Способ моделирования заболевания, вызываемого вирусом хантаан - возбудителем геморрагической лихорадки с почечным синдромом, на экспериментальном животном

Изобретение относится к медицине, в частности к вирусологии, и касается моделирования геморрагической лихорадки с почечным синдромом. Для этого белым мышам подкожно осуществляют введение вируса Хантаан, штамм 76-118 в дозе 10 ЛД₅₀. Способ обеспечивает возможность доклинического изучения эффективности противовирусных препаратов в отношении вируса Хантаан в опытах in vivo. 2 табл.

 

Изобретение относится к экспериментальной медицине, конкретно к моделированию заболевания, вызываемого вирусом Хантаан - возбудителем геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС), на белых мышах с использованием клинико-вирусологических, биохимических, гематологических показателей инфекции и показателей интерферонового статуса животных. Изобретение может найти применение при моделировании хантавирусной инфекции на лабораторном животном с целью проведения доклинического изучения эффективности медицинских средств биологической защиты в отношении возбудителей ГЛПС.

Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом - острое вирусное природно-очаговое заболевание, основу клинической диагностики которого составляют три основных синдрома: лихорадка, геморрагические проявления и специфическое поражение почек [1-3]. По числу регистрируемых случаев ГЛПС занимает одно из ведущих мест среди природно-очаговых вирусных инфекций в России - от 3 до 20 тысяч случаев заболевания в год [4].

Хантавирусы распространены практически по всему миру, что подтверждает обнаружение специфических антител в сыворотках крови человека и мелких грызунов - основного резервуара возбудителей данного заболевания в природе [5]. Установлено, что на территории России на данный момент циркулирует 7 хантавирусов: Хантаан, Пуумала, Сеул, Добрава-Белград, Тула, Хабаровск и Топографов, причем 2 последних не вызывают заболевания у человека [4, 6]. Доминирующее распространение в европейских очагах инфекции имеет вирус Пуумала, а на Дальнем Востоке - вирус Хантаан, который обуславливает наиболее тяжелые формы заболевания с высокой летальностью [3, 7].

В Российской Федерации в практике здравоохранения в настоящее время отсутствуют эффективные отечественные противовирусные средства профилактики и лечения ГЛПС. Установлена высокая эффективность зарубежного химиопрепарата виразола при его использовании для лечения больных в эпидочагах в Китае [11].

Таким образом, эпидемическая значимость ГЛПС и отсутствие в настоящее время эффективных отечественных лекарственных средств определяют необходимость разработки экспериментальной модели данного заболевания на лабораторном животном, предназначенной для поиска эффективных медицинских средств биологической защиты.

В настоящее время для ГЛПС отсутствует адекватная лабораторная модель [3]. При внутривенном инфицировании двумя вариантами штамма вируса Пуумала 19 различных видов низших приматов и 2 видов человекообразных только у двух видов обезьян - яванских макак (Масаса fascicularis) и шимпанзе (Pan Troglodytes) была выявлена незначительная протеинурия. У остальных приматов экспериментальная инфекция носила асимптомный характер с нарастанием титров специфических антител в сыворотке крови [9]. Следует отметить, что внутривенное инфицирование не позволяет моделировать естественный механизм заражения возбудителями ГЛПС.

Наиболее близким по сущности к заявленному изобретению является использование в исследованиях в качестве экспериментальных моделей для вируса Хантаан лабораторных линий полевых мышей [10-13], а для вируса Пуумала - лабораторных линий рыжих полевок [14-16]. В то же время в исследованиях по моделированию данной инфекции на лабораторных животных, которые проводились ранее, изучались только вирусологические показатели инфекции. Моделирование с учетом кроме вирусологических также биохимических, гематологических показателей и показателей интерферонового статуса позволяет разработать лабораторную модель, более адекватную заболеванию человека, и, следовательно, более корректно оценивать лечебный эффект изучаемых препаратов.

Изобретение направлено на разработку экспериментальной модели ГЛПС на белых мышах с использованием патогенетических принципов моделирования. Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что моделирование заболевания проводится на белых мышах двенадцатисуточного возраста, инфицированных подкожно вирусом Хантаан, штамм 76-118 в дозе 10 ЛД₅₀. В качестве показателей эффективности при изучении препаратов используют основные показатели: гибель, среднее время жизни животных; вспомогательные: вирусологический - накопление возбудителя в тканях головного мозга погибших животных; биохимические - уровни креатинина, мочевины, аланинаминотрансферазы (АлАТ), аспартатаминотрансферазы (АсАт), малонового диальдегида (МДА); гематологические показатели - количество лейкоцитов, лейкоцитарная формула; а также показатели интерферонового статуса - уровни циркуляторного интерферона (цИФН), способность лейкоцитов продуцировать α- и γ-интерферон (α- и γ-ИФН).

