Способ получения гипериммунной сыворотки против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят


 


Владельцы патента RU 2523389:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") (RU)

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для получения гипериммунной сыворотки против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят. Способ включает гипериммунизацию быков-продуцентов инактивированными антигенами C1. perfringens, содержащими анатоксины и соматические антигены бактерий серотипов А, С и Д в культуральной среде при следующем соотношении компонентов на 1 л антигена: анатоксин и соматический антиген штамма №28 (тип А) в культуральной среде с концентрацией 1012·(9-10) м.к. в 1 см3, см3 - 300,0-350,0; анатоксин и соматический антиген штамма №392 (тип С) в культуральной среде с концентрацией 1012·(9-10) м.к. в 1 см3, см3 - 300,0-350,0; анатоксин и соматический антиген штамма №213 (тип Д) в культуральной среде с концентрацией 1012·(9-10) м.к. в 1 см3, см3 - 300,0-350,0; формалин, см3 - 4,0-5,0. Проводят дополнительную гипериммунизацию быков-продуцентов инактивированными антигенами E.coli, содержащими соматические и адгезивные антигены K99, A20 в физиологическом растворе, ТЛ-, ТС-анатоксины E.coli в среде культивирования при следующем соотношении компонентов на 1 л антигена: соматический и адгезивный антиген штамма КВ-1 (К99) в физиологическом растворе с концентрацией 1012·(14-15) млрд.м.к. в 1 см3, см3 - 300,0-350,0; соматический и адгезивный антиген штамма ПЗ-3 (A20) в физиологическом растворе с концентрацией 1012·(14-15) м.к. в 1 см3, см3 - 300,0-350,0; формалин, см3 - 4,0-5,0; термостабильные и термолабильные анатоксины штаммов Е.coli KB-1 и ПЗ-3 в культуральной среде с титрами в РДП 1:8-1:16, л - до 1. Гипериммунизацию быков-продуцентов проводят четырехкратно путем подкожного введения в область шеи с одной стороны дозы антигена C1. perfringens и в область шеи с другой стороны - дозы антигена E.coli по следующей схеме: в первый день - по 8 см3, через 14 дней - по 10 см3, через 28 дней - по 15 см3 и через 42 дня - по 20 см3 с крови, затем отделяют сыворотку и консервируют. Заявленное изобретение последующим взятием позволяет получить гипериммунную сыворотку, обеспечивающую лечение и профилактику смешанной инфекции - анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят. 5 табл., 7 пр.

 

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и биотехнологии, в частности к способу получения гипериммунной сыворотки против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят.Сыворотка предназначена для лечения и пассивной иммунопрофилактики анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят.

Желудочно-кишечные болезни сельскохозяйственных животных занимают одно из ведущих мест по частоте, массовости проявления и величине наносимого хозяйствам экономического ущерба вследствие высокой заболеваемости и падежа молодняка, недополучения привеса, а также больших затрат на лечебно-профилактические мероприятия.

В этиологии этих болезней в большинстве случаях регистрируется ассоциация бактерий: эшерихий коли, сальмонелл, стрептококков, клостридий, протея и других (Пирожков М.К., Ленев С.В., Викторова Е.В. и др. Диагностика, специфическая профилактика и лечение при бактериальных болезнях животных // Ветеринария. - 2011. - №1. - С.24-28.; Шахов А.Г. Этиология и профилактика желудочно-кишечных и респираторных болезней телят и поросят // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях. Материалы межд. научн.-практ. конф. - Воронеж, 2002, С.3-8).

Анализ литературных данных и результаты многолетних исследований сотрудников нашего центра свидетельствуют о том, что в хозяйствах, стационарно неблагополучных по желудочно-кишечным болезням, анаэробная энтеротоксемия у телят наиболее часто проявляется в виде смешанной инфекции с эшерихиозом (Казимир А.Н. Эпизоотология, этиология, фаготерапия и специфическая профилактика анаэробной энтеротоксемии телят в хозяйствах Ульяновсой области: автореф. дис. канд. вет. наук. - Казань, 1997. - 22 с.; Салимов В.А. Патологоанатомическая и дифференциальная диагностика эшерихиозов, сальмонеллезов, пастереллезов, анаэробных энтеротоксемий, кандидамикоза, их ассоциаций и осложнений у молодняка сельскохозяйственных животных. - М.: Колос, 2001. - 75 с.; Спиридонов Г.Н., Махмутов А.Ф., Хурамшина М.Т., Спиридонов А.Г. Инфекционная энтеротоксемия молодняка сельскохозяйственных животных в регионе Среднего Поволжья и Предуралья // Актуальные вопросы ветеринарной медицины Сибири: Матер. науч.-практ. конф. - Краснообск, 2010. - С.134-139).

