Способ иммунофлуоресцентного анализа белка эксцизионной репарации ercc1 в солидных опухолях человека



Способ иммунофлуоресцентного анализа белка эксцизионной репарации ercc1 в солидных опухолях человека
Способ иммунофлуоресцентного анализа белка эксцизионной репарации ercc1 в солидных опухолях человека

 


Владельцы патента RU 2563116:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Росийский онкологический научный центр имени Н.Н. Блохина" Российской академии медицинских наук (ФГБУ "РОНЦ им. Н.Н. Блохина" РАМН) (RU)

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам диагностики активности эксцизионной репарации повреждений ДНК, и касается определения экспрессии ключевого белка эксцизионной репарации ERCC1 (excision repair cross-complementing protein 1) в солидных опухолях человека. Способ иммунофлуоресцентного анализа белка эксцизионной репарации ERCC1 в солидных опухолях человека включает приготовление одноклеточных суспензий из опухолевой ткани и культуры сравнения, фиксацию в 4%-ном растворе формальдегида, инкубацию с Tween 20, отмывку с помощью фосфатного буфера pH 7,4, инкубацию с первичными (клон 8F1) и вторичными (флуоресцентный краситель DyLight 650) антителами, двойную отмывку с помощью фосфатного буфера pH 7,4, проведение анализа данных на проточном цитофлуориметре; использование монослойной культуры рака молочной железы человека линии MCF-7 в качестве культуры сравнения; расчет уровня экспрессии белка с помощью статистического теста Колмогорова-Смирнова, а расчет интенсивности экспрессии с помощью геометрического среднего флуоресценции опухолевых клеток. Использование способа позволяет количественно оценить экспрессию белка ERCC1, что исключает субъективный компонент в оценке результата. 2 ил.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам диагностики активности эксцизионной репарации повреждений ДНК, и касается определения экспрессии ключевого белка эксцизионной репарации ERCC1 (excision repair cross-complementing protein 1) в солидных опухолях человека.

Система эксцизионной репарации повреждений ДНК играет ведущую роль в реализации противоопухолевого действия наиболее эффективных противоопухолевых средств, таких как препараты платины, часто используемые в лечении опухолей. В основе механизма их действия лежит реакция с азотистыми основаниями нуклеиновых кислот и образование ковалентных сшивок в ДНК, большое количество которых способно привести к остановке репликации ДНК и гибели клеток. Однако опухолевые клетки обладают системой устранения подобного рода нарушений путем эксцизионной репарации поврежденных нуклеотидов и гиперактивность этой системы является доказанной причиной резистентности к препаратам платины [Reed Ε. Cisplatin, carboplatin, oxaliplatin and analogs. / Chabner B.A., Longo D.L. // Cancer Chemotherapy and Biotherapy: Principles and Practice, 5th ed. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins, 2010; Bowden N.A. Nucleotide excision repair: why is it not used to predict response to platinum-based chemotherapy? Cancer letters 2014, Vol. 346, №2, p. 163-171].

Одним из ключевых белков эксцизионной репарации является белок ERCC1, который обладает функцией 5′-эндонуклеазы и входит в состав репаросомы [Reed Ε. ERCC1 and clinical resistance to platinum-based therapy. Clinical cancer research 2005, Vol. 11, №17, p. 6100-6102].

Существует связь между уровнем мРНК ERCC1 в опухоли и продолжительностью жизни пациентов при лечении цисплатином [Metzger R., Leichman C.G., Danenberg K.D. et al. ERCC1 mRNA Levels Complement Thymidylate Synthase mRNA Levels in Predicting Response and Survival for Gastric Cancer Patients Receiving Combination Cisplatin and Fluorouracil Chemotherapy. Journal of Clinical Oncology 1998, Vol. 16, №1, p. 309-316]. Выявлены корреляции между уровнем белка ERCC1 и резистентностью к препаратам платины [Reynolds С., Obasaju С., Schell M.J. et al. Randomized phase III trial of gemcitabine-based chemotherapy with in situ RRM1 and ERCC1 protein levels for response prediction in non-small-cell lung cancer. Journal of Clinical Oncology, 2009, Vol. 27, №34, p. 5808-5815].

