Способ диагностики кандидоза верхних дыхательных путей у работников агропромышленного комплекса


 


Владельцы патента RU 2485183:

Федеральное бюджетное учреждение науки "УФИМСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ МЕДИЦИНЫ ТРУДА И ЭКОЛОГИИ ЧЕЛОВЕКА" (RU)

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для диагностики кандидоза верхних дыхательных путей у работников агропромышленного комплекса. Способ предусматривает отбор исследуемого материала. Посев исследуемого материала на питательную среду Сабуро с последующей инкубацией на этой среде при 37°С в течение 24 часов. Проведение количественной оценки роста дрожжеподобных грибов рода Candida, и при значении превышающем 10*1 КОЕ/тампон диагностируют кандидоз верхних дыхательных путей. Полученные колонии микроскопируют и из этих колоний выделяют изолированные колонии дрожжеподобных грибов рода Candida. Выделенные колонии дрожжеподобных грибов рода Candida суспензируют в пяти пробирках, содержащих жидкую среду Сабуро с индикатором феноловым красным, в которые добавляют диски с углеводами, причем в первую пробирку - диск, содержащий мальтозу, во вторую - сахарозу, третью - лактозу, четвертую - галактозу, пятую - трегалозу, и инкубируют при 37°С в течение 24 часов с последующей оценкой изменения цвета индикатора. При этом изменение цвета индикатора на желтый принимают за единицу, отсутствие изменения цвета за ноль, рассчитывают сумму значений, полученных при определении цвета индикатора в пяти пробирках. При значении суммы 0 диагностируют кандидоз верхних дыхательных путей, вызванный Candida kruzei, 1 - кандидоз верхних дыхательных путей, вызванный Candida glabrata, 3 - кандидоз верхних дыхательных путей, вызванный Candida albicans, 4 - кандидоз верхних дыхательных путей, вызванный Candida tropicalis. Изобретение позволяет идентифицировать несколько видов дрожжеподобных грибов рода Candida, вызывающих кандидоз, и позволяет учитывать количественный рост дрожжеподобных грибов рода Candida, по которому судят о наличии кандидоза. 6 пр.

 

Изобретение относится к медицине, в частности к медицине труда, микробиологии, микологии, и может быть использовано для диагностики кандидоза верхних дыхательных путей у работников агропромышленного комплекса.

Кандидоз верхних дыхательных путей - воспалительное грибковое заболевание слизистых оболочек верхних дыхательных путей, возбудителями которого являются грибы рода Candida [Хмельницкий O.K. О кандидозе слизистых оболочек. Архив патологии, 2000, Т 62, N6, С 3-10].

Дрожжеподобные грибы рода Candida широко распространены в природе и являются условно-патогенными микроорганизмами, которые при определенных условиях проявляют свои патогенные свойства и вызывают тяжелые заболевания человека и животных. Наиболее восприимчивыми к грибам рода Candida являются человек и все виды сельскохозяйственных животных, однако самый выраженный ущерб кандидамикоз наносит птицеводческим хозяйствам.

Работники, занятые в условиях сельскохозяйственных предприятий, подвергаются высокому риску заражения грибами рода Candida. Факторами передачи данных микроорганизмов на птицеводческих и свиноводческих фермах чаще всего являются корма, молочные продукты, отходы инкубации, почва и др.

Кроме того, другие неблагоприятные факторы производственной среды и трудового процесса в условиях сельскохозяйственных предприятий способствуют снижению естественной резистентности и размножению грибов рода Candida в организме у работников.

Чаще всего со слизистых верхних дыхательных путей у работниц агропромышленного комплекса выделяются дрожжеподобные грибы Candida albicans (74,3% случаев), Candida tropicalis (в 20%), Candida kruzei (5,7% случаев) [Рафикова Л.М., Хуснаризанова Р.Ф. Изучение адгезивной активности дрожжеподобных грибов рода Candida, выделенных со слизистых верхних дыхательных путей и влагалища у работниц агропромышленного комплекса // Успехи современного естествознания. - 2005. - №10 - С.75-75].

Известен способ диагностики кандидоза при вич-инфекции, заключающийся в том, что учитывают результаты двух серологических тестов - РНГА и ИФА - одновременно. При выявлении титров антител к Candida albicans в сыворотке крови выше диагностических только в РНГА диагностируют поверхностный кандидоз, а при выявлении титров антител к Candida albicans в сыворотке крови выше диагностических одновременно в двух реакциях - в РНГА и ИФА (>1: 400) диагностируют глубокий кандидоз (патент RU №2109289, 1998 г.). Однако данный способ является инвазивным, и у пациентов учитываются антитела лишь к Candida albicans.

