Способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов


 


Владельцы патента RU 2547573:

Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Нижегородская Государственная Сельскохозяйственная Академия" (ФГБОУ ВПО НГСХА) (RU)

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к лабораторным методам исследования. Для оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов клетки фиксируют глутаровым альдегидом, отмывают дистиллированной водой и помещают на предметное стекло, обработанное хлористым лантаном, перемешивают и с помощью световой микроскопии наблюдают за агрегацией клеток. Появление агрегатов эритроцитов свидетельствует о присутствии фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов. Изобретение обеспечивает создание простого, быстрого, не требующего специального оборудования и дефицитных реактивов способа оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов. 3 пр.

 

Предлагаемое изобретение относится к биологии и медицине, а именно к лабораторным методам исследования, и может использоваться для оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов.

Известно, что в эритроцитах фосфолипиды расположены асимметрично. Фосфатидилхолин и сфингомиелин локализованы на внешней половине липидного бислоя, фосфатидилэтаноламин на внешней и внутренней половине мембраны. Отрицательно заряженный фосфолипид фосфатидилсерин локализован исключительно на внутренней стороне липидного бислоя (Zwaal R.F.A., Schroit A.J. Blood. 1997. Vol.89. P.1121-1132). Выход фосфатидилсерина на поверхность мембран клеток крови при многих патологических состояниях ускоряет свертывание крови, приводит к тромботическим состояниям (Zwaal R.F.A, Comfurius P., Bevers E.V. Cell.Mol.Life Sci. 2005. Vol.62. P.971-988).

Лантан, являясь трехвалентным катионом, имеет высокое сродство к фосфатидилсерину и в низких концентрациях избирательно взаимодействует с отрицательно заряженным фосфатидилсерином (Bentz J., Alford О., Cohen J., Duzgunes N. Biophys J. 1988. Vol.53. P.593-607).

Принцип предлагаемого способа оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов основан на электростатическом взаимодействии положительно заряженного лантана с отрицательным фосфатидилсерином. В результате взаимодействия лантана с фосфатидилсерином происходит агрегация эритроцитов.

В качестве прототипа выбран способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов, который включает добавление к эритроцитам флюоресцентного белка аннексина V и последующее измерение флюоресценции с помощью проточного цитофлюориметра (Kuypers F.A., Lewis R.A., Hua M. Et al. Blood. l996. Vol.87. P.1179-1183).

Однако для этого требуется дорогостоящее дефицитное оборудование (проточный цитофлюориметр) и дорогие дефицитные реактивы.

Задача предлагаемого изобретения - совершенствование способа.

Технический результат - упрощение способа оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов.

Технический результат достигается за счет того, что в способе? включающем фиксацию эритроцитов с помощью глутарового альдегида, их отмывание, помещение на предметное стекло, обработанное хлористым лантаном, наблюдение за появлением агрегатов, по появлению агрегатов эритроцитов судят о присутствии фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов.

Способ осуществляется следующим образом. Эритроциты фиксируют в 1%-ном растворе глутарового альдегида, приготовленного на фосфатном буфере, в течение 60 мин при комнатной температуре. После фиксации эритроциты трижды отмывают дистиллированной водой с последующим центрифугированием при 3000 об/мин в течение 5 мин. Отмытые эритроциты переносят на предметное стекло, обработанное 0.5 мМ раствором хлористого лантана, перемешивают и наблюдают с помощью светового микроскопа за образованием агрегатов клеток. Появление агрегатов свидетельствует о присутствии фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов.

Известно, что эритроциты кренатной формы (эхиноциты) в отличие от эритроцитов нормальной формы (дискоциты) имеют на поверхности мембраны высокое содержание фосфатидилсерина (Wolfs J.L.N., Comfurius Р., Bevers E.M., Swaal R.F.A. Molecular Membrane Biology. 2003. Vol.20. P.83-91).

В качестве примеров использовали дискоциты и эхиноциты. Эхиноциты получали путем истощения; по АТФ (Feo С., Mohandas N. Nature. 1977. Vol.265. P. 166-168) и после обработки лизофосфатидной кислотой (Chung S.M., Bae O.N., Lim K.M. et al. Arterioscler.Thromb. Vasc.Biol. 2007. Vol.27. P.414-421).

