Способ определения n-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида в биологическом материале



 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2537121:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к биологии и токсикологической химии и может быть использовано в практике химико-токсикологических, экспертно-криминалистических и клинических лабораторий. Способ осуществляется следующим образом: биологический объект, содержащий N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамид, измельчают, двукратно по 45 минут настаивают с порциями органического изолирующего агента, которым является метилацетат, полученные извлечения объединяют, растворитель из объединенного извлечения испаряют, остаток обрабатывают ацетоном, ацетоновое извлечение отделяют, растворитель из объединенного извлечения испаряют, остаток растворяют в диэтиловом эфире, эфирный раствор экстрагируют буферным раствором с pH 9-10, водно-щелочной экстракт подкисляют 24% раствором хлороводородной кислоты до pH 2-3, полученный раствор насыщают бромидом натрия, экстрагируют этилацетатом, полученный экстракт упаривают в токе воздуха при температуре 20-22°C до получения сухого остатка, остаток растворяют в смеси гексана и ацетона, взятых в соотношении 8:2 по объему, хроматографируют в макроколонке с силикагелем L 40/100 мкм с использованием подвижной фазы гексан-ацетон в соотношении 8:2 по объему, фракции элюата, содержащие анализируемое вещество, объединяют, элюент испаряют в токе воздуха при температуре 20-22°C до полного удаления растворителя, остаток растворяют в метаноле и проводят определение комбинированным физико-химическим методом, в качестве которого используется хромато-масс-спектрометрия, с применением капиллярной колонки DB-5 MS EVIDEX с неподвижной фазой, представляющей собой 5%-фенил-95%-метилполисилоксан, используя масс-селективный детектор, работающий в режиме электронного удара, начальная температура термостата колонки составляет 70°C, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура повышается от 70°C до 290°C со скоростью 20°C в минуту, конечная температура колонки выдерживается в течение 16 минут, температура инжектора составляет 250°C, температура квадруполя 150°C, температура интерфейса детектора 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ, регистрируют масс-спектр по полному ионному току, вычисляя количество N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида по площади хроматографического пика. Достигается повышение чувствительности анализа. 2 пр., 3 табл.

 

Изобретение относится к биологии и токсикологической химии, а именно к способам определения N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида в биологическом материале, и может быть использовано в практике в практике химико-токсикологических, экспертно-криминалистических и клинических лабораторий. Способ относится к числу массовых.

Известен способ определения N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида в биологическом материале (ткани печени) на основе изолирования по Стасу-Отто, заключающийся в том, что биологический объект измельчают, настаивают 3-4 раза по 24 часа с органическим изолирующим агентом, которым является этанол, подкисленный щавелевой кислотой, отдельные извлечения объединяют, концентрируют, к концентрату прибавляют этанол, образующийся осадок белковых структур отфильтровывают, процесс концентрирования и прибавления этанола повторяют до тех пор, пока при прибавлении этанола к полученному в очередной раз концентрату не будет наблюдаться отсутствие осадка белковых структур, раствор разбавляют водой, реакцию среды полученного раствора доводят до pH 2, экстрагируют хлороформом, хлороформный экстракт упаривают до сухого остатка, остаток растворяют в этаноле, полученный раствор центрифугируют, вводят в хроматограф и определяют анализируемое вещество методом ВЭЖХ в колонке с сорбентом «Prontosil-120-5-С-18» размерами 75×2 мм, проводя процесс в градиентном режиме с использованием в качестве элюентов 0,1% раствора трифторуксусной кислоты и ацетонитрила, изменяя содержание ацетонитрила в подвижной фазе от 0% до 100% в течение 25 минут (Заздравных Н.А., Стаценко И.В., Воронкова Л.Г. Изолирование и идентификация нимесулида в биологическом материале // Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики. - 2008. - №13. - С.75-78).

Способ отличается длительностью выполнения, трудоемкостью, недостаточно высокими чувствительностью и селективностью определения.

