Способ дифференциальной диагностики рака предстательной железы


 


Владельцы патента RU 2521389:

Водолажский Дмитрий Игоревич (RU)
Коган Михаил Иосифович (RU)
Чибичян Микаел Бедросович (RU)

Изобретение относится к области медицины и предназначено для дифференциальной диагностики рака предстательной железы. В клетках периферической крови пациента методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени измеряют экспрессию генов Тр53, GSTP1 и IL10 относительно референтного гена β-актина (АСТВ). При величинах относительной экспрессии генов Тр53 больше 3,68×10-6, GSTP1 больше 3,73×10-3 и IL10 меньше величины 4,32×10-5 диагностируют рак предстательной железы. При величинах относительной экспрессии генов Тр53 меньше 3,68×10-6, GSTP1 меньше 3,73×10-3 и IL10 больше 4,32×10-5 диагностируют доброкачественную гиперплазию предстательной железы. Изобретение позволяет эффективно диагностировать рак предстательной железы и доброкачественную гиперплазию предстательной железы в том числе при низких значениях простатоспецифического антигена, что позволяет начать своевременную и адекватную терапию. 5 табл., 4 пр.

 

Изобретение относится к области медицины и найдет применение в урологии, в частности при дифференциальной диагностике рака предстательной железы и доброкачественной гиперплазии предстательной железы.

Рак предстательной железы относится к одному из наиболее распространенных онкологических заболеваний мужчин среднего и пожилого возрастов в развитых странах. По количеству летальных исходов среди онкологических заболеваний рак предстательной железы /РПЖ/ уступает лишь раку легких [Jemal A., Siegel R. et al. Cancer statistics. CA Cancer J Clin. 2010 Sep-Oct; 60(5):277-300]. Осложненное течение заболевания и летальность при РПЖ происходят вследствие метастазирования [Plate K. From angiogenesis to lymphangiogenesis. Nature Medicine 2001; 7:151-152.]. До настоящего времени не обнаружены маркеры, дифференцирующие «малый» РПЖ от доброкачественной гиперплазии предстательной железы /ДГПЖ/. Такие диагностические возможности чрезвычайно актуальны: согласно статистике, в течение пяти лет после диагностирования и своевременного лечения локального РПЖ, выживает 88% пациентов, тогда как доля выживших пациентов с болезнью, диагностированной в метастатическую фазу, составляет только 29% [Coffey D. Prostate cancer. An overview of an increasing dilemma. Cancer 1993. 71(3):880-886.]. Использование простатоспецифического антигена /ПСА/ сыворотки крови для диагностики РПЖ до сих пор является «золотым стандартом». Однако высокий уровень ложноотрицательных и ложноположительных результатов при его использовании, широкое разнообразие изоформ ПСА являются трудной проблемой диагностики РПЖ, требующей решения [Stamey Т., Johnstone I. et al. Preoperative serum prostate specific antigen levels between 2 and 22 ng/ml correlate poorly with post-radical prostatectomy cancer morphology: prostate specific antigen cure rates appear constant between 2 and 9 ng/ml. J. Urol. 2002;167: 103-111; Carling P., Elliott D et al. Targeting alternative splicing in prostate oncology. Discov Med. 2009; 8(41):74-80.]. В настоящее время наблюдается рост количества публикаций с использованием подхода полимеразная цепная реакция в реальном времени /РВ-ПЦР/ для выявления предполагаемых онкомаркеров предстательной железы.

Скрининг пациентов на содержание ПСА в плазме периферической крови остается «золотым стандартом» при диагностике РПЖ. Однако применение этого маркера ограничивается его малой специфичностью, особенно, это касается дифференцировки ДГПЖ и ранних стадий РПЖ.

В качестве объекта исследования для диагностики онкологических заболеваний в последнее время все чаще используется мононуклеарная фракция клеток (МНФ) периферической крови. МНФ включает в себя лимфоциты, моноциты, макрофаги, базофилы и дендритные клетки. Эти клетки являются одними из важнейших компонентов иммунной системы в борьбе с инфекциями и онкотрансформированными клетками. [Delves P. et al. Roitt′s Essential Immunology, 11 th Ed.] МНФ клеток периферической крови предоставляет для анализа легкодоступный субстрат иммунной системы для поиска новых биомаркеров в качестве биосенсоров для диагностики различных патологических процессов [Novelli G., et al. May-Aug Genetic tests and genomic biomarkers: regulation, qualification and validation. Clin Cases Miner Bone Metab. 2008; 5(2):149-154].

Исследование паттерна экспрессии генетических локусов МИФ клеток периферической крови эффективно используется в отдельных медицинских центрах для постановки диагноза и оценки эффективности лечебных мероприятий у больных раком предстательной железы. В частности, в работе Komatsu et al. [Komatsu N., Matsueda S. et al. Gene expression profiles in peripheral blood as a biomarker in cancer patients receiving peptide vaccination. Cancer 2012 Jun 15; 118(12):3208-3221] анализ экспрессии генетических локусов в МНФ периферической крови, позволил эффективно (с точностью 92%) разделить группы больных РПЖ с разными сроками выживаемости.

В работе Novelli et al. [Novelli G., et al. Genetic tests and genomic biomarkers: regulation, qualification and validation. Clin Cases Miner Bone Metab. 2008 May-Aug; 5(2): 149-154.] был разработан олиго-чип низкой плотности ("AndroChip 2") для анализа 190 генетических локусов, отобранных на основе их доказанной или возможной роли в канцерогенезе предстательной железы по механизму андрогенной сигнализации.

В качестве маркеров циркулирующих в крови малигнизированных клеток предстательной железы в некоторых работах предлагается использовать уровень транскрипционной активности генетического локуса ПСА и простатспецифичного мембранного антигена (ПСМА) [Grasso Y. et al.. Combined Nested RT-PCR assay for prostate-specific antigen and prostate-specific membrane antigen in prostate cancer patients: correlation with pathological stage. Cancer Research 1998; 58:1456-1459], антигена эпителиальных клеток CK-19 [Machado M. et al. CK-19 expression by RT-PCR in the peripheral blood of prostate cancer patients. Journal of Clinical Oncology 2005; 23:248-252], CD44-рецептора, отвечающего за адгезию клеток к элементам внеклеточного матрикса [Paradis V. et al. De novo expression of CD44 in prostate carcinoma is correlated with systemic dissemination of prostate cancer. Clin Pathol 1998; 51: 798-802], ткане- и онкоспецифичных генов p503s, p504s и p510s [Xu J. et al.. Identification of differentially expressed genes in human prostate cancer using subtraction and microarray. Can. Res 2000; 60:1677-1682] и т.д. В качестве потенциальных онкомаркеров объектом исследований часто становятся супрессоры опухолей и регуляторы клеточного цикла, изменение транскрипционной активности которых может отражать прогресс онкотрансформации.

