Модифицированная питательная среда эндо для выявления и идентификации энтеробактерий



Модифицированная питательная среда эндо для выявления и идентификации энтеробактерий
Модифицированная питательная среда эндо для выявления и идентификации энтеробактерий

 


Владельцы патента RU 2574210:

Федеральное Бюджетное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (RU)

Изобретение относится к клинической и санитарной микробиологии и может быть использовано при исследовании различного биологического материала, а также объектов окружающей среды на наличие как патогенных, так и условно-патогенных энтеробактерий. Модифицированная питательная среда Эндо содержит гидролизат кильки панкреатический, экстракт дрожжей кормовых, лактозу, фуксин основной, натрия сульфит, натрия хлорид, натрия карбонат, натриевые соли желчных кислот, L-триптофан, агар микробиологический и дистиллированную воду в заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет выделить культуру в чистом виде и провести точный количественный учет выросших микроорганизмов. 1 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к санитарной и клинической микробиологии, и может быть использовано при исследовании различного биологического материала, а также объектов окружающей среды на наличие как патогенных, так и условно-патогенных энтеробактерий.

Как известно, питательная среда Эндо является одной из наиболее широко используемых сред в бактериологической практике для первичного посева исследуемого материала с целью выявления как патогенных, так и условно-патогенных энтеробактерий (5, 10, 2, 8). Также назначением среды Эндо, согласно действующим САНПиН, является использование ее при санитарном микробиологическом контроле объектов окружающей среды, в том числе воды и пищевых продуктов (6). Питательная среда Эндо - это традиционная дифференциально-диагностическая питательная среда для выделения грамотрицательных бактерий, в которой заложен принцип ферментации лактозы. Однако недостаток среды заключается в том, что среда Эндо не подавляет «роение» протея, в силу чего в случае наличия в микробной ассоциации «роящихся» форм протеев (Proteus mirabilis, Proteus vulgaris) невозможно выделить изолированную колонию, а также произвести подсчет числа выросших колоний, вследствие образования сплошной пленки протеев на поверхности среды. Следует отметить, что именно эти два вида протеев наиболее часто выделяются как при клинических, так и при санитарных исследованиях (7). Разработанные ранее многочисленные модификации среды Эндо не устраняют этого недостатка (4, 9).

При проведении исследований по избавлению от этого недостатка нами было обнаружено, что только при сочетанном внесении в среду Эндо натриевых солей желчных кислот и L-триптофана обеспечивается рост «роящихся» форм протеев в О-Н-форме (т.е. без «роения»), а также выявляется специфический фермент протеев триптофандезаминаза.

В состав известной среды Эндо, согласно каталогам различных производителей, входят в г/л (1,3):

Причиной, препятствующей достижению указанного ниже технического результата при использовании сухой питательной среды для выделения энтеробактерий, принятой за прототип, является образование пленки протеями (Proteus vulgaris, Proteus mirabilis), что не дает возможности провести количественный учет выросших колоний и выделить культуры в чистом виде (Табл. 1)

Задачей изобретения является создание модифицированной питательной среды Эндо, позволяющей подавить «роение» протеев, что в случае наличия их в исследуемой микробной ассоциации позволит проводить эффективный количественный учет энтеробактерий.

Для достижения поставленной задачи в известную среду Эндо добавляют натриевые соли желчных кислот и L-триптофан в определенных концетрациях, сочетание которых позволяет подавить «роение» протеев и выявить специфический фермент протеев - триптофандезаминазу. Под воздействием триптофандезаминазы протеев L-триптофан расщепляется с образованием продукта вишнево-коричневого цвета, окрашивающего только колонии протеев и среду вокруг них в вишнево-коричневый цвет.

Для микроорганизмов, не продуцирующих триптофандезаминазу, в составе среды присутствуют лактоза и фуксин, которые позволяют выявить образование кислоты из лактозы при росте указанных микроорганизмов, вследствие чего они окрашиваются в красный цвет в отличие от колоний протеев вишнево-коричневого цвета. Лактозоотрицательные энтеробактерии вырастают на среде бесцветного цвета. Идентификация протеев на предлагаемой среде осуществляется одновременно с их выделением, т.е. одноэтапно. «Роение» протеев ингибируется, в отличие от традиционной среды Эндо, взятой за прототип. Грамположительные микроорганизмы подавляются при посеве из разведения 10-1 в результате введения в среду фуксина основного.

Состав предлагаемой среды Эндо в г/л дистиллированной воды:

Гидролизат кильки панкреатический 15,0-16,0
Экстракт дрожжей кормовых 0,65-0,7
Лактоза 10,5-11,0
Фуксин основной 0,2-0,25
Натрия сульфит 0,8-0,85
Натрия хлорид 4,0-5,0
Натрия карбонат 0,025-0,035
Натриевые соли желчных кислот (фирма «Oxoid») 1,4-1,6
L-триптофан 4,0-5,0
Агар микробиологический 7,0-7,8

Данный состав среды обеспечивает четкую дифференциацию по цвету протеев (вишнево-коричневого с таким же преципитатом) от патогенных энтеробактерий (бесцветных) и условно-патогенных энтеробактерий (красных), что не представляется возможным при использовании традиционной среды Эндо.

