Способ изготовления вакцины против ящура


 


Владельцы патента RU 2522868:

Федеральное государственное унитарное предприятие "Щелковский биокомбинат" (RU)

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при изготовлении вакцины против ящура. Способ изготовления вакцины против ящура включает культивирование вирусного антигена в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36-37 °С, очистку вирусной суспензии от балластных примесей, инактивацию, концентрирование полученного антигена вируса ящура и соединение концентрата антигена с адъювантом, при этом очистку вирусной суспензии от балластных примесей проводят добавлением производных полигуанидинов в конечной концентрации 0,005-0,01% или смеси хлороформа и производных полигуанидинов, взятых в весовых соотношениях (40-160):1, соответственно, в конечной концентрации 0,4-0,8. В качестве производных полигуанидинов используют дигидрохлорид 1,12-дигуанидиногексана, или дигидрохлорид бис(3-гуанидинопропил)пиперазина, или дигидрохлорид 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина, или дигидрохлорид 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида. Изобретение обеспечивает повышение уровня очистки вирусной суспензии от балластных примесей и повышение иммуногенности целевого продукта. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.,16 пр.

 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при изготовлении вакцины против ящура.

Известен способ изготовления вакцины против ящура типа О, включающий культивирование вирусного антигена в суспензионной культуре клеток ВНК-21 в течение 10-15 часов при 36-37 °С, причем культивирование прекращают при достижении количества мертвых клеток 90-95%, после чего вирус ящура подвергают инактивации, очищают от балластных примесей, концентрируют полученный антиген и соединяют концентрат антигена с адъювантом. Вакцина, полученная данным способом, содержит авирулентный и очищенный антигенный материал в виде иммуногенных компонентов (146S+75S) вируса ящура типа О, гель гидроокиси алюминия, сапонин и поддерживающую среду (патент РФ №2212895, МПК А61К 39/135, C12N 7/00, 27.09.2003).

Недостатком известного способа изготовления вакцины является негарантированный уровень полученного антигенного материала в связи с оценкой его количества методом определения (1465+758)-компонентов, т.к. капсид вируса 75S как неполная структура антигена склонен к разрушению до капсомеров 12S при температурных колебаниях и других физико-химических факторах.

Известен также способ изготовления вакцины против ящура, включающий культивирование вирусного антигена в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36-37 °С, очистку вирусной суспензии от балластных примесей, инактивацию, концентрирование полученного антигена вируса ящура и соединение концентрата антигена с адъювантом, причем начиная с 6-8 часов культивирования вирусного антигена через каждые 2 часа определяют процент мертвых клеток, и при достижении его уровня 95% и выше осуществляют дальнейшее культивирование в течение 2-8 часов в зависимости от типа вируса (патент РФ №2332233, МПК А61К 39/135. Бюл. №24, 27.08.2008).

Однако в известном способе недостаточно эффективно проводится очистка вирусной суспензии от балластных примесей, что ведет к снижению иммуногенности целевого продукта.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа изготовления вакцины против ящура, позволяющего повысить уровень очистки вирусной суспензии от балластных примесей и иммуногенность целевого продукта.

Поставленная задача решается в способе изготовления вакцины против ящура, включающем культивирование вирусного антигена в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36-37 °С, очистку вирусной суспензии от балластных примесей, инактивацию, концентрирование полученного антигена вируса ящура и соединение концентрата антигена с адъювантом тем, что очистку вирусной суспензии от балластных примесей проводят добавлением производных полигуанидинов в конечной концентрации 0,005-0,01% или смеси хлороформа и производных полигуанидинов, взятых в весовых соотношениях (40-160):1, соответственно, в конечной концентрации 0,4-0,8%.

Поставленная задача также решается в способе изготовления вакцины против ящура тем, что в качестве производных полигуанидинов используют дигидрохлорид 1,12-дигуанидиногексана, или дигидрохлорид бис(3-гуанидинопропил)пиперазина, или дигидрохлорид 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина, или дигидрохлорида 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида.

Известны производные полигуанидинов, в частности дигидрохлорида 1,12-дигуанидиногексана, дигидрохлорида бис(3-гуанидинопропил)пиперазина, дигидрохлорида 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина, дигидрохлорида 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида, используемые в качестве как антитуберкулезные, противовирусные, фунгицидные, противоплесневые и антитрипаносомные препараты (Патент РФ «Производные полигуанидинов» №2230734, МПК С07С 279/02, 2004).

В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения, содержащие режимы в способе изготовления вакцины против ящура, аналогичные заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию «новизна».

Все режимы способа осуществимы в лабораторных и промышленных условиях, направлены на решение реальной технической задачи, т.е. предложение «промышленно применимо».

В задачу создания изобретения входило разработать способ технического процесса промышленного производства изготовления вакцины против ящура с учетом современных факторов. Нами впервые установлено, что очистка вирусной суспензии от балластных примесей при получении вакцины против ящура проводят добавлением производных полигуанидинов к вирусной суспензии при определенных режимах.

