Способ определения функции эритроцитов генерировать оксид азота

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной диагностике, и позволяет определить способность эритроцитов генерировать оксид азота (NO). Способ включает взятие у обследуемого образца крови, перемешивание образца с антикоагулянтом, помещение половины данного образца в условия гипоксии, затем получение плазмы крови из частей образца, подвергавшихся и не подвергавшихся гипоксии, определение в обеих частях содержания оксида азота и вычисление разницы полученных величин в сравнении с аналогичными данными в контрольной группе. По результатам сравнения судят о состоянии NO-генерирующей функции эритроцитов. Данный способ позволяет оценить вклад усиленной или пониженной NO-генерирующей функции эритроцитов в патогенез гипертонической болезни и других заболеваний, связанных с состояниями гипоксии, тромбоза, нарушения регуляции сосудистого тонуса и обмена оксида азота. 4 з.п. ф-лы, 2 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной диагностике, и позволяет определить способность эритроцитов генерировать оксид азота (окись азота, NO). Изобретение может быть использовано для оценки вклада усиленной или пониженной NO-генерирующей функции эритроцитов в патогенез гипертонической болезни и других заболеваний, связанных с состояниями гипоксии, тромбоза, нарушения регуляции сосудистого тонуса и обмена оксида азота. Кроме того, изобретение может быть использовано для оценки тяжести, прогноза и эффективности лечения этих заболеваний, а также для поиска новых фармакологических средств коррекции эритроцитарной дисфункции в экспериментальной фармакологии.

Оксид азота несет множество функций в поддержании сосудистого гомеостаза, включая контроль сосудистого тонуса, ингибирование тромбообразования, торможение агрегации эритроцитов, регуляцию экспрессии молекул эндотелиальной адгезии. Свободнорадикальная природа оксида азота, его минимальная способность к диффузии, короткое время жизни и быстрая реакция с гемоглобином позволяют этой молекуле быть местным сигнальным агентом для активации растворимой гуанилатциклазы, что приводит к синтезу цГМФ и к цГМФ-зависимой вазодилятации [1, 2]. В последние годы появились доказательства того, что кроме локального воздействия короткоживущего оксида азота существуют дистантные эффекты этой молекулы, в том числе вазодилятация, вызванная гипоксией. Дистантные эффекты NO связаны с существованием его циркулирующего резервуара в виде молекул нитрита ( NO 2 , продукт одноэлектронного окисления NO), присутствующих в эритроцитах (290 нМ) и в плазме (120 нМ) [3]. В тканях с изменением pH и градиента кислорода NO 2 восстанавливается разнообразными ферментами и модулирует экспрессию белков, обмен веществ, ангиогенез, цитопротекцию и пр. В кровотоке под влиянием гипоксии нитритредуктаза, взаимодействуя с NO 2 , образует NO, вызывая вазодилятацию [4]. В этой реакции нитритредуктазной активностью обладает железосодержащий деоксигенированный гемоглобин [deoxyHb(Fe2+)], формирующий в присутствии протона оксид азота и метгемоглобин. Далее deoxyHb(Fe2+) под действием оксида азота может нитрозилироваться. Нитрит, содержащийся в эритроцитах, может служить источником оксида азота не только за счет нитритредуктазной активности deoxyHb(Fe2+), но также за счет восстановления эритроцитарной ксантиноксидоредуктазой, либо спонтанного или усиленного карбангидразой диспропорционирования [5, 6, 7]. Кроме того, эритроцитарными источниками NO в условиях гипоксии могут быть гем-нитрозил-гемоглобин [8] и S-нитрозогемоглобин [9, 10, 11]. Небольших концентраций оксида азота (EC50=5-10 нМ), покидающих эритроциты, достаточно для индукции вазодилятации. Важно, что при гипоксии способность эндотелиальной NO-синтазы генерировать оксид азота весьма лимитирована [12], и в этих условиях основным источником оксида азота становятся эритроциты.

Гипоксическая вазодилятация - фундаментальный компенсаторно-приспособительный ответ, повышающий перфузию ткани при недостатке кислорода. Наряду с повышением доставки кислорода за счет вазодилятации, генерируемый в эритроцитах NO ингибирует митохондриальное дыхание, тем самым уменьшая потребление кислорода [13]. Эти механизмы, а также значение оксида азота в подавлении тромбообразования и агрегации эритроцитов позволяют утверждать, что в условиях ишемии эритроцитарная продукция NO представляет собой ключевой механизм поддержания сосудистого гомеостаза.

