Технология определения трисомии хромосом методом секвенирования


 


Владельцы патента RU 2507269:

ЗАО "Геноаналитика" (RU)

Изобретение относится к области генетики, медицины и молекулярной биологии. Предложен способ определения трисомии хромосом плода, где из плазмы беременных женщин выделяют внеклеточную ДНК, подвергают её бисульфидной конвертации с последующей ПЦР и дальнейшему массовому параллельному секвенированию дифференциально метилированных участков; в качестве контроля дифференциально метилированных участков используют участки с различным уровнем метилирования у матери и плода, анализируют данные путем определения отношения количества чтений, полученных при секвенировании дифференциально метилированных участков ДНК на целевой и контрольной хромосомах, где в случае трисомии, при константном количестве чтений ДНК плода, картированных на дифференциально метилированных участках хромосом, будет наблюдаться количество чтений, картированных на целевую хромосому к количеству чтений на контрольных хромосомах, равное 3/2, тогда как в норме это отношение будет постоянным и равным 1. Способ может быть использован в медицине для пренатальной диагностики генетических болезней плода. 2 з.п. ф-лы, 1 табл.

 

Изобретение относится к области медицины, клинической молекулярной биологии, генетическим исследованиям, и может быть использовано в качестве пренатальной неинвазивной диагностики трисомии хромосом у плода в период первого триместра беременности.

Используемый на сегодняшний день метод пренатальной диагностики трисомии - УЗИ в сочетании с биохимическим анализом крови беременной (тройной тест с использованием альфафетопротеина АФП, хорионического гонадотропина ХГЧ и неконъюгированного эстриола НЭ, patent US 5324667,1992, patent US 5622176,1995) - позволяет выявить более 90% случаев заболевания. У 3-5% пациенток группы высокого риска может проводиться забор генетического материала плода посредством амниоцентеза или биопсии хориона. Эти методы являются инвазивными и связаны с 1% риском развития ятрогенного аборта. Альтернативой являются современные технологии, которые позволяют производить пренатальную диагностику трисомии неинвазивно для плода: анализируя следы генетического материала плода, находящиеся в крови матери. Внеклеточная ДНК (вкДНК) плода выявляется в крови матери начиная с первого месяца беременности и составляет в норме от 3 до 6% от общей вкДНК матери [1]. Посредством поиска специфических нуклеотидных последовательностей вкДНК успешно анализируется с целью определения пола будущего ребенка, а также его резус-фактора у резус-негативных женщин (patent US 6258540, 1999).

Аналогичный подход применен в нескольких зарубежных исследованиях для выявления анэуплоидий у плода. Клиническая эффективность и практическая применимость методики были оценены в недавнем многоцентровом исследовании, проведенном в Гонконге, Великобритании и Голландии [2]. Авторами был применен метод мультиплексного секвенирования вкДНК. Данный способ включает следующие стадии: выделение вкДНК, приготовление геномной библиотеки, секвенирование, определение количества 21 хромосомы. Недостатком данного способа является нормирование количества плодной ДНК по Y хромосоме, что допустимо только в случае беременности мальчиком (male pragnancy), а также избыточное количество информации, полученной в процессе нецелевого, тотального секвенирования вкДНК, что, в свою очередь, негативно скажется на стоимости и доступности данного анализа.

Аналогом предлагаемого изобретения является метод, предложенный компанией Sequenom (США, Сан Диего, Калифорния, US Patent No. 6258540). Это обширное исследование опубликовано в 2011 году [3], а в 2012 году метод неинвазивной пренатальной диагностики нашел свое коммерческое применение в виде теста «MaterniT21». Недостатком данного метода также является избыточное количество информации, получаемое в процессе нецелевого секвенирования, что требует дорогостоящего оборудования и негативно скажется на доступности данного анализа.

Близким к предлагаемому способу диагностики трисомии является метод, описанный в Евразийском патенте №014274, 2010 г. Недостатком данного метода является патентование именно принципа определения последовательностей ДНК, принадлежащих плоду в смеси вкДНК матери и плода, с помощью дифференциально метилированных участков без описания какого-либо способа количественного определения гомологичных хромосом.

