Фармацевтическая композиция и способ получения противовирусных фракций (антивирус-с)


 


Владельцы патента RU 2526799:

Шестаков Виталий Александрович (RU)

(57) Группа изобретений относится к области медицины и предназначено для защиты клеток от цитопатогенного действия вируса гепатита С. Заявлена фармацевтическая композиция, обладающая противовирусным действием в отношении вируса гепатита C и способ ее получения. Проводят электростимуляцию головы бройлерных кур в режиме 100-120 B 3-4 A в течение 3-4 с. Забирают кровь и инкубируют её при 4-8°C в течение 18-24 часов. Осуществляют отбор сыворотки. Отобранную сыворотку фильтруют через фильтр с диаметром пор 10 нм, лиофилизируют и облучают в линейном ускорителе электронов (ЛУЭ) в режиме 10-40 кГр. Использование заявленной группы изобретений ээфективно для защиты клеток СПЭВ от цитопатогенного действия вируса гепатита С. 2 н. п. ф-лы, 2 табл., 1пр.

 

Область техники, к которой относится изобретение.

Предлагаемое изобретение относится к медицине, может быть использовано для получения биологически активных фракций из сыворотки крови кур, полезной при вирусных заболеваниях и расстройствах в организме человека и животных.

Уровень техники.

Широко известны способы получения биологически активной сыворотки крови, основанные на взятии крови у доноров и животных, инкубации, отделении с последующим консервированием. Способы предполагают получение сыворотки крови, повышающей устойчивость организма к таким экзогенным и эндогенным факторам, как атмосферное давление, температура, сила тяжести, свет и т.п., а также голод, жажда, сонная и половая потребности и т.п. (Патент Японии №2123287, EP 0542303 A2, Патенты России №2096041, 2120301, 2236238, 2302237).

Биологически активные фракции получают из сыворотки крови птиц, предварительно введенных в электрошок II-III степени, и подвергают гамма-обработке с использованием Co60 (Патент 2236238, 2302238 РФ) и ЛУЭ (Патент №2426548 РФ).

Задачей данного изобретения было получение антивирусных фракций по отношению к вирусу гепатита C (ВГС) из электрошоковой сыворотки крови кур и облученных в линейном ускорителе электронов (ЛУЭ).

Краткое изложение сущности изобретения.

Оказалось, что, если электрошоковую сыворотку крови птиц облучить в ЛУЭ в интервале 10-40 кГр, то можно получать биологически активные пептидные фракции, обладающие антивирусной активностью (будут раскрыты далее), которые полезны при вирусе гепатита C пациента (будут раскрыты далее).

Таким образом, целью настоящего изобретения является разработка нового способа получения антивирусных пептидных фракций.

Еще одной целью настоящего изобретения является разработка лекарственной формы новых биологически активных фракций. Изобретение предполагает разные лекарственные формы: в том числе для перорального, парентерального, назального, буккального, в виде суппозиториев и т.п. введения.

В изобретении предусматривается использование подходящих физиологически приемлемых носителей (таких как дистиллированная вода, физиологический раствор), наполнителей (например, масло какао, витепсол) биологически активных фракций. Биологически активные пептидные фракции могут применяться как самостоятельно, так и в сочетании с другими лечебными средствами.

Дополнительной целью изобретения является фармацевтическая композиция, в которой активным началом являются фракции согласно настоящему изобретению. При этом фармацевтическая композиция должна содержать активный ингредиент в количестве, достаточном для оказания благоприятного воздействия на организм пациента, т.е содержать его в эффективном количестве.

Еще одной целью изобретения является определение эффективной дозы пептидных фракций согласно данному изобретению. Полагается, что доза находится в интервале от 0,67 мг/мл до 5,0 мг/мл клеток пациента. Очевидно, что конкретная доза будет определяться лечащим врачом в зависимости от состояния пациента, его возраста, веса и курса лечения.

Подробное раскрытие изобретения.

Далее изобретение подробно раскрывается в предпочтительных вариантах конкретного выполнения, при этом приводимые примеры активных пептидных фракций, фармацевтических композиций, лекарственных форм не должны стать основанием для ограничения притязаний, а предназначены исключительно лишь для демонстрации осуществимости изобретения и реализации указанного (ных) назначения (ий). Каждый специалист в данной области, безусловно, убедится, что могут быть предложены многочисленные модификации приводимых вариантов выполнения изобретения, которые попадают под притязания, отраженные далее в формуле изобретения.