Несмотря на столь серьезную роль депонирования и генерации оксида азота в эритроцитах, количественных методов оценки этой функции эритроцитов не существует. В настоящее время используются лишь методы исследования in vivo, оценивающие реакцию сосудистой стенки или содержание в крови метаболитов и дериватов оксида азота.

Недостатком таких методов является, в частности, то, что получаемые при этом показатели отражают интегральный ответ, включающий не только состояние эритроцитарной NO-генерирующей функции/дисфункции, но и активность других сосудорасширяющих и NO-генерирующих механизмов. Значение собственно эритроцитарной дисфункции при этом не вычленяется.

Известен «Способ прогнозирования постгипоксической кардиопатии у новорожденных» (патент РФ №2228532, МКИ G01N 33/84), заключающийся в определении в крови беременных содержания нитритов, уровень которых при гипоксии плода существенно повышается.

Недостатками метода являются его узкая направленность, то есть ограниченная применимость при другой патологии, сложность интерпретации, связанная с вероятным влиянием независимых от гипоксии факторов, и невозможность оценки эритроцитарных резервов мобилизации оксида азота.

Известен способ прижизненного динамического определения содержания оксида азота в ткани мозга с помощью специального устройства/зонда в условиях экспериментальной глобальной ишемии головного мозга, вызванной двусторонней окклюзией каротидных артерий [14]. Способ применялся на крысах для оценки роли NO-синтаз, значение которых верифицировалось введением специфических ингибиторов. Роль NO-генерирующей функции/дисфункции эритроцитов при этом не оценивалась, хотя, с определенными оговорками, ее косвенная оценка при одновременном применении ингибиторов всех типов NO-синтаз при данном способе теоретически возможна.

Недостатками способа являются необходимость приобретения специального дорогостоящего оборудования, сложности технического осуществления способа, неудобства, связанные с работой на животных в условиях in vivo и обязательность использования ингибиторов.

Известен «Способ коррекции эндотелиальной регуляции сосудистого тонуса пациента» (патент РФ №2170102, МКИ A61K 38/55, G01N 33/48, A61M 16/00, A61P 9/12), который позволяет выявить дефицит оксида азота в биологических жидкостях с использованием гипоксического теста. Данный способ заключается в определении содержания нитратов и нитритов в биологических жидкостях пациента до и после интервально-гипоксической тренировки.

Недостатком данного метода является условие его использования у лиц без тяжелой патологии, так как гипоксия может усугубить течение заболевания. Другими недостатками являются приносящее неудобства пациенту трудо- и времязатратное проведение тренировки, а также оценка интегральной сосудистой, а не эритроцитарной дисфункции.

Известен «Способ оценки способности эндотелия сосудистой стенки к продукции и секреции монооксида азота» (патент РФ №2157089, МКИ A61B 5/021, G01N 33/84). Способ заключается в определении содержания оксида азота в крови пациента и в контрольной группе до и после компрессии кровеносных сосудов конечности (создание очага кратковременной локальной ишемии) и вычислении разности полученных величин у пациента в сравнении с данными в контрольной группе, по которой судят о способности эндотелия сосудистой стенки к продукции и секреции оксида азота.

Недостатками способа являются необходимость специальной работы с пациентом, сложность и неудобство для него процедуры проведения компрессионных манипуляций и невозможность оценки эритроцитарной NO-генерирующей функции/дисфункции.

Наиболее близким к заявляемому способу является метод прямого планшетного измерения генерации оксида азота гипоксичными эритроцитами в проточном микрожидкостном устройстве [15]. Метод осуществлялся на эритроцитах кроликов, полученных путем троекратного осаждения в центрифуге и отмывания в физиологическом растворе с последующим помещением клеток в буфер, содержащий кислород-поглощающий фермент оксиразу (Oxyrase Inc. Mansfield, ОН).

Недостатками метода являются невозможность его клинико-лабораторного использования из-за необходимости применения сложного технического обеспечения в виде устройства, пока существующего в единственном экспериментальном варианте, сложной пробоподготовки эритроцитов и использования дорогостоящего гипоксичного буфера.

Задачей, на решение которой направлено настоящее изобретение, является разработка способа определения функции эритроцитов генерировать оксид азота, позволяющее выявлять способность эритроцитов к гипо-, нормо- или гиперпродукции NO в условиях гипоксии. Тем самым заявляемый способ позволит оценивать вклад эритроцитов в поддержание сосудистого гомеостаза.