Прототипом изобретения является способ идентификации дрожжеподобных грибов, заключающийся в том, что производят посев гриба на агар Сабуро, содержащий среду Гисса с глюкозой, среду Гисса с мальтозой, среду Гисса с сахарозой, инкубируют 24-48 ч. Выделение дрожжеподобных грибов Candida albicans осуществляют по изменению цвета колоний, при этом на агаре Сабуро, содержащем среду Гисса с глюкозой и среду Гисса с мальтозой, - колонии синего цвета, на агаре Сабуро, содержащем среду Гисса с сахарозой, - бледно-голубого цвета (патент RU №2386693, 2010 г). Недостатком способа является то, что он позволяет идентифицировать Candida albicans - лишь один вид грибов рода Candida, способ не учитывает принадлежность выделенных у работников агропромышленного комплекса штаммов к другим видам грибов рода Candida. Кроме того, прототип не учитывает количественный рост дрожжеподобных грибов рода Candida у работников на слизистой верхних дыхательных путей, по которому судят о наличии кандидоза у работников агропромышленного комплекса.

Задачей изобретения является разработка способа, позволяющего с высокой достоверностью проводить диагностику кандидоза верхних дыхательных путей, вызванного Candida albicans, Candida tropicalis, Candida glabrata, Candida kruzei, у работников агропромышленного комплекса.

Технический результат при использовании изобретения - получение критериев диагностики кандидоза верхних дыхательных путей, вызванного Candida albicans, или Candida tropicalis, или Candida glabrata, или Candida kruzei у работников агропромышленного комплекса при обследованиях.

Предлагаемый способ диагностики кандидоза верхних дыхательных путей у работников агропромышленного комплекса осуществляют следующим образом.

- Материал из ротовой полости у работника собирают с соблюдением правил асептики в предварительно простерилизованные пробирки. Интервал между взятием материала и его посевом не должен превышать 1-2 часа. Материал берут натощак или через 2 часа после еды стерильным ватным тампоном со слизистой оболочки рта у выходов протоков слюнных желез, поверхности языка, из язвочек.

- Оценивают количественно рост дрожжеподобных грибов рода Candida в КОЕ/тампон согласно Приказу МЗ СССР №535 от 22.04.1985 г. «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений». Для определения количественного роста дрожжеподобных грибов рода Candida в пробирку с тампоном с исследуемым материалом наливают с помощью стерильной пипетки 1 мл жидкой среды Сабуро (аккуратно встряхивая, перемешивают) - получают 1-е разведение. 0,5 мл полученной суспензии с помощью стерильной пипетки приливают в стерильную пробирку, добавляют 4,5 мл жидкой среды Сабуро (перемешивают стерильной стеклянной палочкой), - получают 2-е разведение. Из полученной суспензии 2-го разведения также берут 0,5 мл с помощью стерильной пипетки, приливают в стерильную пробирку и добавляют 4,5 мл жидкой среды Сабуро (перемешивают стерильной стеклянной палочкой) - получают 3-е разведение.

Производят посев клинического материала на плотную среду Сабуро. Сначала сеют 3-е, затем 2-е разведения, затем 1-е разведение. Материал из каждого разведения сеют в отдельную чашку с плотной средой Сабуро. Засевают по 0,1 мл из разведенной суспензии. При посеве стерильным шпателем материал втирают штрихами по всей поверхности питательной среды. Чашки с засеянным материалом инкубируют при температуре 37°С 24 часа. На 2-е сутки чашки просматривают, выделенные культуры микроскопируют. При наличии псевдогифов и псевдоконидий относят культуру к грибам рода Candida. После чего подсчитывают количество колоний. Количество микроорганизмов определяют в максимальном разведении, в котором еще удалось обнаружить данный вид микроорганизмов. Если дрожжеподобные грибы рода Candida обнаруживают лишь в 1-м разведении то, количество дрожжеподобных грибов рода Candida будет соответствовать 10*1 КОЕ/тампон; если дрожжеподобные грибы рода Candida обнаруживают в 1-м и 2-м разведении, то количество дрожжеподобных грибов рода Candida будет соответствовать 10*2 КОЕ/тампон; если дрожжеподобные грибы рода Candida обнаруживают в 1-м, 2-м и 3-ем разведении, то количество дрожжеподобных грибов рода Candida будет соответствовать 10*3 КОЕ/тампон; если дрожжеподобные грибы рода Candida не обнаруживают ни в 1-м, ни во 2-м, ни в третьем разведении то количество дрожжеподобных грибов рода Candida будет соответствовать менее 10*1 КОЕ/тампон. За норму обсемененности слизистых верхних дыхательных путей дрожжеподобными грибами рода Candida у работников агропромышленного комплекса принимают - 10*1 КОЕ/тампон и менее. При количестве дрожжеподобных грибов более чем 10*1 КОЕ/тампон, диагностируют кандидоз верхних дыхательных путей у работников агропромышленного комплекса. В случае когда дрожжеподобные грибы рода Candida обнаруживаются в количестве более чем 10*1 КОЕ/тампон, производят дальнейшую работу с культурами с целью выделения чистой культуры и идентификации дрожжеподобных грибов рода Candida.