Известен способ иммуногистохимического анализа белка ERCC1 [De Dosso S., Zanellato Ε., Nucifora Μ., et al. ERCC1 predicts outcome in patients with gastric cancer treated with adjuvant cisplatin-based chemotherapy. Cancer chemotherapy and pharmacology 2013, Vol. 72, №1, p. 159-165].

Способ иммуногистохимического анализа эксцизионной репарации белка ERCC1 заключается в следующем.

Из парафинового блока, включающего образец исследуемой опухоли, фиксированной в 4%-ном растворе формальдегида и обезвоженной в результате последовательных проводок через панель этилового спирта с повышающейся до 96% концентрацией, готовят на микротоме срез ткани. Затем ткань депарафинизируют и проводят гидратацию через панель этилового спирта с понижающейся до 50% концентрацией. После инкубации с Tween 20 для увеличения проницаемости клеточной мембраны образцы ткани инкубируют с первичными антителами к ERCC1, далее инкубируют с вторичными антителами. Количество окрашенных клеток и интенсивность их окрашивания оценивают визуально под микроскопом.

Недостатки способа:

1) не позволяет выявить достоверных корреляций между уровнем экспрессии белка ERCC1 и резистентностью опухолей к препаратам платины;

2) не позволяет количественно оценить уровень белка ERCC1 в исследуемой опухоли.

Задачей изобретения является создание способа иммунофлуоресцентного анализа белка эксцизионной репарации ERCC1 в солидных опухолях человека, позволяющего количественно оценить в опухолевой ткани экспрессию белка ERCC1.

Технический результат изобретения заключается в том, что заявляемый способ позволяет количественно оценить экспрессию белка ERCC1, что исключает субъективный компонент в оценке результата.

Задача решается тем, что предложен способ иммунофлуоресцентного анализа белка эксцизионной репарации ERCC1 в солидных опухолях человека, включающий приготовление одноклеточной суспензии из опухолевой ткани, которую фиксируют в 4%-ном растворе формальдегида, инкубацию с Tween 20, отмывку фосфатным буфером pH 7,4, инкубацию с первичными антителами, инкубацию с вторичными антителами и двойную отмывку фосфатным буфером pН 7,4; проведение анализа данных на проточном цитофлуориметре; применение монослойной культуры рака молочной железы человека линии MCF-7 в качестве культуры сравнения, расчет уровня экспрессии белка с помощью статистического теста Колмогорова-Смирнова и расчет интенсивности экспрессии с помощью геометрического среднего флуоресценции опухолевых клеток.

Способ осуществляется следующим образом.

Для получения одноклеточной суспензии культуры сравнения - суспензии клеток рака молочной железы человека линии MCF-7 - из культурального матраца сливают питательную среду, дважды промывают монослой раствором фосфатного буфера pH 7,4, добавляют раствор Версена до покрытия клеток тонким слоем жидкости и помещают в термостат на 30 мин при t+37°C. Раствор Версена осторожно сливают, клетки снимают со дна матраца рабером, переносят в пробирку с раствором фосфатного буфера pH 7,4 и пипетируют до получения одноклеточной суспензии. Количество клеток в полученной суспензии подсчитывают в камере Горяева и добавляют раствор формальдегида до 4%-ной конечной концентрации.