Сущность данного способа определения функции эритроцитов генерировать оксид азота заключается в том, что образец крови обследуемого забирают в пробирку с антикоагулянтом, перемешивают, одну часть образца крови помещают в условия гипоксии, получают плазму крови и определяют в ней содержание оксида азота, одновременно содержание оксида азота определяют в плазме другой, не подвергавшейся гипоксии, части образца крови, вычисляют разницу полученных величин, сравнивают с аналогичным значением, полученным в контрольной группе, и по результату сравнения судят о состоянии функции эритроцитов генерировать оксид азота.

В качестве антикоагулянта можно использовать цитрат натрия, ЭДТА или гепарин.

Условия гипоксии можно создать:

а) помещением образца крови в атмосферу с малым содержанием кислорода, например, созданную такими приемами, как открытое пламя в замкнутом пространстве, откачивание воздуха, химическое поглощение кислорода, подача инертного газа или газовой смеси газ-генерирующим пакетом или мультигазовым инкубатором;

б) введением поглотителей кислорода, например, таких как сульфиты или оксираза, непосредственно в образец крови.

Полученную плазму перед определением в ней содержания оксида азота можно хранить в замороженном виде.

Результаты измерения можно выражать в виде концентрации нитритов, приходящейся на эритроцитарную фракцию гематокрита, или в виде концентрации нитритов, приходящейся на количество эритроцитов в единице объема крови, например на число эритроцитов в 1 л крови.

Способ осуществляют следующим образом.

Образцы крови получают натощак из локтевой вены, используя стандартные разовые стерильные вакуумные пробирки с антикоагулянтом, например с цитратом натрия. Сразу же после забора крови пробирки несколько раз переворачивают для перемешивания с антикоагулянтом. Образец крови обследуемого в объеме 4 мл помещают в два 24-луночного планшета, заполняя в каждом планшете по 2 лунки по 1 мл на лунку. Далее один планшет с кровью помещают на 30 минут в условия искусственно созданной гипоксии, например в герметичный контейнер, содержащий поглотитель кислорода (например, дитионит натрия), второй находится в условиях атмосферного воздуха. Плазму крови отделяют центрифугированием в течение 10 мин при 3000 об × мин-1 и определяют содержание выделенного эритроцитами оксида азота по суммарному количеству его метаболитов (нитриты и нитраты), например, с использованием реактива Грисса [16]. Для определения нитратов их восстанавливают в нитриты, используя металлический кадмий, покрытый медью [16].

Для определения метаболитов оксида азота полученную плазму крови отбирают в 8 пробирок по 150 мкл в каждой, депротеинизируют путем добавления 7,5 мкл 2М ZnSO4, встряхивают на шейкере 2 мин, центрифугируют 10 мин при 12000g и отбирают супернатант по 100 мкл в чистые пробирки. Пока происходит депротеинизация гранулы кадмия покрывают медью, для чего их трижды промывают деионизированной водой, помещают в 5 мМ раствор CuSO4 на 5 мин, помешивая стеклянной палочкой, затем дважды промывают глицин-NaOH-буфером (pH 9,7), подсушивают и сразу используют. Четыре пробирки используют для определения нитритов. В остальные четыре пробирки добавляют по 33 мкл 0,2М глицин-NaOH буфера и 2 гранулы (d~2 мм) кадмия, покрытого медью, встряхивают 15 мин. Затем содержимое (жидкую часть) переносят в чистую пробирку и центрифугируют 7 мин при 12000g. Супернатант используют для определения нитритов. С этой целью в лунки 96-луночного планшета вносят в дублях по 50 мкл супернатантов, смешивают их с равным объемом реактива Грисса (смесь равных объемов 1% сульфаниламида в 30%-ной уксусной кислоте и 0,1% N-[1-нафтил]-этилендиамин дигидрохлорида в 60%-ной уксусной кислоте) и через 10 мин на планшетном спектрофотометре при длине волны 540 нм относительно лунок, в которые вместо реактива Грисса добавлена вода, измеряют оптическую плотность образцов. Содержание нитритов рассчитывают по калибровочному графику, построенному с использованием в качестве стандарта NANO2. Результаты выражают в мкмолях нитритов на 1 л плазмы.