Для технического решения поставленной задачи были использованы белые мыши двенадцатисуточного возраста, суспензия вируса Хантаан, штамм 76-118, а также все необходимое оборудование и материалы для определения: биологической активности вируса Хантаан в вируссодержащих суспензиях органов; уровней мочевины, креатинина, АсАТ, АлАТ, МДА в сыворотке крови фотометрическим методом с использованием стандартных тест-наборов для клинических исследований; концентрации лейкоцитов крови, а также подсчета лейкоцитарной формулы крови; уровня цИФН в сыворотке крови, продукции лейкоцитами крови α- и γ-ИФН в ответ на стимуляцию in vitro.

Разработку экспериментальной модели осуществляли следующим способом: белым мышам двенадцатисуточного возраста подкожно вводили вируссодержащую суспензию вируса Хантаан в дозе 10 ЛД₅₀. Белые мыши двенадцатисуточного возраста и способ инфицирования были выбраны на основании результатов экспериментальных исследований по изучению чувствительности различных лабораторных животных, а также чувствительности различных возрастных групп белых мышей к данному возбудителю при различных способах инфицирования.

Животные были разделены на 4 группы:

1 группа - контроль стада (фоновый контроль);

2 группа - оценка вирусологических, гематологических, биохимических критериев и интерферонового статуса на 3 сутки после инфицирования;

3 группа - оценка вирусологических, гематологических, биохимических критериев и интерферонового статуса на 8 сутки после инфицирования;

4 группа - оценка вирусологических, гематологических, биохимических критериев и интерферонового статуса на 9 сутки после инфицирования.

При изучении вирусологических показателей экспериментальной хантавирусной инфекции у данных животных установлено, что началом инфекции является активная репродукция вируса в легких: средняя величина накопления вируса на 4 сутки после инфицирования составила (6,0±0,4) lg БОЕ/г [(Х±σ_Х), n=3]. Начиная с 5 суток, возбудитель в возрастающей концентрации накапливается в головном мозгу животных, достигая максимального уровня накопления к периоду развития максимальной гибели животных (8-10 сутки от момента инфицирования). Концентрация вируса колебалась в пределах от (6,6±0,4) до (7,4±0,4) lg БОЕ/г [(Х±σ_Х), n=3].

Проведено изучение показателей экспериментальной хантавирусной инфекции у белых мышей двенадцатисуточного возраста, которые позволят моделировать экспериментальную форму заболевания лабораторных животных, адекватную заболеванию человека. Для этого на основании анализа данных литературы были выбраны лабораторные показатели, которые характеризуют степень тяжести заболевания человека ГЛПС. К ним относятся: биохимические показатели крови, характеризующие поражение почек (уровни креатинина, мочевины) и печени (уровни АлАТ, АсАТ) [17, 18]; показатель, характеризующий степень нарушений в системе перекисного окисления липидов (ПОЛ) (уровень МДА) [19-21]; гематологические показатели (количество лейкоцитов и изменения в лейкоцитарной формуле крови) [18, 22, 23] и показатели интерферонового статуса (уровни цИФН, продукции лейкоцитами α- и γ-ИФН) [24, 25].

Результаты изучения динамики изменений данных показателей у мышей двенадцатисуточного возраста, инфицированных подкожно вирусом Хантаан, штамм 76-118 в дозе 10 ЛД₅₀, представлены в таблице 1.