- В случае когда дрожжеподобные грибы рода Candida обнаруживаются в количестве более чем 10*1 КОЕ/тампон, отвивают культуры из последней чашки, в которой еще удалось обнаружить дрожжеподобные грибы рода Candida, и делают разреженный посев на плотную среду Сабуро для получения роста изолированных колоний. Поверх посева накладывают покровное стекло, оставляют культуру на 18-24 часа при комнатной температуре, после чего культуру микроскопируют. При наличии псевдогифов и псевдоконидий относят культуру к грибам рода Candida.

- Снимают хорошо изолированные колонии со среды Сабуро и суспензируют культуру в 5-ти пробирках, содержащих 2 мл жидкой среды Сабуро, содержащей 0,002% фенолового красного.

- Последовательно помещают в пробирки, содержащие культуру, диски с углеводами: в первую пробирку - диск, содержащий мальтозу, во вторую - сахарозу, третью - лактозу, четвертую - галактозу, пятую - трегалозу, инкубируют в термостате при 37°С 24 часа.

- Оценивают изменение цвета фенолового красного в пробирках. Изменение цвета индикатора на желтый принимают за единицу (1), отсутствие изменения цвета - за ноль (0).

- Для идентификации видовой принадлежности определяют сумму значений, полученных при определении цвета индикатора в каждой из пяти пробирок.

При значении суммы, равном 0, - идентифицируют кандидоз верхних дыхательных путей, вызванный Candida kruzei, 1 - кандидоз верхних дыхательных путей, вызванный Candida glabrata, 3 - кандидоз верхних дыхательных путей, вызванный Candida albicans, 4 - кандидоз верхних дыхательных путей, вызванный Candida tropicalis.

Было проведено бактериологическое исследование мазков, взятых из ротовой полости у работников агропромышленного комплекса с жалобами на отек, белые налеты слизистой полости рта, а также при наличии клинических признаков кандидоза в виде синюшности каймы губ, шелушения, творожистых серовато-белых налетов в полости рта, после снятия которых образуются эрозии. Результаты проведенного исследования показали, что у работников с наличием клинических признаков кандидоза чаще по сравнению с работниками без клинических признаков кандидоза обнаруживались дрожжеподобные грибы рода Candida, преимущественно Candida albicans, Candida tropicalis, Candida kruzei, Candida glabrata в количестве, превышающем 10*1 КОЕ/тампон (р<0,001; OR=4,10). У работников агропромышленного комплекса без клинических признаков кандидоза Candida spp. встречалась в единичных случаях в количестве 10*1 КОЕ/тампон и менее. Известно, что Candida kruzei не способна утилизировать мальтозу, сахарозу, лактозу, галактозу, трегалозу, Candida glabrata утилизирует трегалозу, Candida albicans - мальтозу, галактозу, трегалозу, Candida tropicalis - все вышеуказанные углеводы, кроме лактозы [Кубась В.Г. Этиология и патогенез кандидоза. Микробиология в гигиене и клинической медицине / В.Г.Кубась. - СПб.: Издательский дом СПб МАПО. - 2000. - С.4-19].

Предлагаемый способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Шаймуратова P.M., 1961 г.р., профессия «птичница», стаж работы - 22 года. При обследовании на слизистой полости рта обнаружены творожистые серовато-белых налеты, после снятия которых образуются эрозии.

Материал из ротовой полости у работника собирают в стерильную пробирку натощак стерильным ватным тампоном со слизистой оболочки рта с поверхности эрозии.

- В пробирку с тампоном с исследуемым материалом с помощью стерильной пипетки наливают 1 мл жидкой среды Сабуро (перемешивают) - получают 1-е разведение. 0,5 мл полученной суспензии с помощью стерильной пипетки приливают в стерильную пробирку, добавляют 4,5 мл жидкой среды Сабуро (перемешивают), - получают 2-е разведение. Из полученной суспензии 2-го разведения берут 0,5 мл с помощью стерильной пипетки приливают в стерильную пробирку и добавляют 4,5 мл жидкой среды Сабуро (перемешивают) - получают 3-е разведение.