Также близким к предлагаемому способу диагностики трисомии является метод, описанный в статье Papageorgiou с соавторами [4], где был предложен метод разделения ДНК матери и плода по статусу метелирования дифференциально метелированных участков. Недостатком данного способа является технология определения количества гомологичных хромосом с помощью количественной полимеразной цепной реакции, что значительно снижает чувствительность и точность метода.

В Российской Федерации в настоящий момент нет прямых или косвенных аналогов данной методики. Технической задачей настоящего изобретения является упрощение способа, повышение чувствительности и точности анализа описанных выше зарубежных аналогов.

Сущность способа заключается в количественном определении чтений ДНК при секвенировании участков целевой хромосомы плода во фракции внеклеточной ДНК матери в первом триместре беременности, а именно - определение количества гомологичных хромосом. Нормирование количества чтений ДНК целевой хромосомы осуществляется по количеству чтений ДНК на других аутосомах. Определение плодной ДНК в общей смеси внеклеточной ДНК осуществляется посредством измерения статуса метилирования участков ДНК в норме, метилированных в различной степени у плода и матери. Статус метилирования ДНК определяли после бисульфитной обработки ДНК, приводящей к конверсии неметилированных оснований цитозина в урацил, и сохранения защищенного метильной группой 5-метилцитозина с последующей ПЦР со специфичными к модифицированной последовательности праймерами и секвенирования. Для этого на целевой хромосоме были выбраны несколько известных участков ДНК с различной степенью метилирования у матери и плода. Данные участки дифференциального метилирования отличались гиперметилированием плодной ДНК по сравнению с материнской. Контролем служили дифференциально метилированные участки ДНК, расположенные на других аутосомах. По отношению к уровню метилирования материнской ДНК контрольные участки плодной ДНК были как гиперметилированны, так и гипометилированны. Использование для определения состояния трисомии внеклеточной ДНК, а также секвенирования ДНК небольшими, длиной до 300 нуклеотидов участками, дифференциально метилированных у плода и матери, позволяет значительно повысить достоверность и чувствительность метода пренатальной диагностики трисомии в период первого триместра беременности.

Определяющими отличительными признаками предлагаемого способа, по сравнению с зарубежными аналогами, являются:

1. Использование внеклеточной ДНК выделенной из плазмы матери.

2. Использование различий в статусе метилирования участков ДНК у матери и плода, что позволяет определить долю плодной ДНК в смеси плодной и материнской ДНК.

3. Целевое секвенирование небольших, менее 300 нуклеотидов, участков ДНК увеличивает чувствительность и точность анализа, а также предлагает меньшие требования к аппаратуре.

Технология определения трисомии осуществляется следующим способом.

У женщин, проводящих пренатальную генетическую диагностику в первый триместр беременности, была собрана кровь в ватуйнеры с ЭДТА, объемом 9 мл. Полученную кровь центрифугировали 10 мин 2000 об/мин для получения плазмы, богатой тромбоцитами.

Далее плазму повторно центрифугировали 15 мин 16000 об/мин для получения очищенной плазмы. Внеклеточную ДНК получали с использованием набора реактивов QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit (Qiagen), руководствуясь инструкцией к набору. Концентрацию полученной вкДНК определяли с помощью Qubit 2.0 Fluorometer (Life Technologies).

Полученную ДНК модифицировали обработкой бисульфитом натрия, при которой неметилированные цитозины превращаются в урацилы, а метелированные цитозины остаются неизменными. Бисульфитную модификацию проводили, используя набор реактивов EZ DNA Methylation Kit (Zymo Research).

Бисульфитно модифицированную ДНК секвенировали с использованием следующих праймеров на дифференциально метилированные участки (ДМУ):

При математическом анализе данных определяли количество чтений, полученных при секвенировании дифференциально метилированных участков ДНК, как на целевой хромосоме, так и на других аутосомах. Секвенирование участков ДНК после бисульфитной конвертации позволяет все полученные последовательности разделить на относящиеся к матери или к плоду. В случае трисомии, при константном количестве чтений ДНК плода, картированных на контрольные участки, будет наблюдаться большее количество чтений, картированных на участки целевой хромосомы. Т.е. в случае трисомии у плода отношение чтений, картированных на 21 хромосому, к количеству чтений на остальных аутосомах будет равно 3/2. Тогда как это отношение в норме у плода и матери будет постоянным и равно 1.