Анаэробную энтеротоксемию вызывают бактерии C1. perfringens, которых подразделяют на шесть типов: A, B, C, D, E, F, отличающихся друг от друга антигенной структурой и вырабатываемыми ими токсинами. У телят анаэробную энтеротоксемию вызывают возбудители серотипов A, C и D (Куриленко А.Н., Крупальник В.Л., Пименов Н.В. Бактериальные и вирусные болезни молодняка сельскохозяйственных животных. М.: Колос, 2006. - 296 с.; Спиридонов А.Г. Разработка и оценка эффективности вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят: автореф. дис. канд. биолог. наук. - Казань, 2013. - 18 с.).

Эшерихиозную диарею вызывают энтеротоксигенные штаммы E. coli, синтезирующие адгезивные антигены K88, K99, 987P, F41, A20, Att25. У телят в более 80% случаях болезнь вызывается Е. coli, продуцирующими адгезивные антигены A20 и K99 (Гаффаров Х.З., Иванов А.В. и др. Моно- и смешанные инфекционные диареи новорожденных телят и поросят. - Казань: Изд-во «Фэн», 2002. - 592 с.; Зароза В.Г., Бурова Г.А., Буров В.Г. Возбудители колибактериоза животных и их лабораторная идентификация // Ветеринария. - 2008. - №3. - С.29-32).

В РФ разработана ассоциированная вакцина против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят на основе инактивированных антигенов бактерий CI. perfringens (серотипы A, С, Д) и Е. coli, синтезирующих адгезивные антигены К99, А20, а также их ТЛ- и ТС-анатоксинов. Вакцина предназначена для иммунизации глубокостельных коров и нетелей с целью создания колострального иммунитета у потомства через материнское молозиво, а также для иммунизации молодняка 18-20-и дневного возраста, полученных от иммунизированных маток (Патент РФ на изобретение №2428202 от 10.09.2011 г.). Антитела, полученные с молозивом матери, обеспечивают защиту новорожденных телят от заболеваний до тех пор, пока у них не выработаются собственные механизмы иммунитета. По различным причинам некоторые животные после рождения не получают в необходимом количестве эту естественную защиту, что связано с недостаточным поступлением антител с молозивом матери или нарушением механизма абсорбции иммуноглобулинов молозива кишечником новорожденных. Отмечено также, что не все животные по разным причинам после профилактической вакцинации приобретают достаточно напряженный иммунитет. Гипериммунная сыворотка также необходима для купирования свежих очагов инфекции. В связи с этим разработка гипериммунной сыворотки против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят является весьма актуальной. В настоящее время биопредприятиями Российской Федерации выпускаются несколько видов гипериммунных сывороток для специфической профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний телят: «Сыворотка антиадгезивная, антитоксическая против эшерихиоза сельскохозяйственных животных», «Поливалентная антитоксическая сыворотка против паратифа и колибациллеза телят, ягнят, овец и птиц» и др. (Справочник ветеринарных препаратов под редакцией П.П. Достоевского. - Киев. - Урожай. -1986. - С.248-250 Каталог лекарственных средств для животных, Торговый дом «Биопром». - М. - 2005. - С.191). Гипериммунная сыворотка, предназначенная для специфической терапии и пассивной иммунопрофилактики анаэробной энтеротоксемии телят, в РФ не разработана и биологической промышленностью не выпускается.

Известна сыворотка антиадгезивная, антитоксическая против эшерихиоза сельскохозяйственных животных, содержащая комплекс антител против соматических 09, 078, 0141, белковых адгезивных K88, K99, 987P, F41, полисахаридных капсульных K30, K80, K87 антигенов и консервант фенол (патент RU №2043772 C1, A61K 39/108, K 39/40, опуб. 20.09.1995 г.).

Основным недостатком этой сыворотки является узкий ее спектр действия из-за отсутствия в ее составе специфических антител против бактерий C1. perfringens - возбудителей анаэробной энтеротоксемии телят, часто проявляющих патогенное действие в ассоциации с бактериями E.coli. Следовательно, она не позволяет получить лечебно-профилактический эффект при анаэробной энтеротоксемии телят, а также при смешанном ее течении с эшерихиозом.

В связи с вышеизложенным изыскание эффективных средств специфической терапии и пассивной иммунопрофилактики анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят является актуальной задачей ветеринарной науки и практики.

Задачей изобретения является разработка способа получения гипериммунной сыворотки, обеспечивающей лечение и профилактику смешанной инфекции - анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят.