Однако полученные результаты не всегда подтверждаются в повторных исследованиях.

Известен способ контроля за лечением опухолей предстательной железы по патенту РФ№2079132, (10.05.1997), включающий предварительное выявление заболевания путем определения содержания ДНК в опухолевых клетках биологического материала, отличающийся тем, что в качестве биологического материала используют утреннюю мочу до и после пальцевого обследования предстательной железы и при обнаружении в ней после пальцевого обследования увеличения количества клеток с содержанием ДНК больше, чем тетраплоидное и/или более 5 7 количества клеток с содержанием ДНК больше, чем у нормальных диплоидных, по сравнению с пробой мочи до пальцевого обследования, судят о наличии в ней опухолевых клеток из предстательной железы, а контроль за последующим лечением осуществляют по изменению этих показателей, при этом по уменьшению их значений судят о правильности выбранной тактики лечения.

Недостаток способа: состоит в ускорении выявления опухолевых клеток и снижении травматичности процедуры, но применим только в онкологии. Как указывают сами авторы, сравнительный анализ процентного содержания клеток, находящихся в G0+G1 фазах цикла и элементов с плоидностью менее 20, показывает, что по этим показателям группы больных, страдающих аденомами и раком предстательной железы, мало отличаются друг от друга, хотя и отличаются от контроля (р<0,05).

Известен способ дифференциальной диагностики доброкачественной гиперплазии и рака предстательной железы по патенту РФ №2151397, (20.06.2000). В цельной крови методом проточной горизонтальной хроматографии определяют уровень фосфатидилинозит-3-фосфатов (ФИФ 1). И при значениях 0,1-0,08 нмоль фосфора ФИФ 1 на 1 мг белка диагностируют доброкачественную гиперплазию предстательной железы, а при значении 0,04-0,01 нмоль фосфора ФИФ 1 на 1 мг белка - рак предстательной железы.

Известен способ дифференциальной диагностики гиперплазии, дисплазии и рака предстательной железы по патенту РФ №2156977, (27.09.2000). Проводят микротелефотометрическое исследование срезов биоптатов, окрашенных по Фельгену, для определения содержания дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) в ядрах интерфазных клеток популяции ростковых зон и вычисляют индекс ее накопления, и при его значениях от 2,2 до 3,7 диагностируют гиперплазию, от 3,8 до 6,5 - дисплазию, а от 6,6 и выше - разные формы рака предстательной железы.

Недостатки: перечисленные методы оказались недостаточно специфичными, трудно воспроизводимыми и не нашли до настоящего времени клинического применения (Злокачественные новообразования в России в 2002 году. Заболеваемость и смертность. / Ред. В.И. Чиссов, В.В. Старинский, Г.В. Петрова, М., Из-во "МЕДпресс-информ". 2004. С.5-22).

Известен способ цитометрической диагностики опухолевых заболеваний предстательной железы по патенту РФ №2322676, (20.04.2008). Для осуществления способа клеточные отпечатки биоптатов предстательной железы фиксируют спиртом и окрашивают 50% раствором AgNO3. Далее проводят компьютерную морфометрию ядерно-ядрышкового аппарата и выделяют 6 морфотипов ядер, имеющих следующие характеристки по средним значениям площадей: 1-й морфотип - ядра 34,43 мкм2, ядрышки 1,43 мкм 2; 2-й морфотип - ядра 45,71 мкм2, ядрышки 2,78 мкм2; 3-й морфотип - ядра 51,64 мкм2, ядрышки 4,60 мкм 2; 4-й морфотип - ядра 62,70 мкм2, ядрышки 6,96 мкм2; 5-й морфотип - ядра 94,91 мкм2, ядрышки 11,07 мкм 2, 6-й морфотип - ядра 111,46 мкм2, ядрышки 16,35 мкм2. При этом при выявлении 1-3 морфотипов диагностируют доброкачественную гиперплазию, 1-4 морфотипов - интраэпителиальную неоплазию, 1-6 морфотипов - рак предстательной железы.

К недостаткам данного метода, как и для всех микроскопических методов, можно отнести относительно высокий фактор субъективности оценки наблюдаемой картины. Биопсия простаты, особенно на ранних стадиях развития РПЖ зачастую не имеет возможности дать объективную гистологическую картину опухолевого процесса простаты, и требует повторных болезненных процедур.

Известен маркер рака предстательной железы по патенту РФ №2360924, (10.07.2009), который состоит из белка молекулярной массы 28,5 кДа и видимой изоэлектрической точкой 6,92, выделяемого из опухолевой ткани предстательной железы. Выделенный маркерный белок включает пептиды MPADLPSLAADFVESK; DVFLGMFLYEYAR; VFDEFKPLVEEPQNLIK; FQNALLVR; VPQVSTPTLVEVSR и AVMDDFAAFVEKCCK.

Недостатки - предлагаемый тест сходен с тестом на простатспецифичный антиген и поэтому имеет те же недостатки, в частности малую специфичность.

Известен способ диагностики онкологических заболеваний предстательной железы по патенту РФ№2348042, (27.02.2009). Способ включает сочетанное определение активности сериновой протеиназы-хепсина и метилированного гена глютатион-S-трансферазы класса PI (GSTP1) в опухолевых клетках, обнаруживаемых в моче пациентов, и при значении активности хепсина выше, чем 42% по отношению к контролю, и выявлении метилированного гена GSTP1 диагностируют онкологическое заболевание.

Известен способ диагностики рака предстательной железы на основе детекции метилирования гена GSTP1 в биологических жидкостях и тканях человека, в том числе моче пациентов (патент США №7,049,062).

Недостатками такого определения являются традиционно низкая прогностическая ценность при использовании одного маркера, а также отсутствие первичного материала (объектов анализа) - т.е. опухолевых клеток предстательной железы.

