(3s)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2н-[1,4]бензоксазин и (3r)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2н-[1,4]бензоксазин, обладающие противовирусной активностью



(3s)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2н-[1,4]бензоксазин и (3r)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2н-[1,4]бензоксазин, обладающие противовирусной активностью
(3s)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2н-[1,4]бензоксазин и (3r)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2н-[1,4]бензоксазин, обладающие противовирусной активностью
(3s)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2н-[1,4]бензоксазин и (3r)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2н-[1,4]бензоксазин, обладающие противовирусной активностью
(3s)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2н-[1,4]бензоксазин и (3r)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2н-[1,4]бензоксазин, обладающие противовирусной активностью
(3s)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2н-[1,4]бензоксазин и (3r)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2н-[1,4]бензоксазин, обладающие противовирусной активностью
(3s)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2н-[1,4]бензоксазин и (3r)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2н-[1,4]бензоксазин, обладающие противовирусной активностью
(3s)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2н-[1,4]бензоксазин и (3r)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2н-[1,4]бензоксазин, обладающие противовирусной активностью
(3s)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2н-[1,4]бензоксазин и (3r)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2н-[1,4]бензоксазин, обладающие противовирусной активностью
(3s)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2н-[1,4]бензоксазин и (3r)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2н-[1,4]бензоксазин, обладающие противовирусной активностью
(3s)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2н-[1,4]бензоксазин и (3r)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2н-[1,4]бензоксазин, обладающие противовирусной активностью

Владельцы патента RU 2644351:

федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт органического синтеза им. И.Я. Постовского Уральского отделения Российской академии наук (ИОС УрО РАН) (RU)

Изобретение относится к новым производным пурина формул:

. Технический результат: получены новые производные, обладающие избирательной противовирусной активностью в отношении вирусов герпеса простого типа 1 и действующие на вирусные штаммы с лекарственной резистентностью к ацикловиру и родственным соединениям. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 1 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к области органической химии, а именно к новым производным пурина - (3S)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2H-[1,4]бензоксазину ((S)-1) и (3R)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2H-[1,4]бензоксазину ((R)-1), которые обладают противовирусной активностью, в первую очередь в отношении вируса простого герпеса, тип 1 (ВПГ-1), и могут найти применение в медицине и ветеринарии.

Инфекции, вызываемые вирусами простого герпеса (ВПГ), имеют широчайшее распространение во всем мире: по последним оценкам ВОЗ (Информационный бюллетень №400, январь 2016 г.) [http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs400/ru/] 67% населения Земного шара в возрасте до 50 лет (около 3,7 миллиарда человек) инфицированы ВПГ 1-го типа (ВПГ-1), а инфицированность ВПГ 2-го типа (ВПГ-2) составляет 11% или около 417 миллионов человек в возрасте от 15 до 49 лет. Обе формы ВПГ устанавливают пожизненную периодически рецидивирующую латентную инфекцию. Контагенозность герпетической инфекции (ГИ) не только в период наличия симптомов, но и в их отсутствие обусловливает постепенное увеличение показателя инфицированности для старших возрастных групп населения [Smith J.S., Robinson N.J. Age-specific prevalence of infection with herpes simplex virus types 2 and 1: a global review // J. Infect. Dis. 2002, V. 186 (Suppl. 1), S3-S28; Diaz-Ramon J.L., J.L. Skin diseases with high public health impact. Herpes simplex and zoster // Eur. J. Dermatol. 2008, V. 18(1), 108-111].

К этиотропным противогерпетическим препаратам первого ряда, используемым в медицинской практике для лечения и предотвращения рецидивов ГИ, вызываемых ВПГ, относятся модифицированный нуклеозид ацикловир (2) (зовиракс, 9-[(2-гидроксиэтокси)метил]гуанин), его производные (3, валацикловир) и аналоги (4, пенцикловир; фамцикловир) [Kimberlin D.W., Whitley R.J. Antiviral therapy of HSV-1 and -2 // In: Arvin A., Campadelli-Fiume G., Mocarski E., Moore P.S., Roizman В., Whitley R., Yamanishi K., eds. Human herpesviruses: biology, therapy, and immuno-prophylaxis. Cambridge, UK: Cambridge University Press; 2007: 1141-1160; Галегов Г.А., Андронова В.Л., Колобухина Л.В., Львов Н.Д. Специфическая лекарственная терапия распространенных и социально значимых вирусных инфекций человека // Вопросы вирусологии 2012, № S1, 180-189].

