Способ стабилизации бляшки с высоким содержанием липидов и способ профилактики ее разрушения

Данная группа изобретений относится к медицине, в частности к кардиологии, и касается стабилизации атеросклеротических бляшек. Для этого вводят эффективное количество 2-[4-[2-(бензимидазол-2-илтио)этил]пиперазин-1-ил]-N-[2,4-бис(метилтио)-6-метил-3-пиридил]ацетамида, или фармацевтическую композицию, содержащую в качестве действующего начала эффективное количество этого соединения. Это обеспечивает эффективную профилактику разрушения бляшек, т.е. их стабилизацию, за счет уменьшения количества макрофагов и увеличения коллагеновых волокон в атеросклеротических бляшках. 12 н.п. ф-лы, 7 ил.

 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к способу стабилизации бляшек с высоким содержанием липидов при атеросклеротических повреждениях и к способу профилактики их разрушения. Более конкретно, настоящее изобретение относится к способу стабилизации бляшек с высоким содержанием липидов и к способу профилактики их разрушения посредством подавления накопления макрофагов и повышения содержания коллагена в бляшечных поражениях путем введения эффективного количества 2-[4-[2-(бензимидазол-2-илтио)этил]пиперазин-1-ил]-N-[2,4-бис(метилтио)-6-метил-3-пиридил]ацетамида, его кислой соли или гидрата.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

В последнее время увеличивается количество артериосклеротических заболеваний как следствие изменений образа жизни в результате улучшения материального благосостояния, таких как потребление высококалорийной пищи и пищи с высоким содержанием холестерина, снижение физической активности, ожирение, стресс, вызываемый социальными сложностями, стареющее общество и т.п. Факторы риска артериосклеротических заболеваний можно классифицировать на курение, ожирение, гипертензию, гиперурикемию, сахарный диабет, гиперлипидемию и т.п. Среди них все возрастающее внимание привлекает гиперлипидемия, такая как гипертриглицеридемия, пониженное содержание HDL ((HDL): липопротеины высокой плотности) и повышенное содержание LDL ((LDL): липопротеины низкой плотности), и особенно понижающийся уровень при гиперхолестеринемии выделяют как цель медикаментозного лечения, и были разработаны различные лекарственные средства. В частности, можно упомянуть лекарственное средство (статиновое лекарственное средство), которое может обеспечивать достоверные результаты при лечении гиперхолестеринемии, представляет собой лекарственное средство, ингибирующее HMG-CoA (HMG-CoA: 3-гидрокси-3-метилглутарил-кофермент А) редуктазу, фермент, ограничивающий скорость синтеза холестерина. Лечение, понижающее холестерин, с использованием статина показывает успешные результаты, особенно в случае различных артериосклеротических заболеваний, например инфаркта миокарда и церебрального инфаркта, вызванных гиперлипидемией. Что касается заболеваний коронарных артерий, включая острый инфаркт миокарда, сообщалось о результатах многоцентровых эпидемиологических исследований, таких как 4S (Scandinavian Simvastatin Survival Study) и WOS (COPS) (West of Scotland Coronary Prevention Study), и была доказана эффективность лечения симвастатином в отношении улучшения коэффициента выживаемости в течение пяти лет. Однако даже если говорится о том, что статиновое лекарственное средство, представленное симвастатином (патентная ссылка 1) и правастатином (патентная ссылка 2), является эффективным, степень улучшения для скорости кризиса события коронарного заболевания составляет приблизительно не более 30%, а это не является удовлетворительным условием в области медицины. Что касается механизма лекарственной эффективности статинов, известно, что в результате ингибирования биосинтеза холестерина in vivo и одновременной повышенной экспрессии рецепторов LDL, сопровождающейся понижением уровня холестерина в печени, увеличенное количество рецепторов LDL способствует инкорпорации LDL крови и вызывает понижение уровня общего холестерина в плазме. В результате существует проблема, которая заключается в том, что полного снижения LDL холестерина нельзя ожидать у гомозиготных и гетерозиготных пациентов с дефицитом рецептора LDL, таких как пациентов с наследственной гиперхолестеринемией. Известно, что комбинированное медикаментозное лечение фибратом и статином пациента с гипертриглицеридемией вызывает рабдомиолиз, а в случае церивастатина (патентная ссылка 3) - тяжелый побочный эффект, вызванный указанным лекарственным средством, привел к прекращению продаж. С учетом вышесказанного, лекарственные средства, которые не демонстрируют антиартериосклеротического действия в сочетании с понижением уровня общего холестерина в плазме, но демонстрируют прямое действие на артериосклеротическое повреждение, являются привлекательными и ожидаемыми.

Бляшки, которые являются первичным очагом атеросклероза, состоят из липидной сердцевины, наполненной холестерином и его сложным эфиром и фиброзным материалом, называемым внеклеточным матриксом. Из них бляшки с высоким содержанием липидов, которые состоят главным образом из липида и клеток воспаления, таких как макрофаг, и покрыты тонкой фиброзной мембраной, называют «нестабильными бляшками». Они легко разрушаются, а когда бляшки разрушаются, их содержимое подвергается воздействию кровотока, что способствует тромбообразованию. В результате будет наблюдаться острый коронарный синдром (ACS), такой как нестабильная стенокардия, острый инфаркт миокарда и внезапная ишемическая смерть (непатентная ссылка 1). Действительно, известно, в результате исследования повреждения, послужившего причиной в случаях смерти, вызванной ACS, что около 75% случаев происходило в результате тромбообразования, сопровождавшегося разрушением бляшек (непатентная ссылка 2). При концентрации внимания на степени стеноза кровеносного сосуда, т.е. на размере бляшки, было установлено, что повреждение, послужившее причиной инфаркта миокарда, являлось преимущественно участком кровеносного сосуда со степенью стеноза менее 50% (непатентная ссылка 2). Данный факт наводит на мысль о том, что причиной разрушения бляшек является не размер бляшки, а ее качество.