Таблица 1 Результаты изучения биохимических, гематологических показателей и показателей интерферонового статуса у мышей двенадцатисуточного возраста, инфицированных подкожно вирусом Хантаан, штамм 76-118 в дозе 10 ЛД50 (n=3)
Показатель, единица измерения	Значение показателя на...сутки от момента инфицирования, Х±σх
интактные животные	3	8	9
Биохимические
Содержание в сыворотке крови креатинина, мкМ/л	138,8±2,1	195,6±1,5	366,0±2,1	422,3±1,3
мочевины, мМ/л	7,4±0,1	8,7±0,1	11,6±0,1	12,1±0,1
АлАТ, мкМ/(ч·л)	0,73±0,01	1,16±0,02	1,79±0,02	1,72±0,01
АсАт, мкМ/(ч·л)	0,71±0,02	1,09±0,01	1,36±0,03	1,29±0,03
МДА, мкМ/л	3,8±0,1	16,9±0,2	22,5±0,4	24,5±0,3
Гематологические
Содержание лейкоцитов в сыворотке крови, клеток/мкл	(6,5±0,2)·103	(9,1±0,2)·103	(16,6±0,4)·103	(16,9±0,4)·103
Лейкоцитарная формула, процент   лимфоциты
59,3±0,5	43,7±0,0	35,3±0,3	38,0±0,3
бластные формы	0,0±0,0	0,0±0,0	0,0±0,0	0,5±0,0
нейтрафилы сегментоядерные	35,8±0,3	50,0±0,0	48,9±1,7	47,9±1,2
палочкоядерные	2,8±0,3	4,0±0,0	9,1±0,3	7,8±0,3
базофилы	0,3±0,0	0,0±0,0	1,2±0,3	1,8±0,2
эозинофилы	1,0±0,0	2,0±0,0	4,0±0,0	3,0±0,0
моноциты	0,8±0,0	0,7±0,3	1,0±0,0	1,0±0,0
Интерферонового статуса
Уровень циркуляторного интерферона, ЕД/мл	4,9±0,8	9,7±0,3	276,5±1,1	282,4±1,5
Продукция лейкоцитами..., ЕД/мл интерферона-α	2645,2±14,3	640,0±12,5	210,1±12,6	198,4±10,4
интерферона-γ	135,6±1,3	76,5±1,1	35,4±0,9	30,6±1,2
Примечание - Н.о. - не определяется.

Показано, что в процессе развития экспериментальной хантавирусной инфекции у мышей отмечается значительное изменение биохимических показателей крови, характеризующих поражение почек, печени и нарушений в системе ПОЛ (на 8 сутки после инфицирования уровень креатинина увеличивается в 2,7 раз, мочевины в - 1,6, АлАТ - в 2,3, АсАТ - в 1,9 раз, МДА - в 5,9 раз). Изменение гематологических показателей характеризуется увеличением уровня лейкоцитов крови и изменениями в лейкоцитарной формуле - увеличивается относительное количество гранулоцитов: нейтрафилов, эозинофилов, базофилов и отмечается относительная лимфопения. Изменения показателей интерферонового статуса характеризуются увеличением уровня цИФН (в 56,4 раз на 8 сутки от момента инфицирования) и снижением интерферонпродуцирующей способности лейкоцитов крови в ответ на стимуляцию in vitro (α-ИФН - в 12,6 раз, γ-ИФН - в 3,8 раза на 8 сутки от момента инфицирования).

При интраназальном инфицировании мышей двенадцатисуточного возраста максимально возможной дозой возбудителя (4,8 lg БОЕ) экспериментальная хантавирусная инфекция носит асимптомный характер и не приводит к гибели животных. Возбудитель в тканях легких и головного мозга определяют, только начиная с 9 суток после инфицирования, максимальное его накопление выявлено на 12 сутки - (5,3±0,4) lg БОЕ/г в легких и (4,8±0,4) lg БОЕ/г в головном мозгу, далее отмечается элиминация вируса из организма инфицированных животных. Результаты изучения биохимических, гематологических показателей и показателей интерферонового статуса у мышей двенадцатисуточного возраста, инфицированных интраназально вирусом Хантаан в дозе 4,8 lg БОЕ, представлены в таблице 2.

При интраназальном инфицировании мышей двенадцатисуточного возраста изменения биохимических, гематологических показателей и показателей интерферонового статуса соответствует таковым при подкожном инфицировании животных, но имеют меньшую степень выраженности.

Изменения изученных биохимических, гематологических показателей экспериментальной хантавирусной инфекции и показателей интерферонового статуса у мышей выявляют патологические сдвиги, которые имеют схожесть с таковыми при заболевании у человека, что позволяет рассматривать экспериментальную хантавирусную инфекцию у данных животных в качестве лабораторной модели, адекватной заболеванию человека по данным патологическим изменениям.