Поставленная задача решается тем, что способ получения гипериммунной сыворотки против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят включает гипериммунизацию быков-продуцентов инактивированными антигенами C1. perfringens, содержащими анатоксины и соматические антигены бактерий серотипов А, С и Д в культуральной среде при следующем соотношении компонентов на 1 л антигена: анатоксин и соматический антиген штамма №28 (тип А) в культуральной среде с концентрацией 9·1012-10·1012 м.к. в 1 см3, см3 - 300,0-350,0; анатоксин и соматический антиген штамма №392 (тип С) в культуральной среде с концентрацией 9·1012-10·1012 м.к. в 1 см3, см3 - 300,0-350,0; анатоксин и соматический антиген штамма №213 (тип Д) в культуральной среде с концентрацией 9·1012-10·1012 м.к. в 1 см3, см3 -300,0-350,0; формалин, см3 - 4,0-5,0, проводят дополнительную гипериммунизацию быков-продуцентов инактивированными антигенами E.coli, содержащими соматические и адгезивные антигены K99, A20 в физиологическом растворе, ТЛ-, ТС-анатоксины E.coli в среде культивирования при следующем соотношении компонентов на 1 л антигена: соматический и адгезивный антиген штамма КВ-1 (K99) в физиологическом растворе с концентрацией 14·1012-15·1012 м.к. в 1 см3, см3 - 300,0-350,0; соматический и адгезивный антиген штамма ПЗ-З (А20) в физиологическом растворе с концентрацией 14·1012-15·1012 м.к. в 1 см3, см3 - 300,0-350,0; формалин, см3 - 4,0-5,0; термостабильные и термолабильные анатоксины штаммов Е.coli КВ-1 и ПЗ-З в культуральной среде с титрами в РДП 1:8-1:16, л. - до 1, а гипериммунизацию быков-продуцентов проводят четырехкратно путем подкожного введения дозы в область шеи с одной стороны антигена C1. perfringens и в область шеи с другой стороны - дозы антигена E.coli по следующей схеме: в первый день - по 8 см3, через 14 дней - по 10 см3, через 28 дней - по 15 см3 и через 42 дня - по 20 см3 с последующим взятием крови, отделением и консервированием полученной сыворотки.

Предлагаемые наборы антигенов позволяют получить высокоэффективную лечебно-профилактическую сыворотку с широким спектром действия против C1. perfringens (типы А, С, Д) и Е. coli (K99, A20). В качестве иммунизирующего антигена применяют любые из производственных или местных штаммов C1. perfringens серотипов А, С, Д, а также Е. coli, активно продуцирующие термостабильные и термолабильные токсины, а также адгезивные антигены K99 и A20.

Пример 1. Способ получения антигенов C1. perfringens.

В качестве производственных штаммов при получении гипериммунной сыворотки используют производственные штаммы C1. perfringens серотипа А (№28), серотипа С (№392) и серотипа Д (№213). Для получения анатоксинов и соматических антигенов производственные штаммы C1. perfringens №28, №392 и №213 выращивают отдельно на мясо-печеночно-казеиновой среде в реакторе в течение 6-8 часов при температуре 37-38°C до накопления не менее 4·1012 м.к. в 1 см3. Проверяют токсичность выращенной культуры на белых мышах, которые должны погибнуть после внутрибрюшинного введения культуры в дозе 0,5 см3 в течение 24 ч.

В реактор с выращенной культурой добавляют формалин до 0,5%-ной концентрации, выдерживают 8 суток при температуре 37-38°C, затем вносят 6%-ный раствор гидроокиси алюминия до 5%-ной концентрации, выдерживают 3-5 суток и удаляют 2/3 от общего объема надосадочной жидкости, устанавливали pH 7,2-7,4. Полученные анатоксины и соматические антигены производственных штаммов, содержащие не менее 9·1012-10·1012 м.к. в 1 см3, объединяют в равных соотношениях и используют для гипериммунизации быков-продуцентов.

Пример 2. Способ получения эшерихиозных антигенов.

В качестве производственных штаммов при получении гипериммунной сыворотки используют производственные энтеротоксигенные штаммы Е.coli: «KB-1» - синтезирующий адгезивный антиген К99, «ПЗ-3» -синтезирующий адгезивный антиген A20, вызывающие гибель белых мышей в течение 24 ч после внутрибрюшинного заражения в дозе 500 млн. м.к. Для получения бактериальной массы Е.coli используют мясопептонный агар (для штамма «ПЗ-З») и среду Минка (для штамма «КВ-1»). С этой целью указанные питательные среды разливают в матровые колбы по 300 см3 и стерилизуют при 0,5 атм. (110°C) в течение 15 минут. После застывания сред делают посев указанных культур. Посевы выдерживают в термостате при температуре 37-38°C. Через 24 часа выросшие колонии культур Е.coli смывают 0,85%-ным стерильным раствором хлорида натрия, готовят суспензию в концентрации 14·1012-15·1012 м.к. в 1 см3 по бактерийному или оптическому стандарту мутности ГИСК им. Тарасевича. Инактивацию бактериальной взвеси осуществляют формалином. Для этого в взвесь добавляют формалин до 0,5% конечной концентрации и выдерживают 4-5 суток в термостате при температуре 37-38°C. Затем проверяют полноту инактивации путем посева на соответствующие питательные среды.

