Способ дифференциальной цитометрии при микстинвазиях птиц


 


Владельцы патента RU 2431833:

Федеральное государственное образовательное учреждение Высшего профессионального образования КАБАРДИНО-БАЛКАРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ им. В.М. КОКОВА (RU)

Изобретение относится к области ветеринарной медицины. Способ основан на том, что показания индикатора кондуктометрического счетчика микрочастиц PICOSCALE вычитаются друг из друга при различных порогах напряжения с шагом 0,5 В, при этом абсолютное количество эритроцитов с различными объемами определяют по формуле: Эann+1 где Эa - абсолютное количество эритроцитов с различными объемами, Эn - количество эритроцитов, объем которых выше уровня дискриминации, т.е. отсчет начинается с минимального объема клеток, определяемых прибором при заданном пороге напряжения, Эn+1 - последующее значение количества эритроцитов, объем которых выше уровня дискриминации при очередном положении регулятора напряжения, а процентное содержание эритроцитов определяют по отношению абсолютного количества эритроцитов с различными объемами к общему количеству эритроцитов (RBC). Способ позволяет выявить патологические сдвиги в популяции эритроцитов, а также значительно повысить точность цитометрии и сократить время ее проведения. 1 табл.

 

Изобретение относится к области ветеринарной медицины и может быть использовано при диагностике инвазионных болезней птиц - микстинвазиях.

Существует способ подсчета эритроцитов при помощи счетных камер [1]. Недостатками данного способа являются низкая точность измерений и невозможность определения объема клеток.

Известен также способ подсчета эритроцитов, основанный на использовании проточных счетчиков микрочастиц [2] (прототип). Этот способ не позволяет определять абсолютное количество и процентное содержание эритроцитов с различными объемами. Например, принцип работы счетчика LABROSCALE основывается на построении кривой распределения, с которой снимаются параметры объема эритроцитов. Данный способ трудоемок и имеет низкую точность измерений.

Цель изобретения - повышение точности определения абсолютного количества и процентного содержания эритроцитов с различными объемами.

Поставленная цель достигается тем, что показания индикатора кондуктометрического счетчика микрочастиц PICOSCALE вычитываются друг из друга при различных порогах напряжения с шагом 0,5 В. Абсолютное количество эритроцитов с различными объемами (Эa) определяется по формуле

Эann+1,

где Эn - количество эритроцитов, объем которых выше уровня дискриминации, т.е. отсчет начинается с минимального объема клеток, определяемых прибором при заданном пороге напряжения;

Эn+1 - последующее значение количества эритроцитов, объем которых выше уровня дискриминации при очередном положении регулятора порога напряжения.

Процентное содержание эритроцитов определяется по отношению абсолютного количества клеток с различными объемами к их общему количеству (RBC).

Способ осуществляется следующим образом.

Измерительный стаканчик с взвесью крови в электропроводящей жидкости в соотношении 1:63000 общим объемом 10 мл устанавливается на подставку кондуктометрического счетчика PICOSCALE. Нажатием кнопки «Start» до отказа вниз создается разность давлений, под действием которой электропроводящая жидкость продавливается через измерительную цепь электродов, создавая импульсы напряжения при переходе эритроцитов через измерительное отверстие. Величина электрического импульса, создаваемого эритроцитами при переходе через измерительное отверстие, зависит от их размера.

Измерения проводят при порогах напряжения 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5 и т.д. до 10,0 В, значения которых устанавливаются с помощью регулятора. При этом каждое очередное повышение порога напряжения с шагом в 0,5 В сопровождается исключением из общего количества эритроцитов группы клеток объемом ниже уровня дискриминации.

Способ позволяет получить общее количество эритроцитов в 1 мкл (RBC), распределение эритроцитов по объему на 18 субпопуляций (см. таблицу), отражающее их абсолютное и процентное содержание. Кроме того, предлагаемый способ позволит путем несложных математических расчетов определить средний объем эритроцитов (MCV), процентное содержание микро-, нормо- и макроцитов, характер распределения эритроцитов по объему (RDW).

Пример реализации способа при исследовании эритроцитов птиц
№п/п Пороги напряжения, В Объем эритроцитов, соответствующий пороговому уровню дискриминации, Ve, мкм3 Количество эритроцитов, объем которых выше порогового уровня дискриминации, Эn (n=1,2,3…18), 1012/л Абсолютное количество эритроцитов, Эа, 1012/л Процентное содержание эритроцитов, %
1,25 3,47 (RBC)
1 1,5 32,4 3,45 0,02 0,7
2 2,0 43,2 3,08 0,37 10,6
3 2,5 54,0 1,66 1,42 40,8
4 3,0 64,8 1,02 0,64 18,3
5 3,5 75,6 0,70 0,32 9,1
6 4,0 86,4 0,43 0,27 7,7
7 4,5 97,2 0,26 0,17 4,9
8 5,0 108,0 0,16 0,10 2,8
9 5,5 118,8 0,09 0,07 2,1
10 6,0 129,6 0,04 0,05 1,4
11 6,5 140,4 0,02 0,02 0,7
12 7,0 151,2 0,01 0,01 0,3
13 7,5 162,0 0 0,01 0,3
14 8,0 172,8 0 0,00 0,2
15 8,5 183,6 0 0 0,1
16 9,0 194,4 0 0 0
17 9,5 205,2 0 0 0
18 10,0 216,0 0 0 0

Средний объем эритроцитов (MCV) можно определить по данным таблицы как сумма произведений объемов эритроцитов (Ve) на их процентное содержание (%), отнесенное к 100 (MCV=Σ(Vе1×%, Ve2×%,…Ve18×%)/100).