Участие металлопротеиназы матрикса (ММР), секретируемой большим количеством скопившихся макрофагов, считают непосредственной причиной разрушения бляшек, и ММР может расщеплять фиброзный коллаген до тонкой и ослабленной фиброзной пленки. Кроме того, сообщается, что макрофаг стимулирует тромбообразование на поврежденном участке посредством экспрессии тканевого фактора (непатентная ссылка 3).

Таким образом, предотвращение разрушения «нестабильных бляшек» может быть важным для противодействия ACS. Для осуществления указанной цели можно рассматривать способы, включающие ингибирование функции или аккумуляции макрофагов, или ингибирование расщепления фиброзного коллагена или укрепление фиброзной мембраны путем увеличения содержания коллагена. В заключение, для профилактики и лечения острого коронарного синдрома, хотя регрессия бляшек, которую вызывает уменьшение уровня общего холестерина в плазме, может быть эффективной, вместо этого, лекарственные средства для ингибирования аккумуляции макрофагов и увеличения содержания коллагена, в результате стабилизирующие бляшки с высоким содержанием липидов, могут быть более предпочтительными.

С учетом указанных ситуаций ингибитор ацил-СоА: холестерин-О-ацилтрансферазы (АСАТ) обращает на себя внимание как понижающее содержание холестерина лекарственное средство, обладающее отличным от статина механизмом действия.

Несмотря на то что существует множество сообщений, указывающих на регрессию бляшек при использовании ингибитора АСАТ, значительное уменьшение уровня общего холестерина в плазме сопутствует всем случаям. Таким образом, неизвестно, может ли достигаться непосредственная регрессия бляшек или нет, и в результате могут быть разногласия в интерпретации данных (непатентные ссылки 4 и 5).

Однако в последнее время появились сообщения о нескольких ингибиторах АСАТ, которые демонстрируют эффект регрессии бляшек, не влияя на уровень общего холестерина в плазме. Например, в JP-A-2002-255808 (патентная ссылка 4) описан ингибитор АСАТ как агент, вызывающий регрессию бляшек. В WO 01/034127 (патентная ссылка 5) описан ингибитор АСАТ, который вызывает уменьшение аккумуляции макрофагов и экспрессии ММР в бляшках. Однако хотя в указанных сообщениях указана активность в отношении уменьшения бляшек, в них не упоминается увеличение или уменьшение содержания коллагена, одного из важных факторов, который вносит свой вклад в стабильность бляшек (непатентная ссылка 6). Хотя соединение (авазимиб, далее обозначается как CI-1011), изучавшееся в указанном документе, демонстрирует активность в отношении регрессии бляшек, не указана такая активность, как повышение содержания коллагена и стабильности.

Как следует из сказанного выше, ингибитор АСАТ, который отличается от обычных ингибиторов АСАТ, независимо уменьшает степень оккупации бляшек макрофагами, не влияя на уровень общего холестерина в плазме, и обладает действием, повышающим степень оккупации коллагеном, а также предотвращает разрушение бляшек, не приводя к диффузии макрофагов, даже если они разрушаются. Подобное ингибирование АСАТ до настоящего времени не известно.

Патентная ссылка 1:	Патент США № 4 444 784.
Патентная ссылка 2:	Патент США № 4 346 227.
Патентная ссылка 3:	Патент США № 5 177 080.
Патентная ссылка 4:	Патент JP-A-2002-255808.
Патентная ссылка 5:	WO 01-034127.
Непатентная ссылка 1:	N. Engl. J. 326(4): 242-50, 1992.
Непатентная ссылка 2:	Circulation 92(3): 657-71, 1995.
Непатентная ссылка 3:	Ann. N. Y. Acad. Sci. 902: 140-52, 2000.
Непатентная ссылка 4:	Exp. Opin. Invest. Drugs 4: 353-387, 1995.
Непатентная ссылка 5:	Drug Discovery Today 3: 19-25, 1998.
Непатентная ссылка 6:	Circ. Res. 86: 101-8, 2000.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ПРОБЛЕМА, КОТОРУЮ ДОЛЖНО РЕШИТЬ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Принимая во внимание все сказанное выше, авторы изобретения после всестороннего изучения установили, что 2-[4-[2-(бензимидазол-2-илтио)этил]пиперазин-1-ил]-N-[2,4-бис(метилтио)-6-метил-3-пиридил]ацетамид (далее упоминается как соединение 1), его кислая соль или гидрат, описанные в примере 32 WO 98/054153, могут уменьшать степень оккупации бляшек макрофагами и увеличивать степень оккупации коллагеном, не вызывая значимых изменений уровня общего холестерина в плазме, что предполагает стабилизирующую активность в отношении бляшек с высоким содержанием липидов, и завершили настоящее изобретение. Ингибитор АСАТ, который обладает селективной активностью в отношении макрофага, соединение 1 и способ его получения описаны в WO 98/054153, описание которого включено в настоящий документ в качестве ссылки. Применение описанного в указанном документе соединения представляет собой лечение гиперхолестеринемии и атеросклероза. Хотя в нем описывается ингибитор для (селективного) образования пенистых клеток макрофагов, отсутствует описание стабилизирующей активности в отношении бляшек.

