Способ моделирования поликистозных яичников

Настоящее изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для создания модели поликистозных яичников. Для этого используют неполовозрелых самок крыс линии Vistar в возрасте 30 дней, с массой 30-35 грамм и отсутствием регулярных эстральных 4-дневных циклов. Препарат «Эстрожель» в дозе 2,5 грамма однократно наносят пластмассовым дозатором на предварительно очищенную от шерстного покрова кожу брюшной стенки крысы. Затем фиксируют животное в течение 10-15 минут до полного всасывания препарата. Далее - ежедневно на 15 минут в течение 1 месяца обездвиживают животное. Способ обеспечивает создание модели для более подробного изучения механизмов формирования синдрома поликистозных яичников с периода полового созревания и дальнейшей разработки лечебных и профилактических мероприятий по предотвращению данной патологии яичников на ранней стадии развития заболевания. 3 ил.

 

Настоящее изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии, и найдет применение при моделировании поликистозных яичников (ПКЯ) в периоде полового созревания для изучения теоретических аспектов патогенеза синдрома поликистозных яичников (СПКЯ) и разработке лечебно-профилактических мероприятий по раннему, доклиническому предупреждению данной патологии у девочек-подростков.

СПКЯ представляет собой синдром овариальной дисфункции (нерегулярные месячные, ановуляция), к специфическим проявлениям которой относятся не только гиперандрогения, но и «поликистозная» морфология яичников по данным УЗИ. При этом поликистозные изменения яичников (ПКЯ) - это не заболевание, а его закономерный симптом (Д.Е.Шилин. Синдром поликистозных яичников: Международный диагностический консенсус (2003 г.) и современная идеология терапии. Consilium medicum. - 2004. - Т.6. - №9. - media/consilium/04_09/683.shtml: Wendsday, 19-Jan-2005, 22: 19: 44 MSK).

Известно (Е.В.Уварова. Возможности применения комбинированных оральных контрацептивов в пролонгированном режиме при лечении СПКЯ // Проблемы репродукции. - 2006. - №4. - С.75), что симптомы СПКЯ манифестируют в конце препубертатного и в пубертатном периодах. Данная патология прогрессирует постепенно, а проявление декомпенсации репродуктивной системы при СПКЯ зависит от степени выраженности ее несостоятельности и от воздействия экзогеннных стрессорных факторов (физическое и психическое перенапряжение, инфекционные заболевания и т.д.).

Несмотря на интенсивные исследования в области СПКЯ, механизмы, лежащие в основе формирования данной патологии, все еще недостаточно изучены и дискутабельны, что свидетельствует о мультифакторной этиологии и отсутствии единого взгляда на данную патологию, очень сложную для диагностики и лечения (Манухин И.Б., Геворкян М.А., Кушлинский Н.Е. Синдром поликистозных яичников. - М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2004. - С.10; Е.В.Уварова. Возможности применения комбинированных оральных контрацептивов в пролонгированном режиме при лечении СПКЯ // Проблемы репродукции. - 2006. - №4. - С.73).

В основе решения проблемы формирования СПКЯ важное место занимает биологическое моделирование, при этом общность физиологических процессов регуляции половой системы у человека и крыс позволяет использовать данных животных для изучения механизмов развития репродуктивных нарушений (Серов В.Н., Кожин А.А., Прилепская В.П. Клинико-физиологические основы гинекологической эндокринологии. - Ростов н/Д: Изд-во «Эверест», 1998 г. - С.87-107). Различные методы лечения СПКЯ могут быть также изучены на биологических моделях (Fei Sun, Jin Yu. The Effect of a Special Herbal Tea on Obesity and Anovulation in Androgen-Sterilized Rats. Proceedings of The Society for Experimental Biology and Medicine. Volume 223. Issue 3. Page 295. - March 2000; Elisabet Stener-Victorin, Thomas Lundeberg, Urban Waldenström, Luigi Manni, Luigi Aloe, Stefan Gunnarsson, Per Olof Janson. Effects of Electro-Acupuncture on Nerve Growth Factor and Ovarian Morphology in Rats with Experimentally Induced Polycystic Ovaries. © 2000 by the Society for the Study of Reproduction, Inc. ISSN: 0006-3363. http://www.biolreprod.org; В.Н.Серов. Гормональная контрацепция как метод реабилитации после абортов. РМЖ, том 12, №1, 2004, http://http://www.rmj.ru/main.htm/rmj/t12/n1/5.htm).

