Способ моделирования пиелонефрита

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к экспериментальной урологии и нефрологии, и может быть использовано для моделирования пиелонефрита. Для этого кроликам после нижне-срединной лапаротомии выделяют и перевязывают мочеточник в нижней трети, после чего проксимальнее места перевязки в мочеточник путем пункции вводят 1 мл культуры микроорганизмов Escherichia coli в титре ≥10⁵ или Chlamydia trachomatis в титре ≥10⁴, или Ureaplasma urealyticum в титре ≥10⁴, или эти микроорганизмы в сочетании. При этом перевязывают мочеточник проксимальнее места пункции. Способ обеспечивает получение достоверной модели пиелонефрита при отсутствии инфицирования брюшной полости и послеоперационной раны. 38 ил., 1 табл.

 

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к экспериментальной урологии и нефрологии, к способам создания биологических моделей пиелонефрита.

По данным ведущих микробиологов и эпидемиологов, в последние годы наблюдается определенная тенденция к увеличению заболеваемости инфекциями, передающимися половым путем (ИППП). Однако роль возбудителей ИППП в этиологии рецидивирующих инфекций мочевыводящих путей до сих пор не определена. Поэтому изучение роли таких внутриклеточных микроорганизмов как Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum, а также их сочетаний с условно-патогенными возбудителями (Escherichia coli) в развитии инфекций мочевыводящих путей человека приобретает весьма важное значение как в плане диагностики, так и в выборе алгоритма лечения.

В связи с этим представляется актуальным создание такой модели пиелонефрита, которая позволила бы открыть пути для решения указанных проблем.

Известен способ моделирования пиелонефрита путем экспериментального инфицирования обезьян Масаса mulatta, а именно внутрибрюшинного заражения обезьян уреаплазмой. Через 3 недели после заражения наблюдали генерализацию инфекционного процесса: уреаплазму выделяли из мочи, мочевого пузыря, почек, семенников, лимфатических узлов, печени и других органов (Гамова Н.А. Ureaplasma urealyticum: Диагностика и патогенность, автореф. дисс... к. биол. н., М., 1992, с.17).

Аналогичную картину наблюдали при внутрибрюшинном заражении уреаплазмой кроликов.

Однако при использовании данной модели велики сроки наблюдения, не обеспечивается 100% развитие пиелонефрита в эксперименте и отсутствует возможность сравнения патогенного действия различных микроорганизмов на мочевые пути лабораторных животных.

Также известен способ моделирования калькулезного пиелонефрита на собаках путем имплантации в почечную лоханку камня, инфицированного культурой Е.coli, с последующим изучением функциональных, макро- и микроструктурных изменений в почках в сроки 3, 5, 7, 9 и 12 месяцев (Мамаев К.Т. Степень обратимости анатомо-функциональных изменений в почках и реабилитация больных при нефролитиазе и хроническом калькулезном пиелонефрите (экспериментально-клиническое исследование), дисс... к.м.н., Махачкала, 1991, с.46-51).

Однако этот способ позволяет изучать процесс развития пиелонефрита только в одном, частном случае - при наличии камня в лоханке, т.е. не может обеспечить объективной картины в отношении роли различных патогенных агентов, и, кроме того, предполагает слишком длительные сроки наблюдения, что не всегда удобно и возможно.

Известно также моделирование острого цистита у белых беспородных крыс-самок путем введения возбудителя в предварительно перерастянутый избытком физиологического раствора мочевой пузырь по катетеру или при экспериментальном уретрите у обезьян. В качестве возбудителей в этом случае была использована культура Ur.urealyticum (Загребина О.С. Этиологическое значение Ureaplasma urealyticum в развитии воспалительных процессов половых и мочевых органов у женщин, дисс... к.м.н., М., 2001, с.24-26, 37, 40-41).