СРЕДСТВА РЕШЕНИЯ ПРОБЛЕМ

Настоящее изобретение относится к способу стабилизации бляшек с высоким содержанием липидов в атеросклеротических повреждениях и к способу предотвращения их разрушения, которые отличаются тем, что пациенту, имеющему бляшки с высоким содержанием липидов, вводят эффективное количество соединения 1, его кислой соли или гидрата. Помимо этого, настоящее изобретение относится к стабилизирующему агенту для бляшек с высоким содержанием липидов и агенту для предотвращения их разрушения, включающему соединение 1, его кислую соль или гидрат в качестве активного ингредиента. Помимо этого, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, обладающей стабилизирующей активностью в отношении бляшек с высоким содержанием липидов, включающей соединение 1, его кислую соль или гидрат и фармацевтически приемлемый носитель. Также настоящее изобретение относится к применению соединения 1, его кислой соли или гидрата для изготовления стабилизирующего агента для бляшек с высоким содержанием липидов и агента для предотвращения их разрушения.

Настоящее изобретение относится к способу профилактики тромбообразования, следующего за разрушением бляшек с высоким содержанием липидов, который отличается тем, что пациенту, имеющему бляшки с высоким содержанием липидов, вводят эффективное количество соединения 1, его кислой соли или гидрата. Помимо этого, настоящее изобретение относится к агенту, обладающему активностью в отношении профилактики тромбообразования, следующего за разрушением бляшек с высоким содержанием липидов, включающему соединение 1, его кислую соль или гидрат в качестве активного ингредиента. Помимо этого, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, обладающей активностью в отношении профилактики тромбообразования, следующего за разрушением бляшек с высоким содержанием липидов, включающей соединение 1, его кислую соль или гидрат и фармацевтически приемлемый носитель. Также настоящее изобретение относится к применению соединения 1, его кислой соли или гидрата для изготовления фармацевтического препарата для профилактики тромбообразования, следующего за разрушением бляшек с высоким содержанием липидов.

Настоящее изобретение относится к способу профилактики и/или лечения острого коронарного синдрома, который отличается тем, что пациенту, имеющему бляшки с высоким содержанием липидов, вводят эффективное количество соединения 1, его кислой соли или гидрата. Помимо этого, настоящее изобретение относится к агенту для профилактики и/или лечения острого коронарного синдрома, включающему соединение 1, его кислую соль или гидрат в качестве активного ингредиента. Помимо этого, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, обладающей активностью в отношении профилактики и/или лечения острого коронарного синдрома, включающей соединение 1, его кислую соль или гидрат и фармацевтически приемлемый носитель. Также настоящее изобретение относится к применению соединения 1, его кислой соли или гидрата для изготовления фармацевтического препарата для профилактики и/или лечения острого коронарного синдрома.

Настоящее изобретение относится к способу профилактики и/или лечения острого инфаркта миокарда, который отличается тем, что пациенту, имеющему бляшки с высоким содержанием липидов, вводят эффективное количество соединения 1, его кислой соли или гидрата. Помимо этого, настоящее изобретение относится к агенту для профилактики и/или лечения острого инфаркта миокарда, включающему соединение 1, его кислую соль или гидрат в качестве активного ингредиента. Помимо этого, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, обладающей активностью в отношении профилактики и/или лечения острого инфаркта миокарда, включающей соединение 1, его кислую соль или гидрат и фармацевтически приемлемый носитель. Также настоящее изобретение относится к применению соединения 1, его кислой соли или гидрата для изготовления фармацевтического препарата для профилактики и/или лечения острого инфаркта миокарда.

Настоящее изобретение относится к способу профилактики и/или лечения нестабильной стенокардии, который отличается тем, что пациенту, имеющему бляшки с высоким содержанием липидов, вводят эффективное количество соединения 1, его кислой соли или гидрата. Помимо этого, настоящее изобретение относится к агенту для профилактики и/или лечения нестабильной стенокардии, включающему соединение 1, его кислую соль или гидрат в качестве активного ингредиента. Помимо этого, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, обладающей активностью в отношении профилактики и/или лечения нестабильной стенокардии, включающей соединение 1, его кислую соль или гидрат и фармацевтически приемлемый носитель. Также настоящее изобретение относится к применению соединения 1, его кислой соли или гидрата для изготовления фармацевтического препарата для профилактики и/или лечения нестабильной стенокардии.

Настоящее изобретение относится к способу профилактики и/или лечения обструкции периферических артерий, который отличается тем, что пациенту, имеющему бляшки с высоким содержанием липидов, вводят эффективное количество соединения 1, его кислой соли или гидрата. Помимо этого, настоящее изобретение относится к агенту для профилактики и/или лечения обструкции периферических артерий, включающему соединение 1, его кислую соль или гидрат в качестве активного ингредиента. Помимо этого, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, обладающей активностью в отношении профилактики и/или лечения обструкции периферических артерий, включающей соединение 1, его кислую соль или гидрат и фармацевтически приемлемый носитель. Также настоящее изобретение относится к применению соединения 1, его кислой соли или гидрата для изготовления фармацевтического препарата для профилактики и/или лечения обструкции периферических артерий.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

На Фиг.1 показан уровень общего холестерина в плазме, когда соединение 1 (100 мг/кг), CI-1011 (100 мг/кг) или носитель вводили перорально, дважды в день, в течение 12 недель самцам мышей с нокаутом АроЕ.

На Фиг.2 показана площадь поперечного сечения бляшек, измеренная окрашиванием краской Victoria blue-HE (НЕ: гематоксилин-эозин) образцов удаленного хирургическим путем синуса аорты, после перорального введения соединения 1 (100 мг/кг), CI-1011 (100 мг/кг) или носителя, дважды в день, в течение 12 недель самцам мышей с нокаутом АроЕ.

На Фиг.3 показаны фотографии результатов окрашивания краской Azan образцов удаленного хирургическим путем синуса аорты после перорального введения соединения 1 (100 мг/кг), CI-1011 (100 мг/кг) или носителя, дважды в день, в течение 12 недель самцам мышей с нокаутом АроЕ.