Описан анализ аномального метилирования трех генов (GSTP1, RASSF1A, RARβ 2), вовлеченных в канцерогенез предстательной железы, показана значительная частота этого явления. Предполагается, что эти гены могут быть использованы для ранней диагностики и определения прогноза развития рака предстательной железы (Perry AS, Foley R, Woodson K, Lawler M. The emerging roles of DNA methylation in the clinical management of prostate cancer. Endocr Relat Cancer. 2006 Jun; 13(2):357-77).

Однако авторы не анализируют метилирование других генов, используют в своем анализе метилспецифическую полимеразную реакцию (МС-ПЦР). Кроме того, анализ проводился на опухолевом и биопсийном материале (что может приводить к занижению частот метилирования, если не использована микродиссекция опухолевых клеток).

Известен способ ранней ДНК-диагностики рака предстательной железы по патенту РФ №2405837, (10.12.2010). Исследуют сыворотку крови на предмет метилирования промоторных районов генов GSTP, р16 и N33 методом метил-чувствительной ПЦР. И при обнаружении аномального метилирования хотя бы двух из указанных генов, делают вывод о наличии заболевания.

К недостаткам можно отнести относительно небольшие величины содержания внеклеточной ДНК в сыворотке крови, с вытекающими отсюда проблемами анализа при малом количестве ДНК и большие затраты времени при выполнении диагностики. На сегодняшний день сертифицированных тест-систем и способов ДНК-диагностики такого типа не существует.

Известен способ дифференциальной диагностики морфологических форм рака предстательной железы по патенту РФ №2455643, (10.07.2012), включающий исследование образца сыворотки крови, обработку полученных данных и диагностику заболеваний, где перед исследованием в образец сыворотки крови вводят химические реагенты, а именно: фосфатный буфер с рН 7,4-7,5, раствор сульфата железа (FeSO4) и перекись водорода, световой поток, выделяющийся в результате протекания химической реакции, регистрируют и измеряют величину максимальной интенсивности свечения (Imax) и светосумму (S), характеризующую свечение в течение первых 30 секунд, и при значении максимальной интенсивности свечения (Imax) выше 3,2 мВ и светосуммы (S) выше 24,9 мВ диагностируют злокачественную опухоль предстательной железы как опухоль с инфильтративным ростом, а при значении Imax, равном или меньшем 3,2 мВ, и S, равном или меньшем 24,9 мВ, диагностируют злокачественную опухоль предстательной железы без инфильтративного роста.

Недостатком данного метода является потенциально низкая специфичность изменения хемилюминесценции сыворотки крови - существует много литературных данных изменения данного показателя не только при раке, но и при любых воспалительных процессах.

Прототипом изобретения нами выбран патент США №7,049,062, адаптированный к измерению величины относительной экспрессии генетических локусов МНФ периферической крови человека методами обратной транскрипции с последующим количественным измерением методом Real-Time.

Недостатками данного метода с нашей точки зрения являлись его относительная низкая специфичность и чувствительность к дифференцировке различных фаз развития рака предстательной железы.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа дифференциальной диагностики ДГПЖ и рака предстательной железы, обладающего высокой специфичностью, экономически выгодного и простого в применении.

Поставленная задача решается предлагаемым способом дифференциальной диагностики рака предстательной железы: что в клетках периферической крови пациента методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени измеряют экспрессию генов Тр53, GSTP1 и IL10 относительно референтного гена β-актина (АСТВ) в клетках мононуклеарной фракции периферической крови и при величинах относительной экспрессии генов Тр53 больше 3,68×10-6, GSTP1 больше 3,73×10-3 и IL10 меньше величины 4,32×10-5 диагностируют рак предстательной железы, если величина относительной экспрессии гена Тр53 меньше 3,68×10-6, GSTP1 меньше 3,73×10-3 и IL10 больше 4,32×10-5 - диагностируют доброкачественную гиперплазию предстательной железы. Использование показателей отношения транскрипционной активности генетического локуса BCL2 по сравнению с локусом ВАХ (отношение BCL2/BAX) в клетках МНФ периферической крови (способ - прототип) позволяет эффективно дифференцировать локальный и местнораспространенный РПЖ между собой при пороговом уровне при РПЖ Т3-4 менее единицы.

Новым техническим результатом предлагаемого способа является то, что он позволяет с высокой точностью осуществлять дифференциальную диагностику раннего рака предстательной железы и ДГПЖ, при его экономичности и простоте, значительно снизить количество неоправданных биопсий предстательной железы.

Данный технический результат обусловлен тем, что найдены специфические для рака простаты биомаркеры, проявляющиеся в изменении транскрипционной активности генетических локусов в мононуклеарной фракции периферической крови. В качестве целевых кандидатных локусов были выбраны гены, играющие критическую роль в регулировании клеточного цикла, апоптоза, ангиогинеза и окислительного фосфорилирования митохондриальной локализации. [Водолажский Д.И., Тимошкина Н.Н. Молекулярно-генетические маркеры рака предстательной железы. Вестник Южного научного центра 2009; 5 (1): 36-52.]

Предлагаемый нами подход позволяет объективно и с высокой специфичностью с использованием образцов периферической крови дифференцировать различный стадии патологических процессов в тканях предстательной железы. Метод доступен и воспроизводим.

Многочисленные клинические данные указывают на то, что лейкоциты периферической крови человека активно участвуют в процессах онкогенеза. Иммунный статус здорового индивида отличается от патологического статуса, который допускает существование злокачественных опухолей [Finke J. et al. Where have all the Т cells gone? Mechanisms of immune evasion by tumors. Immunol 1999 Apr; 20(4):158-60]. Происходит накопление хронически активированных клеток-супрессоров миелоидного происхождения и регуляторных Т-клеток, находящихся в кровотоке, лимфоидных органах и неопластических тканях [Curiel, Т. et al. Specific recruitment of regulatory T cells in ovarian carcinoma fosters immune privilege and predicts reduced survival. Nature Med 2004; 10:942-994; Serafini, P. et al. Derangement of immune responses by myeloid suppressor cells. Cancer Immunol. Immunother 2004; 53:64-72.]. Лейкоциты миелоидного происхождения могут способствовать развитию опухолей, являясь источником факторов роста сосудов и других стимуляторов клеточного роста [Sparmann, A., Bar-Sagi, D. Ras-induced interleukin-8 expression plays a critical role in tumor growth and angiogenesis. Cancer Cell 2004; 6:447-458].