Создание модели ПКЯ, формирующейся с периода полового созревания, чрезвычайно актуально, поскольку позволит не только подробнее изучить патогенез СПКЯ, но и разработать современные эффективные и физиологические методы ранней, доклинической коррекции, профилактики и реабилитации репродуктивной патологии у девочек-подростков.

По данным научно-медицинской литературы и изучению патентной информации были найдены следующие способы моделирования ПКЯ.

В работе Fei Sun, Jin Yu (Fei Sun, Jin Yu. The Effect of a Special Herbal Tea on Obesity and Anovulation in Androgen-Sterilized Rats. Proceedings of The Society for Experimental Biology and Medicine. Volume 223. Issue 3. Page 295. - March 2000) описан способ моделирования ПКЯ с помощью введения в организм крыс гормональных препаратов, содержащих андрогены. Авторы моделировали ПКЯ путем подкожного введения 1,25 мг тестостерона пропионата самкам крыс 9-дневного возраста. ПКЯ развивался на 112 день после рождения (4 месяца). Недостатком приведенного способа является то обстоятельство, что введение тестостерона в раннем неонатальном периоде жизни крысы вызывает моделирование андрогенной стерилизации, а не ПКЯ. При моделировании процесса данным способом происходит формирование ановуляторных расстройств, связанных с нарушением половой дифференциации мозга на раннем этапе полового развития. У андрогенстерилизованных крыс отмечается снижение как фолликулостимулирующего (ФСГ), так и лютеинизирующего (ЛГ) гормонов (М.М.Мухаметова. Анализ роли биогенных аминов в регуляции полового цикла и беременности у крыс: Дис... канд. биол. наук. - Ростов-на-Дону, 1996. - С.150-151). Поскольку ведущим звеном развития СПКЯ является повышение ЛГ (Серов В.Н., Прилепская В.Н., Овсянникова Т.В. Гинекологическая эндокринология. - М.: МЕДпрессинформ, 2004. - С.142-143), моделирование ПКЯ описанным способом не приводит к развитию данной патологии, а вызывает лишь развитие ановуляторного синдрома у андрогенстерильных крыс. Данный способ, обеспечивающий возникновение овариальных расстройств яичникового генеза, вряд ли может быть признан адекватным тем жизненным ситуациям, которые встречаются у подростков и провоцируют возникновение репродуктивной патологии.

В.Н.Серов (В.Н.Серов. Гормональная контрацепция как метод реабилитации после абортов. // РМЖ. - 2004. - Т.12. - №1, http://http://www.rmj.ru/main.htm/rmj/t12/n1/5.htm) описывает моделирование ПКЯ применением стрессорного фактора на крысах. Авторы проводили обездвиживание (помещение крысы в станочек, мешающий ей двигаться по 4-5 часов в сутки или «водная» модель, когда крыса находится в ванночке с водой по 2-3 часа в сутки). Формирование поликистоза яичников у крысы на фоне стрессового воздействия происходило в течение 35-40 дней. Недостаток - эксперимент не учитывает, то обстоятельство, что СПКЯ, является мультифакториальным заболеванием, а развитие патологии зависит не только от воздействия экзогенных факторов (стресс), но и от степени выраженности несостоятельности репродуктивной системы (Уварова Е.В. Возможности применения комбинированных оральных контрацептивов в пролонгированном режиме при лечении СПКЯ // Проблемы репродукции. - 2006. - №4. - С.75). Изолированное стрессорное воздействие, без учета исходного гормонального статуса яичников, вряд ли может служить основой для создания модели ПКЯ.

