Способ моделирования острого некротического панкреатита

Изобретение относится к медицине, а именно к области воспроизведения болезней человека в эксперименте, и может быть использовано для моделирования острого некротического панкреатита. Для этого взрослой крысе под эфирным наркозом проводят срединную лапаротомию, выделяют поджелудочную железу и в ее толщу вводят 0,2 мл комплекса, состоящего из 10%-ного водного раствора лизина и 1%-ного водного раствора тритона X-100, взятых в равных объемах. Способ позволяет достичь необратимой деструкции цитоплазматических мембран панкреатоцитов за счет их разрыхления комбинацией тритона Х-100 с лизином. 4 ил.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к области воспроизведения болезней человека в эксперименте, и может быть использовано для моделирования панкреанекроза с последующим изучением патогенеза данного заболевания и его лечения. Заявляемый способ относится к травматическим моделям острого панкреатита, воспроизводимым с помощью химических агентов.

В.О.Попов, Ю.С.Винник и М.И.Гульман в своей монографии по моделированию острого панкреатита (Попов В.О., Винник Ю.С., Гульман М.И. Острый панкреатит: патогенетическая коррекция в экспериментальных условиях. - Красноярск: ГУПП "Сибирь", 2000, С.10 - 15) приводят данные по созданию экспериментального острого панкреатита с использованием различных химических агентов: физиологический раствор (Бердавгетов Б.А., 1972; Жандаров Н.И., 1983), перманганат калия (Шалимов А.А. и соавторы, 1983), таурохолат натрия (Gankish P.G., 1974; Rosato E.F. et al., 1972), пилокарпин (Перельман А.Д., 1979), скипидар (Пигаревский Ю.О., 1978).

На сегодняшний день известно множество способов моделирования острого воспаления поджелудочной железы, в том числе и с помощью химических агентов, но лишь небольшая их часть отличается простой и удобной воспроизводимостью, а также высокой эффективностью.

Для воспроизведения панкреанекроза на крысах известен способ воздействия низкочастотным ультразвуком на ткань поджелудочной железы крыс (патент РФ №2195710, G 09 B 23/28, публикация 27.12.2002). Известны хирургические способы моделирования острого панкреатита у крыс (патент РФ №2236709, G 09 B 23/28, опубликован 09.20.2004; патент РФ №2230373, G 09 B 23/28, опубликован 06.10.2004). Недостатками вышеперечисленных экспериментальных моделей является высокая трудоемкость и достаточно низкая воспроизводимость.

Прототипом заявляемого способа моделирования панкреанекроза выбран способ моделирования панкреатита с использованием тритона Х-100, предложенный Э.С.Гульянц и соавторами, авторское свидетельство СССР №1327152, опубликовано 30.07.1987.

При разработке заявляемой экспериментальной модели поставлены две важные задачи: модель должна отличаться простотой выполнения и высокой воспроизводимостью острого некротического панкреатита, максимально приближенного к таковому у человека.

Поставленная задача достигается тем, что в поджелудочную железу взрослой крысы вводят дозу 0,2 мл комплекса, состоящего из 1%-ного водного раствора тритона Х-100 и 10%-ного водного раствора основной аминокислоты лизина, взятых в равных объемах.

Способ иллюстрирован фиг.1, где показано острое интерстициальное воспаление поджелудочной железы с очагами панкреанекроза; фиг.2 - сформировавшийся панкреанекроз; фиг.3 - отек и нейтрофильная инфильтрация междольковой соединительной ткани (фрагмент "а" фиг.2, увеличение × 400); фиг.4 - целые и разрушенные нейтрофилы в зоне лейкоцитарного вала (фрагмент "б" фиг.2, увеличение × 400).

Способ моделирования осуществляют следующим образом.

Крысе массой 150-250 г под эфирным наркозом проводят срединную лапаротомию, выделяют поджелудочную железу и в ее толщу вводят дозу 0,2 мл 10% водного раствора лизина и 1% водного раствора тритона Х-100, взятых в равных объемах. Вышеуказанную дозу вводят не одномоментно, а постепенно, обкалывая поджелудочную железу на всем ее протяжении, что также способствует более высокой воспроизводимости модели. Затем операционная рана зашивается послойно наглухо.

Воспроизводимость модели существенно возрастает за счет того, что к тритону Х-100 добавляется основная аминокислота лизин, которая способствует формированию перфораций в биологических мембранах клеток поджелудочной железы, что подтверждено экспериментально. Таким образом, комбинация тритона Х-100 вместе с лизином способствует разрыхлению цитоплазматических мембран панкреатоцитов и в конечном счете приводит к необратимому деструктивному процессу в мембранах клеток. Воспроизводимость моделируемого заболевания стала практически 100%-ной и максимально приближенной к патогенезу острого некротического панкреатита у человека, что позволяет адекватно исследовать патогенез данного заболевания, а также изучать новые методы его лечения. Достоинством данного способа является его простота и универсальность, так как с помощью вышеприведенной комбинации химических веществ можно воспроизводить некротические и цитолитические процессы в различных биологических системах.

Изменения в ткани поджелудочной железы, трактуемые как острый панкреатит, подтверждены гистологическим исследованием. Для гистологического исследования кусочки поджелудочной железы экспериментальных крыс фиксировались в 10% растворе нейтрального формалина. Парафиновые срезы окрашивались гематоксилином-эозином. Забор материала проводился через 24 и 72 часа после введения 10% раствора лизина и 1% водного раствора тритона Х-100 в ткань поджелудочной железы.

Проведенные гистологические исследования показали, что уже через сутки в поджелудочной железе отмечаются дистрофические изменения отдельных групп ацинусов (фиг.1). Через трое суток в поджелудочной железе экспериментальных крыс отмечается нарастание выраженности дистрофических изменений клеток ацинусов, полиморфноядерной инфильтрации и отека интерстиция, появляются обширные зоны некроза, формируется лейкоцитарный вал, что характерно для тяжелой формы острого некротизирующего панкреатита - панкреонекроза, что наглядно представлено на снимках гистологических препаратов (фиг.2-4).

Способ моделирования острого некротическрго панкреатита, включающий деструкцию ткани поджелудочной железы крыс тритоном Х-100, отличающийся тем, что в поджелудочную железу взрослой крысы вводят дозу 0,2 мл комплекса, состоящего из 1%-ного водного раствора тритона Х-100 и 10%-ного водного раствора аминокислоты лизина, взятых в равных объемах, получая в течение 24-72 ч сформированный панкреонекроз.