Пример 1. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 №550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.

Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 1,12-дигуанидиногексана) до конечной концентрации 0,01% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 1465-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 1465-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 1 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 2. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 №550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.

Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид бис(3-гуанидинопропил)пиперазина) до конечной концентрации 0,01% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 1465-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 1468-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 2 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 3. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 №550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.

Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорида 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина) до конечной концентрации 0,005% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 1465-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 1465-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 3 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 4. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 №550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.

Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорида 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида) до конечной концентрации 0,005% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 1465-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 1465-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 4 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 5. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 7 часов.

Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 1,12-дигуанидиногексана) до конечной концентрации 0,005% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 1465-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 1465-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 5 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 6. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 8 часов.

Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид бис(3-гуанидинопропил)пиперазина) до конечной концентрации 0,005% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 6 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 7. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 7 часов.

Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорида 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина) до конечной концентрации 0,01% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 7 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 8. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 8 часов.

Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорида 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида) до конечной концентрации 0,01% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 8 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 9. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 №550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.

Затем в биореактор добавляют смесь хлороформа и производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 1,12-дигуанидиногексана), взятых в весовых соотношениях 40:1, соответственно, до конечной концентрации 0,4% в реакционной среде и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 9 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 10. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 №550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки.

При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.

Затем в биореактор добавляют смесь хлороформа и производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 1,12-дигуанидиногексана), взятых в весовых соотношениях 160:1, соответственно, до конечной концентрации 0,8% в реакционной среде и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 10 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 11. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 №550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.

Затем в биореактор добавляют смесь хлороформа и производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид бис(3-гуанидинопропил)пиперазина), взятых в весовых соотношениях 40:1 до конечной концентрации 0,4% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 11 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 12. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 №550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.

Затем в биореактор добавляют смеси производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид бис(3-гуанидинопропил)пиперазина) и хлороформа, взятых в весовых соотношениях 160:1 до конечной концентрации 0,8% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 12 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 13. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 7 часов.

Затем в биореактор добавляют смесь хлороформа и производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина), взятых в весовых соотношениях 40:1 до конечной концентрации 0,4% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 13 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 14. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 8 часов.

Затем в биореактор добавляют смесь хлороформа и производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина), взятых в весовых соотношениях 160:1 до конечной концентрации 0,8% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 14 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 15. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 7 часов.

Затем в биореактор добавляют смесь хлороформа и производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида), взятых в весовых соотношениях 40:1 до конечной концентрации 0,4% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 15 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Пример 16.

Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 8 часов.

Затем в биореактор добавляют смесь хлороформа и производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида), взятых в весовых соотношениях 160:1 до конечной концентрации 0,8% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.

Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.

Полученную вакцину 16 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.

Качество вакцин 1-16, полученных согласно примерам 1-16, проводилось в сравнении с прототипом, данные приведены в таблице.

Таким образом, заявленный способ изготовления вакцины против ящура позволяет повысить в 1,3-1,7 раз уровень очистки вирусной суспензии от балластных примесей и в 1,3-1,5 раз повысить иммуногенность целевого продукта.

Группа Содержание балластного белка (мг/мл) Содержание ИмД50 Микробная контаминация (% случаев)
Вакцина 1 0,61 16 -
Вакцина 2 0,56 18 -
Вакцина 3 0,52 16 -
Вакцина 4 0,60 16 -
Вакцина 5 0,54 18 -
Вакцина 6 0,52 16 -
Вакцина 7 0,58 18 -
Вакцина 8 0,56 18 -
Вакцина 9 0,60 16 -
Вакцина 10 0,54 16 -
Вакцина 11 0,54 16 -
Вакцина 12 0,60 18 -
Вакцина 13 0,58 18 -
Вакцина 14 0,61 16 -
Вакцина 15 0,58 16 -
Вакцина 16 0,56 16 -
Прототип (очистка хлороформом) 0,89 12 100

1. Способ изготовления вакцины против ящура, включающий культивирование вирусного антигена в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36-37 °С, очистку вирусной суспензии от балластных примесей, инактивацию, концентрирование полученного антигена вируса ящура и соединение концентрата антигена с адъювантом, отличающийся тем, что очистку вирусной суспензии от балластных примесей проводят добавлением производных полигуанидинов в конечной концентрации 0,005-0,01% или смеси хлороформа и производных полигуанидинов, взятых в весовых соотношениях (40-160):1, соответственно, в конечной концентрации 0,4-0,8%.