Известен способ определения N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида в биологическом материале (тканях внутренних органов), заключающийся в том, что биологический объект измельчают, настаивают с 1% раствором гидроксида натрия однократно в течение 30 минут при периодическом перемешивании, полученное извлечение отделяют путем процеживания через марлю, подкисляют 6 н. раствором хлороводородной кислоты до pH 1,0-2,0, экстрагируют дважды порциями хлороформа, хлороформные экстракты объединяют, растворитель из объединенного экстракта испаряют, остаток растворяют в хлороформе, полученный раствор вносят в колонку с оксидом алюминия, элюируют вначале хлороформом, а затем этанолом, этанольный элюат собирают, растворитель из этанольного элюата испаряют, остаток растворяют в 0,1 н. растворе гидроксида натрия, исследуют поглощение образующегося окрашенного раствора в интервале длин волн 300-400 нм, анализируемое вещество идентифицируют по положению максимумов полос поглощения и форме спектральной кривой и рассчитывают количественное содержание N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида по величине оптической плотности, измеренной при длине волны 392 нм (Доброриз A.M. Обнаружение нимесулида в биологическом материале // Судебно-медицинская экспертизы. - 2009. - Т. 52, №4. - С.32-34).

Способ характеризуется недостаточно высокой чувствительностью.

Наиболее близким является способ определения N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида в биологическом материале (тканях внутренних органов), заключающийся в том, что биологический объект измельчают, двукратно по 45 минут настаивают с порциями органического изолирующего агента, которым является ацетон, полученные извлечения объединяют, растворитель из объединенного извлечения испаряют, остаток обрабатывают ацетоном, ацетоновое извлечение отделяют, хроматографируют в макроколонке с силикагелем КСС №3 80/120 мкм с использованием подвижной фазы гексан-ацетон в соотношении 75:25 по объему, фракции элюата, содержащие анализируемое вещество, объединяют, элюент испаряют в токе воздуха при температуре 20-22°C до полного удаления растворителя, остаток растворяют в хлороформе и проводят определение комбинированным физико-химическим методом, в качестве которого используется хромато-спектрофотометрия, при этом хроматографируют методом ТСХ на пластине «Сорбфил» марки ПТСХ-АФ-В-УФ, используя подвижную фазу толуол-ацетонитрил в соотношении 7:3 по объему, полученную хроматограмму проявляют в УФ-свете, анализируемое вещество элюируют из сорбента диметилформамидом, элюат спектрофотометрируют, вычисляя количество N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида по величине оптической плотности элюата, измеренной при длине волны 439,4 нм (Шорманов В.К., Герасимов Д.А., Сипливая Л.Е., Галушкин С.Г., Симонов Р.Ю. Распределение нимесулида в организме теплокровных животных // Фармация. - 2013. - Т. 62, №1. - С.39-42).

Способ характеризуется недостаточно высокой чувствительностью.

Техническим результатом настоящего изобретения является повышение чувствительности определения.

Технический результат достигается тем, что биологический объект измельчают, двукратно по 45 минут настаивают с порциями органического изолирующего агента, которым является метилацетат, полученные извлечения объединяют, растворитель из объединенного извлечения испаряют, остаток обрабатывают ацетоном, ацетоновое извлечение отделяют, растворитель из объединенного извлечения испаряют, остаток растворяют в диэтиловом эфире, эфирный раствор экстрагируют буферным раствором с pH 9-10, водно-щелочной экстракт подкисляют 24% раствором хлороводородной кислоты до pH 2-3, полученный раствор насыщают бромидом натрия, экстрагируют этилацетатом, полученный экстракт упаривают в токе воздуха при температуре 20-22°C до получения сухого остатка, остаток растворяют в смеси гексана и ацетона, взятых в соотношении 8:2 по объему, хроматографируют в макроколонке с силикагелем L 40/100 мкм с использованием подвижной фазы гексан-ацетон в соотношении 8:2 по объему, фракции элюата, содержащие анализируемое вещество, объединяют, элюент испаряют в токе воздуха при температуре 20-22°C до полного удаления растворителя, остаток растворяют в метаноле и проводят определение комбинированным физико-химическим методом, в качестве которого используется хромато-масс-спектрометрия, с применением капиллярной колонки DB-5 MS EVIDEX с неподвижной фазой, представляющей собой 5%-фенил-95%-метилполисилоксан, используя масс-селективный детектор, работающий в режиме электронного удара, начальная температура термостата колонки составляет 70°C, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура повышается от 70°C до 290°C со скоростью 20°C в минуту, конечная температура колонки выдерживается в течение 16 минут, температура инжектора составляет 250°C, температура квадруполя 150°C, температура интерфейса детектора 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ, регистрируют масс-спектр по полному ионному току, вычисляя количество N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида по площади хроматографического пика.