Получение фармацевтической композиции.

Для получения фармацевтической композиции использовали кровь птиц (кур), взятую через 3-4 с после электростимуляции головы в течение 3-4 с током напряжением 100-120 B и 3-4 A. Кровь собирали самотеком в полиэтиленовые флаконы после перерезки сонных артерий и вен и инкубировали при температуре 4-8°C в течение 18-24 ч, сыворотку отсасывали, фильтровали через фильтр 10 нм, лиофилизировали и облучали, например, в двух режимах, отражающих крайние значения заявленного интервала: 10 кГр (фармацевтическая композиция A-10) и 40 кГр (фармацевтическая композиция A-40).

Материал и методы.

Были получены две фармацевтические композиции в виде сухого порошка, растворимого в воде. Делали навески по 10 мг каждой композиции и растворяли в 1,0 мл трижды дистиллированной воды, после чего исходную концентрацию разводили в питательной среде 199 до концентраций от 10,0 мг до 0,15 мг в мл. Эти концентрации использовали дли изучения цитотоксического и противовирусного действия в отношении инфекции, вызванной вирусом гепатита С. Фармацевтическую композицию добавляли в момент заражения клеток вирусом при изучении противовирусной активности.

Вирус. Для изучения противовирусной активности фармацевтических композиций использовали цитопатогенный для культур клеток почки эмбриона свиньи (СПЭВ) вариант вируса гепатита C, изолированный нами из сыворотки крови больного хроническим гепатитом С. Вирусосодержащий материал представлял собой культуральную жидкость, собранную из зараженных вирусом гепатита C культур клеток СПЭВ на высоте развития цитопатических проявлений. Исходный титр вируса - 7,51 g ТЦЦ50/100 мкл.

В опытах использовали дозу вируса гепатита C, равную 10,0 и 1,0 ТЦД50.

Культуры клеток. Исследования противовирусной активности препарата проводили в чувствительных для репликации вируса гепатита C культурах клеток СПЭВ, выращенных в виде однодневного монослоя клеток в 24-луночных панелях на среде 199 с добавлением 7% сыворотки крупного рогатого скота, пенициллина и стрептомицина по 100 ЕД/мл.

Определение цитотоксических свойств фармацевтической композиции.

Фармацевтические композиции (A-10 и A-40) в концентрациях от 10 мг/мл до 0,15 мг/мл добавляли в питательную среду культур клеток СПЭВ, после чего на протяжении 4-х суток наблюдали за жизнеспособностью и пролиферативной активностью клеток. Учет результатов проводили по регистрации % жизнеспособных клеток и их пролиферативной активности.

Полученные результаты представлены в табл.1, 2.

Изучение цитотоксических свойств фармацевтических композиций для культур клеток СПЭВ показало (данные табл.1), что в концентрациях от 10,0 мг/мл до 0,15 мг/мл обе фармацевтические композиции не обладают цитотоксическими для данного вида клеток свойствами. Поэтому в исследованиях по изучению противовирусной активности использовали концентрации от 5,0 мг/мл до 0,15 мг в мл (не токсичные для клеток).

При использовании низкой дозы вируса гепатита C для заражения клеток СПЭВ (1,0 ТЦЦ50) был отмечен противовирусный эффект обеих фармацевтических композиций. Максимальный противовирусный эффект был отмечен при использовании композиции, подвергнутой облучению в дозе 10 кГр. Обработка инфицированных клеток СПЭВ приводила к 100% защите при использовании фармацевтических композиций в концентрациях от 0,67 мг/мл до 5,0 мг/мл.

Противовирусный эффект был обнаружен и у фармацевтической композиции, обработанной в режиме 40 кГр.

При использовании высокой дозы вируса гепатита C для заражения клеток (10,0 ТЦД50) были зарегистрированы следующие результаты: полной защиты зараженных клеток от цитопатогенного действия вируса гепатита C не наблюдали. Обнаружено, что обработка клеток СПЭВ сразу же после адсорбции вируса приводила к 85%-й (фармацевтическая композиция A-10) и 50%-й (фармацевтическая композиция A-40) защите зараженных клеток от патогенного действия вируса при использовании их в концентрациях 2,5 и 1,25 мг/мл соответственно.

Заключение.