Учитывая отсутствие подтверждения развития пузырного-мочеточникового рефлюкса и возникновения на этом фоне восходящего пиелонефрита у лабораторных животных, методика внутрипузырного заражения не обеспечивает достоверного сравнения роли различных микроорганизмов в развитии разных вариантов воспалительного процесса в почках. Кроме этого, использование в качестве экспериментальных животных обезьян требует больших материальных затрат.

Известно моделирование пиелонефрита на обезьянах путем атравматичного введения E.coli в мочеточник (Kallenius G. et al. P-fimbriae of pyelonephritogenic Escherichia coli: significance for reflux and renal scarring-a hypothesis // Infection. 1983 Jan-Feb; 11 (1):73-6, abstr. PubMed на сайте http://www.pubmed.com).

Последний способ принят нами за ближайший аналог предлагаемого нами способа.

Способ моделирования пиелонефрита включает введение в мочеточник экспериментального животного культуры микроорганизмов. При этом заболевание моделируют на кроликах. После нижне-срединной лапаротомии выделяют и перевязывают мочеточник в нижней его трети, после чего проксимальнее места перевязки в мочеточник путем пункции вводят культуру микроорганизмов: Escherichia coli, Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum и/или их сочетания и дополнительно перевязывают мочеточник проксимальнее места пункции.

По сравнению с прототипом данный способ также прост, однако, требует гораздо меньших затрат за счет использования в качестве лабораторного животного не обезьяны, а кролика. Кроме того, заявленный способ обеспечивает достоверное, 100% развитие пиелонефрита, поскольку при перевязке мочеточника при оперативном вмешательстве неминуемо нарушение уродинамики, возникновение рефлюкса. В то же время изоляция места пункции путем перевязки мочеточника выше места вкола исключает возможность инфицирования брюшной полости и послеоперационной раны. Тем более, что репаративные способности тканей кролика достаточно велики, что способствует быстрому заживлению раны.

При этом возможность введения животному отдельных видов микроорганизмов и их различных сочетаний позволяет в короткие сроки в рамках одного и того же эксперимента изучать влияние этих инфекционных агентов в сравнительном аспекте на развитие патологических изменений в почке.

Способ осуществляют следующим образом.

Материалы и методы экспериментального исследования

Для экспериментального моделирования пиелонефрита был взят кролик, так как анатомия животного такова, что можно легко выделить мочевой пузырь и достичь нижней трети мочеточника при небольшом разрезе над лоном. Диаметр мочеточника позволяет произвести пункцию и ввести 1 мл культуры в просвет. Модель пиелонефрита была создана путем перевязки мочеточника в нижней трети. Использовались кролики породы австралийский гигант-тупонос, женского пола в возрасте от 136 до 152 недель (средний возраст 142 недели) весом от 3200 г до 4000 г (средний вес 3600 г).

В эксперименте использовались клинические штаммы Е.coli, полученные из мочи больных хроническим пиелонефритом; штаммы Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum, полученные из материала уретры и цервикального канала женщин с воспалительными урогенитальными заболеваниями.

Материалом для морфологического исследования служили ткани как пораженной, так и контрлатеральной почки. Для светооптического исследования материал фиксировали в нейтральном забуференном 10% формалине, проводили по спиртам восходящей концентрации и заливали в парафин по общепринятым методикам. Микротомировали с толщиной срезов 5 мкм, депарафировали, окрашивали гематоксилин-эозином, а также микрофуксином по Ван-Гизону.

Забор мочи производился путем пункции мочеточника стерильным инсулиновым шприцем и проводился посев мочи. Для выделения Ureaplasma urealyticum использовался культуральный метод и метод ПЦР, для выделения Chlamydia trachomatis метод ПИФ и ПЦР, производили соскоб из лоханки и мочеточника.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ ПИЕЛОНЕФРИТА НА ФОНЕ УРОГЕНИТАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Результаты макроскопических и микроскопических исследований экспериментальных животных.