Таблица 2 Результаты изучения экспериментальной инфекции мышей двенадцатисуточного возраста, инфицированных интраназально вирусом Хантаан в дозе 4,8 lg БОЕ (n=3)
Показатель, единица измерения	Значение показателя на...сутки от момента инфицирования, Х±σх
интактные животные	3	8	9	14
Биохимические
Содержание в сыворотке крови креатинина, мкМ/л	136,9±0,5	167,3±0,3	176,6±0,4	179,7±0,3	166,3±0,4
мочевины, мМ/л	7,1±0,03	6,05±0,02	8,3±0,03	11,4±0,04	10,9±0,07
АлАТ, мкМ/(ч·л)	0,72±0,01	0,85±0,01	0,92±0,02	1,04±0,01	0,77±0,01
АсАт, мкМ/(ч·л)	0,70±0,02	0,32±0,01	0,29±0,02	0,22±0,01	0,59±0,03
МДА, мкМ/л	3,4±0,1	9,9±0,1	12,4±0,2	13,3±0,1	5,6±0,2
Гематологические
Содержание лейкоцитов в сыворотке крови, клеток/мкл	(6,6±0,2)·103	(8,0±0,4)·103	(8,1±0,1)·103	(9,6±0,2)·103	(31,0±0,1)·103
Лейкоцитарная формула, процент лимфоциты
57,8±0,2	42,3±0,8	40,4±0,7	39,3±0,2	44,4±0,1
бластные формы	0,0±0,0	0,0±0,0	0,1±0,1	0,5±0,1	0,7±0,1
нейтрафилы сегментоядерные	38,1±0,3	51,5±1,1	47,2±0,8	47,1±0,6	40,3±0,1
палочкоядерные	2,0±0,1	3,7±0,2	8,8±0,2	7,1±0,5	6,1±0,3
базофилы	0,3±0,01	0,0±0,0	0,0±0,0	0,0±0,0	0,0±0,0
эозинофилы	0,8±0,01	2,0±0,1	3,0±0,1	5,5±0,2	8,2±0,2
моноциты	0,8±0,01	0,5±0,1	0,5±0,1	0,5±0,1	0,3±0,09
Интерферонового статуса
Уровень циркуляторного интерферона, ЕД/мл	5,2±0,1	19,3±0,1	21,6±0,1	71,5±0,1	141,6±0,1
Продукция лейкоцитами..., ЕД/мл α-интерферона	2560,0±12,5	337,2±5,6	320,0±9,0	320,0±6,1	186,2±4,1
γ-интерферона	128,0±2,5	57,4±0,9	53,7±0,3	49,6±0,3	129,5±0,5
Примечание - Н.о. - не определяется.

С использованием метода множественных сравнений подтверждено, что изученные показатели являются характеристикой степени тяжести экспериментальной хантавирусной инфекции мышей и, следовательно, могут быть использованы для оценки защитной эффективности препаратов. Исключение составляют показатели относительного количества бластных форм лейкоцитов и моноцитов в лейкоцитарной формуле крови.

Для оценки эффективности лекарственных препаратов в отношении ГЛПС целесообразно выбрать более тяжело и манифестно протекающую экспериментальную инфекцию при подкожном инфицировании животных.

Таким образом, для оценки эффективности препаратов может быть использована экспериментальная модель, основными элементами которой являются:

- лабораторное животное - белые мыши двенадцатисуточного возраста;

- инфицирующий препарат и штамм возбудителя - 10% вируссодержащая суспензия головного мозга мышей-сосунков, погибших в результате интрацеребрального инфицирования вирусом Хантаан, штамм 76-118;

- способ инфицирования - подкожно;

- доза инфицирования - 10 ЛД₅₀ для мышей данной возрастной группы при подкожном способе инфицирования;

Показатели тяжести инфекционного процесса:

основные:

- гибель,

- среднее время жизни животных в группе;

вспомогательные:

- вирусологический - накопление вируса в головном мозгу погибших животных;

биохимические: показатели, характеризующие нарушение выделительной функции почек (уровень креатинина и мочевины) и функции печени (уровень АлАТ и АсАТ);

гематологические: влияние на изменение содержания лейкоцитов в единице объема крови и на изменения в лейкоцитарной формуле крови;

показатели, характеризующие изменения интерферонового статуса: влияние на динамику изменения уровня цИФН, влияние на изменение уровня продукции α- и γ-ИФН лейкоцитами крови, индуцированными in vitro.

Пример 1. Оценка эффективности сочетанного применения химиопрепарата виразола и индуктора интерферона радостина в отношении экспериментальной формы хантавирусной инфекции белых мышей.

Для опыта 280 штук белых мышей двенадцатисуточного возраста разделили на 7 групп по 40 животных в группе.