Другие исследователи (Серов В.Н., Кожин А.А., В.П.Прилепская. Клинико-физиологические основы гинекологической эндокринологии. - Ростов н/Д: Изд-во «Эверест», 1998 г. - С.105-106) моделировали ПКЯ путем облучения взрослых крыс люминесцентными лампами круглосуточно при уровне освещенности 250 лк. Персистирующий эструс наблюдался у большинства крыс основной группы к окончанию первого месяца. У крыс при длительном возбуждении гипоталамуса и гипофиза и торможении функциональной активности эпифиза, вследствие длительного светового воздействия, развивались поликистозные изменения в яичниках. Причем динамика патологического процесса характеризовалась четко выраженной фазностью, с характерными для каждого периода функционально-морфологическими перестройками. При длительном облучении крыс в ткани яичников развивалось кистозное перерождение фолликулов с лизисом яйцеклеток и последующей дегенерацией эпителиальной выстилки. Недостаток - использование взрослых крыс с наличием эстральных циклов. Моделирование данным способом не позволяет объяснить механизм формирования СПКЯ, поскольку патология, как правило, развивается в пубертате (Серов В.Н., Прилепская В.Н., Овсянникова Т.В. Гинекологическая эндокринология. - М.: МЕДпрессинформ, 2004. - С.141). Кроме того, у крыс в результате предлагаемого моделирования ПКЯ развивается персистирующий эструс - аналогичный метроррагии. Однако при стрессорных воздействиях возникают репродуктивные расстройства центрального генеза - центральная форма СПКЯ, которая, как правило, должна сопровождаться проявлениями атрофии или дисплазии эндометрия (Серов В.Н., Прилепская В.Н., Овсянникова Т.В. Гинекологическая эндокринология. - М.: МЕДпрессинформ, 2004. - С.149), а не гиперплазии, проявлением которой в данном способе является пролонгированный эструс.

Наиболее близким техническим решением, выбранным нами в качестве прототипа, является способ моделирования ПКЯ у крыс при парентеральном введении эстрогенного препарата - 17β-эстрадиола валерата (ЭВ), предлагаемый Stener-Victorin E. et al. (Elisabet Stener-Victorin, Thomas Lundeberg, Urban Waldenström, Luigi Manni, Luigi Aloe, Stefan Gunnarsson, Per Olof Janson. Effects of Electro-Acupuncture on Nerve Growth Factor and Ovarian Morphology in Rats with Experimentally Induced Polycystic Ovaries. © 2000 by the Society for the Study of Reproduction, Inc. ISSN: 0006-3363. http://www.biolreprod.org). ПКЯ вызывали у взрослых половозрелых крыс весом 190-210 г и регулярным 4-дневным эстральным циклом. Крысы жили при температуре 22°С по 4 в клетке со свободным доступом к питью и еде. Все крысы получали одну внутримышечную инъекцию ЭВ в масле (2 мг; 4 мг). ПКЯ формировался на 30 день при 4 мг и 60 день при 2 мг ЭВ. Недостатком данного метода является, то, что крысы при данном моделировании были половозрелыми, с наличием регулярного 4-дневного эстрального цикла, крупного веса, что не позволяет изучить механизм развития СПКЯ, так данная патология чаще всего манифестирует с менархе или в препубертате. Применение ЭВ в половозрелом возрасте может привести к развитию ПКЯ, однако в периоде полового созревания животных, когда отмечается отсутствие регулярного эструса, не может вызвать развитие ПКЯ, учитывая, что ЭВ - эстрогенный препарат, который активизирует рост и регенерацию эндометрия в условиях регулярного цикла (Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России: Справочник. - М.: АстраФармСервис, 2001 г. - С.З-128).