Задачи настоящего раздела работы заключались в:

1) установлении возможности развития пиелонефрита на фоне только специфических возбудителей, наличии неспецифических патогенов и их сочетаний;

2) определении морфологических особенностей развития воспалительного процесса на фоне только специфических возбудителей, при наличии неспецифических патогенов и их сочетаний;

3) определении микробиологической картины воспаления.

Индукция воспалительного процесса

После введения животного в наркоз путем в/м инъекции 2% раствора рометара в дозе 0,2 мл на килограмм веса кролика, 4,0 мл кетанола, производилась нижне-срединная лапаротомия. Мобилизовывали правый мочеточник в нижней трети. На нижнюю треть мочеточника накладывались 2 лигатуры (лавсан 2/0), мочеточник перевязывался дистально. Проксимальнее наложенной лигатуры производилась пункция мочеточника иглой инсулинового шприца, вводилась культура E.coli в титре ≥10⁵, Chlamydia trachomatis в титре ≥10⁴, Ureaplasma urealyticum в титре ≥10⁴ по 1 мл, или их сочетания, после чего мочеточник перевязывался проксимальнее места вкола. Данные представлены в таблице 1.

Таблица 1.
Характеристика экспериментальных животных
Вводимая	Число кроликов (n=13)
культура	n=3 (группа сравнения)	n=2	n=2	n=2	n=2	n=2
Не вводилась	+
E.coli		+
Ureaplasma urealyticum			+
Chlamydia trachomatis				+
Ureaplasma urealyticum + E.coli					+
Chlamydia trachomatis + E.coli						+

Животных оставляли под наблюдением и через определенные сроки (на 3 и 7 сутки) исследовали с помощью лабораторных и гистологического методов. Для этой цели кроликов выводили из эксперимента путем внутривенного введения избыточного количества тиопентала-натрия. Вскрытие брюшной полости производилось путем снятия швов. Производился забор материала (исследуемая и контрлатеральная почка) для гистологического исследования, соскоб из лоханки и мочеточника на выявление урогенитальных возбудителей, посев мочи.

Макроскопическая и морфологическая характеристика состояния верхних мочевых путей у исследуемых животных

Макроскопическая картина почки кролика в норме: почка бобовидной формы, размерами 4,2×3,0×2,3 см, мочеточник длиной около 8,0×0,2 см, не расширен. Капсула снимается легко, обнажая светло-коричневую, блестящую, гладкую поверхность.

На разрезе - корковое вещество светло-коричневого цвета, мозговое вещество темно-красного цвета (дифференцировано). Чашечно-лоханочная система не расширена, слизистая гладкая, блестящая. Слизистая мочеточника с продольной складчатостью.

Микроскопическая картина: клубочки без дистрофических изменений, отека. Эпителий восходящих, нисходящих петель и собирательных трубочек бледно окрашен, без дистрофических изменений. Эпителий ЧЛС переходный, без дистрофических изменений. Под собственной пластинкой жировая и соединительная ткань обычной гистоструктуры. Сосуды полнокровны.

Макроскопическая и морфологическая характеристика состояния верхних мочевых путей у животных группы сравнения

На 3 сутки почка бобовидной формы, незначительно увеличена в размерах до 4,6×3,7×3,0 см, незначительно расширена до 0,3 см. Капсула снимается легко, обнажая бурого цвета, блестящую, гладкую поверхность.

На разрезе - корковое вещество светло-коричневого цвета, мозговое вещество бурого цвета, дифференцировка коркового и мозгового вещества слабая. Чашечно-лоханочная система умеренно расширена, слизистая гладкая, блестящая. Продольная складчатость мочеточника сохранена.

Морфологическая характеристика: очаговое полнокровие и кровоизлияния в паренхиму почки. Зернистая дистрофия и некробиоз эпителия канальцев и трубочек. Значительное расширение собирательных трубочек, и увеличение в размерах гиалиновых цилиндров. Появление дистрофических изменений как в клубочках, так и в эпителии канальцев и трубочек. Отек подслизистого слоя с явлениями метахромазии. Вакуольная дистрофия в поверхностных слоях переходного эпителия лоханки.