Изучение противовирусной активности полученных фармацевтических композиций в отношении инфекции, вызванной цитопатогенным вариантом вируса гепатита C в культурах клеток СПЭВ, показало:

1. Для полученных фармацевтических композиций в используемых концентрациях не обнаружены цитотоксические свойства для культур клеток СПЭВ (способности вызывать гибель незараженных клеток).

2. Фармацевтические композиции в используемых концентрациях характеризуются положительным противовирусным эффектом в отношении инфекции, вызванной вирусом гепатита C в культурах клеток СПЭВ, в разных концентрациях они способны защитить 100% клеток от литического действия вируса гепатита C.

3. Максимальной способностью защищать клетки СПЭВ от цитопатогенного действия вируса гепатита C обладала фармацевтическая композиция A-10, при ее сохранении и у композиции A-40 хотя и в меньшем значении. Диапазон концентраций фармацевтических композиций, приводивших к 100% защите клеток, составлял от 5,0 до 0,67 мг/мл.

Табл.1
Цитотоксические свойства разных концентраций фармацевтических композиций для культур клеток СПЭВ.
Доза облучения Концентрации фарм. композиций (мг/мл), % погибших клеток в монослое
10 5 2,5 1,25 0,67 0,31 0,15 контроль
10 кГр 0 0 0 0 0 0 0 0
40 кГр ± 0 0 0 0 0 0 0

Приведенные в табл.2 данные свидетельствуют о противовирусной активности фармацевтических композиций в культурах клеток СПЭВ при использовании как различных концентраций фармацевтических композиций, так и разных доз вируса, используемых для поражения клеток.

Табл.2
Противовирусное действие фармацевтических композиций в отношении инфекции, вызванной вирусом гепатита C в культурах клеток СПЭВ.
Доза облучения Доза инфекции (ТЦД50) Концентрации фарм. композиций (мг/мл), % погибших клеток в монослое)
5 2,5 1,25 0,67 031 0,15 контроль
10 кГр 10,0 75 15 50 100 75 75 100
1,0 75 0 0 0 75 0 90
40 кГр 10,0 100 75 100 100 100 100 100
1,0 75 0 0 75 0 75 100

1. Способ получения фармацевтической композиции, обладающей противовирусным действием в отношении вируса гепатита C, при котором проводят электростимуляцию головы бройлерных кур в режиме 100-120 B 3-4 A в течение 3-4 с, забирают кровь, инкубируют при 4-8°C в течение 18-24 часов, осуществляют отбор сыворотки, отобранную сыворотку фильтруют через фильтр с диаметром пор 10 нм, лиофилизируют и облучают в линейном ускорителе электронов (ЛУЭ) в режиме: 10-40 кГр.

2. Фармацевтическая композиция, обладающая противовирусным действием в отношении вируса гепатита C, полученная способом по п.1.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к противовирусным средствам и представляет собой средство для снижения репродукции вируса гепатита С, содержащее хотя бы один полипренилфосфат или полипренилпирофосфат с количеством изопреновых звеньев от 9 до 20, преимущественно - от 13 до 18, либо смесь различных полипренилфосфатов или различных полипренилпирофосфатов, либо смесь различных полипренилфосфатов и полипренилпирофосфатов с указанным количеством изопреновых звеньев в массовом соотношении от 5:1 до 20:1.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к фармакологии и вирусологии, и может быть использована для профилактики и лечения вирусных инфекций, вызываемых РНКвыми вирусами с отрицательной цепью, предпочтительно вирусами гриппа, прежде всего вирусами типа H5 или H7.