Сценарий развития РПЖ затрагивает транскрипционный статус намного меньшего количества генетических локусов, что затрудняет поиск информативных биомаркеров для детекции РПЖ. Поэтому отличий в паттернах изменения генетических локусов между группой ДГПЖ и группами РПЖ наблюдалось в рамках настоящего исследования намного меньше. Это позволяет нам высказать предположение, что большая часть изменений в транскрипционных профилях клеток МНФ периферической крови, лежащих в основе процесса онкотрансформации, происходит уже при ДГПЖ и носит системный характер, вовлекая в себя клетки МНФ периферической крови.

Использование двух биомаркеров (HIF1A и HV2) для определения стадии опухолевого процесса невозможно из-за того, что они не позволяют различить пациентов с ДГПЖ и РПЖ Т 1-2. Это связано с тем, что транскрипционная активность подавляющего большинства исследованных нами локусов статистически достоверно изменяется уже при ДГПЖ, и продолжает определяться без существенных изменений своего статуса в группах РПЖ Т1-2 и РПЖ Т3-4. Обнаружено значимое изменение экспрессии генов: ТР53 - гена супрессора образования злокачественных опухолей, GSTP1 - гена глутатион S-трансферазы pil и IL10 МНФ крови при РПЖ в сравнении с доброкачественной гиперплазией простаты. Увеличение экспрессии гена ТР53 может явиться эффективным критерием дифференцировки ДГПЖ и начальных стадий РПЖ. Увеличение экспрессии гена GSTP1 и уменьшение экспрессии IL10 может явиться дифференцирующим критерием ДГПЖ и ранних стадий РПЖ.

Таким образом, изменение паттерна экспрессии генетических локусов МНФ периферической крови может быть эффективно использовано для диагностики раковых заболеваний, в том числе и рака простаты.

Подробное описание способа

Материалом для исследований служит венозная кровь, забор которой осуществляют с использованием вакутайнеров, содержащих стабилизатор EDTA KE ("Sarstedt", Germany). Венозную кровь после взятия визуально тестируют на отсутствие гемолиза и в течение 1 часа доставляют для анализа в лабораторию в охлажденном виде.

Препаративное выделение фракции мононуклеарных клеток из цельной периферической крови проводят методом дифференциального гемолиза с использованием хлористого аммония [Berteau P., Dumas F. et al. Molecular Detection of Circulating Prostate Cells in Cancer II: Comparison of Prostate Epithelial Cells Isolation Procedures. Clinical Chemistry 1998; 44 (8): 1750-1753]. Выбранный нами метод фракционирования клеток крови, по сравнению с применяемыми методами обогащения CTCs в градиенте плотности и иммуномагнитной сорбцией, позволяет получать мононуклеарную фракцию клеток без потерь CTCs, лишенных априорно предполагаемых маркерных антигенов, в том числе в результате ЕМТ [Panteleakou Z. et al. Detection of circulating tumor cells in prostate cancer patients: methodological pitfalls and clinical relevance. Mol. Med. 2009; 15: 101-114].

Экстракцию суммарной РНК из мононуклеарной фракции клеток периферической крови проводят по Хомчинскому [Chomczynski P., Sacchi N.. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. Anal. Biochem 1987; 162: 156-159]. Для этих целей используют набор реагентов «РИБО-золь-А» (ООО «ИнтерЛабСервис», Россия). Количественную оценку и нормализацию полученных препаратов РНК осуществляют с помощью набора Quant-iT™ RNA Assay Kit («Invitrogen», USA) на флюориметре Qubit™ («Invitrogen», USA).

Удаление остаточной ДНК из препаратов РНК осуществляют в два этапа. На первом этапе препараты РНК обрабатывают ДНКазой I (#EN0525, Fermentas) согласно протоколу фирмы-изготовителя. На втором этапе препараты РНК центрифугируют в растворе 2М хлорида лития и дважды отмывают 80%-м этанолом [Barlow J. et al. A Simple Method for the Quantitative Isolation of Undegraded High Molecular Weight Ribonucleic Acid. Biochem. Biophys. Res. Commun 1963; 13:61-66].

Для получения кДНК на выделенной РНК - матрице (от 0,5 до 1 мкг) проводят реакцию обратной транскрипции с помощью комплекта реагентов «PEBEPTA-L» (000 «ИнтерЛабСервис», Россия) с использованием рэндомных гексамерных праймеров.

На всех этапах растворения препаратов РНК в DEPC-воде, обработке проб РНК ДНКазой I и синтеза первой цепи кДНК добавляют ингибитор рибонуклеаз (IRNase, ЗАО «Синтол», Россия) до конечной концентрации 1 ед. акт./мкл.

Полимеразную цепную реакцию в режиме реального времени (ПЦР-РВ) используют для определения транскрипционной активности ядерных генов BCL2, ВАХ, ТР53, GSTP1, IL10. В качестве референтного гена использовали ген β-актина (АСТВ). Подбор праймеров для каждого локуса осуществляют с помощью международной базы данных RTPrimer DB (http://www.rtprimerdb.org/) и на основании литературного поиска (Табл.1).

ПЦР-РВ проводят в присутствии флуоресцентного интеркалирующего красителя Eva Green с использованием набора реактивов R-441 (ЗАО «Синтол», Россия) на приборе iCycler CFX96 (Bio-Rad, USA). Объем ПЦР-смеси составляет 25 мкл и содержит 2,5 мМ MgCl2, 5 пкМ каждого праймера, 0.25 мМ dNTP, 1x ПЦР-буфер и 1 ед. акт. HotTaq полимеразы. Матрица кДНК была нормализована до 2-3 нг на реакцию. Амплификацию проводят с использованием следующей программы: первичная денатурация 95°С - 4 мин.; 40 циклов: 95°С - 30 с, 58°С - 20 с, 72°С - 20 с. Для определения экспрессии каждого гена ПЦР-РВ проводят в трех повторностях для каждого локуса с использованием не менее двух наиболее близких значений Ct. Для контроля эффективности ПЦР-РВ и адекватности получаемых результатов каждый опыт сопровождают постановкой реакций, в которых матрицей служила ДНК, оставшаяся в препаратах суммарной РНК без проведения реакции обратной транскрипции.

Работоспособность заявляемого способа подтверждается следующими клиническими примерами:

Пример 1.

Пациент Б-ов, 65 лет.

В марте 2012 г. проходил обследование в клинике урологии Ростовского государственного медицинского университета с предварительным диагнозом гиперплазия предстательной железы. Жалобы на учащенное мочеиспускание.