К 7 суткам происходит увеличение почки в размерах до 5,0×3,7×3,3 см, нарастание обструкции (мочеточник 0,5 см, резко расширен). Признаков гнойного процесса не выявлено (капсула снимается легко, обнажая бурого цвета, блестящую, гладкую поверхность). Исчезает дифференцировка коркового и мозгового вещества, чашечно-лоханочная система резко расширена, слизистая гладкая, блестящая, продольная складчатость мочеточника сглажена (фиг.1, 2).

Морфологическая характеристика: выраженные дистрофические и некробиотические изменения в клубочках, в эпителии канальцев и трубочек. Значительное расширение просвета собирательных трубочек. Зернистая дистрофия эпителия чашечек и лоханки с уплощением эпителия. Выраженный отек подэпителиальной клетчатки. Появление метахромазии собственной пластинки слизистой. Кровоизлияния в собственно слизистую с моноцеллюлярными некрозами. Появление единичных плазмоцитов (в подслизистой) и пролиферация фибробластических клеток (процесс склероза) - фиг.3.

Макроскопическая и морфологическая характеристика состояния верхних мочевых путей у животных после введения культуры Е.coli

У животных после введения 1 мл культуры Е.coli в титре >10⁵, на 3 сутки макроскопически почка бобовидной формы, размерами 4,5×3,5×2,5 см, мочеточник длиной около 12,0×0,3 см, расширен. Капсула снимается легко, обнажая тусклую, с единичными апостематозными очагами, диаметром от 0,1 до 1,5 см. На разрезе - корковое и мозговое вещество слабо дифференцировано. Чашечно-лоханочная система незначительно расширена, тусклая с мутными наложениями. Слизистая мочеточника тусклая, продольная складчатость выражена (фиг.4, 5).

Морфологическая характеристика: обширные поля нагноения и распада подслизистого слоя. Микроабсцессы преимущественно в мозговом веществе, единичные в корковом. Единичные поля кровоизлияний в подслизистом слое, появление гранулоцитов. Со стороны слизистой ЧЛС преобладает десквамация эпителия, наложение слизи и гранулоцитарная инфильтрация. В подслизистом слое микроабсцедирование.

На 7 сутки после введения культуры E.coli как макроскопически, так и микроскопически определяются выраженные гнойные изменения. Почка увеличена в размерах до 4,7×3,3×3,0 см, мочеточник длиной около 7,0×0,5 см, резко расширен. Капсула снимается легко, обнажая тусклую, с множественными апостематозными очагами, местами сливными, диаметром от 0,3 до 1,0 см. На разрезе - корковое и мозговое вещество не дифференцировано. Чашечно-лоханочная система значительно расширена, тусклая с мутными наложениями. Слизистая мочеточника тусклая, продольная складчатость отсутствует.

Морфологическая характеристика: нарастание гнойно-деструктивных изменений, обширные поля нагноения и распада подслизистого слоя с микроабсцедированием. Распространение гнойного процесса в корковое вещество с образованием микроабсцессов. Сливные поля кровоизлияний в подслизистом слое, с выраженной воспалительной инфильтрацией. Эпителий ЧЛС слущен в просвет с наложениями слизи (фиг.6).

Макроскопическая и морфологическая характеристика состояния верхних мочевых путей у животных после введения культуры Ureaplasma urealyticum

У животных после введения 1 мл культуры Ureaplasma urealyticum в титре >10⁴, на 3 сутки макроскопически почка незначительно увеличена размерами 4,0×2,7×2,3 см, мочеточник длиной около 10,0×0,4 см, расширен. Капсула снимается легко, обнажая гладкую, блестящую бурую поверхность. На разрезе - корковое и мозговое вещество слабо дифференцировано. Чашечно-лоханочная система незначительно расширена, тусклая, гладкая. Под слизистой лоханки множественные очаги бурого цвета (кровоизлияния). Слизистая мочеточника тусклая, продольная складчатость выражена (фиг.7-9).