Для получения анатоксина каждый штамм Е.coli засевают отдельно в реактор с бульоном Хоттингера, выращивают 5-7 суток при температуре 37-38°C. Определяют концентрацию ТЛ-, ТС-токсинов в реакции диффузионной преципитации. Титр ТЛ-, ТС-токсинов в культуральной жидкости должен быть не менее 1:4-1:8. Затем к культуре добавляют формалин до 0,4-0,5% и выдерживают при температуре 37-38°C в течение 10-12 суток, затем добавляют 6%-ную гидроокиси алюминия до 5%-ной концентрации, выдерживают 3 суток и удаляют 2/3 общего объема надосадочной жидкости, устанавливают pH 7,2-7,4.

Пример 3. Гипериммунизация быков-продуцентов. Животных, предназначенных для гипериммунизации, карантинируют и подвергают исследованию и необходимой обработке против инфекционных болезней согласно действующей инструкции «О порядке заготовки и санитарной обработки животных, используемых для производства биопрепаратов». К эксплуатации допускают животных 18-24 мес. возраста с живой массой 350-400 кг.

Гипериммунизацию животных проводят по схеме, приведенной в таблице 1. При этом антиген C1. perfringens вводится подкожно в нарастающих дозах в область шеи с одной стороны, эшерихиозный антиген подкожно с другой стороны шеи.

Пример 4. Взятие и обработка крови.

Производственное взятие крови разрешается при наличии антител в сыворотке крови продуцентов к C1. perfringens в титрах не менее 1:12800 в ИФА, к эшерихиям, продуцирующим адгезивные антигены K99, A20 - не менее 1:1600 в РА, к термостабильному и термолабильному анатоксину Е.coli - не менее 1:8 в РДП и при условии, если общая температура тела животных не превышает 39,5°C, а также после предварительной выдержки животных на голодной диете в течение 12 ч при неограниченном водопое.

Кровь для получения сыворотки берут у быков-продуцентов в убойном цехе мясокомбината при помощи закрытой системы, исключающей контакт крови с атмосферным воздухом. Система включает в себя полый нож длиной 40 см, диаметром 3,5 см из нержавеющей стали, соединенный герметично через силиконовый шланг и резиновую пробку с 10-литровой бутылью, которая сообщается с атмосферным воздухом через ватный фильтр. Предварительно в бутыли наливают 100 см3 5%-ного раствора натрия хлорида, после чего система монтируется и автоклавируется при 1,5 атм. в течение 40 минут. Взятие крови у животных производится непосредственно из сердца. После наполнения бутыли кровью примерно наполовину шланг перекрывается зажимом и нож вынимается из сердца. Бутыли с кровью в вертикальном положении оставляют при комнатной температуре на 1-2 ч до образования плотного сгустка, после чего их размешают под углом 30° в холодильную камеру при температуре 2-4°C. Отстой сыворотки продолжается 48-72 ч. Сыворотку из бутылей отсасывают над пламенем горелки при помощи изогнутой стеклянной трубки длиной 45-50 см, диаметром 1 см, которая посредством силиконового шланга соединена с емкостью, в которую собирают сыворотку. В емкости для сбора сыворотки создается отрицательное давление отсасывающим компрессором. Эта система также стерильна, закрытого типа. Собранную сыворотку сначала пропускают через глубинные фильтры EKS 1 или EKS 2, консервируют 5%-ным раствором фенола до концентрации его в общем объеме сыворотки 0,5%. После этого сыворотку перекачивают в отстойник и выдерживают 2-2,5 месяца при 2-4°C. Затем сыворотку пропускают через мембранные миллипоровые фильтры с убывающим размером пор (от 1,2 до 0,22 мкм) и разливают в стеклянные флаконы по 100-200 см3, закрывают резиновыми пробками, обкатывают алюминиевыми колпачками, этикетируют.

Пример 5. Контроль сыворотки на внешний вид, стерильность, безвредность и активность.

Для определения внешнего вида, цвета, наличия посторонних примесей, не разбивающихся хлопьев, герметичности укупорки все флаконы с сывороткой встряхивают, просматривают в проходящем свете и переворачивают пробками вниз.

Стерильность проверяют путем высева сыворотки на МПА, МПБ, Сабура, регенерированную среду Китта-Тароцци. Посевы выдерживают при 37-38°C. Через 48 ч из жидких сред делают пересевы на МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом. Первичные посевы выдерживают 10, вторичные -8 суток. Роста на питательных средах не должно быть.

Безвредность сыворотки проверяют на 10 белых мышах, которым препарат вводят подкожно в дозе 0,5 см3. Сыворотку считают безвредной, если все животные остаются клинически здоровыми в течение 10 суток.

