными протоками желез и волосками шерстного покрова. В волокнистой дерме расположены волосяные фолликулы и неповрежденные потовые и сальные железы. Следов экспериментального воздействия не обнаружено.

Таким образом, заявляемое средство местнораздражающим действием не обладает.

Как следует из приведенных данных (табл.1 и 2 и особенно табл.3) заявляемое средство не уступает по активности применяемому в настоящее время в медицинской практике препарату мазь Диоксиколь. Более того, использование в составе заявляемого средства в качестве местного анестетика менее токсичного (по сравнению с тримекаином) препарата лидокаина гидрохлорида и в меньшей концентрации позволяет снизить отрицательные побочные явления.

Таким образом, использование в заявляемом комбинированном лекарственном средстве лидокаина гидрохлорида вместо тримекаина (в сравнении с прототипом) позволило снизить концентрацию анестетика и получить более доступный по цене препарат.

Заявляемое средство позволяет расширить арсенал лекарственных средств для лечения гнойных ран, что особенно важно в случаях непереносимости известных препаратов.

Таблица 1 Антибактериальная активность заявляемого средства в сравнении с мазью Диоксиколь in vitro
Штаммы микроорганизмов	Заявляемое средство	Мазь Диоксиколь
МПК в %
S.aureus 6533-P	0,12	0,12
S.aureus 178	0,25	0.25
S.aureus Гуре	0,12	0,12
S.aureus Smith	0,12	0,12
B.subtilis 6633	0,06	0,06
E.coli 25922	0,03	0,03
E.coli M-17	0,015	0,015
Pr.vulgaris 6896	0,12	0,12
P.aeruginosa 165	0,06	0,06
C.albicans 885-653	0,5	0,5

Таблица 2 Антибактериальная активность заявляемого средства в сравнении с мазью Диоксиколь in vitro в отношении анаэробных бактерий
Штаммы микроорганизмов	Заявляемое средство	Мазь Диоксиколь
МПК в %
B.fragilis 323	0,015	0,015
B.melaninogenicus	0,03	0,03
B.distasonis	0,03	0,03
B.asaccharolyticus	0,03	0,03
Pertostreptococcus anaerobius	0,06	0,06
Fusobacterium nucleatum 143	0,06	0,06
Clostridium septicum	0,06	0,06
Clostridium novji	0.12	0,12

Таблица 3 Химиотерапевтическая активность заявляемого средства и мази Диоксиколь на модели гнойно-некротического процесса у мышей, вызванного различными возбудителями
Возбудители гнойно-некротического процесса	Препараты	Контроль
	Заявляемое средство	Мазь Диоксиколь
Инд. пор. (балл)	ТЭ %	Инд. пор. (балл)	ТЭ %	Инд. пор. (балл)	ТЭ %
S.aureus Гуре	12,4	53	13,6	48	26,1	-
S.aureus 178	10,5	57	9,9	58	22,3	-
Е.coli	11,6	52	12,1	49	23,8	-
P.aeruginosa	11,8	53	12,3	51	25,2	-

Противомикробное средство для лечения гнойных ран в виде мази, содержащее антибактериальное средство - диоксидин, средство, ускоряющее процессы клеточной регенерации - метилурацил, местноанестезирующее средство, основу - полиэтиленоксиды, отличающееся тем, что в качестве местноанестезирующего средства содержит лидокаина гидрохлорид, основы - полиэтиленоксид 400 и 1500, при массовом соотношении диоксидина, метилурацила, лидокаина гидрохлорид 1:4:2 и полиэтиленоксида 400 и 1500 (3,5-3,6):1.