Целью настоящего изобретения является создание модели ПКЯ, что послужит основанием для более подробного изучения механизмов формирования СПКЯ с периода полового созревания и дальнейшей разработки лечебных и профилактических мероприятий по предотвращению данной патологии яичников на ранней стадии развития заболевания.

Эта цель достигается путем воздействия на экспериментальных животных - крыс линии Vistar эстрогенным препаратом «Эстрожель» (Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России: Справочник. - М.: АстраФармСервис, 2001 г. - С.Б - 721) в сочетании с применением стрессорного фактора. Для моделирования отбирают неполовозрелых самок крыс линии Vistar в возрасте 30 дней, с массой 30-35 г и отсутствием регулярных эстральных 4-дневных циклов. 2,5 г препарата «Эстрожель», содержащего 1,5 мг 17β-эстрадиола, наносят однократно с помощью пластмассового дозатора на предварительно очищенную от шерстного покрова кожу передней брюшной стенки крысы. Затем фиксируют животное до полного впитывания препарата в течение 10-15 минут. Далее - ежедневно на 15 минут в течение 1 месяца обездвиживают животное, путем пеленания в марлевую ткань.

Способ моделирования ПКЯ осуществляется следующим образом.

Неполовозрелым самкам крыс линии Vistar 30 дневного возраста, без наличия эстральных 4-дневных циклов, весом 30-35 мг, после предварительного сбривания шерсти безопасным бритвенным станком, на кожу брюшной стенки с помощью пластмассового дозатора наносится 2,5 г препарата «Эстрожель» (Oestrogel, Laboratoires BESING INTERNATIONAL), содержащего в своей основе 1,5 мг 17β-эстрадиола, затем фиксируют животное до полного впитывания препарата в течение 10-15 минут. Далее, в течение 1 месяца ежедневно проводится 15-минутное обездвиживание животного в завернутом состоянии - пеленание в марлевую ткань при положении крысы на спине. Затем, в течение 30 дней исследуется кольпоцитологическая картина влагалищных мазков для определения формирования ановуляции - анэструса по содержанию форменных элементов отделяемого влагалища. При достижении данными животными половой зрелости (120 дней), изучаются морфологические структуры в яичниках и эндометрии (гистологический анализ ткани яичников, эндометрия).

Данный способ позволяет более эффективно моделировать ПКЯ, так как учитывается характерное время манифестации СПКЯ (период полового созревания), мультифакторность данной патологии и воздействие препарата, содержащего 17β-эстрадиол. Эстрадиол - фолликулярный гормон, необходимый для развития женского организма, а в повышенной дозировке, вызывающий гиперплазию эндометрия (Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России: Справочник. - М.: АстраФармСервис, 2001 г. - С.З-127; Регистр лекарственных средств России. РЛС-энциклопедия лекарств. - 11-й выпуск / Гл. ред. Г.Л.Вышковский. - М.: РЛС - 2004. - С.1040-1041).