Результаты проведенного пальцевого ректального исследования показали: границы предстательной железы нечеткие; железа - умеренно увеличена, уплотнена, неоднородна. Количество баллов по международной шкале оценки простатических симптомов (IPPS) - 18.

Общий анализ мочи - норма. Лабораторная диагностика: ПСА=0,3 нг/мл. Результаты ТРУЗИ предстательной железы: объем простаты - 63 см3.

Пациенту было проведено исследование согласно заявляемому способу.

Таблица 2.
Уровень относительной экспрессии предлагаемых генов, полученные у пациента.
Ген Уровень полученной экспрессии, 2-ΔCt Пороговый уровень экспрессии при РПЖ Диагноз
ТР53 5,92×10-6 >3,68×10-6 РПЖ Т1-2
GSTP1 9,61×10-3 >3,73×10-3 РПЖ Т1-2
IL10 1,71×10-5 <4,32×10-5 РПЖ Т1-2

Согласно результатам, полученным методом ПЦР-РВ, уровень экспрессии ТР53, GSTP1, IL10 генов в МНФ крови значительно отличается от показателей, известных для ДГПЖ: активность генов ТР53 и GSTP1 повышается в 1,6 и 2,6 раза, соответственно, тогда как уровень экспрессии IL10 снижается в 2,5 раз (Табл.2). Наблюдаемые значения по всем трем локусам соответствуют раку предстательной железы РПЖ Т 1-2.

Биопсия простаты (гистологическое заключение), выполненная обосновано: высокодифференцированная аденокарцинома, занимающая верхушку правой доли простаты. Индекс Глиссона 4(2+2).

Пример 2.

Пациент Г-ев, 69 лет.

В январе 2012 года проходил обследование в клинике урологии Ростовского государственного медицинского университета с предварительным диагнозом гиперплазия предстательной железы. Жалобы на учащенное мочеиспускание.

Результаты проведенного пальцевого ректального исследования показали: границы предстательной железы нечеткие; железа - умеренно увеличена, без очаговых образований. Количество баллов по международной шкале оценки простатических симптомов (IPPS) - 16.

Общий анализ мочи - норма. Лабораторная диагностика: ПСА=8,44 нг/мл. Результаты ТРУЗИ предстательной железы: объем простаты - 54 см3.

Пациенту было проведено исследование согласно заявляемому способу.

Таблица 3.
Уровень относительной экспрессии предлагаемых генов, полученных у пациента.
Ген Уровень полученной экспрессии, 2-ΔCt Пороговый уровень экспрессии при РПЖ Диагноз
ТР53 3,86×10-6 >3,68×10-6 РПЖ Т1-2
GSTP1 1,1×10-2 >3,73×10-3 РПЖ Т1-2
IL10 2,84×10-5 <4,32×10-5 РПЖ Т1-2

Согласно полученным в ПЦР-РВ результатам (табл.3), уровень экспрессии ТР53 отличается от подобного показателя для ДГПЖ, активность GSTP1 гена в МНФ крови пациента в 3 раза превысила показатель ДГПЖ, а IL10 гена - в 1,5 раза снизилась, что идентифицирует по двум локусам местно распространенный рак предстательной железы.

Биопсия простаты (гистологическое заключение): высодифференцированная аденокарцинома с поражением двух долей. Индекс Глиссона 6(3+3).

Пример. 3.

Больной Б-ов, 76 лет.

В феврале 2009 года проходил обследование в клинике урологии Ростовского государственного медицинского университета с диагнозом подозрение на рак предстательной железы. Жалобы на частое затрудненное мочеиспускание.

Результаты проведенного пальцевого ректального исследования: границы предстательной железы нечеткие; железа - увеличена с уплотнениями в обеих долях каменистой плотности, неоднородна. Количество баллов по международной шкале оценки простатических симптомов (IPPS) - 20.

Общий анализ мочи - норма. Лабораторная диагностика: ПСА=64,4 нг/мл.

Результаты ТРУЗИ предстательной железы: объем простаты - 55 см3

Пациенту было проведено исследование согласно заявляемому способу.

Таблица. 4
Уровень относительной экспрессии предлагаемых генов, полученных у пациента.
Ген Уровень полученной экспрессии, 2-ΔCt Пороговый уровень экспрессии при РПЖ Т3-4 Диагноз
BCL2/BAX 0,33 <1,0 РПЖ Т3

Биопсия простаты (гистологическое заключение): Умереннодифференцированная ацинарная аденокарцинома индекс Gleason 7 (4+3), локализующаяся в двух долях, занимающая до 100% объема биоптатов, прорастает капсулу, инвазия в периневальные пространство

Пример 4.

Больной И-ов, 63 лет.

В декабре 2011 года проходил обследование в клинике урологии Ростовского государственного медицинского университета с диагнозом доброкачественная гиперплазия предстательной железы. Жалобы на частое затрудненное мочеиспускание.

Результаты проведенного пальцевого ректального исследования: границы предстательной железы четкие, железа увеличена по аденоматозному типу, без очаговых образований, однородна. Количество баллов по международной шкале оценки простатических симптомов (IPPS) - 22.

Общий анализ мочи - норма. Лабораторная диагностика: ПСА=3,8 нг/мл.

Результаты ТРУЗИ предстательной железы: объем простаты - 75 см3.

Пациенту было проведено исследование согласно заявляемому способу.

Таблица 5.
Уровень относительной экспрессии генов, полученных у пациента.
Ген Уровень полученной экспрессии, 2-ΔCt Пороговый уровень экспрессии при РПЖ Т1-2 Диагноз
ТР53 1,8×10-6 >3,68×10-6 ДГПЖ
GSTP1 1,7×10-3 >3,73×10-3 ДГПЖ
IL10 7,5×10-5 <4,32×10-5 ДГПЖ
BCL2/BAX 3,3 >0,9 ДГПЖ

Нами обследовано 78 мужчин, разделенных на группы: ДГПЖ, РПЖ Т1-2, РПЖ Т3-4, здоровые.

Во всех случаях рак верифицировался путем выполнения биопсии предстательной железы и гистологически представлял аденокарциному. Объем поражения опухолью биоптатов - 70-100%. Сумма Глисона варьировала от 6 до 10 баллов.