На Фиг.4 показаны фотографии результатов иммунохимического окрашивания макрофагов в образцах удаленного хирургическим путем синуса аорты, после перорального введения соединения 1 (100 мг/кг), CI-1011 (100 мг/кг) или носителя, дважды в день, в течение 12 недель самцам мышей с нокаутом АроЕ.

На Фиг.5 показаны фотографии результатов окрашивания краской Sirius Red образцов удаленного хирургическим путем синуса аорты после перорального введения соединения 1 (100 мг/кг), CI-1011 (100 мг/кг) или носителя, дважды в день, в течение 12 недель самцам мышей с нокаутом АроЕ.

На Фиг.6 показана степень оккупации макрофагами, полученная путем анализа изображения иммунохимического окрашивания макрофагов в образцах удаленного хирургическим путем синуса аорты, после перорального введения соединения 1 (100 мг/кг), CI-1011 (100 мг/кг) или носителя, дважды в день, в течение 12 недель самцам мышей с нокаутом АроЕ.

На Фиг.7 показана степень оккупации коллагеном, полученная путем анализа изображения окрашивания макрофагов краской Sirius Red в образцах удаленного хирургическим путем синуса аорты, после перорального введения соединения 1 (100 мг/кг), CI-1011 (100 мг/кг) или носителя, дважды в день, в течение 12 недель самцам мышей с нокаутом АроЕ.

НАИЛУЧШИЙ СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

Авторы настоящего изобретения изучили влияние введения ингибитора АСАТ на уровень общего холестерина в плазме и повреждение сосудов с использованием мышей с нокаутом АроЕ.

В исследовании, в котором изучали влияние на уровень общего холестерина в плазме, соединение 1 (100 мг/кг), CI-1011 (100 мг/кг) или носитель вводили перорально, дважды в день, в течение 12 недель самцам мышей с нокаутом АроЕ и измеряли уровень общего холестерина в плазме. Результаты показаны на фиг.1. На оси ординат на фиг.1 показан уровень общего холестерина в плазме (мг/дл). Как показано на фиг.1, достоверно пониженные уровни общего холестерина в плазме были показаны для всех групп, получавших соединение 1 и CI-1011, по сравнению с контрольной группой. Было установлено, что степень уменьшения величины была малой в случае соединения 1, но значительной в случае CI-1011.

Параллельно с оценкой липидов плазмы хирургическим путем удаляли синус аорты и заливали в парафин, затем изготавливали серийные срезы, окрашивали краской Victoria blue-гематоксилин-эозин, окрашивали краской Azan, производили иммунохимическое окрашивание макрофагов (анти-CD11b антитело) и окрашивали краской Sirius Red.

С использованием образцов, окрашенных краской Victoria blue-гематоксилин-эозин, изучали под оптическим микроскопом внутренний эластический слой. Площадь поперечного сечения бляшек в образцах показана на фиг.2. На оси ординат на фиг.2 показана площадь поперечного сечения бляшек (мм²). Как показано на фиг.2, площадь почти не изменялась в группе, получавшей соединение 1, но площадь поперечного сечения бляшек достоверно уменьшалась в группе, получавшей CI-1011, по сравнению с контрольной группой.

Результаты окрашивания с использованием краски Azan показаны на фиг.3. Как показано на фиг.3, в контрольной группе внутренняя мембрана со стороны поверхностного слоя состояла главным образом из окрашенных в светло-красный цвет пенистых макрофагов, а окрашенный в голубой цвет внеклеточный матрикс в небольшом количестве наблюдался в глубоком слое. В бляшке наблюдалось большое количество белых дефектных игловидных участков, названных холестериновым транспортом. Напротив, несмотря на то, что площадь поперечного сечения бляшки в группе, получавшей соединение 1, не так сильно отличалась от контрольной группы, бляшка состояла из малой площади клеточных компонентов и больших количеств окружающего внеклеточного матрикса. В группе, получавшей CI-1011, несмотря на то, что площадь поперечного сечения бляшки была несколько меньше по сравнению с контрольной группой, бляшка состояла из наиболее интенсивно окрашенных в красный цвет макрофагов и скудного количества окрашенного в голубой цвет внеклеточного матрикса.

Результаты иммунохимического окрашивания макрофагов показаны на фиг.4. Как показано на фиг.4, несмотря на то, что макрофаги наблюдались в изобилии, особенно со стороны поверхностного слоя бляшки в контрольной группе, макрофаги изредка встречались в группе, получавшей соединение 1. Напротив, макрофаги наблюдались в изобилии во всей бляшке в группе, получавшей CI-1011.

Результаты окрашивания с использованием краски Sirius Red показаны на фиг.5. Как показано на фиг.5, компактно расположенные коллагеновые волокна встречались в бляшке повсюду в группе, получавшей соединение 1, по сравнению с контрольной группой. Однако в группе, получавшей CI-1011, было меньше коллагеновых волокон по сравнению с контрольной группой.

Результаты по степени оккупации бляшек макрофагами, рассчитанные с помощью анализа изображения на фиг.4, показаны на фиг.6. На оси ординат на фиг.6 показана степень оккупации (%) бляшек макрофагами. Как показано на фиг.6, степень оккупации макрофагами была достоверно уменьшена в группе, получавшей соединение 1, по сравнению с контрольной группой. Достоверное увеличение наблюдалось в группе, получавшей CI-1011.

Результаты по степени оккупации бляшек коллагеном, рассчитанные с помощью анализа изображения на фиг.5, показаны на фиг.7. На оси ординат на фиг.7 показана степень оккупации (%) бляшек коллагеном. Как показано на фиг. 7, степень оккупации коллагеном была достоверно увеличена в группе, получавшей соединение 1, по сравнению с контрольной группой. С другой стороны, наблюдалась тенденция к уменьшению в группе, получавшей CI-1011.