Способ осуществляется следующим образом: биологический объект, содержащий N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамид, измельчают, двукратно по 45 минут настаивают с порциями органического изолирующего агента, которым является метилацетат, полученные извлечения объединяют, растворитель из объединенного извлечения испаряют, остаток обрабатывают ацетоном, ацетоновое извлечение отделяют, растворитель из объединенного извлечения испаряют, остаток растворяют в диэтиловом эфире, эфирный раствор экстрагируют буферным раствором с pH 9-10, водно-щелочной экстракт подкисляют 24% раствором хлороводородной кислоты до pH 2-3, полученный раствор насыщают бромидом натрия, экстрагируют этилацетатом, полученный экстракт упаривают в токе воздуха при температуре 20-22°C до получения сухого остатка, остаток растворяют в смеси гексана и ацетона, взятых в соотношении 8:2 по объему, хроматографируют в макроколонке с силикагелем L 40/100 мкм с использованием подвижной фазы гексан-ацетон в соотношении 8:2 по объему, фракции элюата, содержащие анализируемое вещество, объединяют, элюент испаряют в токе воздуха при температуре 20-22°C до полного удаления растворителя, остаток растворяют в метаноле и проводят определение комбинированным физико-химическим методом, в качестве которого используется хромато-масс-спектрометрия с применением капиллярной колонки DB-5 MS EVIDEX с неподвижной фазой, представляющей собой 5%-фенил-95%-метилполисилоксан, используя масс-селективный детектор, работающий в режиме электронного удара, начальная температура термостата колонки составляет 70°С, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура повышается от 70°C до 290°C со скоростью 20°C в минуту, конечная температура колонки выдерживается в течение 16 минут, температура инжектора составляет 250°C, температура квадруполя 150°C, температура интерфейса детектора 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ, регистрируют масс-спектр по полному ионному току, вычисляя количество N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида по площади хроматографического пика.

Пример 1

Определение N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида в ткани печени

К 10 г ткани печени прибавляют 5 мг N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида, тщательно перемешивают биологический объект с веществом и оставляют на 1,5 часа при температуре 20-22°C. По истечении указанного времени смесь заливают 20 г органического изолирующего агента, которым является метилацетат, и настаивают 45 минут при перемешивании. Извлечение отделяют, операцию настаивания повторяют в вышеописанных условиях. Полученные извлечения объединяют, объединенное органическое извлечение упаривают до полного удаления растворителя в токе воздуха при 20-22°C, остаток неоднократно (трижды по 3 минуты) обрабатывают ацетоном (порциями по 15 г каждая) при энергичном перемешивании, ацетоновые извлечения отделяют, объединяют, растворитель из объединенного извлечения испаряют в токе воздуха при 20-22°C до полного удаления растворителя, остаток растворяют в 10 мл диэтилового эфира, образующийся раствор экстрагируют дважды порциями буферного раствора с pH 9-10 по 10 мл каждая. Отдельные водно-щелочные экстракты объединяют, подкисляют 24%-ным раствором хлороводородной кислоты до pH 2-3, полученный раствор насыщают бромидом натрия и экстрагируют дважды порциями этилацетата по 20 мл каждая. Отдельные этилацетатные экстракты объединяют, упаривают в токе воздуха при температуре 20-22°C до получения сухого остатка.

Остаток растворяют в 2-3 мл смеси гексана и ацетона, взятых в соотношении 8:2 по объему, и вносят в хроматографическую макроколонку размерами 490×11 мм, заполненную 10 г силикагеля L 40/100 мкм. Хроматографируют, используя подвижную фазу гексан-ацетон в соотношении 8:2 по объему. Элюат собирают отдельными фракциями по 2 мл каждая.