В соответствии с разработанной экспериментальной моделью инфицирование белых мышей двенадцатисуточного возраста в группах 4, 5, 6, 7 проводят подкожно вирусом Хантаан, штамм 76-118 в дозе 10 ЛД₅₀.

Результаты оценки эффективности сочетанного применения препаратов в отношении экспериментальной формы хантавирусной инфекции показывают, что при сочетанном применении по схеме экстренной профилактики виразол и ридостин оказывают выраженный защитный эффект в отношении экспериментальной хантавирусной инфекции мышей, защищая от гибели (72±3)% животных и увеличивая среднее время жизни на 10,1 суток. Уровень накопления возбудителя в тканях головного мозга погибших животных уменьшается на (2,8±0,5) lg БОЕ.

При этом отмечается уменьшение изменений всех вспомогательных показателей, кроме относительного количества базофилов в лейкоцитарной формуле крови. Лечебное действие препаратов выражается в значительном уменьшении поражения почек (о чем свидетельствует нормализация уровня креатинина на 65,8% и мочевины - на 100% в группе леченных животных по сравнению с инфицированными нелечеными мышами). Также у инфицированных леченных животных снижается риск поражения печени (о чем свидетельствует нормализация концентрации АлАТ и АсАТ в сыворотке крови) и значительно уменьшаются нарушения в системе ПОЛ (о чем свидетельствует уменьшение уровня МДА на 41,8%). В результате применения препаратов у животных наблюдается практически полная нормализация гематологических показателей (содержание лейкоцитов, лейкоцитарная формула), а также происходит более выраженная активация системы интерферона, что является благоприятным прогностическим моментом в развитии инфекции.

Использование разработанной лабораторной модели апробировано при изучении эффективности противовирусных препаратов в практике работы Вирусологического центра МО РФ. Высокая медико-социальная значимость использования данной модели заключается в возможности проведения доклинического изучения эффективности медицинских средств защиты в опытах in vivo в отношении вируса Хантаан - возбудителя ГЛПС, что может найти применение в системе Минздрава РФ.

Новизна способа заключается в том, что впервые показана возможность экспериментального моделирования инфекции, вызываемой вирусом Хантаан - возбудителем ГЛПС, на лабораторном животном - белых мышах двенадцатисуточного возраста при подкожном способе инфицирования на основании изучения патогенетически значимых показателей данного заболевания.

Изобретательский уровень предложения обосновывается его очевидностью. Авторам изобретения не известно об использовании предлагаемой экспериментальной модели для оценки эффективности препаратов.

Воспроизводимость способа не вызывает сомнения и не требует дополнительных доказательств.

Статистическая обработка результатов исследования проводилась в соответствии с рекомендациями [26].

Источники информации

1. Вирусные геморрагические лихорадки / Доклад Комитета экспертов ВОЗ. - Женева, 1986.

2. Сомов Г.П., Беседнова Н.Н. Геморрагические лихорадки. - Л., 1981.

3. Manual of Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome and Hantavirus Pulmonary Syndrome / Edit. H.W.Lee, C.Calisher, C.Schmaljohn. - Seoul: WHO Collaborating Center for Virus Reference and Research (Hantaviruses) Asian Institute for Life Sciences, 1998.

4. Tkachenko E.A. HFRS and hantaviruses in Russian // 3^rd Int. Conf. HFRS, May 31 - June 3, 1995, Helsinki, Finland. - Helsinki, 1995. - P.13.

5. Lee H.W. Geographical distribution of hantaviruses and hemorrhagic fever with renal syndrome // Abst. Int. Symp. "100 Years ofVirol.", Sept. 21-25, 1992, St.Petersburg. - M., 1992. - P.52-53.

6. Isolation and characterization of Tula virus, a distinct serotype in the genus Hantavirus family Bunyaviride / О.Vapalahti, A.Lundkvist, S.K.J.Kukkonenetal et al. // J. Gen. Virol. - 1996. - Vol.77, N 12. - P.3063-3067.

7. Лещинская Е.В., Ткаченко E.A., Рыльцева Е.В. К характеристике эпидемиологических очагов ГЛПС в разных регионах СССР // Вопр. вирусол. - 1990. - №1. - С.42-45.

8. Prospective, double blind, concurrent, placebo-controlled clinical trial of intravenous ribavirin therapy of hemorrhagic fever with renal syndrome / J.W.Huggins, C.M.Hsiang, T.M.Cosgriffet al. // J. Infect. Dis. - 1991. - Vol.164, N 6. - P.1119-1127.