Для выяснения чувствительности выбранных биомаркеров для анализа РПЖ и их способности отражать стадийность развития этого заболевания, мы провели сопоставление изменений транскрипционного паттерна изучаемых генов МНФ периферической крови при РПЖ с аналогичными показателями контрольной группы.

Статистически значимые отличия (р<0.05) между группами РПЖ и ДГПЖ наблюдались для транскрипционной активности 3 генов: ТР53, GSTP1 и IL10. При этом наиболее выраженные количественные отличия наблюдались для увеличения транскрипционной активности гена ТР53 в ряду ДГПЖ → РПЖ Т1-2 (увеличение относительной экспрессии в 3 раза) и ДГПЖ → РПЖ Т3-4 (увеличение относительной экспрессии в 4 раза).

Изменения в транскрипционной активности генов GSTP1 и IL10 в группах РПЖ носили разнонаправленный характер. Относительная экспрессия гена GSTP1 у больных группы РПЖ Т1-2 увеличивалась на 40% по сравнению с группой больных с ДГПЖ, в то время как в группе с РПЖ Т3-4 аналогичный показатель уменьшался на 70%. Таким образом, суммарное изменение экспрессии локуса GSTP1 между группами больных РПЖ Т1-2 и РПЖ Т3-4 достигает 110%, что позволяет дифференцировать стадии локального и местнораспространенного развития патологического процесса с высоким уровнем достоверности.

Относительная экспрессия гена IL10 у больных с РПЖ Т1-2 уменьшалась на 30% по сравнению с группой ДГПЖ, в то время как в группе РПЖ Т3-4 аналогичный показатель, наоборот, увеличивался на 10%.

Таким образом, суммарное изменение экспрессии гена IL10 между группами больных РПЖ Т1-2 и РПЖ Т3-4 достигает 40%, что позволяет дифференцировать эти стадии развития патологического процесса с высокой достоверностью.

Показатели величин относительной экспрессии изученных в исследовании маркеров не проявили достоверной корреляции с ПСА и поэтому они могут быть эффективно использованы в качестве независимых маркеров для повышения достоверности диагностики РПЖ. При комплексном использовании изменения величины транскрипционной активности генов ТР53, GSTP1 и IL10 при дискриминации групп ДГПЖ и РПЖ Т1-2 специфичность составляет 90% и чувствительность 93% соответственно [Алексеева М. и др. Онкомаркеры, их характеристика и некоторые аспекты клинико-диагностического использования (обзор литературы). Проблемы репродукции 2005; 3: 65-78].

Первичную обработку данных ПЦР-РВ анализа проводили с помощью программного обеспечения "Bio-Rad CFX-Manager" ver. 2.1. Оценку уровня экспрессии генов относительно аналогичных показателей контроля рассчитывали по методу 2-ΔΔCt Livak [Livak K., Schmittgen T. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method. Methods 2001; 25(4):402-408]. Для представления средних значений показателей транскрипционной активности рядов мы использовали такой показатель как «медиана». В статистическом анализе использовали непараметрические описательные статистики и критерии оценки достоверности различий несвязанных выборок. Для оценки достоверности отличий и корреляционного анализа полученных рядов мы применяли непараметрические критерии: U-критерий Манна-Уитни и коэффициент корреляции Спирмена соответственно [Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Мир 1998] с использованием программного пакета Statistica 6.1.

Использование предлагаемого способа позволяет эффективно диагностировать рак предстательной железы, в том числе при низких значениях ПСА. Способ прост в выполнении, позволяет существенно снизить количество необоснованных биопсий предстательной железы, соответственно снижает экономические затраты на их проведение. Достоверность заявляемого способа составила 95%. Стоимость проведения исследования согласно заявляемому способу составила две тысячи рублей на одного пациента. Способ позволяет дифференцировать малые формы РПЖ от местнораспространенных, что позволяет начать своевременную и адекватную терапию.

Предлагаемый способ не требует штата специально обученного персонала, проводится в амбулаторных условиях и может быть широко внедрен в клиническую практику.

Способ дифференциальной диагностики рака предстательной железы путем исследования биологической жидкости больного, отличающийся тем, что в клетках периферической крови пациента методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени измеряют экспрессию генов Тр53, GSTP1 и IL10 относительно референтного гена β-актина (АСТВ) в клетках мононуклеарной фракции периферической крови и при величинах относительной экспрессии генов Тр53 больше 3,68×10-6, GSTP1 больше 3,73×10-3 и IL10 меньше величины 4,32×10-5 диагностируют рак предстательной железы, если величина относительной экспрессии гена Тр53 меньше 3,68×10-6, GSTP1 меньше 3,73×10-3 и IL10 больше 4,32×10-5 - диагностируют доброкачественную гиперплазию предстательной железы.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области диагностики злокачественной опухоли. Изобретение относится к способу улавливания, детекции, охарактеризовывания и количественного определения экзосом человека в небольших объемах жидкостей организма человека с использованием сэндвич-ELISA-теста.

Группа изобретений относится к выбору подходящего противоракового лекарственного средства для лечения рака легких, прогнозированию реакции опухоли легких на лечение противораковым лекарственным средством, а также к применению матрицы для выбора подходящего противоракового лекарственного средства для лечения рака легких.

Изобретение относится к способам определения эффективности лиганда ионного канала. Ex vivo способ определения эффективности лиганда ионного канала in vivo в зависимости от присутствия плазмы, включает стадии: a) приведение клетки, экспрессирующей ионный канал, в контакт с i) плазмой животного и ii) лигандом ионного канала и b) определение эффекта лиганда ионного канала на клетку, или a) приведение клетки, экспрессирующей ионный канал, в контакт с i) плазмой животного и ii) соединением, которое определяют как лиганд ионного канала, и b) определение эффекта соединения на клетку, или a) приведение клетки, экспрессирующей ионный канал, в контакт с плазмой животного, которому был введен лиганд ионного канала, и b) определение эффекта лиганда ионного канала на клетку.

Изобретение относится к области биохимии. Способ идентификации клеток, которые показывают восприимчивость к ингибированию передачи сигнала, в которую вовлечены рецептор фактора роста фибробластов (FGF-R) или его вариант, включающий определение статуса фосфорилирования субстрата 2 рецептора FGF-R (FRS-2), его варианта или его фрагмента, содержащего тирозин, в биологическом образце, в качестве биомаркера такой чувствительности к ингибированию, где в отношении клеток, которые показывают фосфорилирование тирозина FRS-2, можно ожидать, что они покажут восприимчивость к ингибированию передачи сигнала с участием FGF-R.