Фракции с 9 по 17 включительно объединяют, упаривают в токе воздуха при температуре 20-22°C до полного удаления растворителя. Остаток растворяют в 10 мл метанола (раствор А). 1,0 мл раствора А вносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят метанолом до метки (раствор Б).

4 мкл раствора Б вводят в хромато-масс-спектрометр.

Определение проводят, используя газовый хроматограф фирмы Agilent Technologies (США) модели 6850 Network GC System с квадрупольным масс-селективным детектором модели 5973 Network этой же фирмы.

Хроматографирование осуществляют в капиллярной колонке DB-5 MS EVIDEX длиной 25 м, внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой толщиной 0,33 мкм, представляющей собой 5%-фенил-95%-метилполисилоксан.

Начальная температура термостата колонки составляет 70°C, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура повышается от 70°C до 290°C со скоростью 20°C в минуту, конечная температура колонки выдерживается в течение 16 минут, температура инжектора составляет 250°C, температура квадруполя 150°C, температура интерфейса детектора 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ, регистрируют масс-спектр по полному ионному току и вычисляют количество N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида по площади хроматографического пика.

В качестве газа-носителя используется гелий. Подача газа-носителя производится со скоростью 0,6 мл/мин. Режим с делением потока 1:2. Масс-селективный детектор работает в режиме электронного удара (70 эВ). Регистрация масс-спектра проводится по полному ионному току с задержкой 3,5 минуты. Диапазон сканирования составляет 40-500 m/z.

Пик на хроматограмме с временем удерживания 17,14 мин соответствует N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамиду. В масс-спектре данного соединения, снятому по полному ионному току, обнаруживаются сигналы ряда характеристических заряженных частиц с массовыми числами 51, 77, 78, 128, 154, 169, 183, 199, 229, 308. Наиболее интенсивной является частица с массовым числом 154, интенсивность которой принимается за 100%.

N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамид идентифицируют по сочетанию времени удерживания в неподвижной фазе колонки и специфического набора сигналов характеристических заряженных частиц в его масс-спектре.

По площади хроматографического пика, полученного при регистрации интенсивности по полному ионному току, определяют количественное содержание N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида, используя уравнение градуировочного графика, и пересчитывают на навеску анализируемого вещества, внесенную в биологический материал.

Построение градуировочного графика

В ряд мерных колб вместимостью 25 мл вносят 0,05, 0,2, 0,8, 2,0, 5,0 мл 0,00125% раствора и 0,8, 2,0, 8,0, 12,0, 20,0 мл 0,0125% раствора N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида в метаноле и доводят объем содержимого каждой колбы до метки метанолом.

4 мкл каждого из полученных растворов вводят в хромато-масс-спектрометр.

Определение проводят, используя газовый хроматограф фирмы Agilent Technologies (США) модели 6850 Network GC System с квадрупольным масс-селективным детектором модели 5973 Network этой же фирмы.

Хроматографирование осуществляют в капиллярной колонке DB-5 MS EVIDEX длиной 25 м, внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой толщиной 0,33 мкм, представляющей собой 5%-фенил-95%-метилполисилоксан.

Начальная температура термостата колонки составляет 70°C, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура повышается от 70°C до 290°C со скоростью 20°C в минуту, конечная температура колонки выдерживается в течение 16 минут, температура инжектора составляет 250°C, температура квадруполя 150°C, температура интерфейса детектора 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ, регистрируют масс-спектр по полному ионному току и вычисляют количество N-[-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида по площади хроматографического пика.

В качестве газа-носителя используется гелий. Подача газа-носителя производится со скоростью 0,6 мл/мин. Режим с делением потока 1:2. Масс-селективный детектор работает в режиме электронного удара (70 эВ). Регистрация масс-спектра проводится по полному ионному току с задержкой 3,5 минуты. Диапазон сканирования составляет 40-500 m/z.

По результатам измерений на хромато-масс-спектрометре строят график зависимости площади пика от концентрации определяемого вещества. График линеен в интервале концентраций 5·10-11-2,0·10-7 г.