Чтобы иметь возможность судить о нормо-, гипо- или гиперфункции эритроцитов в отношении генерации оксида азота нами были определены нормальные значения данной функции в группе условно здоровых лиц. При этом варьировали условия определения, выясняя возможность использования разных антикоагулянтов, способов получения гипоксии in vitro, замораживания образцов плазмы перед определением метаболитов NO, использования теста с физической, пищевой, или фармакологической нагрузкой. Число обследуемых в каждой группе было ≥ 6. Достоверность различий между группами оценивали с помощью t-критерия Стьюдента. Результаты исследования с конкретными условиями определения NO-генерирующей функции эритроцитов в группе условно здоровых лиц представлены таблице 1.

Результаты исследования (табл. 1) свидетельствуют, что все использованные в исследовании условия позволяют адекватно судить об NO-генерирующей функции эритроцитов при сравнении с соответствующим контролем. Кроме того, представленные в таблице 1 результаты свидетельствуют, что данный способ имеет высокий уровень воспроизводимости.

В аналогичном исследовании образцы крови получали у больных с гипертонической болезнью и с сахарным диабетом 2-го типа. Условия определения были такими же, как в исследовании группы условно здоровых лиц. Число больных в каждой группе ≥ 6. В качестве антикоагулянта использовали цитрат натрия. Достоверность различий между группами оценивали с помощью t-критерия Стьюдента. Результаты исследования у больных приведены в таблице 2.

Полученные результаты демонстрируют достоверное снижение NO-генерирующей функции эритроцитов при данной патологии и заставляют думать о патогенетической роли эритроцитарной дисфункции в развитии ряда заболеваний и их осложнений.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами.

Пример 1. У обследуемого О. (условно здоровый) из локтевой вены в вакутейнер с цитратом натрия забрали 4 мл крови, цитратную кровь разделили на два образца. В плазме крови одного образца, не подвергавшегося гипоксии, содержание оксида азота (нитриты + нитраты) составило 5,2 мкмоль/л. Содержание выделенного эритроцитами оксида азота в другом образце, экспонированном в атмосфере с недостатком кислорода (горящая свеча в плотно закрытом эксикаторе), составило 10,3 мкмоль/л. Разница значений составила 5,1 мкмоль/л. Сравнивая данное значение с нормальным значением данной функции в контрольной группе (условно здоровые лица), можно сделать вывод, что NO-генерирующая функция эритроцитов соответствует норме.

Пример 2. У больного Ш. (гипертоническая болезнь) NO-генерирующую функцию эритроцитов определяли точно так же, как в примере 1. В плазме крови образца, не подвергавшегося гипоксии, содержание оксида азота (нитриты + нитраты) составило 3,4 мкмоль/л, а в образце, подвергнутом гипоксии - 4,9 мкмоль/л. Разница значений составила 1,5 мкмоль/л. Сравнивая данное значение с нормальным значением данной функции в контрольной группе (условно здоровые лица), можно сделать вывод о снижении NO-генерирующей функции эритроцитов.

Литература

1. Lundberg JO, Gladwin MT, Ahluwalia A, Benjamin N, Bryan NS, Butler A et al. Nitrate and nitrite in biology, nutrition and therapeutics. Nat ChemBiol 2009; 5: 865-869.

2. Lundberg JO, Weitzberg E, Gladwin MT. The nitrate-nitrite-nitric oxide pathway in physiology and therapeutics. NatRevDrugDiscov 2008; 7: 156-167.

3. DejamA, Hunter CJ, Pelletier MM, Hsu LL, Machado RF, Shiva S et al. Erythrocytes are the major intravascular storage sites of nitrite in human blood. Blood 2005; 106: 734-739.

4. van Faassen EE, Bahrami S, Feelisch M, Hogg N, Kelm M, Kim-Shapiro DB et al. Nitrite as regulator of hypoxic signaling in mammalian physiology. Med Res Rev 2009; 29: 683-741.

5. Webb A, Milsom A, Rathod K, et al. Mechanisms underlying erythrocyte and endothelial nitrite reduction to nitric oxide in hypoxia: role for xanthine oxidoreductase and endothelial nitric oxide synthase. Circ Res. 2008; 103(9): 957-964.

6. Zweier JL, Wang P, Samouilov A, et al. Enzymeindependent formation of nitric oxide in biological tissues. Nat Med. 1995; 1(8): 804-809.

