Способ диагностики токсического гепатита в эксперименте
Владельцы патента RU 2382595:
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Смоленская государственная медицинская академия федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию (RU)
Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и может быть использовано для диагностики токсического гепатита в эксперименте. Проводят динамическую биоимпедансометрию ткани печени, измеряя импеданс интактной печени троекратно с последующим расчетом средней величины Zинт. Сравнивают его со средним значением импеданса печени того же животного, измеренного троекратно на третьи сутки после введения токсического агента Zтох. И если Zинт меньше, чем Zтох, то говорят о возникновении токсического гепатита. Способ обеспечивает разработку прижизненного малоинвазивного способа диагностики токсического гепатита в эксперименте. 2 табл.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано в эксперименте и клинической медицине для диагностики токсического гепатита.
Известен способ определения диагностики токсического гепатита в эксперименте, при котором животное забивают, а для выявления токсического гепатита проводят гистологическое исследование печени. Материал фиксируют 10% раствором нейтрального формалина, заливают в парафин, приготавливают гистологические срезы и окрашивают гематоксилином и эозином. Затем под микроскопом оценивают ультраструктуру паренхимы печени, и если в морфологической картине ткани выявляют выраженную тотальную жировую дистрофию, появление лимфоидно-гистиоцитарной инфильтрации по всей площади долек, полнокровие вен портального тракта и лейкостаз в них, снижение уровня гликогена, то говорят о токсическом ее поражении (Фаращук Н.Ф. Мексидол и гепатит: результаты в эксперименте и перспективы в клинике // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2006, приложение 1).
Метод является трудоемким, предполагает забой лабораторных животных. Кроме того, используя вышеописанную методику, не возможно динамическое наблюдение за процессом развития токсического гепатита у одного и того же животного.
Задачей изобретения является разработка прижизненного малоинвазивного способа диагностики токсического гепатита в эксперименте.
Сущность предложенного способа состоит в том, что проводят динамическую биоимпедансометрию (БИМ) ткани печени, измеряя импеданс интактной печени троекратно с последующим расчетом средней величины Zинт, сравнивают его со средним значением импеданса печени того же животного, измеренного троекратно на третьи сутки после введения токсического агента Zтox, и если Zинт меньше, чем Zтox, то говорят о возникновении токсического гепатита.
Различные патологические процессы приводят к изменению размеров, формы и взаимного расположения клеток в биологической ткани. Соответственно, изменяется микроархитектоника биологической ткани, интенсивность кровоснабжения и метаболизма клеток. При этом меняются электрофизические свойства биообъектов, в частности импеданс. Что легло в основу данного изобретения.
Пример. Крысе весом 180 г под эфирным рауш-наркозом производили верхнесрединную лапаротомию длиной 1 см, вывихивали хвостатую долю печени в рану, осуществляли биоимпедансометрию интактной печени (частота тока 2 кГц, напряжение IV) при помощи игольчатых электродов, которые вводили в ткань печени на глубину 2 мм. Импеданс печени замеряли в разных точках (Z1, Z2, Z3) на площади 10 мм2. Затем вычисляли среднее значение (Zинт).
На 4 сутки после операции внутрибрюшинно вводили 50% масляный раствор четыреххлористого углерода (ЧХУ) в дозе 0,25 мл на 100 г веса. На 3 сутки после введения ЧХУ была проведена повторная лапаротомия с последующей биоимпедансометрией хвостатой доли печени. Импеданс печени замеряли в разных точках (Z1 Z2, Z3) на площади 10 мм. Затем вычисляли среднее значение (Zтox).
При измерении импеданса интактной печени получили: Z1=2069 Ом, Z2=2177 Ом, Z3=2237 Ом, тогда Zинт=2161 Ом.
При измерении импеданса печени после введения ЧХУ получили: Z1=2337 Ом, Z2=2791 Ом, Z3=2187 Ом, тогда Zтox=2438 Ом.
Таким образом, Zинт меньше, чем Zтox, следовательно, у данного животного диагностируется токсическое поражение печени.
Далее крысу забили, на гистологическое исследование взяли фрагмент хвостатой доли печени. Материал фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, заливали в парафин, приготавливали гистологические срезы и окрашивали их гематоксилином и эозином. Затем под микроскопом оценивали ультраструктуру паренхимы печени.
При гистологическом исследовании выявили выраженную тотальную жировую дистрофию, появление лимфоидно-гистиоцитарной инфильтрации по всей площади долек, полнокровие вен портального тракта и лейкостаз в них, снижение уровня гликогена, что является признаком токсического поражения печени.
Провели эксперимент на 15 крысах-самцах весом от 145 до 185 г. Были сформированы 2 группы: опытная группа животных в количестве 10 шт. и контрольная 5 шт.
В опытной группе животных моделировали токсический гепатит и измеряли импеданс ткани печени по описанной выше методике. В результате у всех животных Zинт был меньше, чем Zтox, что говорит о развитии токсического гепатита (табл.1, 2). Диагноз подтверждался гистологическим исследованием ткани печени.
| Таблица 1 Способ диагностики токсического гепатита в эксперименте |
|||
| № крысы | Zинт, Ом | Zтox, Ом | Сравнение |
| 1 | 2178 | 2300 | Zинт < Zтох |
| 2 | 2265 | 2665 | Zинт < Zтох |
| 3 | 2161 | 2438 | Zинт < Zтox |
| 4 | 2053 | 2624 | Zинт < Zтox |
| 5 | 2388 | 2602 | Zинт < Zтох |
| 6 | 1816 | 2923 | Zинт < Zтох |
| 7 | 2981 | 3313 | Zинт < Zтох |
| 8 | 2172 | 2225 | Zинт < Zтox |
| 9 | 2480 | 2822 | Zинт < Zтох |
| 10 | 2216 | 2448 | Zинт < Zтox |
| Таблица 2 | |||
| № крысы | Zинт, Ом | Zтox, Ом | Сравнение |
| 1 | 3173 | 1793 | Zинт > Zтox |
| 2 | 2806 | 1828 | Zинт > Zтox |
| 3 | 3146 | 2355 | Zинт > Zтox |
| 4 | 2889 | 1769 | Zинт > Zтox |
| 5 | 2637 | 1728 | Zинт > Zтox |
В контрольной группе крыс проводили измерение импеданса ткани печени в те же сроки, что и у опытной группы животных, но ЧХУ не вводили. В результате у всех контрольных животных Zинт был больше, чем Zтox, что подтверждает отсутствие токсического поражения печени. Результаты биоимпедансометрии были подтверждены гистологическим исследованием.
Таким образом, предложенный способ диагностики токсического гепатита является объективным и надежным, может быть широко использован в экспериментальной медицине для исследования влияния различных токсических агентов на ткань печени и оценки эффективности лекарственных препаратов при токсическом поражении печени.
Способ диагностики токсического гепатита в эксперименте, отличающийся тем, что проводят динамическую биоимпедансометрию ткани печени, измеряя импеданс интактной печени троекратно с последующим расчетом средней величины Zинт, сравнивают его со средним значением импеданса печени того же животного, измеренного троекратно на третьи сутки после введения токсического агента Zтох, и если Zинт меньше, чем Zтох, то говорят о возникновении токсического гепатита.