Уровень содержания специфических антител в гипериммунной сыворотке проверяют к C1. perfringens в ИФА, к Е.coli в РА, к ТЛ- и ТС-токсинам Е.coli в РДП. Показатели специфической активности экспериментальных серий гипериммунной сыворотки приведены в табл.2.

Превентивные свойства гипериммунной сыворотки изучают на 100 белых мышах с массой 14-16 г, разделенных на 2 группы по 50 гол в каждой. Мышей первой группы иммунизируют гипериммунной сывороткой, полученной от быков-продуцентов, мыши второй группы служат контролем, т.е. сыворотка им не вводятся. Сыворотку вводят мышам 1 группы подкожно, введя каждой белой мыши по 0,5 см свежеприготовленной сыворотки, взятой в равном объеме от пяти быков. Заражение мышей проводят внутрибрюшинно через 24 ч после введения сыворотки подтитрованными смертельными дозами Е.coli (K99 и A20) и C1. perfringens (серотипы А, С и Д). Результаты этих исследований представлены в таблице 3.

Пример 6. Производственное испытание экспериментальных серий гипериммунной сыворотки.

За 2011-2012 г в лаборатории по изучению болезней молодняка ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» изготовлено 4 серии сыворотки в количестве 115 л. Результаты лабораторного контроля сыворотки показали, что все ее серии были стерильны, безвредны, ареактогенны и обладали выраженными лечебно-профилактическими свойствами.

Оценка лечебно-профилактической эффективности полиспецифической гипериммунной сыворотки проводилась в 2 скотоводческих хозяйствах Республики Татарстан, неблагополучных по анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят. С профилактической целью новорожденным телятам сыворотку вводили внутримышечно дозе 2 см3 на 1 кг массы тела. С лечебной целью сыворотку применяли внутримышечно в дозе 2,5 см3 на 1 кг массы тела. При тяжелом течении болезни сыворотку вводили повторно через 1-3 дня в тех же дозах внутрибрюшинно. Суточную лечебную дозу сыворотки вводили в 2 приема с интервалом 6 часов.

Результаты производственного испытания сыворотки представлены в таблицах 4 и 5, из которых следует, что гипериммунная сыворотка обладает выраженными лечебно-профилактическими свойствами. Так, например, в группе телят, обработанной гипериммунной сывороткой, заболело всего 29,6%, пало 5,7% телят, тогда как в контрольной (интактной) группе эти показатели составили 82,7% и 17,3% соответственно. При этом сохранность телят в опытной группе составила 94,3% против 82,7% в контрольной группе. Применение сыворотки в лечебных дозах позволило вылечить 93,0% больных телят, тогда как в контрольной группе, где в качестве лечебных средств применялись антибиотики и сульфаниламидные препараты, сохранность телят составила лишь 79,4%, что на 13,6% ниже, чем в опытной группе.

Пример 7. Общие сведения, биологические свойства, порядок применения сыворотки гипериммунной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят.

Общие сведения.

Сыворотка представляет собой прозрачную, слегка опалесцирующую жидкость желтовато-красного цвета. На дне флаконов, особенно при длительном хранении, выпадает незначительный белковый осадок, который при встряхивании легко разбивается в равномерную взвесь. Сыворотку расфасовывают по 100 и 200 см3 во флаконы стеклянные соответствующей вместимости, укупоривают резиновыми пробками, обкатывают алюминиевыми колпачками и этикетируют. На этикетке указывают: наименование организации-производителя, ее адрес и товарный знак, название сыворотки, количество во флаконе, дозу и способ применения, условия хранения, номер серии, номер госконтроля, дату изготовления (месяц, год), срок годности, обозначения ТУ, регистрационный номер, надпись «Для ветеринарного применения».

Флаконы с сывороткой упаковывают в ящики из фанеры, для обеспечения целостности флаконы обертывает бумагой или алигнином, в холодное время года - ватой или другими теплоизолирующими материалами. Внутрь каждого ящика вкладывают 3 экз. инструкции по применению сыворотки.

На упаковку с флаконами (транспортная тара) наклеивают этикетку, на которой указывают: наименование ведомства, наименование организации-производителя, ее адрес и товарный знак, название препарата, его количества в ящике, объем сыворотки во флаконе, номер серии, номер контроля, дату изготовления (месяц, год), срок годности, обозначение технических условий, регистрационный номер, надпись «Для ветеринарного применения».

Сыворотку транспортируют и хранят в сухом, защищенном от света месте при температуре от 4 до 8°C. Срок годности препарата 2 года со дня изготовления при соблюдении условий транспортировки и хранения.

Сыворотку с нарушенной целостностью флакона и подвергшихся замораживанию, без этикеток, наличием посторонних примесей, а также не использованную в день вскрытия флакона выбраковывают.

Биологические свойства.