Для получения суспензии клеток из биопсийного материала опухолевую ткань разрезают ножницами на мелкие кусочки объемом менее 1 мм3 в чашке Петри и добавляют в полученную кашицу раствор Версена. Затем инкубируют в течение 30 мин в термостате при t+37°C. После инкубации содержимое чашки Петри гомогенизируют в цилиндрическом стеклянном гомогенизаторе и переносят в пробирку, объемом 50 мл, доводя фосфатным буфером pH 7,4 объем жидкости в ней до 40 мл. Далее проводят фильтрацию суспензии с помощью фильтров на 100 и на 40 мкм. Очищенную от крупных фрагментов ткани суспензию центрифугируют 10 мин при 3 тыс. об/сек. Надосадочную жидкость удаляют пипеткой, а осадок ресуспендируют в 3-7 мл раствора фосфатного буфера pH 7,4. Количество клеток в полученной суспензии подсчитывают в камере Горяева и добавляют раствор формальдегида до 4%-ной конечной концентрации.

Окрашивание одноклеточных суспензий моноклональными антителами, специфичными к белку ERCC1

Для анализа белка ERCC1 используют мышиные моноклональные антитела фирмы Abeam (ab2356), клон 8F1. В исследовании используют следующие концентрации антител: 0,25, 0,5 и 1,0 мкг/мл. В качестве изотипического контроля используют мышиные моноклональные антитела IgG2a (аb18415, Abcam), в эквивалентных специфическим антителам концентрациях. В качестве вторичных антител используют козьи поликлональные антимышиные антитела (ab98729, Abcam), меченные флуоресцентным красителем DyLight 650 в разведении 1: 500.

Суспензию исследуемых клеток центрифугируют в течение 10 мин при 3 тыс. об/мин, отбирают надосадочную жидкость и инкубируют в 1 мл 1%-ного раствора Tween 20 в течение 20 мин при комнатной температуре. Далее в пробирку добавляют 10 мл фосфатного буферного раствора pH=7,4 и центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 10 мин. Надосадочную жидкость отбирают и доводят суспензию до необходимого объема фостафтным буферным раствором pH=7,4. В пластиковые пробирки для проточного цитофлуориметра к 100 мкл суспензии исследуемых клеток добавляют соответствующие разведения специфических и изотипических антител и инкубируют при t+4°C в течение 18 час. После окончания инкубации в пробирку добавляют 2 мл фосфатного буферного раствора pH 7,4 и центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 10 мин. Надосадочную жидкость отбирают и доводят суспензию до объема 100 мкл. Затем добавляют вторичные антитела и инкубируют при t+4°C в течение 1,5 час. После окончания инкубации для отмывки свободных антител в каждую пробирку добавляют по 2 мл фосфатного буферного раствора pH 7,4 и центрифугируют при 3 тыс.об/мин в течение 10 мин. Надосадочную жидкость отбирают и процедуру отмывки проводят повторно. Осадок ресуспендируют в 200 мкл фосфатного буферного раствора pH 7,4.

Измерение флуоресценции проводят на проточном цитофлуориметре при λex=633 нм, λем=650 нм. Число анализируемых событий - 5 тыс. Анализ гистограмм проводят по количеству специфически окрашенных клеток, которое оценивают статистическим методом Колмогорова-Смирнова, включенным в программу FlowJo (TreeStar).

При наложении FSC файла измеренной пробы с изотипическим контролем на файл пробы со специфическими антителами в подразделе программы «Сравнение популяций» (Population Comparison) вычисляется значение, которое принимают за процент окрашенных клеток - Kolmogorov-Smirnov Chi Squared Value. Все файлы записываются на проточном цитофлуориметре с помощью программы FACSDiva. Процент окрашенных клеток соответствует уровню экспрессии белка ERCC1.

При делении геометрического среднего пробы со специфическими антителами на изотопический контроль (раздел статистики программы FlowJo) получают параметр, характеризующий интенсивность экспрессии белка ERCC1.

Изобретение иллюстрируется фиг. 1 (А и Б) и фиг. 2 (А-Г). По оси абсцисс - концентрация антител (мкг/мл); по оси ординат - уровень экспрессии белка ERCC1 (фиг. 1А) и интенсивность экспрессии белка ERCC1 (фиг. 1Б). На фиг. 1 (А и Б) и фиг. 2 (А-Г): кривые 1 (■) - пример высокого уровня и интенсивности экспрессии белка ERCC1, кривые 2 (♦) - пример низкого уровня и интенсивности экспрессии белка ERCC1.