Методом наименьших квадратов рассчитывают уравнение градуировочного графика, которое в данном случае имеет вид:

S=429918·С-7874,

где S - площадь хроматографического пика; C - концентрация определяемого вещества в хроматографируемой пробе, нг.

Результаты количественного определения N-(4-нитро-2-фенокси-фенил)-метансульфонамида в ткани печени представлены в таблице 1.

Пример 2

Определение N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида в ткани легких

К 10 г ткани легких прибавляют 5 мг N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида, тщательно перемешивают биологический объект с веществом и оставляют на 1,5 часа при температуре 20-22°C. По истечении указанного времени смесь заливают 20 г органического изолирующего агента, которым является метилацетат, и настаивают 45 минут при перемешивании. Извлечение отделяют, операцию настаивания повторяют в вышеописанных условиях. Полученные извлечения объединяют, объединенное органическое извлечение упаривают до полного удаления растворителя в токе воздуха при 20-22°C, остаток неоднократно (трижды по 3 минуты) обрабатывают ацетоном (порциями по 15 г каждая) при энергичном перемешивании, ацетоновые извлечения отделяют, объединяют, растворитель из объединенного извлечения испаряют в токе воздуха при 20-22°C до полного удаления растворителя, остаток растворяют в 10 мл диэтилового эфира, образующийся раствор экстрагируют дважды порциями буферного раствора с pH 9-10 по 10 мл каждая. Отдельные водно-щелочные экстракты объединяют, подкисляют 24%-ным раствором хлороводородной кислоты до pH 2-3, полученный раствор насыщают бромидом натрия и экстрагируют дважды порциями этилацетата по 20 мл каждая. Отдельные этилацетатные экстракты объединяют, упаривают в токе воздуха при температуре 20-22°C до получения сухого остатка.

Остаток растворяют в 2-3 мл смеси гексана и ацетона, взятых в соотношении 8:2 по объему, и вносят в хроматографическую макроколонку размерами 490×11 мм, заполненную 10 г силикагеля L 40/100 мкм. Хроматографируют, используя подвижную фазу гексан-ацетон в соотношении 8:2 по объему. Элюат собирают отдельными фракциями по 2 мл каждая.

Фракции с 9 по 17 включительно объединяют, упаривают в токе воздуха при температуре 20-22°C до полного удаления растворителя.

Остаток растворяют в 10 мл метанола (раствор А). 1,0 мл раствора А вносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят метанолом до метки (раствор Б).

4 мкл раствора Б вводят в хромато-масс-спектрометр.

Определение проводят, используя газовый хроматограф фирмы Agilent Technologies (США) модели 6850 Network GC System с квадрупольным масс-селективным детектором модели 5973 Network этой же фирмы.

Хроматографирование осуществляют в капиллярной колонке DB-5 MS EVIDEX длиной 25 м, внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой толщиной 0,33 мкм, представляющей собой 5%-фенил-95%-метилполисилоксан.

Начальная температура термостата колонки составляет 70°C, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура повышается от 70°C до 290°C со скоростью 20°C в минуту, конечная температура колонки выдерживается в течение 16 минут, температура инжектора составляет 250°C, температура квадруполя 150°C, температура интерфейса детектора 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ, регистрируют масс-спектр по полному ионному току и вычисляют количество N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида по площади хроматографического пика.

В качестве газа-носителя используется гелий. Подача газа-носителя производится со скоростью 0,6 мл/мин. Режим с делением потока 1:2. Масс-селективный детектор работает в режиме электронного удара (70 эВ). Регистрация масс-спектра проводится по полному ионному току с задержкой 3,5 минуты. Диапазон сканирования составляет 40-500 m/z.

Пик на хроматограмме с временем удерживания 17,14 мин соответствует N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамиду. В масс-спектре данного соединения, снятому по полному ионному току, обнаруживаются сигналы ряда характеристических заряженных частиц с массовыми числами 51, 77, 78, 128, 154, 169, 183, 199, 229, 308. Наиболее интенсивной является частица с массовым числом 154, интенсивность которой принимается за 100%.