- В чашку с плотной средой Сабуро с помощью стерильной пипетки наливают 0,1 мл суспензии 3-его разведения, затем в другую чашку с плотной средой Сабуро той же пипеткой наливают 0,1 мл суспензии 2-го разведения, в 3-ю чашку с плотной средой Сабуро той же пипеткой наливают 0,1 мл суспензии 1-го разведения. Суспензию с материалом 3-его, затем отдельно 2-го, и затем отдельно 1-го разведения втирают штрихами по всей поверхности питательной среды одним стерильным шпателем. Чашки с засеянным материалом помещают в термостат и инкубируют при температуре 37°С 24 часа.

- Подсчитывают количество микроорганизмов. В чашке с 1-м разведением - рост бактерий обнаружен (100 колоний), в чашке со 2-м разведением рост бактерий обнаружен (10 колоний), в чашке с 3-им разведением - рост бактерий обнаружен (5 колоний). Количество дрожжеподобных грибов рода Candida соответствует 10*3 КОЕ/тампон. Культуру, выращенную в чашке с 3-им разведением, микроскопируют. Обнаруживают псевдогифы и псевдоконидии, относят культуру к грибам рода Candida.

- Отвивают культуры из чашки с 3-им разведением и делают разреженный посев на плотную среду Сабуро для получения роста изолированных колоний. Поверх посева накладывают покровное стекло, оставляют культуру на 24 часа при комнатной температуре. Обнаруживают рост микроорганизмов, после чего культуру микроскопируют. Обнаруживают псевдогифы и псевдоконидии, относят культуру к грибам рода Candida.

- Снимают хорошо изолированные колонии со среды Сабуро и суспензируют культуру в 5-и пробирках, содержащих 2 мл жидкой среды Сабуро, содержащей 0,002% фенолового красного.

- Последовательно помещают в пробирки, содержащие культуру, диски с углеводами - в первую пробирку - диск, содержащий мальтозу, во вторую - сахарозу, третью - лактозу, четвертую - галактозу, пятую - трегалозу, инкубируют в термостате при 37°С 24 часа.

- Оценивают изменение цвета фенолового красного в пробирках.

Цвет индикатора в пробирке, содержащей культуру с мальтозой, не изменился (0).

Цвет индикатора в пробирке, содержащей культуру с сахарозой, не изменился (0).

Цвет индикатора в пробирке, содержащей культуру с лактозой, не изменился (0).

Цвет индикатора в пробирке, содержащей культуру с галактозой, не изменился (0).

Цвет индикатора в пробирке, содержащей культуру с трегалозой, изменился на желтый (1).

Определяют сумму значений, характеризующих изменение цвета фенолового красного в каждой из пяти пробирок. Сумма равна 1 (0+0+0+0+1=1), что свидетельствует о наличии у работницы кандидоза верхних дыхательных путей, вызванного Candida glabrata.

Пример 2. Ганиева М.Т., 1967 г.р., профессия «птичница», стаж работы - 15 лет. При обследовании на слизистой полости рта обнаружены творожистые белые налеты, эрозии.

Материал из ротовой полости у работника собирают в стерильную пробирку натощак стерильным ватным тампоном со слизистой оболочки рта с поверхности эрозии.

- В пробирку с тампоном с исследуемым материалом с помощью стерильной пипетки наливают 1 мл жидкой среды Сабуро (перемешивают)- получают 1-е разведение. 0,5 мл полученной суспензии с помощью стерильной пипетки приливают в стерильную пробирку, добавляют 4,5 мл жидкой среды Сабуро (перемешивают), - получают 2-е разведение. Из полученной суспензии 2-го разведения берут 0,5 мл с помощью стерильной пипетки приливают в стерильную пробирку и добавляют 4,5 мл жидкой среды Сабуро (перемешивают) - получают 3-е разведение.

- В чашку с плотной средой Сабуро с помощью стерильной пипетки наливают 0,1 мл суспензии 3-его разведения, затем в другую чашку с плотной средой Сабуро той же пипеткой наливают 0,1 мл суспензии 2-го разведения, в 3-ю чашку с плотной средой Сабуро той же пипеткой наливают 0,1 мл суспензии 1-го разведения. Суспензию с материалом 3-его, затем отдельно 2-го, и затем отдельно 1-го разведения втирают штрихами по всей поверхности питательной среды одним стерильным шпателем. Чашки с засеянным материалом помещают в термостат и инкубируют при температуре 37°С 24 часа. На 2-е сутки чашки просматривают.

- Подсчитывают количество микроорганизмов. В чашке с 1-м разведением - рост бактерий обнаружен (100 колоний), в чашке со 2-м разведением рост бактерий обнаружен (8 колоний), в чашке с 3-им разведением - рост бактерий не обнаружен. Количество дрожжеподобных грибов рода Candida соответствует 10*2 КОЕ/тампон. Культуру, выращенную в чашке со 2-м разведением, микроскопируют. Обнаруживают псевдогифы и псевдоконидии, относят культуру к грибам рода Candida.