2. Способ изготовления вакцины против ящура по п.1, отличающийся тем, что в качестве производных полигуанидинов используют дигидрохлорид 1,12-дигуанидиногексана, или дигидрохлорид бис(3-гуанидинопропил)пиперазина, или дигидрохлорид 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина, или дигидрохлорид 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и биотехнологии, может быть использовано при разработке средств специфической профилактики и, в частности, для получения вакцины против бешенства животных.
Изобретение относится к медицинской вирусологии и микробиологии. Способ оценки активности лечебно-профилактических препаратов против вируса натуральной оспы включает введение в организм модельных животных контрольной и испытуемой групп по заданной схеме суспензии исследуемого противовирусного препарата, интраназальное заражение их штаммом вируса натуральной оспы, инкубацию вируса в организме животных и определение концентрации вируса в легких животных с последующим вычислением оценочных показателей снижения концентрации вируса в легких.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии, и касается лечения вирусных заболеваний. Для этого вводят лекарственное средство, содержащее в качестве действующих компонентов активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека и активированную-потенцированную форму антител к CD4 рецептору.

Заявленная группа изобретений относится к области ветеринарии и предназначена для лечения субклинической формы вызываемой PCV2 инфекции у животных. Заявлены способ лечения субклинической формы вызываемой PCV 2 инфекции; способ уменьшения нарушения роста из-за субклинической формы вызываемой PCV2 инфекции; способ снижения количества животных с вирусной нагрузкой, превышающей 106 геномных копий на мл сыворотки; способ снижения выделения вируса из носа и/или продолжительности виремии у животных, инфицированных субклинической формой PCV2.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии, и касается профилактики и лечения инфекционных вирусных заболеваний. Для этого вводят комплексное лекарственное средство, содержащее смесь нескольких компонентов в виде активированных-потенцированных форм антител к растворенному антигену и антигену, связанному с наружной мембраной клеток иммунной системы.

Предложенная группа изобретений относится к области ветеринарии. Предложена иммуногенная композиция для собак, содержащая эффективное количество вирионов парвовируса с белком типа VP-2, содержащим нуклеиновую кислоту, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:2 и SEQ ID NO:4.
Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к композиции, содержащей инкапсулированную тритерпеновую кислоту: бетулиновую кислоту, урсоловую кислоту или их производные в виде солей и эфиров или тритерпеновый спирт - бетулин, которая может быть использована в медицине для лечения и профилактики вирусных инфекций, вызываемых ДНК- и РНК-содержащими вирусами, такими как вирусы гриппа, онковирусы, герпес, опоясывающий лишай, а также инфекций, вызываемых грамположительными и грамотрицательными бактериями: Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Shigella spp., Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp., Acinetobacter spp., Citrobacter spp., Pseudomonas spp., Serratia spp., Klebsiella spp., Antracoides spp., Cryptococcus spp., патогенными грибами рода Microsporum, Trichophyton, Nocardia, Aspergillus, дрожжеподобными грибами рода Candida, в т.ч.

Настоящее изобретение относится к новым алкил [2-(2-{5-[4-(4-{2-[1-(2-метоксикарбониламино-ацетил)-пирролидин-2-ил]-3Н-имидазол-4-ил}-фенил)-бута-1,3-диинил]-1Н-имидазол-2-ил}-пирролидин-1-ил)-2-оксо-этил]-карбаматам или их нафталин-1,5-дисульфонатам, которые обладают свойствами ингибитора белка NS5A и могут быть использованы для профилактики и лечения вирусных заболеваний, вызываемых вирусами гепатита С (HCV) и гепатита GBV-C.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к композиции, обладающей противовирусной активностью (варианты). Композиция, обладающая противовирусной активностью, включающая глицирризинат аммония, β-циклодекстрин, эмульгатор, консервант, лизоцим, полимерный носитель, регулятор pH, воду деминерализованную, при определенном соотношении компонентов.
Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к вирусологии, и касается профилактики инфицирования ВИЧ, комплексной профилактики и лечения заболеваний, вызываемых ВИЧ или ассоциированных с ВИЧ, в том числе СПИДа.
Изобретение относится к биотехнологии, ветеринарной вирусологии и микробиологии. Предложено применение этония в качестве адъюванта для производства сорбированной противоящурной вакцины, где этоний используют в виде 10%-ного водного раствора, который вносят в состав противоящурных вакцин в количестве 750 мкг на 1 см3 препарата.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к полиэпитопному вакцинному белку, предназначенному для иммунизации против вируса ящура, нуклеиновой кислоте, кодирующей данный белок, рекомбинантной плазмиде pA7248-AMV-H-PE для продукции в растениях данного белка и к вакцинному препарату для профилактики и защиты от инфекции, вызываемой вирусом ящура.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии. .

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии. .

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается вакцины против ящура типа А. Вакцина содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма вируса Aphtae epizooticae, сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, серотипа A, депонированного в коллекции ФГУ «ВГНКИ» под регистрационным номером №2045/Киргизия/2007-ДЕПА №2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный в перевиваемой культуре клеток ВНК-21, представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура, адъюванты гидроокись алюминия с сапонином и поддерживающую среду в эффективных соотношениях. Вакцина обладает высокой иммуногенностью и способна обеспечить эффективную защиту от возбудителя инфекции ящура, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока. 11 з.п. ф-лы, 14 табл., 1 ил, 4 пр.
Наверх