Источники информации

1. Lo YM, Corbetta N, Chamberlain PF, Rai V, Sargent IL, Redman CW, Wainscoat JS. Presence of fetal DNA in maternal plasma and serum. Lancet. 1997 Aug 16; 350(9076):485-7.

2. Eric Z. Chen, Rossa W.K.Chiu, Hao Sun, Ranjit Akolekar, K.C.Alien Chan, Tak Y.Leung, Peiyong Jiang, Yama W.L.Zheng, Fiona M.F.Lun, Lisa Y.S.Chan, Yongjie Jin, Attie T.J.I.Go, Elizabeth T.Lau, William W.K.To, Wing C.Leung, Rebecca Y.K.Tang, Sidney K.C.Au-Yeung, Helena Lam, Yu Y.Kung, Xiuqing Zhang, John M.G. van Vugt, Ryoko Minekawa, Mary H.Y.Tang, Jun Wang, Cees B.M.Oudejans, Tze K.Lau, Kypros H.Nicolaides, and Y.M.Dennis Lo. Non-invasive prenatal assessment of trisomy 21 by multiplexed maternal plasma DNA sequencing: large scale validity study. PLoS One. 2011; 6(7): e21791.

3. Palomaki GE, Kloza EM, Lambert-Messerlian GM, Haddow JE, Neveux LM, Ehrich M, van den Boom D, Bombard AT, Deciu C, Grody WW, Nelson SF, Canick JA. DNA sequencing of maternal plasma to detect Down syndrome: an international clinical validation study. Genet Med. 2011 Nov; 13(11):913-20.

4. Papageorgiou EA, Fiegler H, Rakyan V, Beck S, Hulten M, Lamnissou K, Carter NP, Patsalis PC. Sites of differential DNA methylation between placenta and peripheral blood: molecular markers for noninvasive prenatal diagnosis of aneuploidies. Am J Pathol. 2009. 174(5):1609-18.

1. Способ определения трисомии хромосом плода, отличающийся тем, что из плазмы беременных женщин выделяют внеклеточную ДНК, подвергают её бисульфидной конвертации с последующей ПЦР и дальнейшему массовому параллельному секвенированию дифференциально метилированных участков; в качестве контроля дифференциально метилированных участков используют участки с различным уровнем метилирования у матери и плода, анализируют данные путем определения отношения количества чтений, полученных при секвенировании дифференциально метилированных участков ДНК на целевой и контрольной хромосомах, где в случае трисомии, при константном количестве чтений ДНК плода, картированных на дифференциально метилированных участках хромосом, будет наблюдаться количество чтений, картированных на целевую хромосому, к количеству чтений на контрольных хромосомах, равное 3/2, тогда как в норме это отношение будет постоянным и равным 1.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве контрольных дифференциально метилированных участков используются участки с различным уровнем метилирования у матери и плода, расположенные на аутосомах.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве целевых дифференциально метилированных участков используются участки с различным уровнем метилирования у матери и плода и расположенные на целевой хромосоме, отличной от контрольных хромосом.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины, в частности молекулярной биологии и онкологии, и касается системы маркеров, представляющую собой группу генов микроРНК: miR-129-2, miR-125b1, miR-137 и miR-375, для диагностики немелкоклеточного рака легкого, включая плоскоклеточный рак и аденокарциному.

Изобретение относится к области лабораторной диагностики, медицинской вирусологии, молекулярной биологии и эпидемиологии. Изобретение предназначено для выявления и идентификации в клинических образцах и элюатах, полученных в результате концентрирования из воды, одиннадцати групп кишечных вирусов (энтеровирусов (ЭВ), полиовирусов (ПВ), ротавирусов А и С (РВА и РВС соответственно), аденовирусов (АДВ), норовирусов (НВ), саповирусов (СВ), вирусов гепатита А и Е (ВГА и ВГЕ соответственно), астровирусов (АВ), ортореовирусов (ОРВ) в присутствии внутреннего положительного контроля (ВПК) посредством мультиплексной ПЦР с детекцией в режиме реального времени.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу и диагностическому набору для диагностики коклюша и определения авирулентных мутантов возбудителя коклюша.