На фиг. 1 (А и Б) представлены кривые зависимости уровня и интенсивности экспрессии белка ERCC1 от концентрации моноклональных специфических антител для культуры сравнения - клеток рака молочной железы человека линии MCF-7. Показано, что плато окрашивания клеток рака молочной железы человека линии MCF-7 достигается на концентрациях специфических антител к ERCC1 0,5 и 1,0 мкг/мл и значениях уровня экспрессии 72 и 75% (фиг. 1А). При этом интенсивность экспрессии при тех же концентрациях специфических антител к белку ERCC1 составляет 3,7 и 4,2 усл. ед. (фиг. 1Б). Такие показатели уровня и интенсивности экспрессии белка ERCC1 являются высокими, что позволяет четко контролировать изменение активности специфических антител.

На фиг. 2 (А-Г) представлен результат окрашивания клеток, полученных из солидных опухолей человека.

На фиг. 2 (А и Б) приведены уровень и интенсивность экспрессии белка ERCC1 в ткани немелкоклеточного рака легкого. Показано увеличение уровня экспрессии белка ERCC1 при увеличении концентрации специфических антител от 0,25 до 1,0 мкг/мл с 36 до 65% (фиг. 2А), при этом интенсивность экспрессии изменяется с 2,0 до 3,5 усл. ед. соответственно. Эти показатели экспрессии белка ERCC1 являются высокими.

На фиг. 2 (В и Г) приведены уровень и интенсивность экспрессии белка ERCC1 в ткани рака молочной железы. При увеличении концентрации специфических антител от 0,25 до 1,0 мкг/мл не происходит изменения уровня и интенсивности экспрессии белка ERCC1, при этом уровень составляет 12-16% (фиг. 2В), а интенсивность - 1,1-1,3 усл. ед. (фиг. 2Г). Эти показатели экспрессии белка ERCC1 являются низкими.

Способ иммунофлуоресцентного анализа белка эксцизионной репарации ERCC1 в солидных опухолях человека, включающий приготовление одноклеточных суспензий из опухолевой ткани и культуры сравнения, фиксацию в 4%-ном растворе формальдегида, инкубацию с Tween 20, отмывку с помощью фосфатного буфера pH 7,4, инкубацию с первичными (клон 8F1) и вторичными (флуоресцентный краситель DyLight 650) антителами, двойную отмывку с помощью фосфатного буфера pH 7,4, проведение анализа данных на проточном цитофлуориметре; использование монослойной культуры рака молочной железы человека линии MCF-7 в качестве культуры сравнения; расчет уровня экспрессии белка с помощью статистического теста Колмогорова-Смирнова, а расчет интенсивности экспрессии с помощью геометрического среднего флуоресценции опухолевых клеток.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине и описывает способ оценки эффективности включения мексидола в комбинированную терапию острого коронарного синдрома по динамике липидно-фосфолипидного спектра сыворотки крови, где устанавливают влияние мексидола на редукцию волнообразного характера изменений липидно-фосфолипидных комплексов сыворотки крови с их стабилизацией на уровне, достаточном для обеспечения энергопластических потребностей организма и миокарда, что оценивают как положительный результат комбинированного лечения больных с ОКС.

Изобретение относится к области спортивной медицины, а именно к методам лабораторной диагностики уровня физической нагрузки на организм спортсмена. Для этого определяют содержание кальция и белка в ротовой жидкости до и после физической нагрузки, а также через день после физической нагрузки.