Сыворотка получена из крови быков-продуцентов, гипериммунизированных инактивированными антигенами C1. perfringens (типы А, С, Д) и Е.coli (K99, A20)

У животных, привитых сывороткой, иммунитет формируется через сутки и сохраняется в течение 12-14 дней.

Порядок применения сыворотки.

Сыворотку применяют с профилактической и лечебной целью в угрожаемых и стационарно неблагополучных хозяйствах по анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят.

Перед применением флаконы с сывороткой необходимо тщательно встряхивать и подогревать в водяной бане до 37-38°C.

С профилактической целью новорожденным телятам сыворотку вводят внутримышечно дозе 2 см3 на 1 кг массы тела.

С лечебной целью сыворотку применяют внутримышечно в дозе 2,5 см3 на 1 кг массы тела. При тяжелом течении болезни сыворотку вводят повторно через 1-3 дня в тех же дозах внутрибрюшинно. Суточную лечебную дозу сыворотки следует вводить в 2-3 приема с интервалом 3-4 ч, что обеспечивает лучший терапевтический эффект.

При введении сыворотки необходимо соблюдать правила асептики и антисептики. Место введения сыворотки дезинфицируют 70% раствором этилового спирта. Шприцы и иглы перед применением стерилизуют кипячением, для каждого животного используют отдельную иглу. Наряду с применением сыворотки необходимо проводить в хозяйстве ветеринарно-санитарные мероприятия, направленные на уничтожение инфекционного начала.

Меры личной профилактики.

При применении сыворотки необходимо соблюдать правила личной гигиены, принятые при работе с лекарственными средствами. В местах работы должна находиться аптечка для оказания первой доврачебной помощи.

В случае попадания сыворотки на открытые участки тела или слизистые оболочки глаз, рта, носа и после окончания работы руки и другие открытые участки тела моют водой с мылом.

Сыворотка по истечении срока годности применению не подлежит.

Сыворотку следует хранить в местах, недоступных для детей.

Таблица 1 - Схема гипериммунизации быков-продуцентов
День инъекции антигена Доза антигена, см3
C1. perfringens Е.coli
1 8,0 8,0
14 10,0 10,0
28 15,0 15,0
42 20,0 20,0
Таблица 2 - Показатели специфической активности экспериментальных серий гипериммунной сыворотки
Вид антигена Метод исследования Титры специфических антител
Серия 1 Серия 2 Серия 3
C1. perfringens тип А ИФА 1:25600 1:12800 1:25600
C1. perfringens тип С ИФА 1:12800 1:25600 1:12800
C1. perfringens тип Д ИФА 1:12800 1:12800 1:12800
Е.coli K99 РА 1:3200 1:3200 1:3200
Е.coli A20 РА 1:6400 1:3200 1:6400
ТЛ-токсин РДП 1:8 1:8 1:16
ТС-токсин РДП 1:16 1:8 1:16
Таблица 3 - Превентивные свойства гипериммунной сыворотки на белых мышах в реакции нейтрализации по отношению к C1. perfringens и Е.coli
Группа мышей Кол-во, гол. Доза сыворотки, см3 Заражены бактериями Результаты контроля
Пало Выжило
к-во % к-во %
10 0,5 C1. perfringens, тип А 0 0 10 100
Опытная. 10 0,5 C1. perfringens, тип С 1 10 9 90
Обработана гипериммунной сывороткой 10 0,5 C1. perfringens, тип Д 1 10 9 90
10 0,5 Е.coli K99 0 0 10 100
10 0,5 Е.coli A20 0 0 10 100
10 - C1. perfringens, тип А 10 100 0 0
Контрольная 10 - C1. perfringens, тип С 10 100 0 0
Сывороткой не обработана 10 - C1. perfringens, тип Д 10 100 0 0
10 - Е.coli K99 10 100 0 0
10 - Е.coli A20 10 100 0 0
Таблица 4 - Результаты испытания профилактической эффективности сыворотки
Наименование хозяйства Опытная группа Контрольная группа
Всего голов не заболело заболело пало Всего голов не заболело заболело пало
гол. % гол. % гол. % гол. % гол. % гол. %
ООО «Среднее Девятово» 85 63 74,1 22 25,9 2 2,35 63 12 19,0 51 81,0 9 14,3
ООО «Ак Барс Агро» 128 87 68,0 41 32,0 9 7,03 139 23 16,5 116 83,5 26 18,3
Итого: 213 150 70,4 63 29,6 11 5,7 202 35 17,3 167 82,7 35 17,3
Таблица 5 - Результаты испытания лечебной эффективности сыворотки
Наименование хозяйства Опытная группа Контрольная группа
Всего голов выздоровело пало Всего голов выздоровело пало
голов % голов % голов % голов %
ООО «Среднее Девятово» 47 45 95,7 2 4,3 25 22 88,0 3 12,0
ООО «Ак Барс Агро» 68 62 91,2 6 8,8 67 51 76,2 16 23,8
Итого: 115 107 93,0 8 7,0 92 73 79,4 19 20,6