Как описано выше, было установлено, что соединение 1 уменьшало степень оккупации бляшек макрофагами, не оказывая значительного действия на изменения уровня общего холестерина в плазме, и увеличивало степень оккупации коллагеном. Таким образом, соединение 1 повышает уровень коллагена и одновременно уменьшает степень оккупации макрофагами, что стабилизирует бляшки, предотвращая, таким образом, их разрушение.

Таким образом, настоящее изобретение относится к способу стабилизации бляшек с высоким содержанием липидов и к способу профилактики их разрушения. Более конкретно, настоящее изобретение относится к способу стабилизации бляшек с высоким содержанием липидов и к способу профилактики их разрушения, которые отличаются тем, что эффективное количество фармацевтической композиции, содержащей активный ингредиент, состоящий из одного или более типов соединения 1, его кислой соли или гидрата, вводят пациенту, имеющему бляшки с высоким содержанием липидов. Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, обладающей активностью в отношении стабилизации бляшек с высоким содержанием липидов и предотвращения их разрушения, включающей активный ингредиент, состоящий из одного или более типов соединения 1, его кислой соли или гидрата, и фармацевтически приемлемый носитель.

Поскольку соединение 1, его кислая соль или гидрат, согласно изобретению увеличивают содержание коллагена в бляшках с высоким содержанием липидов и уменьшают степень оккупации макрофагами, оно может стабилизировать бляшки с высоким содержанием липидов и предотвращать их разрушение, предотвращая, таким образом, тромбообразование. Таким образом, настоящее изобретение относится к профилактическим агентам и/или терапевтическим агентам для лечения различных заболеваний, связанных с тромбами, таких как тромбоз, вызванный тромбообразованием, острый коронарный синдром, острый инфаркт миокарда, нестабильная стенокардия и обструкция периферических артерий, к содержащей их фармацевтической композиции, к способу профилактики и/или лечения с их использованием и к применению для их изготовления.

Фармацевтическая композиция, обладающая стабилизирующей активностью в отношении бляшек, согласно изобретению, включает соединение 1, согласно изобретению, в качестве активного ингредиента, объединенное с фармацевтически приемлемым носителем в композицию, подходящую для такой формы введения, как пероральная форма или парентеральная форма, например для пероральной формы введения инъекционной формы, суппозитория, мази или пластыря, и может быть изготовлена с использованием способа изготовления, известного специалисту. Также в настоящем изобретении можно использовать кислую соль соединения 1, или гидрат соединения 1, или кислую соль соединения 1. Кислую соль или гидрат можно получить обычным способом. Примерами кислоты для образования кислой соли, согласно изобретению, являются неорганические кислоты, такие как хлористоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота, бромистоводородная кислота и иодистоводородная кислота, и органические кислоты, такие как уксусная кислота, молочная кислота, янтарная кислота, винная кислота, яблочная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, лимонная кислота, аскорбиновая кислота, метансульфоновая кислота, бесилат и толуолсульфоновая кислота. Можно использовать соединение 1, его кислую соль или гидрат в отдельности или в качестве активного ингредиента, но также можно использовать в смеси из двух или более видов в качестве активного ингредиента.

При изготовлении твердого препарата для перорального введения, например таблетки, таблетки в оболочке, гранулы, порошки и капсулы можно изготавливать обычным способом после добавления к соединению 1, его кислой соли или гидрату разбавителя, если необходимо, связующего агента, разрыхлителя, смазывающего агента, красителя, отдушки и корригента. Примерами указанных добавок могут быть обычно использующиеся в данной области материалы. Например, разбавитель включает лактозу, белый мягкий сахар, хлорид натрия, глюкозу, крахмал, карбонат кальция, каолин, кристаллическую целлюлозу, кремниевую кислоту и т.п.; связующие агенты включают воду, этанол, пропанол, простой сироп, раствор глюкозы, суспензию крахмала, раствор желатина, карбоксиметилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилкрахмал, метилцеллюлозу, этилцеллюлозу, шеллак, фосфат кальция, поливинилпирролидон и т.п.; разрыхлители включают сухой крахмал, альгинат натрия, агаровый порошок, гидрокарбонат натрия, карбонат кальция, лаурилсульфат натрия, моноглицеридстеарат, лактозу и т.п.; смазывающие агенты включают очищенный тальк, стеарат, борат натрия, полиэтиленгликоль и т.п.; и корригенты, такие как белый мягкий сахар, апельсиновая горькая цедра, лимонная кислота, винная кислота и т.п.

В случае изготовления жидкостей и растворов для перорального введения, например жидкий препарат для перорального введения, сироп, эликсир и т.п., можно изготавливать обычным способом добавлением к описанному выше соединению 1, его кислой соли или гидрату, если необходимо, отдушки, буфера, стабилизирующего агента, корригента и т.п. Примерами отдушек являются агенты, описанные выше, а примерами буферов являются цитрат натрия и т.п., и стабилизирующими агентами являются трагакант, аравийская камедь, желатин и т.п.

В случае изготовления препарата для инъекций, например препараты для подкожных инъекций, внутримышечных инъекций, внутривенных инъекций и т.п., можно изготавливать обычным способом добавлением к описанному выше соединению 1, его кислой соли или гидрату, если необходимо, агента для обеспечения необходимой величины рН, буфера, стабилизирующего агента, агента для обеспечения необходимой тоничности, местного анестетика и т.п. Примерами агента для обеспечения необходимой величины рН и буфера являются цитрат натрия, ацетат натрия, фосфат натрия и т.п. Примерами стабилизирующего агента являются пиросульфит натрия, EDTA, тиогликолевая кислота, тиомолочная кислота и т.п. Примерами местного анестетика являются прокаина гидрохлорид, лидокаина гидрохлорид и т.п. Примерами агентов для обеспечения необходимой тоничности являются хлорид натрия, глюкоза и т.п.