По биосинтезу и свойствам гонадотропинов и половых гормонов эстральный цикл крысы может служить экспериментальной моделью овариального цикла женщины и базой для исследования механизмов возникновения нарушений функций яичников нейроэндокринной этиологии, сопровождающихся ановуляцией (Серов В.Н., Кожин А.А., Прилепская В.П. Клинико-физиологические основы гинекологической эндокринологии. - Ростов н/Д: Изд-во «Эверест», 1998 г. - С.94). Механизм формирования ПКЯ при данном моделировании может быть представлен следующим образом. При трансдермальном введении 17β-эстрадиола самкам крыс раннего возраста, без эстральных 4-дневных циклов, по принципу положительной обратной связи происходит увеличение выработки фолликулостимулирующего гормона гипофиза (ФСГ), что стимулирует рост и развитие фолликулов до преовуляторной стадии, затем высокий уровень эстрогенизации по принципу отрицательной обратной связи вызывает падение уровня ФСГ и увеличение уровня лютеинизирующего гормона гипофиза (ЛГ). По данным авторов (Серов В.Н., Прилепская В.Н., Овсянникова Т.В. Гинекологическая эндокринология. - М.: МЕДпрессинформ, 2004. - С.140-141), с повышением уровня ЛГ связана гиперпродукция в тека-ткани андрогенных стероидов. Повышенный уровень андрогенов вызывает атрезию фолликулов, что приводит к постепенной элиминации эстроген- и прогестерон-синтезирующих гранулезных клеток, которые замещаются андроген-продуцирующей тканью (тека-клетки, строма). Развитие данного «порочного круга» в подростковом возрасте замыкается формированием ПКЯ. Ановуляторное состояние, у крыс - анэструс, на фоне атрезии предоминантного фолликула вызывает негативные пролиферативные изменения в эндометрии матки крыс (фаза длительного проэструса). Применение стрессорного фактора - ежедневное обездвиживание, позволяет моделировать ПКЯ в условиях приближенных к реальным, так как в настоящее время девочки-подростки довольно часто испытывают на себе психоэмоциональные и физические перегрузки, являющиеся дополнительным стрессорным фактором, способствующим развитию СПКЯ (В.Ф.Коколина. Детская гинекология: Руководство для врачей. - М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2001. - С.229-230).

В эксперименте, который проводился на кафедре патологической физиологии ГОУ ВПО РостГМУ, было использовано 20 самок крыс линии Vistar в возрасте 30 дней, массой 30-35 г и с отсутствием регулярных эстральных 4-дневных циклов. Крысы были помещены в одинаковые условия - по 5 в клетке со свободным доступом к пище и воде во время всего периода эксперимента. Основную группу для моделирования ПКЯ составили 15 крыс, контрольную группу - 5 крыс. В основной группе для воспроизведения ПКЯ на 30 день от рождения крысы, на предварительно очищенную от шерсти безопасной бритвой кожу брюшной стенки пластмассовым дозатором наносили 2,5 г препарата «Эстрожель», содержащего 1,5 мг 17β-эстрадиола (одна доза геля) однократно, затем фиксировали животное в течение 10-15 минут до полного всасывания препарата. Начиная со следующего дня, в течение 1 месяца ежедневно проводили 15-минутное обездвиживание крысы (пеленание в марлевую ткань при положении крысы на спине). В контрольной группе никаких воздействий на крыс не было.

Начиная с двухмесячного возраста, у данных лабораторных животных ежедневно в течение 1 месяца проводили микроскопическое исследование влагалищных мазков с определением наличия определенных фаз эстрального цикла (по содержанию лейкоцитов, слизи, зернистых эпителиальных клеток или чешуек). По данным литературы (Серая крыса: Систематика, экология, регуляция численности // Под ред. В.Е.Соколова, Е.В.Карасевой. - М.: Наука, 1990. - С.184-189), половой цикл взрослой самки белой крысы периодически возобновляется примерно каждые 5 суток и состоит из четырех стадий, которые могут различаться по вагинальным мазкам.

1. Диэструс (стадия покоя) продолжается 57 ч и характеризуется содержанием во влагалище слизи с лейкоцитами и незначительным количеством зернистых эпителиальных клеток.

2. Проэструс (переходная к течке стадия) продолжается около 12 ч, во влагалищных мазках имеется множество зернистых эпителиальных клеток, лейкоцитов, слизи нет.

3. Эструс (стадия течки), длящаяся около 27 ч, характеризующаяся содержанием во влагалище безъядерных ороговевших клеток, имеющих вид чешуек. Лейкоциты и эпителиальные клетки с ядрами в препарате отсутствуют.

4. Метаэструс (стадия восстановления) продолжается около 6 ч. В мазке отмечается исчезновение чешуек и появление зернистых клеток и лейкоцитов.