Морфологическая характеристика: более выраженный отек подэпителиальной клетчатки с обширными полями кровоизлияний с участками некрозов. Появление макрофагов с цитоплазматическими включениями округлой формы (скопления микроорганизмов). В слизистой ЧЛС выраженная баллонная дистрофия. Единичные гранулоциты (фиг.10).

На 7 сутки после введения 1 мл культуры Ureaplasma urealyticum макроскопически увеличена в размерах до 4,5×3,3×2,4 см, мочеточник длиной около 7,0×0,5 см, расширен. Капсула снимается легко, обнажая гладкую, блестящую бурую поверхность.

На разрезе - корковое и мозговое вещество не дифференцировано. Чашечно-лоханочная система резко расширена, гладкая, блестящая. Продольная складчатость мочеточника сглажена. В месте введения культуры стенка мочеточника уплотнена, пальпируется инфильтрат около 1 см в диаметре (фиг.11-13).

Морфологическая характеристика: единичные некрозы в подэпителиальном слое, наличие макрофагальной реакции. Единичные поля кровоизлияний из лизированных эритроцитов. Имеет место баллонная дистрофия не только в слизистой лоханки и чашечек, но и мочеточника. Это обусловлено, вероятно, способом заражения. Слабовыраженное гранулоцитарное воспаление (фиг.14).

Макроскопическая и морфологическая характеристика состояния верхних мочевых путей у животных после введения культуры Chlamydia trachomatis

У животных после введения 1 мл культуры Chlamydia trachomatis в титре >10⁴, на 3 сутки почка макроскопически незначительно увеличена, размерами 4,8×3,5×2,8 см, мочеточник незначительно расширен до 0,3 мм. Капсула снимается легко, обнажая бурого цвета, блестящую, гладкую поверхность. На разрезе - корковое вещество и мозговое вещество слабо дифференцированы. Чашечно-лоханочная система умеренно расширена, слизистая с мутными наложениями. Слизистая мочеточника с продольной складчатостью (фиг.15-17).

Морфологическая характеристика: очаговое полнокровие и кровоизлияния в паренхиму почки. Зернистая дистрофия и некробиоз эпителия канальцев и трубочек. Стазы эритроцитов в клубочках. Резко сужен просвет между клубочками и капсулой (набухание). Формирование гиалиновых цилиндров в выводных протоках. Эпителий чашечек и лоханки не изменен, выраженный отек подслизистого слоя.

На 7 сутки после введения 1 мл культуры Chlamydia trachomatis макроскопически почка увеличена в размерах до 4,5×3,0×3,0 см, мочеточник значительно расширен 0,4 см. Капсула снимается легко, обнажая бурого цвета, блестящую, гладкую поверхность. На разрезе - корковое вещество светло-коричневого цвета, мозговое вещество бурого цвета (слабо дифференцировано). Чашечно-лоханочная система резко расширена, слизистая гладкая, блестящая. Слизистая мочеточника со сглаженной продольной складчатостью (фиг.18, 19).

Морфологическая характеристика (фиг.20): выраженное расширение дистальных и проксимальных канальцев, чуть менее выраженное в собирательных трубочках. Воспаления нет и дистрофических изменений эпителия тоже нет. В канальцах наличие округлых образований, неравномерно окрашенных в фиолетовый цвет (кальцинаты).