Пример 1. Фиксированные дискоциты помещают на предметное стекло, обработанное лантаном, перемешивают и наблюдают с помощью светового микроскопа. Наблюдается отсутствие агрегатов эритроцитов. На поверхности мембран эритроцитов фосфатидилсерин отсутствует.

Пример 2. Фиксированные эхиноциты, полученные после истощения по АТФ, помещают на предметное стекло, обработанное лантаном, перемешивают и наблюдают с помощью световой микроскопии. Наблюдаются агрегаты эритроцитов. На поверхности мембран эритроцитов присутствует фосфатидилсерин.

Пример 3. Фиксированные эхиноциты, полученные после обработки лизофосфатидной кислотой, помещают на предметное стекло, обработанное лантаном, перемешивают и наблюдают с помощью световой микроскопии. Наблюдаются агрегаты эритроцитов. На поверхности мембран эритроцитов присутствует фосфатидилсерин.

Таким образом, предлагаемый способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов не требует специального оборудования.

Преимуществом предлагаемого способа является простота, доступность, быстрота, отсутствие необходимости в сложном дорогостоящем оборудовании и дорогих дефицитных реактивов.

Способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов, включающий фиксацию эритроцитов глутаровым альдегидом, отличающийся тем, что для оценки присутствия фосфатидилсерина фиксированные эритроциты помещают на предметное стекло, обработанное хлористым лантаном, перемешивают и по появлению агрегатов судят о присутствии фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области судебной медицины, криминалистики и может быть использовано в этих областях при экспертном отождествлении личности умершего ребенка раннего возраста с диагнозом фетального алкогольного синдрома, а также для диагностики фетального алкогольного синдрома у умершего ребенка раннего возраста.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в онкологии, урологии, клинической лабораторной диагностике для цитологического и/или иммуноцитохимического анализа спиртового смыва мочевого пузыря для диагностики рака мочевого пузыря.
Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии и к патолого-анатомической диагностике, и может быть использовано для прогнозирования течения инфильтрирующего рака молочной железы.
Изобретение относится к медицине, онкологии и может применяться для ранней диагностики опухолей позвонков. Проводят трехступенчатую диагностику всем больным с опухолевыми заболеваниями различной локализации.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложена биосенсорная система и тестовые сенсоры (варианты) для определения концентрации анализируемого вещества в образце.
Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования развития полипозного риносинусита у больных бронхиальной астмой, который осуществляется путем определения в крови пациентов показателей эндотоксикоза: лейкоцитов, молекул средней массы, креатинина, мочевины и скорости оседания эритроцитов; прогноз осуществляют с помощью дискриминантного уравнения: D=6,900×лейкоциты(×10^9/л)+2,640×скорость оседания эритроцитов (мм/ч)+17,819×молекулы средней массы (ед.
Изобретение относится к медицине и описывает способ прогнозирования выраженности болевого синдрома после липосакции с помощью забора липоаспирата и его центрифугирования, при этом измеряют в миллиметрах высоту образовавшихся верхнего и нижнего слоев жира, вычисляют отношение верхнего слоя жира к нижнему и при значении данного показателя более 0,2 прогнозируют выраженный болевой синдром.

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для для оценки эффективности химиотерапии при лечении цитостатиками злокачественных новообразований эпителиальных тканей.