Группа изобретений относится к медицине. Представлен портативный анализатор для исследования пробы биологической жидкости, содержащий корпус с магазином, имеющим отделения для размещения используемых для анализа диагностических полосок или тест-полосок, имеющих зону для биологической жидкости, анализирующее устройство с щелевидным приемником для используемой диагностической полоски или тест-полоски, оснащенной с одного конца электрическими контактами, и индикаторное устройство для отображения не менее одного результата анализа, причем корпус со стороны задней части выполнен с понижением, образующим плоскую поверхность, на которой вдоль корпуса или поперечно ему выполнены выступы, разделяющие плоскую поверхность понижения на отделения для размещения диагностических полосок или тест-полосок и образующие магазин, расположенных параллельно не менее чем в один ряд, при этом отделения закрыты снимаемой или открываемой крышкой, являющейся частью корпуса.

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, в частности к биохимии, гигиене, стоматологии, медицинской экологии, может быть использовано для выявления степени адаптации к производственным условиям при взаимодействии с вредными и опасными факторами.

Изобретение относится к области медицины и может быть применено для определения катехоламинов их метаболитов в объектах на основе матриц сложного состава, в том числе нерастворимых в воде, без их дополнительной пробоподготовки.
Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к хирургии, и может быть использовано для диагностики некроза кишки при мезентериальной ишемии. Сущность изобретения заключается в моделировании у крыс острой мезентериальной ишемии с последующим определением количества лимфоцитов в центральной венозной крови, и при снижении их более чем на 80% от средних нормальных значений диагностируют некроз кишки.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ дифференциальной диагностики хронического вирусного гепатита и жирового поражения печени у больных с синдромом дислипидемии, заключающийся в том, что у больного в сыворотке крови определяют активность фермента антиоксидантной системы глутатионредуктазы (ГЛР), которую оценивают спектрофотометрическим методом, и при значении ГЛР менее или равно 14,6 мкмоль/л/мин диагностируют жировую болезнь печени, при концентрации ГЛР более 14,6 мкмоль/л/мин - хронический вирусный гепатит.
Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии. С помощью спектроскопа комбинированного рассеяния проводят серию регистрации спектров области новообразования и здоровой кожи.
Изобретение относится к медицине, а именно к детской офтальмологии, и описывает способ диагностики миопии у детей дошкольного возраста, заключающийся в том, что в слезной жидкости ребенка определяют активность фермента γ-глутамилтранспептидазы и при ее значении свыше 11 Е/л диагностируют заболевание.

Изобретение относится к области медицинской биохимии и представляет собой способ определения концентрации катионов цинка в сыворотке крови с одновременным определением соотношения катионов цинка и катионов меди, включающий использование в качестве основного реагента раствор дитизона в четыреххлористом углероде, инкубацию при комнатной температуре в щелочной среде, удаление органической фазы и колориметрию коллоидных растворов пробы сыворотки крови и стандартного раствора при 535 нм, расчет концентрации катионов цинка, колориметрию коллоидных растворов пробы сыворотки крови и стандартного раствора при при 435 нм и расчет молярного соотношения катионов цинка и меди.

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии и неонатологии. Предлагаемый способ включает определение концентрации серомукоида в надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата. При значениях концентрации серомукоида 0,135-0,195 единиц оптической плотности отмечают отсутствие воспалительных заболеваний головного мозга и его оболочек у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией. При концентрации серомукоида 0,196-0,256 единиц оптической плотности диагностируют воспалительные заболевания головного мозга и его оболочек у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией. Применение изобретения обеспечивает раннюю диагностику воспалительных заболеваний головного мозга и его оболочек у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной диагностике, и позволяет определить способность эритроцитов генерировать оксид азота (NO). Способ включает взятие у обследуемого образца крови, перемешивание образца с антикоагулянтом, помещение половины данного образца в условия гипоксии, затем получение плазмы крови из частей образца, подвергавшихся и не подвергавшихся гипоксии, определение в обеих частях содержания оксида азота и вычисление разницы полученных величин в сравнении с аналогичными данными в контрольной группе. По результатам сравнения судят о состоянии NO-генерирующей функции эритроцитов. Данный способ позволяет оценить вклад усиленной или пониженной NO-генерирующей функции эритроцитов в патогенез гипертонической болезни и других заболеваний, связанных с состояниями гипоксии, тромбоза, нарушения регуляции сосудистого тонуса и обмена оксида азота. 4 з.п. ф-лы, 2 табл., 2 пр.