Макроскопическая и морфологическая характеристика состояния верхних мочевых путей у животных после введения культуры Ureaplasma urealyticum в сочетании с культурой E.coli

У животных после введения 1 мл культуры Ureaplasma urealyticum в титре >10⁴ и 1 мл культуры E.coli титре >10⁵, на 3 сутки макроскопически почка резко увеличена в размерах до 5,0×3,5×3,5 см, мочеточник значительно расширен. Капсула снимается легко, обнажая неравномерно окрашенную серо-бурую поверхность с множественными апостемами диаметром от 0,1 до 1 см. На разрезе - корковое и мозговое вещество не дифференцировано. Чашечно-лоханочная система резко расширена, выполнена беловато-серыми хлопьевидными массами. Слизистая мочеточника со сглаженной продольной складчатостью (фиг.21-23).

Морфологическая характеристика: обширные поля нагноения и распада подслизистого слоя. Микроабсцессы не только в мозговом, но и в корковом слое, а также в собирательных трубочках. Единичные поля кровоизлияний в подслизистом слое, появление гранулоцитов. Со стороны слизистой ЧЛС преобладает слущивание, наложение слизи и гранулоцитарная (воспалительная) инфильтрация на фоне баллонной дистрофии. В подслизистом слое микроабсцедирование (фиг.24).

На 7 сутки после введения 1 мл культуры Ureaplasma urealyticum в титре >10⁴ и 1 мл культуры Е.coli в титре >10⁵ почка также увеличена в размерах, 4,6×3,5×3,2 см, мочеточник значительно расширен. Капсула снимается легко, обнажая неравномерно окрашенную серо-бурую поверхность с множественными апостемами диаметром от 0,1 до 1 см.

На разрезе - корковое и мозговое вещество дифференцировано. Чашечно-лоханочная система умеренно расширена, с единичными подслизистыми кровоизлияниями, выполнена беловато-серыми хлопьевидными массами. Слизистая мочеточника со сглаженной продольной складчатостью (фиг.25-27).

Морфологическая характеристика - на 7 сутки формируются абсцессы в корковом и мозговом веществе, сохраняется баллонная дистрофия эпителия ЧЛС, происходит гнойное расплавление подслизистого слоя лоханки и чашечек. Выраженная гранулоцитарная инфильтрация (фиг.28, 29).

Макроскопическая и морфологическая характеристика состояния верхних мочевых путей у животных после введения культуры Chlamydia trachomatis в сочетании с культурой Е.coli.

У животных после введения 1 мл культуры Chlamydia trachomatis в титре >10⁴ и 1 мл культуры Е.coli в титре >10⁵, на 3 сутки макроскопически почка увеличена в размерах до 5,6×4,0×3,6 см, мочеточник расширен. Капсула снимается легко, обнажая гладкую поверхность с мелкими желтоватыми вкраплениями. На разрезе - корковое и мозговое вещество дифференцировано. Чашечно-лоханочная система незначительно расширена, с гладкой блестящей поверхностью. Слизистая мочеточника со сглаженной продольной складчатостью (фиг.30-32).

Морфологическая характеристика: картина апостематозного пиелонефрита. Обширные поля нагноения и распада подслизистого слоя. Микроабсцессы преимущественно в мозговом веществе, единичные в корковом. Единичные поля кровоизлияний в подслизистом слое, появление гранулоцитов. Со стороны слизистой ЧЛС преобладает слущивание, наложение слизи и гранулоцитарная (воспалительная) инфильтрация. В подслизистом слое микроабсцедирование. Отсутствие лимфоидной инфильтрации, наличие кальцинатов в небольшом количестве.

На 7 сутки после введения 1 мл культуры Chlamydia trachomatis в титре >10⁴ и 1 мл культуры Е.coli в титре >10⁵, макроскопически почка резко увеличена в размерах до 6,8×4,6×3,7 см, мочеточник расширен до 0,5 см. Капсула снимается легко, обнажая гладкую поверхность. На разрезе - корковое и мозговое вещество слабо дифференцировано. Чашечно-лоханочная система резко расширена, слизиста мутная, с беловатыми наложениями. Слизистая мочеточника со сглаженной продольной складчатостью. В месте введения культур имеет место инфильтрат, плотный, спаянный с окружающей клетчаткой (фиг.33-36).