Крысы относятся к полиэстральным видам с множественной беременностью, причем у лабораторных крыс эструс наблюдается регулярно в течение всего года. Сезонные циклы не имеют большого значения в регуляции размножения лабораторных крыс.

По результатам кольпоцитологического исследования в основной группе у всех 15 (100%) животных было обнаружено отсутствие циклических изменений в цитологической картине влагалищных мазков, взятых у этих животных, что свидетельствовало об анэструсе. Полученные влагалищные мазки характеризовались отсутствием лейкоцитов и слизи и наличием исключительно эпителиальных клеток, имеющих крупное ядро, что соответствовало фазе проэструс. Данные изменения свидетельствовали о развитии стойкой ановуляторной дисфункции (основной признак развития ПКЯ), развивающейся у всех животных при данном способе моделирования.

В контрольной группе по данным кольпоцитологической картины вагинальных мазков у всех 5 крыс, начиная с 87-95 дня после рождения отмечался эстральный цикл, который возобновлялся примерно каждые 5 суток и состоял из четырех стадий - диэструса, проэструса, эструса и метэструса, о чем свидетельствовали показатели форменных элементов влагалищного мазка.

По данным литературы (Серая крыса: Систематика, экология, регуляция численности // Под ред. В.Е.Соколова, Е.В.Карасевой. - М.: Наука, 1990. - С.188-189), половая зрелость определяется возрастом крысы 120 дней и достижением веса 115 г. По достижению крысами половой зрелости (вес более 115 г и возраст 120 дней) проводили забой. Перед забоем все животные были анестезированы путем внутрибрюшинного введения нембутала и декапитированы. Применявшиеся в данном эксперименте методы обезболивания и умерщвления животных строго соответствовали принципам Хельсинкской декларации о гуманном отношении к животным.

Осуществлялся забор ткани яичников, матки. Яичники были очищены от жировой клетчатки и помещены в 4% р-р формальдегида. Затем были сделаны гистологические препараты с окраской гематоксилин-эозином. Описание препаратов проводили в Ростовском патологоанатомическом бюро.

На фиг.1 представлена микрофотография гистологического препарата яичника крысы из контрольной группы (1 - полностью сформированное желтое тело; 2 - предоминантный фолликул).

На фиг.2 представлена микрофотография гистологического препарата яичника крысы из основной группы (3 - зрелый фолликул с явлениями атрезии; 4 - деструктуризация мембраны фолликула и фрагменты клеточной оболочки в полости фолликула; 5 - пикнотические ядра в фолликулярном эпителии).

На фиг.3 представлена микрофотография гистологического препарата яичника крысы из основной группы (6 - лизис яйцеклетки; 7-гипертрофия соединительно-тканных прослоек).

В результате проведенного исследования в контрольной группе у 5 крыс яичники не были увеличены, на разрезе большую часть яичника занимали полностью сформированные желтые тела и фолликулы различной стадии зрелости (фиг.1, позиция 1, позиция 2).

В основной группе выявлены характерные морфологические изменения в яичниках у всех 15 крыс. Макроскопически яичники были увеличены в размерах, бугристые, на разрезе различимы мелкие гладкостенные кисты. При гистологическом исследовании определялись множественные зрелые фолликулы с явлениями атрезии (фиг.2, позиция 3). Отмечалось: деструктуризация мембраны фолликула и появление фрагментов клеточной оболочки в полости фолликула (фиг.2, позиция 4), появление пикнотических ядер в фолликулярном эпителии (фиг.2, позиция 5), лизис яйцеклетки (фиг.3, позиция 6). Вокруг атретичных фолликулов имелась гипертрофия соединительно-тканных прослоек (фиг.3, позиция 7), резко выраженная пролиферация и гиперплазия тека-лютеиновых клеток. Желтых тел в яичнике (основной признак овуляции) не обнаружено ни у одного животного основной группы. Эндометрий соответствует фолликулиновой фазе (проэструс) - функциональный слой утолщен, эпителий цилиндрический. Данные морфологические изменения свидетельствовали об отсутствии овуляции яйцеклетки (анэструс) и развитии поликистоза яичников у всех 15 экспериментальных животных основной группы.