Способ получения гипериммунной сыворотки против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят, включающий гипериммунизацию быков-продуцентов инактивированными антигенами C1. perfringens, содержащими анатоксины и соматические антигены бактерий серотипов А, С и Д в культуральной среде при следующем соотношении компонентов на 1 л антигена:
анатоксин и соматический антиген штамма №28 (тип А) в культуральной среде с концентрацией 1012·(9-10) м.к. в 1 см3, см3 - 300,0-350,0;
анатоксин и соматический антиген штамма №392 (тип С) в культуральной среде с концентрацией 1012·(9-10) м.к. в 1 см3, см3 - 300,0-350,0;
анатоксин и соматический антиген штамма №213 (тип Д) в культуральной среде с концентрацией 1012·(9-10) м.к. в 1 см3, см3 - 300,0-350,0;
формалин, см3 - 4,0-5,0,
проводят дополнительную гипериммунизацию быков-продуцентов инактивированными антигенами E.coli, содержащими соматические и адгезивные антигены К99, А20 в физиологическом растворе, ТЛ-, ТС-анатоксины E.coli в среде культивирования при следующем соотношении компонентов на 1 л антигена:
соматический и адгезивный антиген штамма КВ-1 (К99) в физиологическом растворе с концентрацией 1012·(14-15) м.к. в 1 см3, см3 - 300,0-350,0;
соматический и адгезивный антиген штамма ПЗ-3 (А20) в физиологическом растворе с концентрацией 1012·(14-15) м.к. в 1 см3, см3 - 300,0-350,0;
формалин, см3 - 4,0-5,0;
термостабильные и термолабильные анатоксины штаммов Е. coli КВ-1 и ПЗ-3 в культуральной среде с титрами в РДП 1:8-1:16, л - до 1, а гипериммунизацию быков-продуцентов проводят четырехкратно путем подкожного введения дозы в область шеи с одной стороны антигена С1. perfringens и в область шеи с другой стороны - дозы антигена E.coli по следующей схеме: в первый день - по 8 см3, через 14 дней - по 10 см3, через 28 дней - по 15 см3 и через 42 дня - по 20 см3 с последующим взятием крови, затем отделяют сыворотку и консервируют.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для профилактики и лечения комплекса респираторных болезней свиней PRDC. Заявлено применение рекомбинантного протеина ORF2 PCV2 или иммуногенной композиции, содержащей рекомбинантный протеин ORF2 PCV2, для приготовления лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения комплекса респираторных болезней свиней (PRDC), обусловленных Mycoplasma hyorhinis и/или клинического симптома заметного увеличения смертности в средней до поздней фазы откорма, ассоциированного с PRDC, вызванного PCV2, и по меньше мере одного другого патогена, вызывающего PRDC у животного, где по меньшей мере один патоген, вызывающий PRDC, выбран из группы, включающей PRRSV, Mycoplasma hyopneumoniae, Bordetella bronchiseptica, вирусом свиного гриппа, Actinobacillus pleuropneumoniae, Mycoplasma hyorhinis.

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к неврологии, и касается лечения инфекционных заболеваний, сопровождающихся нейротоксическими нарушениями.
Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, рефлексотерапии и пелоидотерапии. Способ включает проведение курса антибактериальной и/или противовирусной терапии, который начинают на 5-7 день менструального цикла.

Изобретение относится к химическо-фармацевтической промышленности и касается применения производных фуллеренов общей формулы 1 где в общей формуле 1 фрагмент C2n обозначает: углеродный каркас фуллерена C60 (n=30), C70 (n=35); где в общей формуле 1 «x» может принимать значения от 4 до 12, а «y» - от 0 до 16; где в общей формуле 1 фрагмент А обозначает: - одновалентный атом фтора или водорода; - атом кислорода (-O-), присоединенный к фуллереновому каркасу в составе оксиранового фрагмента; где в общей формуле 1 NR1R2 описывается нижеследующими определениями: - остаток амина, где R1 и R2 - атомы водорода или замещенные протонированными (NH3 +) или непротонированными (NH2) аминогруппами линейные или разветвленные алкильные радикалы (CmH2m+1; m=1-20); - остаток пиперазина общей формулы Ic-1, где R, R′1, R′2 R′3 и R′4 - это атомы водорода или линейные или разветвленные алкильные (CmH2m+1 m=1-20) радикалы. в качестве противомикробных средств, а также противомикробной композиции включающей производные фуллеренов.

Предложены: применение соединения формулы (1) или его соли для получения лекарственного средства для усиления HIF-1α стабилизации в клетке, а также для получения лекарственного средства для усиления им-мунной реакции у субъекта, для профилактической обработки раны, препят-ствующей заражению, для лечения заражения, вызванного микроорганизмом, для повышения эффективности вакцины, для обработки раны у субъекта.