- Отвивают культуры из чашки со 2-м разведением и делают разреженный посев на плотную среду Сабуро для получения роста изолированных колоний. Поверх посева накладывают покровное стекло, оставляют культуру на 24 часа при комнатной температуре. Обнаруживают рост микроорганизмов, после чего культуру микроскопируют. Обнаруживают псевдогифы и псевдоконидии, относят культуру к грибам рода Candida.

- Снимают хорошо изолированные колонии со среды Сабуро и суспензируют культуру в 5-и пробирках, содержащих 2 мл жидкой среды Сабуро, содержащей 0,002% фенолового красного.

- Последовательно помещают в пробирки, содержащие культуру, диски с углеводами - в первую пробирку - диск, содержащий мальтозу, во вторую - сахарозу, третью - лактозу, четвертую - галактозу, пятую - трегалозу, инкубируют в термостате при 37°С 24 часа.

- Оценивают изменение цвета фенолового красного в пробирках.

Цвет индикатора в пробирке, содержащей культуру с мальтозой, изменился на желтый (1).

Цвет индикатора в пробирке, содержащей культуру с сахарозой, не изменился (0).

Цвет индикатора в пробирке, содержащей культуру с лактозой, не изменился (0).

Цвет индикатора в пробирке, содержащей культуру с галактозой, изменился на желтый (1).

Цвет индикатора в пробирке, содержащей культуру с трегалозой, изменился на желтый (1).

Определяют сумму значений, характеризующих изменение цвета фенолового красного в каждой из пяти пробирок. Сумма равна 3 (1+0+0+1+1=3), что свидетельствует о наличии у работницы кандидоза верхних дыхательных путей, вызванного Candida albicans.

Пример 3. Мамаева A.M., 1972 г.р., профессия «птичница», стаж работы - 15 лет. При обследовании у работницы отмечены отек слизистой полости рта, белые налеты на слизистой, синюшность, шелушения каймы губ.

Материал из ротовой полости у работника собирают в стерильную пробирку натощак стерильным ватным тампоном со слизистой оболочки рта с поверхности белого налета.

- В пробирку с тампоном с исследуемым материалом с помощью стерильной пипетки наливают 1 мл жидкой среды Сабуро (перемешивают) - получают 1-е разведение. 0,5 мл полученной суспензии с помощью стерильной пипетки приливают в стерильную пробирку, добавляют 4,5 мл жидкой среды Сабуро (перемешивают), - получают 2-е разведение. Из полученной суспензии 2-го разведения берут 0,5 мл с помощью стерильной пипетки, приливают в стерильную пробирку и добавляют 4,5 мл жидкой среды Сабуро (перемешивают) - получают 3-е разведение.

- В чашку с плотной средой Сабуро с помощью стерильной пипетки наливают 0,1 мл суспензии 3-его разведения, затем в другую чашку с плотной средой Сабуро той же пипеткой наливают 0,1 мл суспензии 2-го разведения, в 3-ю чашку с плотной средой Сабуро той же пипеткой наливают 0,1 мл суспензии 1-го разведения. Суспензию с материалом 3-его, затем отдельно 2-го, и затем отдельно 1-го разведения втирают штрихами по всей поверхности питательной среды одним стерильным шпателем. Чашки с засеянным материалом помещают в термостат и инкубируют при температуре 37°С 24 часа. На 2-е сутки чашки просматривают.

- Подсчитывают количество микроорганизмов. В чашке с 1-м разведением - рост бактерий обнаружен (90 колоний), в чашке со 2-м разведением рост бактерий обнаружен (15 колоний), в чашке с 3-им разведением - рост бактерий обнаружен (9 колоний). Количество дрожжеподобных грибов рода Candida соответствует 10*3 КОЕ/тампон. Культуру, выращенную в чашке с 3-им разведением, микроскопируют. Обнаруживают псевдогифы и псевдоконидии, относят культуру к грибам рода Candida.

- Отвивают культуры из чашки с 3-им разведением и делают разреженный посев на плотную среду Сабуро для получения роста изолированных колоний. Поверх посева накладывают покровное стекло, оставляют культуру на 24 часа при комнатной температуре. Обнаруживают рост микроорганизмов, после чего культуру микроскопируют. Обнаруживают псевдогифы и псевдоконидии, относят культуру к грибам рода Candida.

- Снимают хорошо изолированные колонии со среды Сабуро и суспензируют культуру в 5-и пробирках, содержащих 2 мл жидкой среды Сабуро, содержащей 0,002% фенолового красного.