Изобретение касается способа оценки эффективности защиты лимфоцитов от апоптоза, относится к медицине и может быть использовано в биохимии, кардиологии и терапии. Способ включает выделение лимфоцитов, инкубацию клеток 48 часов при температуре 37°С и 5% содержанием СО2, количественное определение жизнеспособности лимфоцитов по включению трипанового синего и биохимическое определение концентрации восстановленного и окисленного глутатиона в лизате лимфоцитов после предварительной инкубации в течение 30 минут с 10 ммоль 2-винилпиридином. Дополнительно в инкубационную среду, содержащую лимфоциты, вводят 1,4-дитиоэритритол и аскорбиновую кислоту в конечной концентрации 3,0 ммоль и 0,1 ммоль соответственно. При росте белково-связанного глутатиона на 18%-35%, а восстановленного глутатиона на 25-41% считают защиту низкоэффективной. При росте белково-связанного глутатиона на 36% и более и восстановленного глутатиона на 42% и более считают защиту высокоэффективной. Использование предлагаемого способа позволяет констатировать защиту клеток от апоптоза. Предлагаемый способ прост в осуществлении и интерпретации полученных результатов. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и предназначено для выявления риска развития преэклампсии. Для прогнозирования риска развития преэклампсии у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья, выделяют ДНК из периферической венозной крови и проводят анализ полиморфизмов генов цитокинов. Прогнозируют минимальный риск развития преэклампсии при сочетании трех генетических вариантов четырех генетических полиморфизмов: G I-ТАС (rs4512021) и +36 GG TNFR1; +250 A Ltα, G I-TAC (rs4512021) и +36 GG TNFR1; +250 G Ltα (rs909253), +36 A TNFR1 (rs767455), -403 G/A RANTES (rs2107538). Использование изобретения позволяет повысить эффективность выявления риска развития преэклампсии. 4 ил., 2 табл., 4 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и предназначено для выявления риска развития и степени тяжести преэклампсии. Для прогнозирования риска возникновения преэклампсии тяжелого течения у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья, выделяют ДНК из периферической венозной крови и анализируют генетические полиморфизмы: -308 G/A TNFα (rs1800629), +36 A/G TNFR1 (rs767455), -801 G/A SDF 1(rs1801157), C/G MCP-1 (rs285765). Повышенный риск развития преэклампсии тяжелого течения прогнозируют при наличии сочетания генетических вариантов -801A SDF1, +36 GG TNFR1 и -308 A TNFα. Пониженный риск развития преэклампсии тяжелого течения прогнозируют при наличии сочетания генетических вариантов -801 G SDF1 и G МСР (rs 285765). Использование изобретения позволяет повысить эффективность выявления тяжелого течения преэклампсии. 4 ил., 2 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, и предназначено для выявления риска развития преэклампсии у женщин с неотягощенной наследственностью. Для прогнозирования риска развития преэклампсии у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья, с неотягощенной наследственностью, выделяют ДНК из периферической крови и проводят анализ полиморфизмов генов цитокинов. Прогнозируют минимальный риск развития преэклампсии у женщин с неотягощенной наследственностью по шести сочетаниям генетических вариантов семи генетических полиморфизмов: +1931 A MIP1β, +250 A Ltα, -403 G/A RANTES; -801 G SDF1, G MCP-1, +250 A Ltα; -801 G SDF1, +250 A Ltα, G I-TAC; +250 A Ltα, G I-TAC, -308 GG TNFα; +1931 A MIP1β, -403 A RANTES; -801 G SDF1, G MCP-1. 7 ил., 1 табл., 6 пр.