Другие лекарственные формы можно изготавливать согласно известным способам. Изготовленная таким образом фармацевтическая композиция, обладающая стабилизирующей активностью в отношении бляшек, согласно изобретению, является эффективной для стабилизации бляшек в атеросклеротических повреждениях, профилактики тромбообразования, которым сопровождается разрушение бляшек, профилактики и/или лечения острого коронарного синдрома, профилактики и/или лечения острого инфаркта миокарда, профилактики и/или лечения нестабильной стенокардии и профилактики и/или лечения обструкции периферических артерий.

Применяемая доза фармацевтической композиции, обладающей стабилизирующей активностью в отношении бляшек, согласно изобретению, зависит от массы тела, возраста, пола, симптомов пациента, лекарственной формы и частоты введения, и предпочтительно обычно вводят соединение 1, его кислую соль или гидрат в дозе 0,01-1000 мг в день, предпочтительно 0,1-100 мг в день, взрослому один или несколько раз в день пероральным или парентеральным путем.

Описанная патентная заявка США № 60/498 610 целиком включена в настоящий документ в качестве ссылки.

Настоящее изобретение далее будет подробно объяснено посредством примеров, но настоящее изобретение ими не ограничивается.

ПРИМЕР 1

Антиартериосклеротическое действие лекарственного средства изучали согласно способу, описанному далее в настоящем документе, с использованием мышей с нокаутом АроЕ, имеющих первичную гиперлипидемию.

(1) Тест-метод

1. Экспериментальное животное

Для экспериментов использовали самцов мышей с нокаутом АроЕ отечественного разведения (C57BL/6J-ApoE<tmlUnc>, Jackson Labo^TM), выращенных в обычных условиях, в возрасте 8 недель.

2. Испытуемое лекарственное средство и препарат испытуемого лекарственного средства, способ и длительность введения

Соединение 1 (пример 32, WO 98/54153) и контрольное лекарственное средство, CI-1011 (пример 5, WO 94/26702), синтезировали согласно способам, описанным в упомянутых публикациях. Соединение 1 и CI-1011 растворяли (соединение 1) или суспендировали (CI-1011) в водном растворе 0,5% метилцеллюлозы (МС). Раствор или суспензию изготавливали таким образом, чтобы доза составляла 100 мг/кг, а объем для введения составлял 0,1 мл/10 г массы тела. Контрольная группа (в которой лекарственное средство не вводили) получала растворитель, водный раствор 0,5% метилцеллюлозы (МС). Приготовленные раствор и суспензию лекарственного средства вводили дважды в день, перорально, на протяжении 12 недель (до возраста 20 недель) (всего 3 группы, каждая по 15 животных).

3. Способ наблюдения и проверки

А. Уровень общего холестерина в плазме

После окончания последнего введения мыши голодали. На следующее утро мышам проводили лапаротомию под наркозом пентобарбиталом натрия, обнажали абдоминальную вену и брали образец крови 1 мл. Взятую кровь центрифугировали на 3000 об/мин в течение 15 минут, чтобы получить плазму. Уровень общего холестерина в плазме оценивали с использованием Е-теста Wako на холестерин (метод холестерин-оксидазы DAOS).

В. Гистологическая оценка

После взятия крови животным проводили торакотомию и пунктировали верхушку сердца иглой для инъекций калибра 20 G. Физиологический раствор и, впоследствии, 4% параформальдегид, перфузировали из верхушки сердца при перфузионном давлении 120 см водного столба в течение 5 минут, чтобы фиксировать посредством перфузии. Сердце и грудную аорту удаляли и фиксировали в фиксаторе погружением на день или более. Затем синус аорты отсекали и заливали в парафин. Изготавливали серийные срезы и окрашивали краской Victoria blue-гематоксилин-эозин, краской Azan, производили иммунохимическое окрашивание макрофагов (анти-CD11b-антитела) и краской Sirius Red. В образцах, окрашенных краской Victoria blue-гематоксилин-эозин, изучали внутренний эластический слой с использованием оптического микроскопа и анализировали площадь поперечного сечения бляшек (Win ROOF, Mitsuya Shoji K.K.). Подобным образом определяли площадь, занимаемую макрофагами, с использованием иммунохимически окрашенных на макрофаги образцов, и рассчитывали отношение к общей площади бляшек (степень оккупации макрофагами). Затем определяли площадь, занимаемую коллагеном, с использованием окрашивания краской Sirius Red, и рассчитывали отношение площади, занимаемой коллагеном, к общей площади бляшек (степень оккупации коллагеном).

4. Статистический анализ и обработка данных

Полученные результаты показаны как среднее ± стандартная ошибка. Тест на значимость между контрольной группой и группой, получавшей лекарственное средство, осуществляли с использованием критерия Дюнетта.

(2) Результаты

А. Уровень общего холестерина в плазме

Уровень общего холестерина в плазме для каждой группы показан на фиг.1. Уровень общего холестерина в плазме для контрольной группы составлял 641,8 ± 23,0 мг/дл, в то время как уровень общего холестерина в плазме для группы, получавшей соединение 1 в дозе 100 мг/кг, составлял 535,0 ± 22,8 мг/дл, и, хотя это является достоверным (P <0,01), показан низкий понижающий эффект. Уровень общего холестерина в плазме для группы, получавшей CI-1011 в дозе 100 мг/кг, составлял 360,3 ± 19,4 мг/дл, и это было достоверным (P <0,01) и характеризовалось более выраженным понижающим эффектом по сравнению с соединением 1. В результате, испытуемые лекарственные средства демонстрировали уменьшенное действие на уровень общего холестерина в плазме, и, как было установлено, активность значительно проявлялась в группе, получавшей CI-1011 в дозе 100 мг/кг.