N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамид идентифицируют по сочетанию времени удерживания в неподвижной фазе колонки и специфического набора сигналов характеристических заряженных частиц в его масс-спектре.

По площади хроматографического пика, полученного при регистрации интенсивности по полному ионному току, определяют количественное содержание N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида, используя уравнение градуировочного графика, и пересчитывают на навеску анализируемого вещества, внесенную в биологический материал.

Построение градуировочного графика

Построение градуировочного графика и его уравнение приводятся в примере 1.

Результаты количественного определения N-(4-нитро-2-фенокси-фенил)-метансульфонамида в ткани легких представлены в таблице 2.

Предлагаемый способ по сравнению с прототипом в 5,7·104 раз повышает чувствительность определения в детектируемой пробе и в 12 раз - в биологическом материале.

Сравнительные характеристики предлагаемого и известного способов представлены в таблице 3.

Таблица 1
Результаты определения N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида в ткани печени (n=5; p=0,95)
Внесено N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида, мг в 10 г ткани печени Найдено
площадь пика на хроматограмме, усл. ед. мг в хроматографируемой пробе мг в пересчете на навеску, внесенную в биоматериал % от внесенной в биоматериал навески Метрологические характеристики,
%
1 5,00 7591356 1,768·10-5 4,419 88,38 x = 84 , 57
2 5,00 7342004 1,710·10-5 4,274 85,48 S=2,50
3 5,00 7047080 1,641·10-5 4,103 82,05 S x = 1 , 12
4 5,00 7110708 1,656·10-5 4,140 82,79 Δ x = 3 , 11
5 5,00 7226786 1,683·10-5 4,207 84,14 ε ¯ = 3 , 68
Таблица 2
Результаты определения N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида в ткани легких (n=5; р=0,95)
Внесено N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида, мг в 10 г ткани легких Найдено Метрологические характеристики, %
площадь пика на хроматограмме, усл. ед. мг в хроматографируемой пробе мг в пересчете на навеску, внесенную в биоматериал % от внесенной в биоматериал навески
1 5,00 7624030 1,775·10-5 4,438 88,76 x = 85 , 72
2 5,00 7028164 1,637·10-5 4,092 81,83 S=2,72
3 5,00 7246562 1,687·10-5 4,219 84,37 S x = 1 , 21
4 5,00 7514831 1,750·10-5 4,375 87,49 Δ x = 3 , 38
5 5,00 7399613 1,723·10-5 4,308 86,15 ε ¯ = 4 , 94
Таблица 3
Сравнительная характеристика предлагаемого и известного способов (на примере исследования ткани печени)
Показатели Предлагаемый способ Известный способ
Чувствительность (открываемый минимум)
а) в 100 г биоматериала 5,0·10-6 г 6,0·10-5 г
б) в детектируемой пробе 3,5·10-11 г 2,0·10-6 г
Интервал линейности градуировочного графика (г в детектируемой пробе)
5,0·10-11-2,0·10-7 г 2,0·10-6-6,4·10-5 г