Изобретение относится к новым биологически активным производным 1-(1-адамантил)этиламина (ремантадина), представляющим собой адамантил-пептиды, обладающие противовирусным действием.
Группа изобретений относится к фармацевтической промышленности, а именно противовирусному средству. Способ получения противовирусного средства проводят путем приготовления посевного мицелия базидиомицета опенок зимний Flammulina velutipes (Curtis) Singer, приготовления жидкой питательной среды, содержащей воду, в качестве источников углерода - растительное масло и мелассу, в качестве источника азота - кукурузную муку, в качестве минеральных солей дигидрофосфат калия и сульфат магния, ее стерилизации, засева приготовленным посевным мицелием стерильной жидкой питательной среды, культивирование в ней базидиомицета в аэробных условиях, полученную погруженную культуру разделяют на биомассу базидиомицета и культуральную жидкость, из которой выделяют сгусток посредством добавления к последней этилового спирта, который отжимают, высушивают и измельчают с получением противовирусного средства, при определенных условиях.
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при изготовлении вакцины против ящура. Способ изготовления вакцины против ящура включает культивирование вирусного антигена в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36-37 °С, очистку вирусной суспензии от балластных примесей, инактивацию, концентрирование полученного антигена вируса ящура и соединение концентрата антигена с адъювантом, при этом очистку вирусной суспензии от балластных примесей проводят добавлением производных полигуанидинов в конечной концентрации 0,005-0,01% или смеси хлороформа и производных полигуанидинов, взятых в весовых соотношениях (40-160):1, соответственно, в конечной концентрации 0,4-0,8.
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и биотехнологии, может быть использовано при разработке средств специфической профилактики и, в частности, для получения вакцины против бешенства животных.
Изобретение относится к медицинской вирусологии и микробиологии. Способ оценки активности лечебно-профилактических препаратов против вируса натуральной оспы включает введение в организм модельных животных контрольной и испытуемой групп по заданной схеме суспензии исследуемого противовирусного препарата, интраназальное заражение их штаммом вируса натуральной оспы, инкубацию вируса в организме животных и определение концентрации вируса в легких животных с последующим вычислением оценочных показателей снижения концентрации вируса в легких.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии, и касается лечения вирусных заболеваний. Для этого вводят лекарственное средство, содержащее в качестве действующих компонентов активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека и активированную-потенцированную форму антител к CD4 рецептору.

Заявленная группа изобретений относится к области ветеринарии и предназначена для лечения субклинической формы вызываемой PCV2 инфекции у животных. Заявлены способ лечения субклинической формы вызываемой PCV 2 инфекции; способ уменьшения нарушения роста из-за субклинической формы вызываемой PCV2 инфекции; способ снижения количества животных с вирусной нагрузкой, превышающей 106 геномных копий на мл сыворотки; способ снижения выделения вируса из носа и/или продолжительности виремии у животных, инфицированных субклинической формой PCV2.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии, и касается профилактики и лечения инфекционных вирусных заболеваний. Для этого вводят комплексное лекарственное средство, содержащее смесь нескольких компонентов в виде активированных-потенцированных форм антител к растворенному антигену и антигену, связанному с наружной мембраной клеток иммунной системы.

Группа изобретений относится к области биотехнологии и касается способа получения белков, выделенных при лизисе клеток Vero, включающего следующие стадии: культивирование и сбор клеток Vero; разрушение и лизис клеток Vero; очистку выделенных при лизисе клеток Vero белков путем гидрофобной хроматографии на фенилсефарозе 6FF, эксклюзивную хроматографию на сефарозе, элюцию, концентрирование, выделенные белки представляют собой смесь белков с молекулярными массами 11 кДа, 17-34 кДа, 55 кДа и 72-170 кДа.

Изобретение относится к медицине и касается фармацевтической композиции прозрачного раствора, содержащей пептид, где указанный пептид представляет собой Н-Inp-D-Bal-D-Trp-Phe-Apc-NH2, действующий в качестве лиганда рецептора GHS, или его фармацевтически приемлемую соль.

Изобретение относится к биохимии и представляет собой пептид, выделенный из морской анемоны Urticina grebelnyi и обладающий анальгетическим действием за счет ингибирования функциональной активности протонактивируемого ионного канала.