- Последовательно помещают в пробирки, содержащие культуру, диски с углеводами - в первую пробирку - диск, содержащий мальтозу, во вторую - сахарозу, третью - лактозу, четвертую - галактозу, пятую - трегалозу, инкубируют в термостате при 37°С 24 часа.

- Оценивают изменение цвета фенолового красного в пробирках. Цвет индикатора в пробирке, содержащей культуру с мальтозой, изменился на желтый (1).

Цвет индикатора в пробирке, содержащей культуру с сахарозой, изменился на желтый (1).

Цвет индикатора в пробирке, содержащей культуру с лактозой, не изменился (0).

Цвет индикатора в пробирке, содержащей культуру с галактозой, изменился на желтый (1).

Цвет индикатора в пробирке, содержащей культуру с трегалозой, изменился на желтый (1).

Определяют сумму значений, характеризующих изменение цвета фенолового красного в каждой из пяти пробирок. Сумма равна 4 (1+1+0+1+1=4), что свидетельствует о наличии у работницы кандидоза верхних дыхательных путей, вызванного Candida tropicalis.

Пример 4. Соколова В.А., 1961 г.р., профессия «рабочая» стаж работы - 14 лет. При обследовании на слизистой полости рта обнаружены творожистые серовато-белых налеты, после снятия которых образуются эрозии.

Материал из ротовой полости у работника собирают в стерильную пробирку натощак стерильным ватным тампоном со слизистой оболочки рта с поверхности эрозии.

- В пробирку с тампоном с исследуемым материалом с помощью стерильной пипетки наливают 1 мл жидкой среды Сабуро (перемешивают) - получают 1-е разведение. 0,5 мл полученной суспензии с помощью стерильной пипетки приливают в стерильную пробирку, добавляют 4,5 мл жидкой среды Сабуро (перемешивают), - получают 2-е разведение. Из полученной суспензии 2-го разведения берут 0,5 мл с помощью стерильной пипетки приливают в стерильную пробирку и добавляют 4,5 мл жидкой среды Сабуро (перемешивают) - получают 3-е разведение.

- В чашку с плотной средой Сабуро с помощью стерильной пипетки наливают 0,1 мл суспензии 3-его разведения, затем в другую чашку с плотной средой Сабуро той же пипеткой наливают 0,1 мл суспензии 2-го разведения, в 3-ю чашку с плотной средой Сабуро той же пипеткой наливают 0,1 мл суспензии 1-го разведения. Суспензию с материалом 3-его, затем отдельно 2-го, и затем отдельно 1-го разведения втирают штрихами по всей поверхности питательной среды одним стерильным шпателем. Чашки с засеянным материалом помещают в термостат и инкубируют при температуре 37°С - 24 часа. На 2-е сутки чашки просматривают.

- Подсчитывают количество микроорганизмов. В чашке с 1-м разведением - рост бактерий обнаружен (1 колоний), в чашке со 2-м разведением рост бактерий обнаружен (9 колоний), в чашке с 3-им разведением - рост бактерий не обнаружен. Количество дрожжеподобных грибов рода Candida соответствует 10*2 КОЕ/тампон. Культуру, выращенную в чашку со 2-м разведением, микроскопируют. Обнаруживают псевдогифы и псевдоконидии, относят культуру к грибам рода Candida.

- Отвивают культуры из чашки со 2-м разведением и делают разреженный посев на плотную среду Сабуро для получения роста изолированных колоний. Поверх посева накладывают покровное стекло, оставляют культуру на 24 часа при комнатной температуре. Обнаруживают рост микроорганизмов, после чего культуру микроскопируют. Обнаруживают псевдогифы и псевдоконидии, относят культуру к грибам рода Candida.

- Снимают хорошо изолированные колонии со среды Сабуро и суспензируют культуру в 5-и пробирках, содержащих 2 мл жидкой среды Сабуро, содержащей 0,002% фенолового красного.

- Последовательно помещают в пробирки, содержащие культуру, диски с углеводами - в первую пробирку - диск, содержащий мальтозу, во вторую - сахарозу, третью - лактозу, четвертую - галактозу, пятую - трегалозу, инкубируют в термостате при 37°С 24 часа.

- Оценивают изменение цвета фенолового красного в пробирках. Цвет индикатора в пробирке, содержащей культуру с мальтозой, не изменился (0).

Цвет индикатора в пробирке, содержащей культуру с сахарозой, не изменился (0).

Цвет индикатора в пробирке, содержащей культуру с лактозой, не изменился (0).

Цвет индикатора в пробирке, содержащей культуру с галактозой, не изменился (0).

Цвет индикатора в пробирке, содержащей культуру с трегалозой, не изменился (0).