7. Aamand R, Dalsgaard T, Jensen FB, et al. Generation of nitric oxide from nitrite by carbonic anhydrase: a possible link between metabolic activity and vasodilation. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2009; 297(6): H2068-H2074.

8. Herold S. The outer-sphere oxidation of nitrosyliron(II)hemoglobin by peroxynitrite leads to the release of nitrogen monoxide. Inorg Chem. 2004; 43(13): 3783-3785.

9. Jia L, Bonaventura C, Bonaventura J, et al. Snitrosohaemoglobin: a dynamic activity of blood involved in vascular control. Nature. 1996; 380: 221-226.

10. Gladwin MT, Lancaster Jr JR, Freeman В A, et al. Nitric oxide′s reactions with hemoglobin: a view through the SNO-storm. Nat Med. 2003; 9: 496-500.

11. Rassaf T, Bryan NS, Maloney RE, et al. NO adducts in mammalian red blood cells: too much or too little? Nat Med. 2003; 9: 481-482.

12. Dweik RA, Laskowski D, Abu-Soud HM, Kaneko F, Hutte R, Stuehr DJ et al. Nitric oxide synthesis in the lung. Regulation by oxygen through a kinetic mechanism. J Clin Invest 1998; 101: 660-666.

13. Shiva S., Rassaf Т., Patel R.P., and Gladwin M.T The detection of the nitrite reductase and NO-generating properties of haemoglobin by mitochondrial inhibition. Cardiovascular Research, 2011, 89: 566-573.

14. Liu K., Yan M., Zheng X., Yang Y. The dynamic detection of NO during the ischemic postconditioning. Nitric Oxide, 2014. - v. 38. - 17-25.

15. Halpin S.T. and Spence D.M. Direct plate-reader measurement of nitric oxide released from hypoxic erythrocytes flowing through a microfluidic device. Anal. Chem., 2010, - v. 82, - 7492-7497.

16. Navarro-Gonzálvez J.A., García-Benayas C., and Arenas J. Semiautomated measurement of nitrate in biological fluids. Clin. Chem., 1998; 44: 679-681.

1. Способ определения функции эритроцитов генерировать оксид азота, характеризующийся тем, что образец крови обследуемого забирают в пробирку с антикоагулянтом, перемешивают, одну часть образца крови помещают в условия гипоксии, получают плазму крови и определяют в ней содержание оксида азота, одновременно содержание оксида азота определяют в плазме другой, не подвергавшейся гипоксии, части образца крови, вычисляют разницу полученных величин, сравнивают с аналогичным значением, полученным в контрольной группе, и по результату сравнения судят о состоянии функции эритроцитов генерировать оксид азота.

2. Способ определения функции эритроцитов генерировать оксид азота по п. 1, характеризующийся тем, что в качестве антикоагулянта используют цитрат натрия, ЭДТА или гепарин.

3. Способ определения функции эритроцитов генерировать оксид азота по п. 1, характеризующийся тем, что условия гипоксии создаются:
а) помещением образца крови в атмосферу с малым содержанием кислорода, например, созданную такими приемами, как открытое пламя в замкнутом пространстве, откачивание воздуха, химическое поглощение кислорода, подача инертного газа или газовой смеси газ-генерирующим пакетом или мультигазовым инкубатором;
б) введением поглотителей кислорода, например, таких как сульфиты или оксираза, непосредственно в образец крови.

4. Способ определения функции эритроцитов генерировать оксид азота по п. 1, характеризующийся тем, что полученную плазму перед определением в ней содержания оксида азота хранят в замороженном виде.

5. Способ определения функции эритроцитов генерировать оксид азота по п. 1, характеризующийся тем, что производится определение гематокрита или подсчет эритроцитов крови и результаты измерения выражают в виде концентрации нитритов, приходящейся на эритроцитарную фракцию гематокрита, или в виде концентрации нитритов, приходящейся на число эритроцитов в 1 л крови.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии и неонатологии. Предлагаемый способ включает определение концентрации серомукоида в надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам диагностики активности эксцизионной репарации повреждений ДНК, и касается определения экспрессии ключевого белка эксцизионной репарации ERCC1 (excision repair cross-complementing protein 1) в солидных опухолях человека.

Изобретение относится к медицине и описывает способ оценки эффективности включения мексидола в комбинированную терапию острого коронарного синдрома по динамике липидно-фосфолипидного спектра сыворотки крови, где устанавливают влияние мексидола на редукцию волнообразного характера изменений липидно-фосфолипидных комплексов сыворотки крови с их стабилизацией на уровне, достаточном для обеспечения энергопластических потребностей организма и миокарда, что оценивают как положительный результат комбинированного лечения больных с ОКС.