Группа изобретений относится к медицине и может быть использована для модификации пищевого поведения у субъекта. Для этого осуществляют периферическое введение субъекту PYY в количестве, эффективном для достижения физиологических уровней PYY3-36 в крови, плазме или сыворотке, определяемых после приема пищи.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой средство для вовлечения мезенхимальной стволовой клетки костного мозга в периферическую кровь из костного мозга, которое вводят в кровеносный сосуд или мышцу и которое содержит любой из компонентов: (a) белок HMGB1; (b) клетка, которая секретирует белок HMGB1; (c) вектор, в который встроена ДНК, кодирующая белок HMGB1; (d) белок HMGB2; (e) клетка, которая секретирует белок HMGB2; (f) вектор, в который встроена ДНК, кодирующая белок HMGB2; (g) белок HMGB3; (h) клетка, которая секретирует белок HMGB3; и (i) вектор, в который встроена ДНК, кодирующая белок HMGB3.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для активизации воспроизводительной функции каракульских овец. Биологическое средство, включающее экстракт женской плаценты и витамины, отличается тем, что оно дополнительно содержит фитоэкстракты (в которых в качестве экстрагента используют физиологический раствор) семян пустынных кормовых растений-однолетних солянок: солянки жесткоцветковой (Salsola sclerantha C.A.M.), спайноцветника спайноплодного (Gamanthus gamocarpus Mog.), климакоптеры шерстистой (Climacoptera lanata Pall.), и фитоэкстракты (в которых в качестве экстрагента используют физиологический раствор): из корневищ аира болотного (Acorus calamus L.) и каперсов колючих (Capparis spinosa L.) в соотношении экстракт плаценты: фитоэкстракты как 1:2 и водорастворимый витаминно-аминокислотный комплекс «Чиктоник», при следующем соотношении компонентов, мл: экстракт женской плаценты 100, фитоэкстракт семян солянки жесткоцветковой (Salsola sclerantha C.A.M.) 30, фитоэкстракт семян спайноцветника спайноплодного (GamanthusgamocarpusMog) 40, фитоэкстракт семян климакоптеры шерстистой (Climacoptera lanata Pall.) 40, фитоэкстракт из корневищ аира болотного (Acorus calamus L.) 40, фитоэкстракт семян каперсов колючих (Capparis spinosa L.) 50, водорастворимый витаминно-аминокислотный комплекс «Чиктоник» 2.

Предложено: применение средства, увеличивающего всасывание, содержащего сложный эфир жирной гидроксикислоты и полиэтиленгликоля 660 (в частности, Solutol® HS15) в составе фармацевтической композиции в качестве средства для увеличения всасывания терапевтического средства через слизистую оболочку, где терапевтическое средство имеет значение log Р менее чем приблизительно 1 и (a) представляет собой пептид, белок, нуклеиновую кислоту, антиген или вакцину; и/или (b) не является субстратом для Р-гликопротеина (P-Gp).

Изобретение относится к области фармацевтических препаратов антител, в частности к стабильному жидкому препарату антитела и к его применению. Изобретение представляет собой жидкий препарат гуманизированного антитела против фактора роста нервной ткани (NGF) с установленной аминокислотной последовательностью, представленной в описании, содержащий помимо антитела агент, регулирующий тоничность, в частности трегалозу, предпочтительно дигидрат трегалозы, гистидиновый буфер, хелатообразующий агент, представляющий EDTA, поверхностно-активное вещество - полисорбат, предпочтительно полисорбат 20 (PS20), взятых в определенных количественных соотношениях.

Заявляемое изобретение относится к биотехнологии и химико-фармацевтической промышленности, а именно представляет собой липосомальную фармацевтическую композицию, осуществляющую направленную транспортировку физиологически активных веществ с целью повышения терапевтической активности лекарственных препаратов, а также обеспечивающих высокую эффективность и стабильность активного вещества в липосомах.

Изобретение относится к медицине, а именно к комбустиологии, хирургии, косметологии, и может найти применение в качестве биопластического материала для замещения дефектов покровных тканей.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу промышленного получения фибрин-мономера из плазмы крови. Способ промышленного получения фибрин-мономера из плазмы крови, заключающийся в размораживании свежезамороженной плазмы человека при постоянном перемешивании, далее добавляют в плазму насыщенный раствор сульфата аммония, полученную смесь выдерживают при температуре, после чего центрифугируют, надосадочную жидкость сливают, затем в фосфатном буфере растворяют мочевину и подогревают, далее в этом буфере растворяют полученный ранее осадок фибриногена, затем добавляют сюда же тромбин человека, перемешивают и оставляют смесь при комнатной температуре, далее разделяют полученную смесь на три части, в емкость с одной из трех частей исходного раствора фибриногена вносят фосфатный буфер, образовавшийся в емкости фибриновый сгусток собирают, промывают в дистиллированной воде и отжимают, в результате получают три отмытых фибриновых сгустка, далее отмыв фибринового сгустка повторяют таким же образом еще два раза, конечный продукт - фибрин-мономер получают путем растворения отмытого фибринового сгустка в ацетатном буфере с мочевиной, полученный фибрин-мономер разливают во флаконы, далее флаконы с фибрин-мономером замораживают и лиофильно высушивают при определенных условиях.
Наверх