Группа изобретений относится к медицине и может быть использована для обнаружения злокачественных опухолей, включая рак молочной железы, рак почек. Для этого проводят измерение экспрессии полипептида, обладающего способностью связываться посредством реакции антиген-антитело с антителом против белка CAPRIN-1, имеющего любую из аминокислотных последовательностей с четными номерами SEQ ID NO:2-30 списка последовательностей, в образце, полученном из живого организма, посредством реакции антиген-антитело в образце, выделенном из живого организма.

Настоящее изобретение относится к прогностическому анализу, а также к способу его применения для определения вероятности продуцирования терапевтического ответа в пораженных клетках или тканях на лечение заболевания, имеющего этиологию, связанную с избыточной пролиферацией клеток, с использованием сердечного гликозида.

Настоящее изобретение относится к медицине и описывает способ определения раковых клеток в плевральном выпоте или асцитической жидкости у больных с подозрением на злокачественные новообразования, предусматривающий взятие экссудата у обследуемого больного в количестве 10 мл, причем серозную жидкость из плевральной или брюшной полости обследуемого больного помещают в искусственную среду, где создают давление, необходимое для прохождения всего исследуемого экссудата через калиброванный фильтр с диаметром пор одна тысяча нанометров, при этом опухолевые клетки задерживаются в осадке на калиброванном фильтре, осадок наносят на предметные стекла, которые предварительно обезжиривают и охлаждают для лучшего прилипания опухолевых клеток и высыхания, затем фиксируют мазки - отпечатки трехпроцентным спиртовым раствором Лейшмана в течение 2-4 минут, далее смывают дистиллированной водой и красят азур-эозиновой смесью в соотношении 3:1 продолжительностью 15 минут, после покраски промывают дистиллированной водой, сушат на воздухе и приступают к просмотру под микроскопом.

Изобретение относится к лабораторной диагностике, а именно к одностадийному способу одновременной детекции раковых клеток толстой кишки или элементов раковых клеток толстой кишки в биологическом образце из лимфатических узлов.

Изобретение относится к медицине и касается диагностики онкологических заболеваний, в частности диагностики наличия злокачественных новообразований. .

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимическим исследованиям в онкологии, и описывает способ прогнозирования возникновения рецидивов рака шейки матки, включающий биохимическое исследование суточной мочи больной, при котором в суточной моче определяют андростерон и этиохоланолон, вычисляют отношение между ними и при величине отношения 0,75 мг/сут и ниже прогнозируют рецидив болезни в первые 2 года, а при величине, превышающей 0,75 мг/сут, - длительный безрецидивный период до 10 лет и более.

Группа изобретений относится к области медицинской диагностики, иммунологии и онкологии, в частности к новым онкомаркерам и способам диагностики онкологических заболеваний. Предложены новые антигены для проведения иммуноферментного анализа для выявления аутоантител, ассоциированных со злокачественными новообразованиями, а именно фрагменты плазминогена, содержащие кринглы. Предложен также способ выявления диагностического признака при онкологических заболеваниях, заключающийся в выявлении аутоантител типа IgA, IgG, IgM к следующим фрагментам плазминогена: тяжелая цепь (Glu-H), тяжелая цепь (Lys-H), легкая цепь (L), K1-4 (Tyr80-Ala440), K1-3 (Tyr80-Val338), K1-3 (Tyr80-Val354), K1-4 (Asn60-Pro447), K1-4 (Lys78-Pro447), K1-4 (Lys78-Pro446), K1-4 (Lys78-Lys468), K1-4,5 (Lys78-Arg530), K4-5 (Val355-Phe546), K1 (Tyr80-Glul64), K2-3 (Cysl65-Val338), K4 (Val354-Ala440), K5 (Ser441-Fhe546), K5 (Val442-Arg561), мини-плазмин в образце плазмы крови человека. Настоящая группа изобретений эффективна в ранней диагностике онкологических заболеваний. 3 н. и 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл., 5 пр.

Изобретение относится к области медицины, в частности, к клинической онкологии, медицинской генетике, молекулярной диагностике и может быть использовано для прогнозирования наследственной предрасположенности к раку молочной железы. Способ характеризуется тем, что проводят амплификацию коротких фрагментов гена BLM протяженностью до 200 п.о., с последующим высокоразрешающим плавлением, включающим оптимизированный для гена BLM этап формирования гетеродуплексов: быстрый нагрев до 95°С и медленное снижение температуры до 50°С; выбирают один фрагмент с аберрантным профилем плавления для секвенирования, секвенируют выбранный фрагмент и при выявлении мутации гена BLM прогнозируют наследственную предрасположенность к раку молочной железы. Способ повышает точность детекции мутации, прост в исполнении и высокоинформативен: позволяет выявлять до 100% мутаций в гене BLM.

Изобретение относится к диагностическим методам в медицине и может быть использовано в онкологии при адъювантной терапии опухолей, а также при длительном наблюдении за пациентами после оперативного удаления опухолей. Способ описывает определение циркулирующих раковых клеток, чувствительных к адъювантной гормональной терапии, в крови больных раком молочной железы, включает выделение и обогащение циркулирующих опухолевых клеток с использованием антител с магнитными метками, получение лизатов циркулирующих опухолевых клеток, извлечение мРНК из лизатов циркулирующих опухолевых клеток, получение кДНК, получение амплифицированной ДНК, определение экспрессии маркерных генов, при этом в случае наличия одного из маркеров GA733-2, MUC-1, HER2 делается заключение о наличии циркулирующих опухолевых клеток, и при обнаружении маркеров ESR1, PGR делается заключение о наличии циркулирующих опухолевых клеток, чувствительных к гормональной терапии. Способ позволяет значительно увеличить вероятность обнаружения циркулирующих опухолевых клеток, чувствительных к адъювантной гормональной терапии, повысить точность измерений и увеличить число анализируемых характеристик циркулирующих опухолевых клеток, повысить чувствительность методов анализа и эффективность диагностики при работе с больными раком молочной железы для оценки прогноза и эффективности терапии, улучшить эффективность лечения и выживаемость онкологических больных. 5 ил., 1 пр.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен L-фукоза α1→6-специфичный лектин, экстрагируемый из базидиального гриба или сумчатого гриба, характеризующийся пиковым значением молекулярной массы около 4500 m/z, определяемым при масс-спектрометрическом анализе MALDI-TOF. Новый L-фукоза α1→6-специфичный лектин обладает высоким сродством к L-фукоза α1→6 сахарной цепи, определяемым константой ассоциации 1,0×104 М-1 или более (при 25ºС), и имеет константу ассоциации 1,0×103 М-1 или менее (при 25ºС) с высокоманнозными сахарными цепями и/или гликолипидами, не содержащими L-фукоза α1→6 сахарную цепь. В одном варианте предложенный L-фукоза α1→6 специфичный лектин представляет собой белок или пептид, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:2-6. L-фукоза α1→6-специфичный лектин используют для специфического обнаружения L-фукоза α1→6 сахарной цепи и эффективной очистки L-фукоза α1→6 сахарной цепи или сахарной цепи, не содержащей L-фукозу α1→6. 6 н. и 10 з.п. ф-лы, 38 ил., 8 табл., 4 пр.