Изобретение относится к области спортивной медицины, а именно к методам лабораторной диагностики уровня физической нагрузки на организм спортсмена. Для этого определяют содержание кальция и белка в ротовой жидкости до и после физической нагрузки, а также через день после физической нагрузки.

Группа изобретений относится к медицине. Представлен портативный анализатор для исследования пробы биологической жидкости, содержащий корпус с магазином, имеющим отделения для размещения используемых для анализа диагностических полосок или тест-полосок, имеющих зону для биологической жидкости, анализирующее устройство с щелевидным приемником для используемой диагностической полоски или тест-полоски, оснащенной с одного конца электрическими контактами, и индикаторное устройство для отображения не менее одного результата анализа, причем корпус со стороны задней части выполнен с понижением, образующим плоскую поверхность, на которой вдоль корпуса или поперечно ему выполнены выступы, разделяющие плоскую поверхность понижения на отделения для размещения диагностических полосок или тест-полосок и образующие магазин, расположенных параллельно не менее чем в один ряд, при этом отделения закрыты снимаемой или открываемой крышкой, являющейся частью корпуса.

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, в частности к биохимии, гигиене, стоматологии, медицинской экологии, может быть использовано для выявления степени адаптации к производственным условиям при взаимодействии с вредными и опасными факторами.

Изобретение относится к области медицины и может быть применено для определения катехоламинов их метаболитов в объектах на основе матриц сложного состава, в том числе нерастворимых в воде, без их дополнительной пробоподготовки.
Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к хирургии, и может быть использовано для диагностики некроза кишки при мезентериальной ишемии. Сущность изобретения заключается в моделировании у крыс острой мезентериальной ишемии с последующим определением количества лимфоцитов в центральной венозной крови, и при снижении их более чем на 80% от средних нормальных значений диагностируют некроз кишки.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ дифференциальной диагностики хронического вирусного гепатита и жирового поражения печени у больных с синдромом дислипидемии, заключающийся в том, что у больного в сыворотке крови определяют активность фермента антиоксидантной системы глутатионредуктазы (ГЛР), которую оценивают спектрофотометрическим методом, и при значении ГЛР менее или равно 14,6 мкмоль/л/мин диагностируют жировую болезнь печени, при концентрации ГЛР более 14,6 мкмоль/л/мин - хронический вирусный гепатит.
Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии. С помощью спектроскопа комбинированного рассеяния проводят серию регистрации спектров области новообразования и здоровой кожи.