9. Experimental hantavirus infection in nonhuman primates / R.Yanagihara, H.Amyx, P.Lee et al. // Arch. Virol. - 1988. - Vol.101. - P.125-130.

10. Hantaan virus infection in suckling mice: virologic and pathologic correlation / K.T.Mr Kee, G.R.Kirn, D.E.Grien, C.J.Peters // J. Med. Virol. - 1985. - N 17. - P.107-117.

11. Experimental infection in newborn mice and rats by hemorrhagic fever with renal syndrome virus / K.Ymanichi, K.Domae, О.Tanishita et al. // Abstr. 6^th Inter. Congr. Virol. - Japan, 1984. - P.27-28.

12. Kim G.R., McKee К.Т. Pathogenesis of Hantaan virus infection in suckling mice: clinical, virologic and serologic observations // Am. J. Trop. Med. Hyg. - 1985. - N34. - P.388-395.

13. Immune spleen-cell-mediated protection against fatal Hantaan virus infection in infant mice / T.Nakamura, R.Ynagihara, C.C.Gibbs, D.C.Gajdusek // J. Infect. Dis. - 1985. - Vol.151. - P.691-697.

14. Chu Y.K., Jennings G.B., Schmaljohn C.S. A vaccinia vectored Hantaan virus vaccine protects hamsters from challenge with Hantaan and Seoul viruses, but not Puumala virus // J. Virol. - 1995. - N 69. - P.6417-6423.

15. Monoclonal antibodies to three strains of hantaviruses: Hantaan, R22, and Puumala / S.L.Ruo, A.Sanchez, L.H.Elliott et al. // Arch. Virol. - 1991. - Vol.119. - P.1-11.

16. Sensitive detection of hantaviruses by biotin-streptavidin enhanced immunoassays based on bank vole monoclonal antibodies / A.Lundkvist, J.Horling, S.Bjorsten, B.Niklasson // J.Virol. Methods. - 1995. - Vol.52. - P.75-86.

17. Epidemic hemorrhagic fever in Hubei Province the People's Republic of China: a clinical and serologic study / M.S.Cohen, J.Casals, G.D.Hsiung et al. // Yale J. Biol. Med. - 1981. - Vol.54. - P.41-55.

18. Hemorrhagic fever with renal syndrome presenting with hemophagocytic lymphohistiocytosis / Lee Je-Jung, Chung Ik-Joo, Shin Dong-Hyeon et al. // Emeg. Inf. Dis. - 2002. - Vol.8, N 2. - P.209-210.

19. Ковальский Ю.Г. Липиды крови и показатели перекисного окисления липидов у больных геморрагической лихорадки с почечным синдромом // Тер. архив. - 1988. - №6. - С.82-85.

20. Куликов В.Ю. Реакция перекисного окисления липидов в процессах адаптации и патологии // Бюл. СО АМН СССР. - 1985. - №5. - С.58.

21. Диагностическое значение показателей перекисного окисления липидов у больных ГЛПС / Д.Х.Хунафина, P.M.Фазлыева, Г.Х.Мирсаева, А.А.Исламова // Тез. докл. V Всероссийской научной конф. «Актуальные вопросы мед. вирусологии» 24-26 марта 1998 г. - СПб., 1998. - С.100-101.

22. Ефратова B.C., Рощупкин В.И., Морозов В.Г. Иммунопрогностические критерии течения геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС) // Сб. науч. тр. «Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии». - М., 1997. - С.314.

23. Relationship between epidemic hemorrhagic fever vims infection and changes of lymphocyte subsets and functions in peripheral blood [abstract 0-20] / Y.M.Tang, W.S.Yang, X.F.Bai et al. // Proced. and abstr. of the Intern. Symp. HFRS, Wuhan, People's Republic of China. - Hubei Med. Univer., 1988.

24. Мавзютова Г.А. Иммуномодулирующий эффект α1-интерферона в комплексной терапии геморрагической лихорадки с почечным синдромом // Журн. микробиол. - 1996. - №6. - С.80-81.

25. Мурзабаева Р.Т. Интерферон у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом // Журн. микробиол. - 2002. - №5. - С.74-76.

26. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., Минздрав РФ, 2000.

Способ моделирования геморрагической лихорадки с почечным синдромом путем введения подкожно белым мышам вируса Хантаан, штамм 76-118 в дозе 10 ЛД₅₀.