Способ диагностики беременности у коров
Владельцы патента RU 2306701:
Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Орловский государственный аграрный университет" (ФГОУ ВПО ОрелГАУ) (RU)
Изобретение относится к животноводству, в частности к скотоводству. Способ заключается в исследовании сыворотки крови. Сыворотку крови исследуют на содержание церулоплазмина, и при значении его активности выше 0,095 ед. опт. пл. диагностируют беременность. Способ точен, позволяет диагностировать беременность у коров на ранней стадии, а также позволяет повысить производительность, уменьшить трудоемкость и отказаться от использования дорогостоящих приборов и реактивов. 1 табл.
Изобретение относится к животноводству, в частности к скотоводству, и может быть использовано для ранней диагностики беременности у коров.
В настоящее время методы диагностики беременности подразделяются на две группы:
1) методы клинической диагностики;
2) методы лабораторной диагностики.
Лабораторные методы основаны на выявлении специфических изменений гормональной функции яичников или плаценты, обмена веществ матери и поступающих в ее организм продуктов метаболизма плода. Из многочисленных лабораторных методов диагностики беременности наиболее точные гормональные.
Из лабораторных методов наиболее часто применяется метод определения прогестерона в крови. Радиоиммунологический метод определения концентрации прогестерона основан на том, что желтое тело беременных вырабатывает прогестерон в течение всего периода стельности. Его концентрация с 5-7-го дня после осеменения увеличивается, достигая пика на 12-17 день, и если беременность не наступает, то за 1-3 дня до очередного полового цикла содержание прогестерона резко падает с 4,9 нг/мл и больше до 1,7 нг/мл (Середин В.А. "Биотехнология воспроизводства в скотоводстве". Учебное пособие, Нальчик, 2004 г., стр.274-275).
Недостатками всех лабораторных методов являются кропотливость, трудоемкость, малая производительность и использование дорогостоящих приборов и реактивов.
Задачей предлагаемого способа является повышение производительности, уменьшение трудоемкости и кропотливости и отказ от использования дорогостоящих приборов и реактивов.
Поставленная задача решается благодаря тому, что в известном способе диагностики беременности у коров, заключающемся в исследовании сыворотки крови на содержание прогестерона, согласно изобретению исследуют кровь на содержание церрулоплазмина и при его значении более 0,095 единиц оптической плотности диагностируют беременность.
Беременность характеризуется высоким уровнем свободно-радикального окисления.
При наступлении беременности отмечается также параллельный рост активности антиоксидантной системы. Показателем роста антиоксидантной активности является активность одного из антиоксидантов церулоплазмина.
Церулоплазмин - белок с электрофоретической подвижностью альфа2 - глобулинов, является медьсодержащей оксидазой (КФ.31.16.3.1), участвующий в острой фазе воспаления и стресса. Обнаружены антиоксидантные свойства церулоплазмина, синтезируется многими тканями.
Определение активности церулоплазмина проводили экспресс-методом по Э.В.Тэну (1981 г.).
Метод основан на способности церулоплазмина проявлять каталитическую активность как полифенолоксидазы. В результате окисления парафенилендиамина образуются вещества оранжевого цвета, интенсивность окраски пропорциональна концентрации церулоплазмина.
Для пояснения сущности предлагаемого способа представляем методику определения активности церулоплазмина в сыворотке крови.
Необходимые реактивы:
- раствор №1: 0,4М ацетатный буфер (рН 5,6). Для приготовления раствора берут 1 мл 0,4 М СН3СООН и 7,2 мл 0,4 М CH3COONa.
- раствор №2: 1%-ный водный раствор парафенилендиамина солянокислого. Берут 1 г парафенилендиамина солянокислого и растворяют в 99 мл H2O.
- раствор №3: 25%-ный раствор едкого натра (NaOH). Берут 25 г NaOH и растворяют в 75 мл Н2О.
Способ осуществляется следующим образом.
В пробирки помещают 0,1 мл сыворотки крови, добавляют 1 мл 0,4 М ацететного буфера (рН 5.6) и 0,5 мл 1% водного раствора парафенилендиамина солянокислого. Смешивают и помещают в водяную баню при 60°С.
Через 10 мин реакцию останавливают добавлением 3,5 мл охлажденного 25%-ного раствора едкого натра. Полученную оранжевого цвета жидкость колориметрируют при 440 нм.
В контрольных пробах содержатся все вышеперечисленные компоненты, но раствор едкого натра добавляется в пробирки перед помещением их в водяную баню.
Активность церулоплазмина выражали в единицах оптической плотности (условные единицы).
В опытах использовались 15 коров черно-пестрой породы в возрасте 3-5 лет с живой массой 350-450 кг и средним удоем за 305 дней лактации 3110 кг молока.
Результаты проведенных исследований представлены в таблице.
| Активность церулоплазмина в сыворотке крови беременных и небеременных коров | |||
| Небеременные (не стельные) животные | Беременные (стельность 24 дня) | Беременные (стельность 48 дней) | |
| № животного | Активность церулоплазмина в ед. от. пл. | Активность церулоплазмина в ед. от. пл. | Активность церулоплазмина в ед. от. пл. |
| 1 | 0,07 | 0,10 | 0,120 |
| 2 | 0,073 | 0,11 | 0,125 |
| 3 | 0,074 | 0,095 | 0,130 |
| 4 | 0,072 | 0,095 | 0,120 |
| 5 | 0,07 | 0,10 | 0,130 |
Таким образом, как наглядно видно из таблицы, при значениях церрулоплазмина более 0,095 ед. оптической плотности диагностируют беременность (стельность) у коров на ранней стадии с высокой точностью и объективностью.
Способ диагностики беременности у коров, заключающийся в исследовании сыворотки крови, отличающийся тем, что сыворотку крови исследуют на содержание церулоплазмина, и при значении его активности выше 0,095 ед. опт. пл. диагностируют беременность.
