Способ криоконсервации бластоцист человека
Владельцы патента RU 2325805:
ГУ научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН (RU)
Изобретение относится к области медицины, в частности к области криоконсервации. Способ криоконсервации бластоцист человека заключается в том, что эмбрионы охлаждают от комнатной температуры до -6°С со скоростью 2°С в минуту, затем инкубируют при -6°С в течение минуты, инициируют кристаллизацию при -6°С, инкубируют при этой температуре 9 минут, затем охлаждают до -35°С со скоростью 0,3°С в минуту и переносят в жидкий азот. Способ позволяет повысить выживаемость бластоцист.
Настоящее изобретение относится к медицине и биологии и может найти применение в отделениях вспомогательных технологий в лечении бесплодия.
Известен способ криоконсервации бластоцист человека, заключающийся в том, что эмбрионы в среде криопротектора охлаждают от комнатной температуры до -6°С со скоростью 2°С в минуту, затем инициируют кристаллизацию при -6°С, охлаждают до -40°С со скоростью 0,3°С в минуту и продолжают охлаждение до -150°С со скоростью 35°С в минуту и переносят эмбрионы в жидкий азот (Veilga A.S., Menezo Y. in Proceedings of the 10th World Congress in Vitro Fertilization and Assisted Reproduction, Vancouver, Canada, p.49).
Частота выживания и частота наступления беременности по этому протоколу составляет 55-60% и 20-22% соответственно.
Недостатком способа является сравнительно невысокая эффективность криоконсервации (выживаемость бластоцист и частота наступления беременности).
Задача изобретения - способ криоконсервации бластоцист человека, позволяющий увеличить выживаемость бластоцист и частоту наступления беременности.
Поставленная задача решается способом, заключающимся в том, что эмбрионы охлаждают от комнатной температуры до -6°С со скоростью 2°С в минуту, затем инкубируют при -6°С в течение минуты, инициируют кристаллизацию при -6°С, инкубируют при этой температуре 9 минут, затем охлаждают до -35°С со скоростью 0,3°С в минуту и переносят в жидкий азот.
Отличительные признаки заявляемого способа - инкубация при -6°С в течение минуты и повторная инкубация при -6°С в течение 9 минут при этой же температуре после инициации кристаллизации и охлаждение от -6°С до -35°С ранее описаны не были, что позволяет заявителю сделать вывод о соответствии заявляемого способа критерию «новизна».
Нижеследующий пример иллюстрирует способ по изобретению.
Клинический пример 1
Пациентка Д. 32-х лет, после экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов в полость матки произведена криоконсервация 4-х эмбрионов на стадии бластоцисты (эмбрионы 5-го дня культивирования) по следующему протоколу: Эмбрионы последовательно инкубированы в двух растворах криопротектора Blast Freeze (MediCult, Дания) в течение 10 минут в каждом последовательно. Эмбрионы помещены в соломинки для замораживания (2 эмбриона в 1 соломинку) CryoBioSystem и перенесены в программируемый замораживатель FreezeControl-8000 (CryoLogic, Австралия). Первый этап охлаждения проводился от комнатной температуры до -6°С со скоростью 2°С в минуту. Второй этап - инкубация в течение 1-й минуты при -6°С, иницииация кристаллизации при -6°С, инкубация при этой температуре еще 9 минут. Третий этап криоконсервации - охлаждение от -6°С до -35°С со скоростью 0,3°С в минуту. Далее эмбрионы перенесены в жидкий азот. Через 8 месяцев хранения разморожено 4 эмбриона с использованием сред Blast Thaw (MediCult, Дания) по рекомендованному фирмой производителем протоколу. Выжило 3 бластоцисты. Выживаемость составила 75%. Произведен перенос в полость матки 3-х бластоцист. Через 3 недели зарегистрирована одноплодная маточная беременность.
Клинический пример 2
Пациентка А., 31 год, после экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов в полость матки произведена криоконсервация 4-х эмбрионов на стадии бластоцисты (эмбрионы 5-го дня культивирования). Эмбрионы последовательно инкубированы в двух растворах криопротектора Blast Freeze (MediCult, Дания) в течение 10 минут в каждом последовательно. Эмбрионы помещены в соломинки для замораживания (2 эмбриона в 1 соломинку) CryoBioSystem и перенесены в программируемый замораживатель FreezeControl-8000 (CryoLogic, Австралия). Первый этап охлаждения проводился от комнатной температуры до -6°С со скоростью 2°С в минуту. Второй этап - инкубация в течение 1-й минуты при -6°С, инициация кристаллизации при -6°С, инкубация при этой температуре еще 9 минут. Третий этап криоконсервации - охлаждение от -6°С до -35°С со скоростью 0,3°С в минуту. Далее эмбрионы перенесены в жидкий азот. Через 8 месяцев хранения разморожено 4 эмбриона с использованием сред Blast Thaw (MediCult, Дания) по рекомендованному фирмой-производителем протоколу. Выжило 4 бластоцисты. Выживаемость составила 100%. Произведен перенос в полость матки 2-х бластоцист. Через 3 недели зарегистрирована одноплодная маточная беременность.
Предлагаемый способ позволяет повысить частоту выживаемости бластоцист до 68-70% и частоту наступления беременности до 28-30%.
Способ криоконсервации бластоцист человека, заключающийся в том, что эмбрионы охлаждают от комнатной температуры до -6°С со скоростью 2°С в минуту, затем инкубируют при -6°С в течение минуты, инициируют кристаллизацию при -6°С, инкубируют при этой температуре 9 мин, затем охлаждают до -35°С со скоростью 0,3°С в минуту и переносят в жидкий азот.