В. Гистологическая оценка

Площадь поперечного сечения бляшек, измеренная с использованием окрашивания краской Victoria blue-гематоксилин-эозин, для каждой группы показана на фиг.2. Площадь поперечного сечения бляшек для контрольной группы составляла 0,23 ± 0,03 мм², в то время как площадь поперечного сечения бляшек для группы, получавшей соединение 1 в дозе 100 мг/кг, составляла 0,22 ± 0,03 мм², и, таким образом, разницы не наблюдалось. Напротив, площадь поперечного сечения бляшек для группы, получавшей CI-1011 в дозе 100 мг/кг, составляла 0,09 ± 0,01 мм², таким образом, уменьшающее действие в отношении площади поперечного сечения бляшек было более выраженным, чем у соединения 1, и это было достоверным (P <0,01). В результате уменьшающее действие в отношении площади поперечного сечения бляшек, а именно уменьшающее действие в отношении бляшек, наблюдалось в группе, получавшей CI-1011 в дозе 100 мг/кг.

В результате окрашивания краской Azan, иммунохимического окрашивания макрофагов и окрашивания краской Sirius Red интима со стороны поверхностного слоя состояла главным образом из окрашенных в светло-красный цвет пенистых макрофагов, а окрашенный в голубой цвет внеклеточный матрикс наблюдался в малом количестве в глубоком слое. В бляшке наблюдалось большое количество белых дефектных игловидных участков, названных холестериновым транспортом. Напротив, несмотря на то, что площадь поперечного сечения бляшки в группе, получавшей соединение 1 в дозе 100 мг/кг, не так сильно отличалась от контрольной группы, бляшки состояли из малой площади клеточных компонентов и больших количеств окружающего внеклеточного матрикса. В группе, получавшей CI-1011, несмотря на то, что площадь поперечного сечения бляшки была меньше, чем в контрольной группе, бляшки состояли главным образом из окрашенных в красный цвет макрофагов и скудного количества окрашенного в голубой цвет внеклеточного матрикса.

Результаты иммунохимического окрашивания макрофагов показаны на фиг.4. Как показано на фиг.4, несмотря на то, что макрофаги встречались в изобилии, особенно на стороне поверхностного слоя, в контрольной группе, макрофаги изредка наблюдались в группе, получавшей соединение 1. Напротив, макрофаги встречались в изобилии по всей бляшке, в группе, получавшей CI-1011.

Результаты окрашивания с использованием краски Sirius Red показаны на фиг.5. Как показано на фиг.5, компактно расположенные коллагеновые волокна встречались по всей бляшке в группе, получавшей соединение 1, по сравнению с контрольной группой. Однако в группе, получавшей CI-1011, было меньше коллагеновых волокон по сравнению с контрольной группой.

Результаты по степени оккупации бляшек макрофагами, рассчитанные с помощью анализа изображения на фиг.4, показаны на фиг.6. Как показано на фиг.6, степень оккупации макрофагами составляла 33,2 ± 2,2% в контрольной группе, в то время как в группе, получавшей соединение 1 в дозе 100 мг/кг, была достоверно уменьшена до 20,0 ± 1,7% (P <0,01). Напротив, она была достоверно увеличена до 44,0 ± 2,7% (P <0,01) в группе, получавшей CI-1011 в дозе 100 мг/кг.

Результаты по степени оккупации бляшек коллагеном, рассчитанные с помощью анализа изображения на фиг.5, показаны на фиг.7. Как показано на фиг.7, степень оккупации коллагеном составляла 9,6 ± 1,1% в контрольной группе, в то время как она была достоверно увеличена до 14,9 ± 1,0% в группе, получавшей соединение 1 в дозе 100 мг/кг (P <0,01). С другой стороны, наблюдалась тенденция к уменьшению до 7,0 ± 0,9% в группе, получавшей CI-1011 в дозе 100 мг/кг.

Как очевидно из фиг.6 и фиг.7, достоверное уменьшение степени оккупации макрофагами и достоверное увеличение степени оккупации коллагеном наблюдалось в группе, получавшей соединение 1 в дозе 100 мг/кг, по сравнению с контрольной группой, в то время как достоверное увеличение степени оккупации макрофагами и пониженная тенденция степени оккупации коллагеном наблюдались в группе, получавшей CI-1011 в дозе 100 мг/кг. А именно, достаточно неожиданно, даже в случае сходного ингибитора АСАТ, подтвердилось совершенно разное действие в отношении бляшек.

Как объяснялось в настоящем документе выше, изучали влияние соединения 1 и CI-1011, обладающих активностью по уменьшению уровня общего холестерина в плазме на основе ингибирующего в отношении АСАТ действия, на уровень общего холестерина в плазме, площадь поперечного сечения бляшек и гистологическую оценку. Результаты показали, что CI-1011 обладал уменьшающим действием в отношении площади поперечного сечения бляшек, т.е. действием, уменьшающим бляшки, в концентрации для уменьшения уровня общего холестерина в плазме, но показал увеличение степени оккупации макрофагами и уменьшение степени оккупации коллагеном; таким образом, было показано, что CI-1011 скорее дестабилизирует бляшки качественно. Напротив, соединение 1 лишь слегка уменьшало уровень общего холестерина в плазме и не показывало действия, уменьшающего бляшки, но показало уменьшение степени оккупации макрофагами и увеличение степени оккупации коллагеном; таким образом, было показано, что соединение 1 обладает выраженным стабилизирующим бляшки действием.