Практическое применение способа иллюстрируется следующим примером.

Пример: после предварительного сбривания шерстного покрова безопасным бритвенным станком, на кожу брюшной стенки самки крысы в возрасте 30 дней, весом 31,7 г, с помощью пластмассового дозатора нанесли 2,5 г препарата «Эстрожель». Фиксировали животное до полного впитывания геля в течение 10-15 минут. Начиная со следующего дня, в течение 1 месяца ежедневно проводили 15-минутное обездвиживание в завернутом положении - пеленание в марлевую ткань при положении крысы на спине. С возраста 60 дней ежедневно в течение 1 месяца проводили динамическое микроскопическое исследование влагалищных мазков, при этом обнаружено отсутствие циклических изменений в цитологической картине влагалищных мазков (анэструс). Препараты характеризовались наличием множества зернистых эпителиальных клеток, имеющих крупное ядро, что соответствовало фазе проэструс. Лейкоцитов и слизи не было.

В возрасте 120 дней, при весе крысы 117, 8 г, после предварительной анестезии путем внутрибрюшинного введение нембутала, животное декапитировано. Был проведен забор ткани яичников, матки. Яичники были очищены от жировой клетчатки и помещены в 4% р-р формальдегида. Объективно: яичники увеличены в размерах, бугристые, на разрезе большую часть яичника занимали мелкие гладкостенные кисты. Затем были сделаны гистологические препараты с окраской гематоксилин-эозином. При гистологическом исследовании препаратов яичников были видны множественные зрелые фолликулы с явлениями атрезии, в фолликулярном эпителии отмечалось появление пикнотических ядер, а вокруг атретичных фолликулов - развитие соединительно-тканных прослоек. При гистологическом исследовании препаратов матки - эндометрий соответствовал фолликулиновой фазе (проэструс) - функциональный слой был утолщен, эпителий цилиндрический.

Таким образом, однократное нанесение 2,5 г препарата «Эстрожель», содержащего в своей основе 1,5 мг 17β-эстрадиола, на предварительно очищенную безопасной бритвой от шерсти кожу брюшной стенки самкам крыс линии Vistar в возрасте 30 дней в сочетании с применением стрессорного фактора в течение 1 месяца ежедневно (15-минутное обездвиживание в завернутом положении) через 30-60 дней после воздействия вызывало у всех 15 (100%) крыс основной группы ановуляторное состояние, которое характеризовалось отсутствием физиологического эстрального цикла (ановуляция), наличием стойкого проэструса (о чем свидетельствовала проводимая в ходе эксперимента кольпоцитологическая картина вагинальных мазков), а в половозрелом возрасте (120 дней) - гистологически подтвержденным поликистозом яичников на фоне атрезии преовуляторного фолликула и гиперпластических изменений в эндометрии. Предлагаемый способ по сравнению с прототипом обеспечивает моделирование ПКЯ у неполовозрелых крыс, что соответствует формированию СПКЯ в периоде полового созревания у девочек-подростков.

Способ моделирования поликистозных яичников, предусматривающий воздействие на экспериментальных животных - крыс линии Vistar эстрогенным препаратом, отличающийся тем, что для моделирования отбирают неполовозрелых самок крыс в возрасте 30 дней, с массой 30-35 г и отсутствием регулярных эстральных 4-х дневных циклов, в качестве эстрогенного препарата применяют «Эстрожель», 2,5 г которого однократно наносят пластмассовым дозатором на предварительно очищенную от шерстного покрова кожу брюшной стенки крысы, затем фиксируют животное в течение 10-15 мин до полного всасывания препарата, далее - ежедневно на 15 мин в течение 1 месяца обездвиживают животное.