Изобретение относится к области медицины, а именно к методу медицинской диагностики, и может быть использовано в лабораторно-диагностической практике для определения пиридоксальфосфата в эритроцитах периферической крови, как в норме, так и при патологических состояниях организма, в том числе анемии.
Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, и может быть использовано для диагностики тяжести дисциркуляторной энцефалопатии у больных с гипергомоцистеинемией.
Изобретение относится к медицине и предназначено для диагностики развития синдрома кишечной недостаточности у больных с абортивными формами острого панкреатита. Проводят ультразвуковое и рентгенологическое исследование кишечного тракта, периферическую компьютерную электрогастроэнтерографию и бактериологическое исследование кала. Дополнительно, не менее чем через 24 часа от момента развития острого панкреатита и не позднее 72 часов, производят забор кала для микроскопического исследования, по результатам которого при обнаружении в кале большого количества клеток цилиндрического эпителия судят о развитии синдрома кишечной недостаточности. Способ позволяет проводить неинвазивную диагностику развития синдрома кишечной недостаточности у больных с абортивными формами острого панкреатита. 1 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для анализа локализации и содержания белкового компонента в клетках млекопитающих с различным уровнем синтетических процессов. Предлагается способ выявления внутриклеточных белков с помощью флуоресцеин-5-изотиоционата (ФИТЦ) в клетках разных типов млекопитающих, которые характеризуются различным уровнем синтетических процессов, с применением метода конфокальной лазерной микроскопии. Клетки млекопитающих фиксируют параформальдегидом (ПФА), предотвращающим экстракцию белков на последующих стадиях окрашивания, пермеабилизуют детергентом, затем в течение 2 ч окрашивают ФИТЦ в концентрации 1 мкг/мл. Клетки заключают в Мовиол 4-88 с добавлением DABCO (1,4-диазобицикло [2.2.2] октан). Полученные препараты используют для анализа локализации и содержания белкового компонента клеток с помощью конфокальной микроскопии. Изобретение позволяет получить информацию и исследовать расположение белков внутри клеток и производить сравнительный анализ содержания белков в клетках с разным уровнем метаболизма. 7 ил., 7 пр.
Заявленная группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии, эндокринологии, и может быть использована для выявления и своевременной коррекции иммунно-метаболической полипатии. Для этого у женщин 19-22 лет и у мужчин 25-30 лет определяют следующие показатели: уровень АД, ЧСС, окружность талии (ОТ), окружность бедер (ОБ), ОТ/ОБ, ИМТ, липидный профиль, мочевая кислота, тиреотропный гормон (ТТГ), инсулин, лептин, пролактин, тестостерон, глобулин, связывающий половые гормоны (ГСПГ), лютеинизирующий гормон (ЛГ), фолликулостимулирующий гормон (ФСГ) анти-Мюллеров гормон (для женщин). При выявлении отклонений хотя бы одного показателя на 10-25% от нормы обследуемого причисляют к группе риска развития иммунно-метаболической полипатии, требующей прохождения профилактических мероприятий. При выявлении значимого отклонения - более 25% от нормы 3-х и более показателей, определяют наличие уже развившейся полипатии, требующей прохождения лечебных мероприятий у профильного специалиста. Способ обеспечивает наиболее точное определение момента перехода физиологических процессов обмена в патофизиологические как показателя нарушения гомеостаза и преднозологического состояния организма у лиц молодого возраста. 2 н.п. ф-лы, 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для экспресс-диагностики генитальной формы инфекционного ринотрахеита у коров. Сущностью предлагаемого способа экспресс-диагностики генитальной формы инфекционного ринотрахеита (ИРТ) у коров является обработка поверхности шейки матки 3% уксусной кислотой в дозе 10-15 мл, удаление поверхностной слизи и выявление участков слизистой с атипичными клетками, которые становятся белыми при проведении пробы. При условии появления окрашенных белым цветом пятен выполняют лабораторные исследования пробы крови коровы для подтверждения наличия или отсутствия вируса ИРТ у животных по известным методикам. Способ позволяет в течение 4-5 минут и с высокой достоверностью поставить диагноз на наличие генитальной формы инфекционного ринотрахеита у коров. 6 ил.