Заявляемую питательную среду Эндо для выявления и идентификации энтеробактерий получают следующим образом.

Пример 1. В 1 литр дистиллированной воды последовательно вносят 15,0 г гидролизата кильки панкреатического, 0,65 г экстракта кормовых дрожжей, 10,5 г лактозы, 0,2 г фуксина основного, 7,0 г агара микробиологического, 4,0 г L-триптофана, 1,4 г натриевых солей желчных кислот, 0,8 г натрия сульфита, 4,0 г натрия хлорида и 0,025 г натрия карбоната. Смесь тщательно перемешивают, трехкратно кипятят по 1-2 мин при помешивании, не допуская пригорания агара, до появления крупнопузырчатой пены. Среду охлаждают до температуры 45-50°C, после чего разливают в стерильные чашки Петри. После застывания агаровой пластинки чашки со средой подсушивают в термостате при 37°C в течение 50-60 мин с соблюдением правил асептики. Готовая к употреблению среда прозрачная, бледно-розового цвета, pH среды 7,4±0,2. Исследуемый материал наносят на поверхность среды и растирают стерильным шпателем. Инкубируют посев при температуре 37°C в течение 24 ч.

Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что в 1 литр дистиллированной воды последовательно вносят 15,5 г гидролизата кильки панкреатического, 0,67 г экстракта кормовых дрожжей, 10,7 г лактозы, 0,23 г фуксина основного, 7,04 г агара микробиологического, 4,5 г L-триптофана, 1,5 г натриевых солей желчных кислот, 0,83 г натрия сульфита, 4,5 г натрия хлорида и 0,03 г натрия карбоната. Далее - по примеру 1.

Пример 3. Отличается от примеров 1 и 2 тем, что в 1 литр дистиллированной воды последовательно вносят 16,0 г гидролизата кильки панкреатического, 0,7 г экстракта кормовых дрожжей, 11,0 г лактозы, 0,25 г фуксина основного, 7,8 г агара микробиологического, 5,0 г L-триптофана, 1,6 г натриевых солей желчных кислот, 0,85 г натрия сульфита, 5,0 г натрия хлорида и 0,035 г натрия карбоната. Далее - по примеру 1.

Через 24 ч инкубации посевов (при 37±1°C) на предлагаемой среде патогенные энтеробактерии (Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Shigella sonnei S-form) формируют типичные колонии бесцветного цвета, диаметром от 1,5 до 2,0 мм в S-форме. Колонии протеев вырастают вишнево-коричневого цвета, в O-H форме, диаметром 2,5-3,0 мм. При этом вокруг колоний протеев четко виден преципитат вишнево-коричневого цвета. Колонии условно-патогенных энтеробактерий - эшерихий, клебсиелл, цитробактера, энтеробактера, серраций вырастают в виде типичных для каждого вида колоний красного цвета, иногда с металлическим блеском, на фоне бледно-розового цвета питательной среды (Табл. 1).

Использование предлагаемой среды позволяет выделить культуру в чистом виде и провести точный количественный учет выросших микроорганизмов, что особенно важно при проведении клинических и санитарных исследований.

Литература

1. Диагностические препараты. Каталог продукции ФБУН ГНЦ ПМБ. - Оболенск. - 2012 г. - С. 14.

2. Загайнова А.В. Способ определения степени эпидемической опасности патогенных и потенциально-патогенных бактерий, выделенных из воды различного вида водопользования. / Рахманин Ю.А. // Патент на изобретение №2446214 от 27.03.2012 г.

3. Меджидов М.М. Справочник по микробиологическим питательным средам. - М.: Медицина, 2003. - С. 33-34.

4. Микробиологические методы исследования при инфекционных заболеваниях. Под ред. Г.Я. Синая и О.Г. Биргера. - М. 1949. - С. 64.

5. Приказ МЗ СССР №535 «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений». - М.: Медицина, 1985.

6. СанПиН 2.3.2.1280-02. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов. Дополнения и изменения N 2 к СанПиН 2.3.2.1078-01 - М.: Минздрав России, 2003. - 32 с.

7. Сбойчаков В.Б. Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований. - С-Пб.: СпецЛит, 2007. - С. 359-362.

8. Снежков Н.И. Способ выявления возбудителей пищевых токсикоинфекций из продуктов животноводства. / Смирнова В.Н. // Патент на изобретение №2175443 от 27.10.2001 г.

9. Справочник по микробиологическим методам исследования. Под ред. М.О. Биргера. - М.: Медицина, 1982. - С. 462.