Изобретение касается способа оценки эффективности защиты лимфоцитов от апоптоза, относится к медицине и может быть использовано в биохимии, кардиологии и терапии. Способ включает выделение лимфоцитов, инкубацию клеток 48 часов при температуре 37°С и 5% содержанием СО2, количественное определение жизнеспособности лимфоцитов по включению трипанового синего и биохимическое определение концентрации восстановленного и окисленного глутатиона в лизате лимфоцитов после предварительной инкубации в течение 30 минут с 10 ммоль 2-винилпиридином. Дополнительно в инкубационную среду, содержащую лимфоциты, вводят 1,4-дитиоэритритол и аскорбиновую кислоту в конечной концентрации 3,0 ммоль и 0,1 ммоль соответственно. При росте белково-связанного глутатиона на 18%-35%, а восстановленного глутатиона на 25-41% считают защиту низкоэффективной. При росте белково-связанного глутатиона на 36% и более и восстановленного глутатиона на 42% и более считают защиту высокоэффективной. Использование предлагаемого способа позволяет констатировать защиту клеток от апоптоза. Предлагаемый способ прост в осуществлении и интерпретации полученных результатов. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и предназначено для выявления риска развития преэклампсии. Для прогнозирования риска развития преэклампсии у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья, выделяют ДНК из периферической венозной крови и проводят анализ полиморфизмов генов цитокинов. Прогнозируют минимальный риск развития преэклампсии при сочетании трех генетических вариантов четырех генетических полиморфизмов: G I-ТАС (rs4512021) и +36 GG TNFR1; +250 A Ltα, G I-TAC (rs4512021) и +36 GG TNFR1; +250 G Ltα (rs909253), +36 A TNFR1 (rs767455), -403 G/A RANTES (rs2107538). Использование изобретения позволяет повысить эффективность выявления риска развития преэклампсии. 4 ил., 2 табл., 4 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и предназначено для выявления риска развития и степени тяжести преэклампсии. Для прогнозирования риска возникновения преэклампсии тяжелого течения у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья, выделяют ДНК из периферической венозной крови и анализируют генетические полиморфизмы: -308 G/A TNFα (rs1800629), +36 A/G TNFR1 (rs767455), -801 G/A SDF 1(rs1801157), C/G MCP-1 (rs285765). Повышенный риск развития преэклампсии тяжелого течения прогнозируют при наличии сочетания генетических вариантов -801A SDF1, +36 GG TNFR1 и -308 A TNFα. Пониженный риск развития преэклампсии тяжелого течения прогнозируют при наличии сочетания генетических вариантов -801 G SDF1 и G МСР (rs 285765). Использование изобретения позволяет повысить эффективность выявления тяжелого течения преэклампсии. 4 ил., 2 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, и предназначено для выявления риска развития преэклампсии у женщин с неотягощенной наследственностью. Для прогнозирования риска развития преэклампсии у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья, с неотягощенной наследственностью, выделяют ДНК из периферической крови и проводят анализ полиморфизмов генов цитокинов. Прогнозируют минимальный риск развития преэклампсии у женщин с неотягощенной наследственностью по шести сочетаниям генетических вариантов семи генетических полиморфизмов: +1931 A MIP1β, +250 A Ltα, -403 G/A RANTES; -801 G SDF1, G MCP-1, +250 A Ltα; -801 G SDF1, +250 A Ltα, G I-TAC; +250 A Ltα, G I-TAC, -308 GG TNFα; +1931 A MIP1β, -403 A RANTES; -801 G SDF1, G MCP-1. 7 ил., 1 табл., 6 пр.

Группа изобретений относится к медицине и описывает композицию реактивов для измерения количества лития в биологических образцах, отличающуюся тем, что указанная композиция реактивов для измерения количества лития представляет собой водный раствор, содержащий соединение, которое имеет структуру, представленную формулой (I), смешиваемый с водой органический растворитель, выбранный из диметилсульфоксида (DMSO), диметилформамида (DMF) и диметилацетамида (DMA), и модификатор pH для доведения pH до значения в диапазоне от pH 5 до pH 12, концентрация соединения формулы (I) составляет от 0,1 до 1,0 г/л. Описан также набор реактивов для определения количества лития в биологических образцах, а также способ определения количества ионов лития в биологических образцах. Группа изобретений позволяет измерять количество ионов лития быстро или незамедлительно с использованием стандартного колориметра. 3 н. и 10 з.п. ф-лы, 9 пр., 11 ил.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для определения кислотной устойчивости эритроцитов. Способ заключается в том, что в пробирку с кровью добавляют антикоагулянт (трилон Б) из расчета 10 мкл на 2 мл крови. Проводят измерения при длине волны 0,450 нм. Используют физиологический раствор 0,65% NaCl. Затем после гемолиза рассчитывают эритрограмму резистентности и определяют процентное распределение эритроцитарных мембран по стойкости. Заявленный способ прост и эффективен для определения кислотной устойчивости эритроцитов. 1 ил., 1 табл., 1 пр.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии, генной инженерии и представляет собой бактериальную клетку, способную реплицироваться в среде, содержащей по меньшей мере один тяжелый металл, выбранный из ртути, кадмия, цинка и свинца. Указанная бактериальная клетка трансформирована по меньшей мере одним хелатирующим агентом, выбранным из генов mt,β-галактозидазы и ppk. При этом указанные гены не экспрессируются как слитый белок в случае использования нескольких генов одновременно, экспрессируются с сильного промотора и по меньшей мере одного из 5'UTR и 3'UTR. Указанная клетка продуцирует более 4000 полных копий мРНК хелатирующего агента на нг суммарной мРНК. Настоящее изобретение раскрывает способы очистки жидкости от загрязнения тяжелыми металлами с использованием культуры указанных бактериальных клеток либо твёрдого матрикса, содержащего β-галактозидазу, а также наборы для обнаружения загрязнения тяжелыми металлами, содержащие культуру указанных бактериальных клеток. Настоящее изобретение позволяет повысить устойчивость конструируемых бактериальных клеток к высоким концентрациям тяжелых металлов. 5 н. и 17 з.п. ф-лы, 11 ил., 7 пр.