Изобретение относится к области медицинской биохимии и представляет собой способ определения концентрации катионов цинка в сыворотке крови с одновременным определением соотношения катионов цинка и катионов меди, включающий использование в качестве основного реагента раствор дитизона в четыреххлористом углероде, инкубацию при комнатной температуре в щелочной среде, удаление органической фазы и колориметрию коллоидных растворов пробы сыворотки крови и стандартного раствора при 535 нм, расчет концентрации катионов цинка, колориметрию коллоидных растворов пробы сыворотки крови и стандартного раствора при при 435 нм и расчет молярного соотношения катионов цинка и меди. Изобретение обеспечивает определение наряду с концентрацией катионов цинка в крови также их соотношения с катионами меди в той же пробе без применения дополнительных реактивов. 4 пр.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для прогнозирования цитопротективного эффекта внутривенных иммуноглобулинов при терапии женщин с привычным невынашиванием беременности и диагностированным антифосфолипидным синдромом. Сущность способа заключается в том, что часть культуры эндотелиальных клеток предварительно обрабатывают иммуноглобулинами для внутривенного введения, а часть оставляют не обработанными, культивируют с сывороткой крови женщины и определяют процент нежизнеспособных эндотелиальных клеток, обработанных иммуноглобулинами для внутривенного введения. Также определяют процент нежизнеспособных эндотелиальных клеток, не обработанных иммуноглобулином для внутривенного введения. Затем рассчитывают цитопротективный эффект в процентах по формуле: ЦЭ=100-100Х/Х1, где X - процент нежизнеспособных эндотелиальных клеток, обработанных иммуноглобулином, после культивирования с сывороткой крови; X1 - процент нежизнеспособных эндотелиальных клеток, не обработанных иммуноглобулином, после культивирования с сывороткой крови. При его значении более 55% прогнозируют цитопротективный эффект как положительный. Способ позволяет прогнозировать цитопротективный эффект внутривенных иммуноглобулинов как при терапии женщин с привычным невынашиванием беременности и диагностированным антифосфолипидным синдромом, так и при терапии других заболеваний, связанных с повреждением эндотелия и формированием эндотелиальной дисфункции. 6 ил., 3 табл., 2 пр.
Изобретение относится к диагностическим методам в области медицины и описывает способ лабораторной диагностики болезни Альцгеймера посредством применения модифицированных по металл-связывающему домену 1-16 форм бета-амилоида человека в качестве биомаркеров патогенеза болезни Альцгеймера. Способ характеризуется тем, что из денатурированного образца биологической жидкости, а именно крови, мочи, цереброспинальной жидкости, последовательно выделяют общую пептидную фракцию, затем фракцию бета-амилоида и, наконец, после направленного протеолиза фракцию фрагментов 1-16 бета-амилоида с ее последующим анализом. При обнаружении в образце биологической жидкости, модифицированной по металл-связывающему домену формы бета-амилоида, изомеризованной по аспарагиновой кислоте в положении 7, при ее относительном содержании более 5% от общего количества фракции 1-16 бета-амилоида и/или при обнаружении модифицированной по металл-связывающему домену формы бета-амилоида, фосфорилированной по серину в положении 8, диагностируют наличие болезни Альцгеймера. Изобретение может использоваться для постановки диагноза болезни Альцгеймера. 1 пр.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выявления вирус-ассоциированных хронических гастродуоденитов у детей и обеспечения дифференцированного подхода к терапии. Проводят морфологическое исследование, в собственной пластинке гастродуоденальной слизистой оболочки выявляют лимфоидные фолликулы без мантии и инфильтрацию покровного эпителия межэпителиальными лимфоцитами с зонами лизиса и при наличии таковых диагностируют вирус-ассоциированный гастродуоденит. Способ позволяет оптимизировать скрининг хронического гастродуоденита, ассоциированного с вирусами, у детей. 2 пр.
Рентгеноконтрастная цветная масса для наливки сосудов и способ ее приготовления для анатомических исследований. Цветная рентгеноконтрастная масса состоит из сульфата бария, глицерина, акриловой краски и водного раствора желатина. Относится к способам получения застывающей цветной рентгеноконтрастной массы. Предлагаемая масса может быть применена для макро- и микропрепарирования сосудов и их рентгенографии. Способ приготовления включает тщательное перемешивание сульфата бария, глицерина с акриловой краской и водным раствором желатина. При этом сульфата бария берут 1,5 части, глицерина 1 часть, акриловой краски 0,1 части, водного раствора желатина добавляют 7,5 частей, перемешивают, а перед применением смесь подогревают до температуры 60-80°C. Приготовленная масса обладает высокой проницаемостью в тонкие сосуды, яркостью (наглядностью), быстрой застываемостью и эластичностью. Приготавливается из доступных и дешевых материалов. Неизрасходованная полностью или невостребованная масса может храниться длительное время. Предлагаемая масса может быть неоднократно подогрета и готова к использованию. 2 н.п. ф-лы.

(57) Изобретение относится к областям животноводства, ветеринарии и экологии и предназначено для определения кадмия в легких крупного рогатого скота. Способ включает анализ биосубстрата. Проводят микроэлементный анализ волоса крупного рогатого скота. Определяют в волосе концентрацию Fe и/или Ti и рассчитывают уравнение регрессии: у=-0,3152х+0,0476, где х - содержание Fe (мг/кг) в волосе, у - содержание Cd (мг/кг) в легких. у=-18,672х+0,047, где х - содержание Ti (мг/кг) в волосе, у - содержание Cd (мг/кг) в легких. Способ точен, атравматичен и неинвазивен, прост и удобен в использовании. 3 табл., 1 пр.
Наверх