Группа изобретений относится к медицине и описывает композицию реактивов для измерения количества лития в биологических образцах, отличающуюся тем, что указанная композиция реактивов для измерения количества лития представляет собой водный раствор, содержащий соединение, которое имеет структуру, представленную формулой (I), смешиваемый с водой органический растворитель, выбранный из диметилсульфоксида (DMSO), диметилформамида (DMF) и диметилацетамида (DMA), и модификатор pH для доведения pH до значения в диапазоне от pH 5 до pH 12, концентрация соединения формулы (I) составляет от 0,1 до 1,0 г/л. Описан также набор реактивов для определения количества лития в биологических образцах, а также способ определения количества ионов лития в биологических образцах. Группа изобретений позволяет измерять количество ионов лития быстро или незамедлительно с использованием стандартного колориметра. 3 н. и 10 з.п. ф-лы, 9 пр., 11 ил.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для определения кислотной устойчивости эритроцитов. Способ заключается в том, что в пробирку с кровью добавляют антикоагулянт (трилон Б) из расчета 10 мкл на 2 мл крови. Проводят измерения при длине волны 0,450 нм. Используют физиологический раствор 0,65% NaCl. Затем после гемолиза рассчитывают эритрограмму резистентности и определяют процентное распределение эритроцитарных мембран по стойкости. Заявленный способ прост и эффективен для определения кислотной устойчивости эритроцитов. 1 ил., 1 табл., 1 пр.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии, генной инженерии и представляет собой бактериальную клетку, способную реплицироваться в среде, содержащей по меньшей мере один тяжелый металл, выбранный из ртути, кадмия, цинка и свинца. Указанная бактериальная клетка трансформирована по меньшей мере одним хелатирующим агентом, выбранным из генов mt,β-галактозидазы и ppk. При этом указанные гены не экспрессируются как слитый белок в случае использования нескольких генов одновременно, экспрессируются с сильного промотора и по меньшей мере одного из 5'UTR и 3'UTR. Указанная клетка продуцирует более 4000 полных копий мРНК хелатирующего агента на нг суммарной мРНК. Настоящее изобретение раскрывает способы очистки жидкости от загрязнения тяжелыми металлами с использованием культуры указанных бактериальных клеток либо твёрдого матрикса, содержащего β-галактозидазу, а также наборы для обнаружения загрязнения тяжелыми металлами, содержащие культуру указанных бактериальных клеток. Настоящее изобретение позволяет повысить устойчивость конструируемых бактериальных клеток к высоким концентрациям тяжелых металлов. 5 н. и 17 з.п. ф-лы, 11 ил., 7 пр.

Изобретение относится к поглощающему изделию, выполненному с возможностью определения ионной силы мочи. Изделие включает непроницаемый для жидкости слой; проницаемый для жидкости слой; поглощающий внутренний слой, расположенный между непроницаемым для жидкости слоем и проницаемым для жидкости слоем; устройство с латеральным потоком, интегрированное в изделие и расположенное таким образом, что оно находится в жидкостном соединении с потоком мочи, выделяемой пользователем изделия. Устройство включает: буферную зону, которая содержит полиэлектролит и зону обнаружения или индикаторную зону, где зона обнаружения содержит недиффузионно иммобилизованные: буферный компонент, включающий слабую полимерную кислоту и слабое полимерное основание с pKa ≤ 10-3, и вещество из класса заряженных полимерных сурфактантов, чувствительных к относительным концентрациям ионов в растворе образца, и заряженный pH-индикатор, заряд которого противоположен заряду заряженного полимерного сурфактанта, где заряженный полимерный сурфактант растворим в количествах, превышающих или равных приблизительно 1 масс. % (≥ 1 масс. % растворенного вещества) в воде и водных растворах, имеющих низкую концентрацию ионов, составляющую ≤ 0,1 масс. % солей, но нерастворим (< 1 масс. % растворенного вещества) в водном растворе с высокой концентрацией ионов, составляющей > 0,1 масс. % солей. 7 з.п. ф-лы, 3 ил., 3 пр.
Наверх