Изобретение относится к поглощающему изделию, выполненному с возможностью определения ионной силы мочи. Изделие включает непроницаемый для жидкости слой; проницаемый для жидкости слой; поглощающий внутренний слой, расположенный между непроницаемым для жидкости слоем и проницаемым для жидкости слоем; устройство с латеральным потоком, интегрированное в изделие и расположенное таким образом, что оно находится в жидкостном соединении с потоком мочи, выделяемой пользователем изделия. Устройство включает: буферную зону, которая содержит полиэлектролит и зону обнаружения или индикаторную зону, где зона обнаружения содержит недиффузионно иммобилизованные: буферный компонент, включающий слабую полимерную кислоту и слабое полимерное основание с pKa ≤ 10-3, и вещество из класса заряженных полимерных сурфактантов, чувствительных к относительным концентрациям ионов в растворе образца, и заряженный pH-индикатор, заряд которого противоположен заряду заряженного полимерного сурфактанта, где заряженный полимерный сурфактант растворим в количествах, превышающих или равных приблизительно 1 масс. % (≥ 1 масс. % растворенного вещества) в воде и водных растворах, имеющих низкую концентрацию ионов, составляющую ≤ 0,1 масс. % солей, но нерастворим (< 1 масс. % растворенного вещества) в водном растворе с высокой концентрацией ионов, составляющей > 0,1 масс. % солей. 7 з.п. ф-лы, 3 ил., 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для неинвазивного определения сахара в крови. Для этого осуществляют подготовку рабочего прибора для определения сахара в крови, в котором используют пробу и реагент, при этом в качестве пробы применяют дозу слюны пациента, а в качестве реагента используют первичный конгломерат монореактива Глюкоза-Ново, где глюкозооксидаза дополнительно содержит мутаротазу. Причем дозу слюны и первичный конгломерат монореактива помещают в кювету для их перемешивания с получением раствора, содержащего окончательный конгломерат монореактива с сахаром в слюне, у которого повышается спектральная чувствительность, достигающая порога 510 нм. Далее кювету устанавливают в рабочий прибор, включают источник светового излучения, в качестве которого используют лазерный диод с диапазоном длин световых волн 490-540 нм, а также фильтр-селектор для формирования необходимого пучка света с длиной волны 510 нм, направляемого на кювету с упомянутым раствором. Осуществляют контроль фотоприемником окраски полученного раствора и его оптической плотности и определяют искомое значение сахара в крови посредством процессора. Изобретение обеспечивает упрощение и повышение надежности определения сахара в крови. 1 з.п. ф-лы, 3 ил.

Изобретение относится к клинической биохимии и представляет собой способ определения литической активности множественно модифицированных липопротеинов низкой плотности (ммЛНП) путем обработки сыворотки крови 20% раствором поливинилпирролидона с молекулярной массой 35000 (ПВП-35000) при объемном соотношении сыворотка: ПВП (1:0,84), инкубируют 10 мин при комнатной температуре, агрегаты ммЛНП осаждают центрифугированием, декантируют, осадок ммЛНП растворяют в буфере без ПВП, добавляют аутологичные отмытые стандартизованные эритроциты человека, инкубируют в течение 48 часов при комнатной температуре, измеряют оптическую плотность на фотометре при длине волны 620 нм, по калибровочному графику определяют степень лизиса и при лизисе более 10% констатируют повышенную литическую активность ммЛНП. Изобретение обеспечивает расширение арсенала способов определения литической активности ммЛНП. 4 пр., 4 табл., 1 ил.

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной диагностике, и позволяет определить способность эритроцитов генерировать оксид азота. Способ включает взятие у обследуемого образца крови, перемешивание образца с антикоагулянтом, помещение половины данного образца в условия гипоксии, затем получение плазмы крови из частей образца, подвергавшихся и не подвергавшихся гипоксии, определение в обеих частях содержания оксида азота и вычисление разницы полученных величин в сравнении с аналогичными данными в контрольной группе. По результатам сравнения судят о состоянии NO-генерирующей функции эритроцитов. Данный способ позволяет оценить вклад усиленной или пониженной NO-генерирующей функции эритроцитов в патогенез гипертонической болезни и других заболеваний, связанных с состояниями гипоксии, тромбоза, нарушения регуляции сосудистого тонуса и обмена оксида азота. 4 з.п. ф-лы, 2 табл., 2 пр.

Наверх