Морфологическая характеристика (фиг.37, 38): диффузное отложения кальцинатов в большом количестве в корковом и мозговом слоях. Диффузно-очаговая лимфоидная инфильтрация с образованием лимфоидных фолликулов без герментативных центров, с примесью лейкоцитов (лимфо-лейкоцитарная инфильтрация). Лоханочный эпителий частично слущен, некротизирован. В подэпителиальном слое ЧЛС выраженная гранулоцитарная инфильтрация. В корковом веществе единичные микроабсцессы с большим количеством эозинофильных гранулоцитов. Кровоизлияний нет.

Таким образом, у животных группы сравнения на фоне обструкции мочеточника воспалительных изменений в чашечно-лоханочной системе и паренхиме почки ни макроскопически, ни микроскопически не выявлено, имело место развитие дистрофических изменений, пролиферация фибробластических клеток.

При введении культуры Е.coli к 3 суткам появляются множественные микроабсцессы в мозговом и единичные очаги в корковом веществе. Появление гранулоцитов в подслизистом слое свидетельствует о наличии гнойного воспаления, в том числе и в стенке чашечно-лоханочной системы.

К 7 суткам развивался массивный гнойный пиелонефрит с поражением коркового вещества.

При введении только культуры Ureaplasma urealyticum уже на 3 сутки в клетках слизистой чашечно-лоханочной системы выявлена баллонная дистрофия, более обширные очаги некрозов, чем в группе сравнения, что коррелирует с данными литературы. Выявлено наличие макрофагальной реакции, макрофагов, внутри которых обнаружены в большом количестве атипичные возбудители. На 7 сутки появляется макрофагальная реакция и явления баллонной дистрофии и в мочеточнике, что, на наш взгляд, обусловлено способом инфицирования (на фоне обструкции ретроградный способ инфицирования), т.е. первоначальное возникновение лоханочно-почечных рефлюксов, а не пузырно-мочеточниковых). В отличие от пиелонефрита, вызванного Е.coli, имеются лишь единичные гранулоциты, что свидетельствует о достаточно вялой воспалительной реакции.

При сочетании Ureaplasma urealyticum и Е.coli уже на 3 сутки на фоне баллонной дистрофии определяются микроабсцессы как в корковом, так и мозговом слое почки и затрагивают выделительную систему (собирательные трубочки). Таких изменений на 3 сутки мы не наблюдали ни в модели с изолированной E.coli, ни при введении изолированной культуры Ureaplasma urealyticum. На 7 сутки формируются сливные абсцессы в корковом и мозговом слое и происходит гнойное расплавление подслизистого слоя ЧЛС. Гранулоцитарная реакция выраженная. Деструктивные изменения в данном случае более выраженные, чем при введении изолированной культуры E.coli.

При введении изолированной культуры Chlamydia trachomatis существенных изменений в чашечно-лоханочной системе и паренхиме в ранние сроки не выявлено по сравнению с контрольной группой, на 7 сутки отмечалось появление кальцинатов в канальцах.

При сочетании введения культур Chlamydia trachomatis и E.coli на 7 сутки обращало на себя внимание формирование диффузно-очаговой лимфоидной инфильтрации с образованием лимфоидных фолликулов без герментативных центров, что свидетельствовало о начале развития хронического процесса в ранние сроки. В корковом и мозговом веществе определялись эозинофильные гранулоциты как проявление аллергической реакции тканей на наличие специфического возбудителя. Увеличилось количество кальцинатов в канальцах.

Резюмируя экспериментальную часть исследований, можно сказать, что выявлены различия в течении воспалительного процесса, вызванного только атипичными возбудителями, или их сочетанием с неспецифическим возбудителем.

Воспалительный процесс в верхних мочевых путях, вызванный Ureaplasma urealyticum у экспериментальных животных, имеет следующие особенности:

1) наличие баллонной дистрофии в эпителии ЧЛС, развивающейся в ранние сроки,

2) отсутствие выраженной гранулоцитарной реакции.