Способ определения N-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида в биологическом материале (тканях внутренних органов), заключающийся в том, что биологический объект измельчают, двукратно по 45 минут настаивают с порциями органического изолирующего агента, полученные извлечения объединяют, растворитель из объединенного извлечения испаряют, остаток обрабатывают ацетоном, ацетоновое извлечение отделяют, хроматографируют в макроколонке с силикагелем с использованием подвижной фазы гексан-ацетон, фракции элюата, содержащие анализируемое вещество, объединяют, элюент испаряют в токе воздуха при температуре 20-22°C до полного удаления растворителя, остаток растворяют и проводят определение комбинированным физико-химическим методом, отличающийся тем, что органическим изолирующим агентом является метилацетат, перед хроматографированием в макроколонке с силикагелем растворитель из ацетонового извлечения испаряют, остаток растворяют в диэтиловом эфире, эфирный раствор экстрагируют буферным раствором с рН 9-10, водно-щелочной экстракт подкисляют 24% раствором хлороводородной кислоты до рН 2-3, полученный раствор насыщают бромидом натрия, экстрагируют этилацетатом, полученный экстракт упаривают в токе воздуха при температуре 20-22°C до получения сухого остатка, остаток растворяют в смеси гексана и ацетона, взятых в соотношении 8:2 по объему, при хроматографировании в макроколонке используют силикагель L 40/100 мкм, соотношение гексана и ацетона в подвижной фазе составляет 8:2 по объему, остаток перед проведением определения комбинированным физико-химическим методом растворяют в метаноле, в качестве комбинированного физико-химического метода используется хромато-масс-спектрометрия с применением капиллярной колонки DB-5 MS EVIDEX с неподвижной фазой, представляющей собой 5%-фенил-95%-метилполисилоксан, используют масс-селективный детектор, работающий в режиме электронного удара, начальная температура термостата колонки составляет 70°C, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура повышается от 70°C до 290°C со скоростью 20°C в минуту, конечная температура колонки выдерживается в течение 16 минут, температура инжектора составляет 250°C, температура квадруполя 150°C, температура интерфейса детектора 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ, регистрируют масс-спектр по полному ионному току, вычисляя количество N-[-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида по площади хроматографического пика.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической, лабораторной диагностике, микробиологическим методам исследования, и направлено на стандартизацию исследования слюны методом клиновидной дегидратации/кристаллографии.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для обоснования предельно допустимых концентраций (ПДК) тяжелых металлов в крови детей, проживающих в условиях загрязненной среды обитания, по критериям риска для здоровья при хронической многосредовой экспозиции.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ экспресс-диагностики острых кишечных инфекций (ОКИ), включающий выявление маркеров-индикаторов этиологии ОКИ, с использованием иммунологического лабораторного исследования, отличается тем, что этиологию ОКИ устанавливают у детей ранней возрастной категории, предпочтительно у новорожденных, при этом определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-10 и наличие хронической фетоплацентарной недостаточности (ХФПН), после чего рассчитывают вероятность (Р) бактериальной этиологии ОКИ, причем значение Р больше 50% свидетельствует о бактериальной этиологии ОКИ, а меньше 50% свидетельствует об отсутствии бактериальной этиологии ОКИ, и необходимости проведения второго этапа диагностики, на котором определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-4, выявляют срок прикладывания к груди, а также вид вскармливания, при этом рассчитывают вероятность (Р) вирусной либо вирусно-бактериальной этиологии ОКИ, причем значение Р больше 50% свидетельствует о вирусной этиологии ОКИ, а меньше 50% свидетельствует о вирусно-бактериальной ОКИ.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики генетического риска развития осложненного клинического течения урогенитальной хламидийной инфекции у человека.
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, и касается диагностики недифференцированной дисплазии соединительной ткани (НДСТ) у женщин с потерей беременности в анамнезе.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть использована для диагностирования наличия заболевания ротовой полости у субъекта. Для этого предложены устройство и способ.

Изобретение относится к спортивной медицине, а именно к способу донозологической диагностики здоровья спортсменов. Проводят комплексное клинико-лабораторное исследование спортсмена через 12-16 часов после прекращения тяжелой физической нагрузки.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ прогнозирования эффективности лечения пациентов с неходжкинскими злокачественными лимфомами высокой степени злокачественности.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ диагностики нарушений агрегации тромбоцитов при муковисцидозе у детей, включающий проведение теста на агрегацию тромбоцитов с индукторами на агрегометре «Multiplate», при этом в кюветы с магнитной мешалкой и электродами добавляют 400 мкл NaCl при 37°C и затем сразу добавляют 400 мкл цельной крови из пробирки с гирудином, инкубируют в камере прибора две минуты, затем добавляют в кювету 30 мкл индуктора агрегации, выбранного из группы: растворимый рецептор тромбина - пептид-6, аденозиндифосфат, арахидоновая кислота, при этом скорость агрегации тромбоцитов изображается на экране прибора в виде кривой и автоматически рассчитывается площадь под кривой U, по значению площади U под кривой судят о состоянии агрегации трмбоцитов в сравнении с референсными значениями в группе здоровых детей и при повышении порогового значения площади U выше референсного судят о гиперагрегации тромбоцитов, а при понижении порогового значения площади U ниже референсного судят о гипоагрегации тромбоцитов.