Изобретение относится к способу получения новых соединений-диад (I) с двумя разными, не сопряженными друг с другом, хромофорными фрагментами, содержащими азогруппы и остатки ферроцена, и их использованию для тушения флуоресценции флуорофоров. где Fc - ферроценил; R1 - Н или Fc; R2 - H или орто- или пара-гидрокси-; R3 - орто- или мета-, или пара-нитро-, или орто- или мета-, или пара-нитрофенилазо-, или пара-N,N-диметиламино-, или пара-карбокси-; L - группа пара-карбамоилвинилиденацетофенона или пара-карбоксамидовинилиденацетофенона, или пара-N-(2-карбамоилэтил)-карбоксамидовинилиденацетофенона, или пара-(4-[метиламино]бутокси)-винилиденацетофенона, или N,N-ди[4{1-(пара-винилиденацетофениламино)-метил-1,2,3-триазолил}бутил]аминогруппа.

Изобретение относится к области молекулярной биологии. Предложены способ, композиция и применение полярного апротонного растворителя с циклической основной структурой для гибридизации последовательностей нуклеиновых кислот.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ выявления мутации c.-53-2A>G в гене SLC26A5, сопровождающийся развитием несиндромальной аутосомно-рецессивной глухоты.

Изобретение относится к области биотехнологии. Раскрыты способы, композиции и наборы для диагностики остеоартрита у животных семейства кошачьих.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генетической инженерии, и может быть использовано для выявления генетического материала (РНК) коронавируса человека, ассоциированного с тяжелым острым респираторным синдромом (ТОРС).

Изобретение относится к области медицины, в частности к применению молекулярных маркеров ВПЧ ВКР и их качественных и количественных характеристик для прогнозирования течения гиперпролиферативных заболеваний ШМ.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и генной инженерии. Предложен способ выявления воспалительного заболевания кишечника млекопитающего посредством детекции повышенной экспрессии генов LY6 в желудочно-кишечных тканях или клетках по сравнению с контролем.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа видовой идентификации лактобацилл L.casei/paracasei, L.fermentum, L.plantarum, L.rhamnosus. Предлагаемый способ включает постановку реакции ПЦР с видоспецифическими праймерами, причем конструируют праймеры, специфичные к первому гену оперона F1F0 АТФ синтазы (гену субъединицы а) и предшествующего ему гена урацилфосфорибозилтрансферазы для L.casei/paracasei и L.rhamnosus и гена урацилтранспортного белка для L.plantarum и L. fermentum. Представленное решение может быть использовано для идентификации видов лактобацилл в различных образцах микрофлоры человека и животных, в фармацевтических препаратах и в продуктах питания. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл.
Изобретение относится к молекулярной биологии и генетике клетки. Предложен способ, включающий этапы предварительной экстракции геномной ДНК, выделения специфической фракции однонитевых G-оверхенгов теломерной ДНК и последующей амплификации их минусовой цепи с дуплекс-специфическим анализом, причем этапы амплификации включают модификацию 3'-концов теломерных оверхенгов с помощью терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазы и осуществляются с использованием набора праймеров SEQ ID NO: 1-5. Дуплекс-специфический анализ основан на гибридизации минусовых цепей оверхенгов с набором специфических флуоресцентно-меченных зондов SEQ ID NO: 6-11, соответствующих шести возможным вариантам нуклеотидных окончаний G-цепи теломерной ДНК человека. Степень разгорания зондов в присутствии фермента дуплекс-специфической нуклеазы служит критерием присутствия соответствующего варианта нуклеотидного окончания и мерой его количественного содержания. Полученные профили терминальных нуклеотидов G-цепи теломерной ДНК служат пролиферативными маркерами, указывающими на степень активации деления клетки и определяющими временную продолжительность клеточного цикла. Изобретение является новой разновидностью ДНК-диагностики, предназначено для выявления изменений нуклеотидных окончаний ДНК теломерных областей хромосом, происходящих в ходе клеточного цикла, и может быть использовано в медицине для диагностики и лечения онкологических заболеваний, в иммунологии, трансплантологии, косметологии, дерматологии, геронтологии, клеточной биотехнологии и других областях, заинтересованных в оценке пролиферативного статуса клетки и методах его направленного регулирования. 3 н. п. и 12 з. п. ф-лы, 9 ил., 8 табл., 5 пр.