Данные, полученные в эксперименте, коррелируют с данными литературы, те же изменения получены при внутрипузырном введении культуры Ureaplasma urealyticum крысам. Ureaplasma urealyticum реализует свои патогенные свойства через мембранную патологию, что, в свою очередь, приводит к формированию клеточных вакуолей и в дальнейшем - к колликвационному некрозу. Все вышеизложенное способствует повышению проницаемости клеток и более быстрому и выраженному развитию воспаления при попадании в лоханку условно-патогенных возбудителей.

Учитывая длительное и бессимптомное течение хламидийной инфекции, в сроки проведения эксперимента (3 и 7 сутки) не представилось возможным выявить характерных изменений в паренхиме и ЧЛС почки за исключением отложений кальцинатов в канальцах. При сочетанном введении культуры Chlamydia trachomatis и E.coli происходит формирование диффузно-очаговой лимфоидной инфильтрации с образованием лимфоидных фолликулов без герментативных центров, появляются эозинофильные гранулоциты. Вышеизложенное позволяет сделать вывод о том, что E.coli является своеобразным катализатором размножения элементарных телец Chlamydia trachomatis, что подтверждено данными культурального исследования.

Микробиологическая характеристика возбудителей.

При микробиологическом исследовании мочи, полученной от экспериментальных животных, в группе сравнения на 3 сутки роста флоры не выявлено, на 7 сутки выявлена споровая палочка, которая не вызывает инфекционного процесса у кроликов.

При введении E.coli на 3 и 7 сутки выявлена E.coli в титре 5×10⁶. При введении изолированных культур атипичных возбудителей посев мочи стерильный. При сочетанном ведении культуры E.coli с атипичными возбудителями в посевах мочи выявлена E.coli в титре 10⁶-5×10⁷.

В соскобах из лоханки и мочеточника, при введении культуры Ureaplasma urealyticum возбудитель был выявлен у животных только на 7 сутки методом ПЦР, культуральным методом возбудитель выявлен не был.

При сочетании Ureaplasma urealyticum с E.coli возбудитель выделен не был, что, вероятно, связано с наличием гноя и слизи в лоханке, что затрудняет получение клеточных элементов при заборе материала. По данным литературы, при введении U.urealyticum параллельно с Proteus mirabilis для изучения роли U.urealyticum в генезе камнеобразования чаще всего развивался пиелонефрит. При этом Proteus в отличие от U.urealyticum повторно выделяли из мочевых путей (Grenabo L. et.al., 1988; Larsson P.A. etal., 1989).

При введении культуры Chlamydia trachomatis как изолированно, так и в сочетании с Е.coli возбудитель был выделен методом ПЦР так же на 7 сутки, методом ПИФ возбудитель не выявлен. Выделение возбудителя только на 7 сутки, вероятно, связано с циклом развития микроорганизмов и с техникой забора.

Таким образом, заявленный способ достаточно прост, позволяет использовать дешевую модель и при этом получить 100% развитие пиелонефрита в короткие сроки, обеспечивает возможность сравнительного изучения влияния конкретных видов микроорганизмов на развитие определенных морфологических вариантов данного заболевания.

Способ моделирования пиелонефрита, включающий введение в мочеточник экспериментального животного культуры микроорганизмов, отличающийся тем, что заболевание моделируют на кроликах, при этом после нижнесрединной лапаротомии выделяют и перевязывают мочеточник в нижней трети, после чего проксимальнее места перевязки в мочеточник путем пункции вводят 1 мл культуры микроорганизмов Escherichia coli в титре ≥10⁵, или Chlamydia trachomatis в титре ≥10⁴, или Ureaplasma urealyticum в титре ≥10⁴ или их сочетания и дополнительно перевязывают мочеточник проксимальнее места пункции.