Изобретение относится к области микробиологии, а именно к способу характеристики микроорганизмов. Сущность способа состоит в (a) получении тестируемого образца, о котором известно, что он содержит или может содержать микроорганизмы; (b) наслаивании тестируемого образца на плотностный буфер в контейнере, где указанный плотностный буфер обладает однородной плотностью от приблизительно 1,025 до приблизительно 1,120 г/мл; (c) добавлении идентификатора в указанный тестируемый образец и/или в указанный плотностный буфер; (d) центрифугировании указанного контейнера для разделения микроорганизмов от других компонентов указанного тестируемого образца и образовании осадка микроорганизмов; (e) спектроскопическом исследовании осадка и/или указанного одного или более чем одного идентификатора с получением измерений, которые характеризуют микроорганизмы, где указанные спектроскопические исследования проводят при нахождении указанного осадка в указанном контейнере; и (f) характеристике микроорганизмов в осадке на основании полученных измерений и/или присутствия или отсутствия указанного идентификатора или метаболизированной формы указанного идентификатора в осадке, где указанные микроорганизмы характеризуют по одной или более моделям классификации, выбранным из группы, состоящей из групп по Граму, клинических групп по Граму, терапевтических групп и функциональных групп.

Изобретение относится к газохроматографическому анализу различных химических соединений и может быть использовано в медицине, биологии, экологии и допинговом контроле.

Изобретение относится к способу получения перфторированного производного сложного эфира посредством химической реакции, где указанная реакция представляет собой реакцию фторирования служащего сырьем исходного соединения, реакцию химического превращения фрагмента перфторированного производного сложного эфира с получением другого перфторированного производного сложного эфира или реакцию взаимодействия карбоновой кислоты со спиртом при условии, что по меньшей мере один из реагентов - карбоновая кислота или спирт - представляет собой перфторированное соединение, причем указанное перфторированное производное сложного эфира представляет собой соединение, в состав которого входит фрагмент приведенной ниже формулы 1 и имеет температуру кипения самое большее 400°С, согласно которому время проведения упомянутой химической реакции является достаточным для того, чтобы выход перфторированного производного сложного эфира достиг заранее заданного значения, и при этом указанный выход перфторированного производного сложного эфира определяют посредством газовой хроматографии с использованием неполярной колонки.

Изобретение относится к области высокоэффективной жидкостной хроматографии. .

Изобретение относится к области высокоэффективной жидкостной хроматографии. .

Изобретение относится к хроматографии и может быть использовано для идентификации индивидуальных соединений или отдельных компонентов сложных смесей в различных отраслях народного хозяйства: химической, нефтяной, газовой, нефтехимической, нефтеперерабатывающей, металлургии, медицине, биологии, экологии и др.

Изобретение относится к охране окружающей среды и может быть использовано как метод контроля загрязнения природной среды полициклическими ароматическими углеводородами (ПАУ).

Изобретение относится к газовой хроматографии и может быть использовано при обработке информации, поступающей от хроматографа , для осуществления анализа с.меси веществ в случае неполного разделения хро.матографических зон.

Изобретение относится к способу прогнозирования газохроматографических индексов удерживания алкилфторфосфонатов и может быть использовано для идентификации опасных соединений. Предложенный способ заключается в преобразовании соединения несимметричной структуры в два соединения симметричной структуры относительно выбранного центра симметрии и в определении индекса удерживания как полусуммы индексов удерживания соединений симметричных структур, отличающийся тем, что в качестве центра симметрии соединения класса O-алкилалкилфторфосфонатов выбирают такой атом углерода в O-алкильном радикале, в разветвлении которого находятся два различных алкильных фрагмента или алкильный фрагмент и атом водорода; далее производят структурные преобразования соединения в два соединения того же класса, O-алкилалкилфторфосфонатов, симметричной структуры относительно выбранного атома углерода, используя лишь эти фрагменты и не подвергая структурному изменению остальную часть молекулы. Предложен новый способ прогнозирования газохроматографических индексов с улучшенной достоверностью и объективностью. 1 пр., 2 табл., 3 ил.
Наверх