Определяют сумму значений, характеризующих изменение цвета фенолового красного в каждой из пяти пробирок. Сумма равна 0 (0+0+0+0+0=0), что свидетельствует о наличии у работницы кандидоза верхних дыхательных путей, вызванного Candida kruzei.

Пример 5. Иванова Е.В., 1975 г.р., профессия «бухгалтер», стаж работы - 4 года. При обследовании на слизистой полости рта не обнаружены какие-либо изменения.

Материал из ротовой полости у работника собирают в стерильную пробирку натощак стерильным ватным тампоном со слизистой оболочки рта

- В пробирку с тампоном с исследуемым материалом с помощью стерильной пипетки наливают 1 мл жидкой среды Сабуро (перемешивают) - получают 1-е разведение. 0,5 мл полученной суспензии с помощью стерильной пипетки приливают в стерильную пробирку, добавляют 4,5 мл жидкой среды Сабуро (перемешивают), - получают 2-е разведение. Из полученной суспензии 2-го разведения также берут 0,5 мл с помощью стерильной пипетки приливают в стерильную пробирку и добавляют 4,5 мл жидкой среды Сабуро (перемешивают) - получают 3-е разведение.

- В чашку с плотной средой Сабуро с помощью стерильной пипетки наливают 0,1 мл суспензии 3-его разведения, затем в другую чашку с плотной средой Сабуро той же пипеткой наливают 0,1 мл суспензии 2-го разведения, в 3-ю чашку с плотной средой Сабуро той же пипеткбй наливают 0,1 мл суспензии 1-го разведения. Суспензию с материалом 3-его, затем отдельно 2-го, и затем отдельно 1-го разведения втирают штрихами по всей поверхности питательной среды одним стерильным шпателем. Чашки с засеянным материалом помещают в термостат и инкубируют при температуре 37°С 24 часа. На 2-е сутки чашки просматривают, выделенные культуры микроскопируют. При наличии псевдогифов и псевдоконидий относят культуру к грибам рода Candida. После чего подсчитывают количество колоний.

- Подсчитывают количество микроорганизмов. В чашке с 1-м разведением - рост бактерий не обнаружен, в чашке со 2-м разведением рост бактерий не обнаружен, в чашке с 3-им разведением - рост бактерий не обнаружен. Количество дрожжеподобных грибов рода Candida соответствует <10*1 КОЕ/тампон. Кандидоз верхних дыхательных путей не выявлен.

Пример 6. Исламова Л.Н., 1970 г.р., профессия «инженер», стаж работы - 8 лет. При обследовании на слизистой полости рта не обнаружены какие-либо изменения.

Материал из ротовой полости у работника собирают в стерильную пробирку натощак стерильным ватным тампоном со слизистой оболочки рта.

- В пробирку с тампоном с исследуемым материалом с помощью стерильной пипетки наливают 1 мл жидкой среды Сабуро (перемешивают) - получают 1-е разведение. 0,5 мл полученной суспензии с помощью стерильной пипетки приливают в стерильную пробирку, добавляют 4,5 мл жидкой среды Сабуро (перемешивают), - получают 2-е разведение. Из полученной суспензии 2-го разведения также берут 0,5 мл с помощью стерильной пипетки, приливают в стерильную пробирку и добавляют 4,5 мл жидкой среды Сабуро (перемешивают) - получают 3-е разведение.

- В чашку с плотной средой Сабуро с помощью стерильной пипетки наливают 0,1 мл суспензии 3-его разведения, затем в другую чашку с плотной средой Сабуро той же пипеткой наливают 0,1 мл суспензии 2-го разведения, в 3-ю чашку с плотной средой Сабуро той же пипеткой наливают 0,1 мл суспензии 1-го разведения. Суспензию с материалом 3-его, затем отдельно 2-го, и затем отдельно 1-го разведения втирают штрихами по всей поверхности питательной среды одним стерильным шпателем. Чашки с засеянным материалом помещают в термостат и инкубируют при температуре 37°С 24 часа. На 2-е сутки чашки просматривают, выделенные культуры микроскопируют. При наличии псевдогифов и псевдоконидий относят культуру к грибам рода Candida. После чего подсчитывают количество колоний.

- Подсчитывают количество микроорганизмов. В чашке с 1-м разведением - рост бактерий обнаружен (5 колоний), в чашке со 2-м разведением рост бактерий не обнаружен, в чашке с 3-им разведением - рост бактерий не обнаружен. Количество дрожжеподобных грибов рода Candida соответствует 10*1 КОЕ/тампон. Кандидоз верхних дыхательных путей не выявлен.