10. Энтеробактерии: Руководство для врачей. Под ред. В.И. Покровского. - М.: Медицина, 1985. - 318 с.

Модифицированная питательная среда Эндо для выявления и идентификации энтеробактерий, содержащая в качестве источника азота гидрализат кильки панкреатический, индикатор фуксин основной, лактозу, натрия сульфит, натрия хлорид, натрия карбонат и агар микробиологический, отличающаяся тем, что она дополнительно включает натриевые соли желчных кислот и L-триптофан при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:

гидролизат кильки панкреатический 15,0-16,0
экстракт дрожжей кормовых 0,65-0,7
лактоза 10,5-11,0
фуксин основной 0,2-0,25
натрия сульфит 0,8-0,85
натрия хлорид 4,0-5,0
натрия карбонат 0,025-0,035
натриевые соли желчных кислот 1,4-1,6
L-триптофан 4,0-5,0
агар микробиологический 7,0-7,8



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицинской микробиологии и микробиологической промышленности и может быть использовано для обнаружения колиформных бактерий и Е.coli в образцах пищевых продуктов и воды при проведении бактериологических исследований.
Изобретение относится к санитарной и клинической микробиологии и может быть использовано для обнаружения и учета Е.coli и колиформных бактерий в воде, пищевых продуктах, клиническом материале и т.д.
Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к ветеринарной микробиологии, и может быть использовано в лабораторной практике для выделения и идентификации энтерогеморрагической кишечной палочки Е.coli O157:H7 в биологическом материале.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для бактериологического обнаружения кишечной палочки в воде, пищевых продуктах и другом инфицированном материале по ее способности расти с образованием газа из лактозы при 43°С в присутствии борной кислоты.

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано при бактериологическом исследовании различных клинических материалов и объектов внешней среды.

Изобретение относится к санитарной микробиологии. .
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и может быть использовано для определения микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae. .

Изобретение относится к санитарной микробиологии. .

Изобретение относится к клинической микробиологии. .

Изобретение относится к микробиологии, а именно к санитарно-гигиеническому контролю за инфицированностью Listeria monocytogenes морской воды и морепродуктов. Способ определения сапрофитных бактерий, стимулирующих рост Listeria monocytogenes в морских микробных сообществах, предусматривает засев «газоном» одной половины чашки Петри с агаризованной средой СММ испытуемыми культурами, а другой половины чашки с ГРМ-агаром - тест-культурами листерий.

Заявленная группа изобретений относится к биотехнологии. Штамм Lactobacillus jensenii депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов ИБФМ им Г.К.
Изобретение относится к области биохимии, в частности к биологически активным соединениям, проявляющим антибактериальную активность. Заявлен природный гликопептидный антибиотик ИНА 5812, который может быть применен в качестве лекарственного препарата в медицинской практике.

Изобретение относится к биотехнологии. Питательная среда для глубинного культивирования бактерий Bacillus subtilis BN-135 содержит муку ржаную гидролизованную или муку ячменную гидролизованную, кукурузный экстракт, аммоний фосфорнокислый двузамещенный, калий фосфорнокислый однозамещенный, кальций хлористый, натрий углекислый и водопроводную воду при заданном соотношении компонентов.

Изобретение относится к области экологии. Предложен способ очистки водной среды от нефти и нефтепродуктов.
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для культивирования дифтерийных микробов на искусственных двухфазных питательных средах.

Предложен штамм микромицета Clonostachys candelabrum, обладающий антибактериальной активностью в отношении возбудителя туляремии Francisella tularensis 15/10. Штамм микромицета выделен из почвы и депонирован в Государственную коллекцию патогенных микроорганизмов (ГКПМ-Оболенск) под регистрационным номером F-1466.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены способ получения терминального алкена, в конкретном варианте - изобутелена, применение мевалонатдифосфат декарбоксилазы и микроорганизма, продуцирующего мевалонатдифосфат декарбоксилазу, для получения терминального алкена, а также композиция для получения терминального алкена.

Группа изобретений относится вариантам добавок к питательной среде для формирования бактериальных биопленок. Предложена добавка, состоящая из биополимера фибрина в количестве от 0,05 г до 10 г на 1 кг питательной среды и ингибитора протеиназ.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм бактерий Enterococcus faecium Ef79OSAU, обладающий антагонистической активностью в отношении бактерий рода Listeria и вида Enterococcus faecalis, депонирован в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры человека (ГКНМ) ФБУН «МНИИЭМ им Г.Н.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения левана микробиологическим способом. Способ предусматривает внесение штамма микроорганизма Azotobacter vinelandii штамм Д-08 в питательную среду, приготовленную путем разведения мелассы дистиллированной водой до концентрации 7 или 10% с последующим культивированием при температуре 28-30°C в течение 72 часов в термостатируемом шейкере при 250 об/мин. Изобретение позволяет упростить способ получения левана, а также повысить динамическую вязкость готового продукта. 1 табл.
Наверх