Изобретение относится к способу индуцирования противоопухолевого иммунитета приведением в контакт антиген-представляющей клетки с иммунологически активным фрагментом, выбранным из группы, состоящей из: (i) иммунологически активного фрагмента полипептида, кодируемого нуклеиновой кислотой ТОМ34, представляющего собой декапептид, обладающий способностью индуцировать цитотоксические Т-клетки, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:7; (ii) иммунологически активного фрагмента полипептида, кодируемого нуклеиновой кислотой ТОМ34, представляющего собой пептид, обладающий способностью индуцировать цитотоксические Т-клетки, где пептид содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:7, в которой 1 или 2 аминокислоты замещены или добавлены; (iii) иммунологически активного фрагмента (ii), где вторая аминокислота с N-конца аминокислотной последовательности SEQ ID NO:7 представляет собой фенилаланин, тирозин, метионин или триптофан; и (iv) иммунологически активного фрагмента (ii), где С-концевая аминокислота аминокислотной последовательности SEQ ID NO:7 представляет собой фенилаланин, лейцин, изолейцин, триптофан или метионин, или с полинуклеотидом, кодирующим указанный фрагмент, или с вектором, содержащим этот полинуклеотид. Применение изобретения обеспечивает эффективную иммунотерапию рака. 10 ил., 3 табл.

Группа изобретений основана на применении рецептора хемокина CCR4 в качестве маркера для идентификации и/или стадирования рака. Информацию диагностического характера получают путем измерения уровней CCR4, экспрессируемого эпителиальными опухолевыми клетками в образце солидной или негематологической опухоли пациента. Группа изобретений относится также к применению олигонуклеотидного праймера или зонда, способного к гибридизации в жестких условиях с SEQ ID NO:1, для обнаружения присутствия или измерения количества экспрессии CCR4 эпителиальными клетками солидной опухоли или негематологической опухоли. Использование группы изобретений позволяет более точно и надежно диагностировать или стадировать рак. 3 н. и 34 з.п. ф-лы, 22 ил., 13 пр.

Изобретение касается диагностического реагента для диагностики рака поджелудочной железы и/или панкреатита, включающего α1→6 специфический лектин, который отличается сильным сродством и высокой специфичностью к фукозе. Фукозный α1→6 специфичный лектин имеет возможность воздействовать на патологический гаптоглобин, содержащийся в образце, взятом у живого организма. При этом указанный лектин: (1) выделен из базидиомицетов; (2) имеет молекулярную массу от 4000 до 40000, установленную ДСН (додецилсульфатом натрия) электрофероза в полиакриламидном геле, и (3) имеет сродство с фукозной α1→6 сахарной цепью с константой связывания 1.0×104 M-1 или более при температуре 25°C и (4) с константой связывания 1.0×103 M-1 или менее при температуре 25°C для длинной маннозной сахарной цепи и/или гликолипида, не содержащего фукозную α1→6 сахарную цепь. Изобретение обеспечивает точную диагностику рака поджелудочной железы и/или панкреатита. 2 з. п. ф-лы, 13 ил., 3 табл.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу качественной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований слизистой оболочки языка по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости. Cущность способа состоит в том, что определяют количественное содержание матриксной металлопротеиназы 2 (ММП 2) в ротовой жидкости пациента, за группу клинического контроля принимают уровень 1,7-2,9 нг/мл, при количестве ММП 2 14,4-24,3 нг/мл диагностируют папиллому слизистой оболочки языка пациента, при содержании в ротовой жидкости ММП 2 пациента 4,1-6,8 нг/мл диагностируют рак слизистой оболочки языка. В качестве биомаркера для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки языка в ротовой жидкости определяют тканевый ингибитор металлопротеиназы 2 (ТИМП 2), при этом за группу клинического контроля принимают уровень 6,44-11,23 нг/мл, при содержании ТИМП 2 29,25-48,75 нг/мл диагностируют папиллому слизистой оболочки языка, при содержании ТИМП 2 57,23-95,03 нг/мл диагностируют рак слизистой оболочки языка. Использование заявленного способа позволяет повысить точность дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований слизистой оболочки языка. 1 з.п. ф-лы, 6 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунотерапии, и может быть использовано для оценки эффективности лечения у пациента с раком. Для этого пациенту вводят иммуногенную композицию, которая содержит рекомбинантный вирусный вектор, экспрессирующий in vivo весь или часть MUC-1 антигена. При этом способ анализа включает получение биологического образца от пациента после введения указанной иммуногенной композиции и измерение уровней интерферона γ в образце. Уровни интерферона γ свыше приблизительно 4 пг/мл свидетельствуют о том, что пациент демонстрирует успешный клинический выход для лечения. Изобретение позволяет оценить клинический результат лечения рака у пациента.14 з.п. ф-лы., 3 ил., 1 пр.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины, в частности онкологии и молекулярной биологии. Предложены способ и набор праймеров и зонда с последовательностями SEQ ID NO: 1, 2 и 3 для осуществления полимеразной цепной реакции в режиме реального времени для диагностики светлоклеточной почечноклеточной карциномы (СПК). Оценивают количественное содержание мРНК гена ACY1. При сниженном содержании мРНК в предположительно пораженной раком ткани человека по сравнению с количеством мРНК в здоровой ткани диагностируют СПК. Предложенная группа изобретений позволяет с высокой достоверностью диагностировать СПК, в том числе на ранней стадии опухолевого заболевания. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 1 ил., 5 табл., 6 пр.
Наверх