Способ диагностики кандидоза верхних дыхательных путей у работников агропромышленного комплекса, предусматривающий отбор исследуемого материала, посев исследуемого материала на среду Сабуро, инкубацию при 37°С в течение 24 ч, количественную оценку роста дрожжеподобных грибов рода Candida и при значении, превышающем 10·1 КОЕ/тампон, диагностику кандидоза верхних дыхательных путей, микроскопирование полученных колоний и выделение изолированных колоний дрожжеподобных грибов Candida, суспендирование выделенных колоний дрожжеподобных грибов Candida в пяти пробирках, содержащих жидкую среду Сабуро с индикатором феноловым красным, в которые добавляют диски с углеводами, причем в первую пробирку - диск, содержащий мальтозу, во вторую - сахарозу, третью - лактозу, четвертую - галактозу, пятую - трегалозу и инкубируют при 37°С в течение 24 ч, оценку изменения цвета индикатора, при этом изменение цвета индикатора на желтый принимают за единицу, отсутствие изменения цвета - за ноль, рассчитывают сумму значений, полученных при определении цвета индикатора в пяти пробирках, и при значении суммы, равном 0, - диагностируют кандидоз верхних дыхательных путей, вызванный Candida kruzei, 1 - кандидоз верхних дыхательных путей, вызванный Candida glabrata, 3 - кандидоз верхних дыхательных путей, вызванный Candida albicans, 4 - кандидоз верхних дыхательных путей, вызванный Candida tropicalis.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к биотехнологии и молочной промышленности. .

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу очистки вируса везикулярного стоматита (ВВС) из жидкости клеточной культуры. .

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при получении нового биопрепарата для очистки воды, почвы, промышленных стоков от устойчивых к разложению пестицидов, выбранных из хлорфеноксиуксусных кислот, таких как 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота (2,4-Д), трихлорфеноксиуксусная кислота (2,4,5-Т), хлорфеноксиуксусная кислота (ХФУК), феноксиуксусная кислота (ФУК), -2,4-дихлорфенокси- -пропионовой кислоты, 2-метил-4-хлорфенокси- -пропионовой кислоты, 2,4,5-трихлорфенокси- -пропионовой кислоты, 2,4-дихлорфенокси- -масляной кислоты, метил-[1-(бутиламино)карбонил]-1Н-бензимидазол-2-илкарбамата, 2,4-дихлорфенола, имидоклаприда, гексахлоргексана, а также фенола.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при получении нового биопрепарата для очистки воды, почвы, промышленных стоков от устойчивых к разложению пестицидов, выбранных из хлорфеноксиуксусных кислот, таких как 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота (2,4-Д), трихлорфеноксиуксусная кислота (2,4,5-Т), хлорфеноксиуксусная кислота (ХФУК), феноксиуксусная кислота (ФУК), -2,4-дихлорфенокси- -пропионовой кислоты, 2-метил-4-хлорфенокси- -пропионовой кислоты, 2,4,5-трихлорфенокси- -пропионовой кислоты, 2,4-дихлорфенокси- -масляной кислоты, метил-[1-(бутиламино)карбонил]-1Н-бензимидазол-2-илкарбамата, 2,4-дихлорфенола, имидоклаприда, гексахлоргексана, а также фенола.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при получении нового биопрепарата для очистки воды, почвы, промышленных стоков от устойчивых к разложению пестицидов, выбранных из хлорфеноксиуксусных кислот, таких как 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота (2,4-Д), трихлорфеноксиуксусная кислота (2,4,5-Т), хлорфеноксиуксусная кислота (ХФУК), феноксиуксусная кислота (ФУК), -2,4-дихлорфенокси- -пропионовой кислоты, 2-метил-4-хлорфенокси- -пропионовой кислоты, 2,4,5-трихлорфенокси- -пропионовой кислоты, 2,4-дихлорфенокси- -масляной кислоты, метил-[1-(бутиламино)карбонил]-1Н-бензимидазол-2-илкарбамата, 2,4-дихлорфенола, имидоклаприда, гексахлоргексана, а также фенола.
Изобретение относится к области микробиологии. .
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при выращивании дрожжей Saccharomyces cerevisiae. .
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для бактериологической диагностики инфекций, вызванных Moraxella (Branchamella) catarrhalis. .
Изобретение относится к микробиологии, в частности к питательным средам, и может быть использовано в научно-исследовательской и практической работе для бактериологической диагностики бактерий.

Изобретение относится к устройству и способам для мониторинга микробиологической активности в технологическом потоке воды. .

Изобретение относится к способу обнаружения и подсчета жизнеспособных микроорганизмов вида Legionella pneumophila в образце. .
Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. .

Изобретение относится к медицине, а конкретно микробиологии, и касается оценки вирулентности штаммов возбудителя мелиоидоза и сапа. .
Наверх