Изобретение относится к молекулярной генетике. Способ включает: получение кДНК EML4-ALK с помощью полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) на матрице РНК гена EML4-ALK с использованием специфичных праймеров; амплификацию фрагментов гена EML4-ALK методом мультиплексной ПЦР на матрице кДНК, полученной на первом этапе ОТ-ПЦР, с помощью набора высокоспецифичных праймеров; получение флуоресцентно-меченого ПЦР-продукта на втором этапе ОТ-ПЦР; создание биочипа для анализа транслокаций EML4-ALK, содержащего набор иммобилизованных зондов; гибридизацию флуоресцентно-меченого ПЦР-продукта с зондами в гелевых ячейках на пластиковой подложке биочипа; регистрацию и интерпретацию результатов гибридизации. Способ предусматривает использование технологии ДНК-биочипов, сконструированных с целью определения 6 вариантов транслокаций EML4-ALK (V2, V3, V5, V4, V7, V1). Способ обладает высокой чувствительностью и специфичностью, универсален, его осуществление возможно с операционным материалом и опухолевой тканью, заключенной в парафиновые блоки; регистрацию результатов производят однократно в конце исследования, способ занимает менее 24 часов. 2 з.п. ф-лы, , 3 табл., 3 ил.

Изобретение относится к паразитологии и касается способа видовой ДНК-дифференциации гельминтов - возбудителей церкариального дерматита человека. Дифференциацию четырех видов Trichobilharzia: Т. szidati, T.regenti, T.franki и T.sp.var.narochanica осуществляют путем амплификации участков последовательности ядерной рибосомальной ДНК (рДНК) в образцах половозрелых гельминтов, их личиночной стадии и/или на рДНК инфицированных указанными гельминтами пресноводных моллюсков из семейства Lymnaeidae с помощью ПЦР и четырех олигонуклотидных праймеров следующего состава: F: 5'-CTTTCCATCTATCACGATGCACT-3' R1: 5'-ATGATAATGTGCATAACACACC-3' R2: 5'-GCCGTTTATTTATATGTATGTG-3' R3: 5'-CAAGCCGTTTATTWATATATAACGG-3'. Полученные амплификационные продукты визуализируют и дифференцируют и идентифицируют по размеру (длине), причем один амплификационный фрагмент размером 255 п.н. характерен для вида T.regenti, один фрагмент длиной 316 п.н. характерен для вида Т.szidati, два фрагмента размером 255 и 316 п.н. характерны для вида T.sp.var.narochanica, а амплификационный фрагмент размером 258 п.н. детектируется только у вида T.franki. Представленный способ позволяет одновременно детектировать и проводить видовую идентификацию четырех видов птичьих шистосом рода Trichobilharzia на разных стадиях жизни. 2 ил., 2 табл., 2 пр.