ПРОМЫШЛЕННАЯ ПРИМЕНИМОСТЬ

Настоящее изобретение относится к способу стабилизации бляшек с высоким содержанием липидов при атеросклеротических повреждениях и к способу профилактики их разрушения. Более конкретно, настоящее изобретение относится к способу стабилизации бляшек с высоким содержанием липидов и к способу профилактики их разрушения посредством подавления накопления макрофагов и повышения содержания коллагена в бляшечных поражениях путем введения эффективного количества 2-[4-[2-(бензимидазол-2-илтио)этил]пиперазин-1-ил]-N-[2,4-бис(метилтио)-6-метил-3-пиридил]ацетамида, его кислой соли или гидрата.

1. Способ стабилизации бляшек с высоким содержанием липидов, отличающийся тем, что пациенту, имеющему бляшки с высоким содержанием липидов, вводят эффективное количество 2-[4-[2-(бензимидазол-2-илтио)этил]пиперазин-1-ил]-N-[2,4-бис(метилтио)-6-метил-3-пиридил]ацетамида, его кислой соли или гидрата.

2. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью в отношении стабилизации бляшек с высоким содержанием липидов, включающая в себя 2-[4-[2-(бензимидазол-2-илтио)этил]пиперазин-1-ил]-N-[2,4-бис(метилтио)-6-метил-3-пиридил]ацетамид, его кислую соль или гидрат и фармацевтически приемлемый носитель.

3. Способ профилактики тромбообразования, вызванного разрушением бляшек с высоким содержанием липидов, отличающийся тем, что пациенту, имеющему бляшки с высоким содержанием липидов, вводят эффективное количество 2-[4-[2-(бензимидазол-2-илтио)этил]пиперазин-1-ил]-N-[2,4-бис(метилтио)-6-метил-3-пиридил]ацетамида, его кислой соли или гидрата.

4. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью в отношении профилактики тромбообразования, вызванного разрушением бляшек с высоким содержанием липидов, содержащая 2-[4-[2-(бензимидазол-2-илтио)этил]пиперазин-1-ил]-N-[2,4-бис(метилтио)-6-метил-3-пиридил]ацетамид, его кислую соль или гидрат и фармацевтически приемлемый носитель.

5. Способ профилактики и/или лечения острого коронарного синдрома, вызванного разрушением бляшек с высоким содержанием липидов, отличающийся тем, что пациенту, имеющему бляшки с высоким содержанием липидов, вводят эффективное количество 2-[4-[2-(бензимидазол-2-илтио)этил]пиперазин-1-ил]-N-[2,4-бис(метилтио)-6-метил-3-пиридил]ацетамида, его кислой соли или гидрата.

6. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью в отношении профилактики и/или лечения острого коронарного синдрома, вызванного разрушением бляшек с высоким содержанием липидов, содержащая 2-[4-[2-(бензимидазол-2-илтио)этил]пиперазин-1-ил]-N-[2,4-бис(метилтио)-6-метил-3-пиридил]ацетамид, его кислую соль или гидрат и фармацевтически приемлемый носитель.

7. Способ профилактики и/или лечения острого инфаркта миокарда, вызванного разрушением бляшек с высоким содержанием липидов, отличающийся тем, что пациенту, имеющему бляшки с высоким содержанием липидов, вводят эффективное количество 2-[4-[2-(бензимидазол-2-илтио)этил]пиперазин-1-ил]-N-[2,4-бис(метилтио)-6-метил-3-пиридил]ацетамида, его кислой соли или гидрата.

8. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью в отношении профилактики и/или лечения острого инфаркта миокарда, вызванного разрушением бляшек с высоким содержанием липидов, содержащая 2-[4-[2-(бензимидазол-2-илтио)этил]пиперазин-1-ил]-N-[2,4-бис(метилтио)-6-метил-3-пиридил]ацетамид, его кислую соль или гидрат и фармацевтически приемлемый носитель.

9. Способ профилактики и/или лечения нестабильной стенокардии, вызванной разрушением бляшек с высоким содержанием липидов, отличающийся тем, что пациенту, имеющему бляшки с высоким содержанием липидов, вводят эффективное количество 2-[4-[2-(бензимидазол-2-илтио)этил]пиперазин-1-ил]-N-[2,4-бис(метилтио)-6-метил-3-пиридил]ацетамида, его кислой соли или гидрата.

10. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью в отношении профилактики и/или лечения нестабильной стенокардии, вызванной разрушением бляшек с высоким содержанием липидов, содержащая 2-[4-[2-(бензимидазол-2-илтио)этил]пиперазин-1-ил]-N-[2,4-бис(метилтио)-6-метил-3-пиридил]ацетамид, его кислую соль или гидрат и фармацевтически приемлемый носитель.

11. Способ профилактики и/или лечения обструкции периферических артерий, вызванной разрушением бляшек с высоким содержанием липидов, отличающийся тем, что пациенту, имеющему бляшки с высоким содержанием липидов, вводят эффективное количество 2-[4-[2-(бензимидазол-2-илтио)этил]пиперазин-1-ил]-N-[2,4-бис(метилтио)-6-метил-3-пиридил]ацетамида, его кислой соли или гидрата.

12. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью в отношении профилактики и/или лечения обструкции периферических артерий, вызванной разрушением бляшек с высоким содержанием липидов, содержащая 2-[4-[2-(бензимидазол-2-илтио)этил]пиперазин-1-ил]-N-[2,4-бис(метилтио)-6-метил-3-пиридил]ацетамид, его кислую соль или гидрат и фармацевтически приемлемый носитель.