Изобретение относится к области медицины, точнее к инфектологии, и предназначено для профилактики развития иксодового клещевого боррелиоза у детей. Способ предупреждения иксодового клещевого боррелиоза у детей путем проведения антибактериальной терапии заключается в том, что при установлении факта присасывания инфицированного боррелиями клеща назначают внутримышечно цефтриаксон в дозе 50 мг/кг в сутки в течение 3 суток с последующим однократным внутримышечным введением бициллина «5» в дозе 50 тыс.

Изобретение относится к антибактериальным соединениям формулы (I) где R1 представляет собой алкоксигруппу; U, V и W каждый представляют собой СН, или один из U, V и W представляет собой N, а каждый другой представляет собой CH; A представляет собой CH2 или O; G обозначает CH=CH-E, где E представляет собой фенильную группу, моно- или дизамещенную галогеном, или G обозначает группу одной из приведенных ниже формул , где Z представляет собой СН или N, Q представляет собой О или S и K представляет собой O или S; или соль такого соединения.

Изобретение относится к области ветеринарии и медицины и может быть использовано для профилактики и лечения бактериальных инфекций. Антибактериальная инъекционная фармацевтическая композиция включает азитромицин, растворители и/или сорастворители, консервант, антиоксидант.

Изобретение относится к биохимии и представляет собой полипептид, обладающий антимикробной активностью, включающий аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 70% идентичности с аминокислотной последовательностью, соответствующей положениям 1-21 SEQ ID NO:2.

Настоящее изобретение относится к макролидному производному, а именно к гидрату солей эритромицина, который имеет молекулярную формулу C37Н67NO13·A·nH2O, n=1, 5; 2; 3; 3,5; 5; 6 или 11, где А представляет собой лактобионовую кислоту или тиоциановую кислоту; причем n=3; 3,5; 5; 6 или 11, если А является лактобионовой кислотой и n=1,5; 2 или 3, если А представляет собой тиоциановую кислоту, причем гидрат обладает хорошей водорастворимостью и лучшей стабильностью при хранении, что удобно для производства лекарственного средства для лечения и профилактики у людей или животных инфекционных заболеваний, вызванных бактериями, микоплазмами или хламидиями, которые чувствительны к эритромицину.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству, обладающему прокинетической и антидиспептической активностью. Композиция, обладающая прокинетической и антидиспептической активностью, содержащая: липофильный экстракт Zingiber officinale, полученный экстракцией корней и корневищ растения диоксидом углерода в сверхкритических условиях, и экстракт Cynara scolymus, полученный экстракцией надземных частей растения спиртом или водно-спиртовым растворителем и фракционированием на смоле, взятые в определенных весовых количествах.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к применению смектита для лечения и профилактики целиакии. Применение смектита, именуемого «диосмектитом», для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики целиакии.
Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской радиологии-онкологии и стоматологии, и может быть использовано для профилактики и лечения химиолучевых стоматитов при химиолучевой терапии рака орофарингеальной области.

Группа изобретений относится к композициям и способам лечения колита и других воспалительных заболеваний кишечника. Предложены: применение соединения формулы (1) или его соли для получения лекарственного средства для лечения воспалительного заболевания эпителиальной ткани кишечника (в частности, неопределенного колита, болезни Крона, синдрома раздраженной толстой кишки и ишемического колита) и фармацевтическая композиция того же назначения.
Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней новорожденных телят, преимущественно токсической диспепсии, колибактериоза и гастроэнтерита.

Группа изобретений относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии, и касается лечения язвенного колита или болезни Крона. Способ лечения включает введение в организм терапевтически эффективного количества прикрепляющихся клеток из плаценты, культивированных таким образом, что не дифференцируются в адипоциты или остеоциты.

Изобретение относится к пиперидиновым соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям, фармацевтической композиции на их основе, способу лечения с их использованием и их применению для лечения желудочно-кишечных заболеваний.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к энтеросорбенту и способу его получения. Энтеросорбент на основе торфа, освобожденного от липидов, дополнительно содержит шрот клюквы, пребиотик при определенном соотношении компонентов.

Изобретение обеспечивает кристаллическую твердую форму (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты или кристаллический гидрохлорид (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты.

Настоящее изобретение относится к области органической химии, а именно к замещенным имидазо[1,2-а]пиридинам формулы I, где R представляет собой -CH2COOH или -СООН. Также изобретение относится к способу получения соединения формулы I и применению соединения формулы I.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии и медицины. Предложен способ профилактики или лечения состояния глаза, связанного с высокой экспрессией или активностью фактора комплемента D, включающий введение субъекту антитела или его антигенсвязывающего фрагмента.
Наверх