Группа изобретений относится к области молекулярной биологии и электрохимии. По первому варианту способ осуществляют путем регистрации циклических вольтамперограмм рабочего электрода, модифицированного углеродными нанотрубками с нековалентно иммобилизованным на их поверхности олигонуклеотидным зондом, до и после внесения в исследуемый раствор образца нуклеиновой кислоты и по изменению емкостной характеристики делают вывод о наличии или отсутствии в образце участка, комплементарного олигонуклеотидному зонду. Второй вариант способа отличается тем, что нековалентную иммобилизацию олигонуклеотидного зонда на поверхность нанотрубок осуществляют посредством якорной группы, предварительно введенной в зонд. В этом варианте регистрируют не только изменение площади вольтамперограмм от цикла к циклу, но и появление специфического пика на циклической вольтамперограмме, связанного с фиксацией детектируемой НК в комплексе с модифицированным зондом. Интенсивность пика на циклической вольтамперограмме пропорциональна концентрации определяемой НК, что позволяет проводить количественную оценку. Устройство для реализации способа детекции специфических последовательностей нуклеиновых кислот представляет собой электрохимический, анализатор, который состоит из трехэлектродной электрохимической ячейки, электроды которой соединены с регистрирующим устройством, а рабочий электрод выполнен из кремниевой подложки, модифицированной вертикально ориентированными углеродными нанотрубками с иммобилизированным олигонуклеотидным зондом, комплементарным определяемой НК. 3 н. и 5 з.п. ф-лы, 5 ил., 4 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ диагностики чувствительности М. tuberculosis (МБТ) к инъекционным противотуберкулезным препаратам резервного ряда. Способ включает этап выделения ДНК, амплификацию исследуемых участков ДНК методом полимеразной цепной реакции и анализ конформационного полиморфизма одноцепочечных фрагментов (SSCP). Амплифицируют участок гена rrs в 50 мкл реакционной смеси с внесением 5 мкл образца. Амплифицируют промоторную область гена eis в 30 мкл реакционной смеси, содержащей прямой 5'CGGAGCCGTCGGGGTATGC и обратный 5'GCCGCGGCCAGTAGGAACA праймеры и 3 мкл образца по программе амплификации: 1-ый этап - 95°- 4 мин; 2-ой этап - 95° - 20 сек, 59° - 30 сек, 72° - 20 сек (30 циклов); 3-ий этап: 72° - 4 мин; 10° - хранение. Разделение продуктов амплификации в соотношении 4 мкл образца и 6 мкл денатурирующего красителя проводят электрофорезом в 8% полиакриламидном геле с 5% глицерином при напряжении 400 вольт в течение 5 часов при 8°C. Окраску геля проводят с помощью азотнокислого серебра. Предложенное изобретение позволяет диагностировать чувствительность М. tuberculosis (МБТ) к инъекционным противотуберкулезным препаратам резервного ряда с высокой точностью. 2 ил.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и может быть использовано в диагностических исследованиях, направленных на выявление возбудителей острых кишечных инфекций (ОКИ). Предложен набор дифференцирующих олигонуклеотидов (зондов), обеспечивающий возможность определения в биологическом образце ДНК патогенных микроорганизмов, вызывающих ОКИ, и их видовой идентификации, где указанные микроорганизмы относятся к группе, включающей Shigella spp. и Enteroinvasive E.coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter jejuni, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae. Описано конструирование биочипа с иммобилизованным на нем набором зондов по изобретению, предназначенного для проведения экспресс-анализа возбудителей ОКИ в клинических образцах и материале, полученном из объектов окружающей среды. 2 н.п. ф-лы, 4 табл., 2 ил., 5 пр.

Изобретение относится к области онкологии и молекулярной биологии. Предложен способ определения чувствительности клеток немелкоклеточного рака легких к действию препаратов, реактивирующих р53 белок, включающий выделение РНК из образцов, синтез кДНК генов CDKN1A, BTG2 и E2F1 методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с детекцией результатов в режиме реального времени с последующим определением соотношения количества кДНК гена E2F1 к количеству кДНК гена CDKN1A или гена BTG2, где при величине соотношения E2F1/CDKN1A>3 или E2Fl/BTG2>1,5 считают клетки немелкоклеточного рака легких чувствительными к препаратам, реактивирующим белок р53. Изобретение может быть использовано при лечении онкологических заболеваний. 3 ил., 3 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способам прогнозирования течения рака, и может быть использовано в медицине. Способ определения прогноза для пациента, страдающего раком NSCLC, включает определение уровней экспрессии ChoK бета или ChoK бета и ChoK альфа в образце от указанного пациента. При этом пониженные уровни ChoK бета относительно уровней в эталонном образце свидетельствуют о том, что пациент демонстрирует плохой прогноз. Пониженные уровни ChoK альфа и высокие уровни ChoK бета относительно уровней экспрессии указанных белков в эталонном образце свидетельствуют о том, что пациент демонстрирует хороший прогноз. Изобретение позволяет прогнозировать вероятность выживания, например выживания без рецидивов, пациента с NSCLC. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 16 ил., 2 табл., 3 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии. Предложенная тест-система для обнаружения РНК вируса блютанга включает серогруппспецифичные праймеры и ДНК-зонд, комплементарные участкам консервативного 10-го сегмента, имеющие следующий нуклеотидный состав (5' - 3'): BTV/10/qf - ACKggTgCWACgCAAACACA; BTV/10/z - FAM - AARgCTgCATTCgCATCgTACGC - BHQ1; BTV/10/qr - ACRTCATCACgAAACgCTTC. Данная тест-система обладает высокой чувствительностью, специфичностью и быстротой при проведении анализа и позволяет с помощью метода ОТ-ПЦР в режиме реального времени обнаруживать РНК вируса блютанга 25 серотипов. 2 табл., 1 пр.
Наверх