Процентное содержание микро-, нормо- и макроцитов можно определить как сумму процентных содержаний эритроцитов (Σ%) с объемами 32,4-75,6 мкм3, 86,4-151,2 мкм3 и 162,0-216,0 мкм3 соответственно.

Характер распределения эритроцитов по объему (RDW) оценивается по: преобладанию клеток определенных объемов (микроцитарный, нормоцитарный, макроцитарный); ширине основания кривой распределения эритроцитов по объему (гомогенный - при узком основании, гетерогенный - при широком основании); количеству вершин у кривой (унимодальная - с одной, бимодальная - с двумя и полимодальная - более двух).

По отклонению от нормы значений показателей дифференциальной цитометрии: RBC, MCV, процентное содержание микро-, нормо- и макроцитов, RDW, можно оценить тяжесть, динамику и прогноз патологических процессов, происходящих при микстинвазиях птиц.

Таким образом, при использовании способа значительно сокращается время проведения исследований эритроцитов, а также повышается точность выполнения измерений. Вместе с тем, данный способ выявляет патологические сдвиги в популяции эритроцитов, что позволяет использовать его в качестве оперативной экспресс-диагностики при оценке тяжести микстинвазий птиц.

Источники информации

1. Атлас клеток крови сельскохозяйственных и лабораторных животных / В.Н. Никитин. - М.: Государственное Издательство Сельскохозяйственной литературы, 1949. - 48 с.

2. Лабораторно-клиническая диагностика анемий / В.М. Погорелов, Г.И. Козинец, Л.Г. Ковалева. - М.: Медицинское информационное агентство, 2004. - 173 с.

Способ дифференциальной цитометрии при микстинвазиях птиц, основанный на том, что показания индикатора кондуктометрического счетчика микрочастиц PICOSCALE вычитаются друг из друга при различных порогах напряжения с шагом 0,5 В, при этом абсолютное количество эритроцитов с различными объемами определяют по формуле: Эann+1,
где Эa - абсолютное количество эритроцитов с различными объемами;
Эn - количество эритроцитов, объем которых выше уровня дискриминации, т.е. отсчет начинается с минимального объема клеток, определяемых прибором при заданном пороге напряжения;
Эn+1 - последующее значение количества эритроцитов, объем которых выше уровня дискриминации при очередном положении регулятора напряжения, а процентное содержание эритроцитов определяют по отношению абсолютного количества эритроцитов с различными объемами к общему количеству эритроцитов (RBC).



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностическим методам, и описывает способ оценки индуцирующего действия герпес-вирусной инфекции на содержание холестерина у родильниц, перенесших в третьем триместре беременности обострение герпес-вирусной инфекции, характеризующийся тем, что исследуют гомогенат плаценты родильниц, определяют титр антител к вирусу герпеса (ВПГ-1) с помощью иммуноферментного метода (ИФМ) на спектрофотометре, затем определяют содержание холестерина в гомогенате плаценты спектрофотометрическим методом и по мере нарастания титра антител к вирусу герпеса устанавливают содержание холестерина в гомогенате плаценты.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения бислойных липидных мембран. .

Изобретение относится к биометрии, а именно к фотометрии, и может быть использовано для определения фотометрических свойств биологической ткани. .

Изобретение относится к масс-спектрометрическому способу идентификации изомеризованного аспартата в белках, отличающийся тем, что определение изоформ аспартата производится с помощью масс-спектрометрии с преобразованием Фурье.

Изобретение относится к медицине и предназначено для составления рациона питания при заболеваниях, в патогенезе которых важна избыточная масса тела. .

Изобретение относится к области эколого-физиологических исследований. .

Изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной гематологии, и описывает способ диагностики перевиваемого лимфобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY.

Изобретение относится к области медицины, в частности нефрологии. .
Изобретение относится к области экспериментальной гематологии. .

Изобретение относится к области медицины, в частности к оториноларингологии, и может быть использовано для оценки эффективности лечения больных хроническими заболеваниями носа и придаточных пазух
Изобретение относится к области медицины, а именно к клинической лабораторной диагностике и иммунологии, может быть использовано как подготовительный этап изучения функциональной активности нейтрофилов периферической крови
Изобретение относится к области медицины, а именно к неврологии, инфекционным болезням, клинической иммунологии

Изобретение относится к картриджу для детектирования присутствия, отсутствия или количества специфических последовательностей ДНК или РНК
Изобретение относится к области медицины, а именно к патологической анатомии

Изобретение относится к области медицины, а именно к медицинской диагностике, и может использоваться в диагностике онкогематологических заболеваний
Изобретение относится к медицине, ведению послеоперационного периода пациентов после задней стабилизации поясничного отдела позвоночника

Изобретение относится к области медицины, в частности микробиологии и гастроэнтерологии
Наверх