Одним из факторов, лимитирующих применение этой группы препаратов, является развитие лекарственной резистентности у ВПГ. У иммунокомпетентных пациентов частота выделения таких штаммов ВПГ составляет в среднем 0.5%. В группе иммунокомпромиссных больных этот показатель существенно выше и колеблется в диапазоне 2-36%. Изоляция таких штаммов часто коррелирует с неэффективностью проводимого лечения. Известны случаи, когда с устойчивыми к ацикловиру вариантами ВПГ были ассоциированы тяжелые клинические формы ГИ (пневмония, менингоэнцефалит, обширные кожно-слизистые поражения и др.), приведшие в ряде случаев к смерти больного [Marks G.L., Nolan Р.Е., Erlich K.S., Ellis M.N. Mucocutaneous dissemination of acyclovir-resistant herpes simplex virus in a patient with AIDS. // Rev. Infect. Dis. 1989, V. 11 (3), 474-476; Erlich K.S., Jacobson M.A., Koehler J.E., et al. Foscarnet therapy for severe acyclovir-resistant herpes simplex virus type-2 infections in patients with the acquired immunodeficiency syndrome (AIDS). An uncontrolled trial // Ann. Intern. Med. 1989, V. 110 (9), 710-713; Gateley A., Gander R.M., Johnson P.C., et al. Herpes simplex virus type 2 meningoencephalitis resistant to acyclovir in a patient with AIDS // J. Infect. Dis. 1990, V. 161 (4), 711-715; Ljungman P., Ellis M.N., Hackman R.C., Shepp D.H., Meyers J.D. Acyclovir-resistant herpes simplex virus causing pneumonia after marrow transplantation // J. Infect. Dis. 1990, V. 162 (1), 244-248; Safrin S., Ashley R., Houlihan C., Cusick P.S., Mills J. Clinical and serologic features of herpes simplex virus infection in patients with AIDS // AIDS 1991, V. 5 (1), 107-110; Dekker A.W., Rozenberg-Arska M. Successful foscarnet therapy for acyclovir-resistant mucocutaneous infection with herpes simplex virus in a recipient of allogeneic BMT // Bone Marrow Transplant 1993, V. 11 (2), 177-179; Sauerbrei A., Bohn K., Heim A., et al. Novel resistance-associated mutations of thymidine kinase and DNA polymerase genes of herpes simplex virus type 1 and type 2 // Antivir. Ther. 2011, V. 16 (8), 1297-308; Andrei G., Georgala A., Topalis D., et al. Heterogeneity and evolution of thymidine kinase and DNA polymerase mutants of herpes simplex virus type 1: implications for antiviral therapy // J. Infect. Dis. 2013, V. 207 (8), 1295-1305].

Молекулярный механизм действия ацикловира и его ближайших аналогов и их метаболических предшественников заключается в следующем. Поэтапно превращаясь в клетке в моно-, ди- и трифосфаты, они ингибируют вирусную ДНК-полимеразу, и кроме того, конкурируя с природными нуклеотидами, они селективно включаются в синтезирующуюся цепочку вирусной ДНК, что приводит к прекращению элонгации по терминационному механизму. При этом, так как первый этап кинирования с образованием монофосфатов катализируется вирусной тимидинкиназой (ТК), а два последующих - клеточными ферментами, то образование активных метаболитов (трифосфатов ацикловира и пенцикловира) возможно только в инфицированной клетке [Elion G.B. Mechanism of action and selectivity of acyclovir // Am. J. Med. 1982, V. 73 (1A), 7-13; Reardon J.E., Spector T. Herpes simplex virus type 1 DNA polymerase. Mechanism of inhibition by acyclovir triphosphate // J. Biol. Chem. 1989, V. 264 (13), 7405-7411; Boyd M.R., Safrin S., Kern E.R. Penciclovir: a review of its spectrum of activity, selectivity, and cross-resistance pattern // Antiviral Chem. Chemother. 1993, V. 4, 3-11]. Соответственно, из-за сходства механизмов действия ацикловира (2), пенцикловира (4) и их метаболических предшественников лекарственная резистентность ВПГ обусловливается мутациями в одном или двух генах, с которыми связан механизм действия этих антивирусных агентов, - UL23 (TK-ген) и UL30 (pol-гене) и в большинстве случаев носит перекрестный характер [Boyd M.R., Safrin S., Kern E.R. Penciclovir: a review of its spectrum of activity, selectivity, and cross-resistance pattern //Antiviral Chem. Chemother. 1993, V. 4, 3-11; Sarisky R.T., Bacon T., Boon R., et al. Penciclovir susceptibilities of herpes simplex virus isolates from patients using penciclovir cream for treatment of recurrent herpes labialis // Antimicrob. Agents Chemother. 2002, V. 46 (9), 2848-2853; Sarisky R.T., Bacon Т.Н., Boon R.J., et al. Profiling penciclovir susceptibility and prevalence of resistance of herpes simplex virus isolates across eleven clinical trials // Arch. Virol. 2003, V. 148 (9), 1757-1769]. В таких случаях замена одного препарата первого ряда на другой с большей биодоступностью (например, ацикловира (2) на его эфир с валином (3, валацикловир) или на фамцикловир) не всегда может обеспечить достижение терапевтического эффекта [Sauerbrei A., Bohn K., Heim A., et al. Novel resistance-associated mutations of thymidine kinase and DNA polymerase genes of herpes simplex virus type 1 and type 2 // Antivir. Ther. 2011, V. 16 (8), 1297-308]. В международной практике в случаях неэффективности противогерпетических препаратов первого ряда используют препараты второго ряда - тринатриевую соль фосфономуравьиной кислоты (фоскарнет) или, если фоскарнет также оказывается неэффективным, цидофовир (вистид). К сожалению, фоскарнет и цидофовир высокотоксичны, и в РФ их использование не разрешено.

Таким образом, поиск новых эффективных и безвредных соединений, эффективных против ВПГ, включая штаммы с лекарственной резистентностью к известным препаратам, несомненно, представляет собой актуальную задачу.

Среди производных пурина найдены соединения, обладающие выраженной противовирусной активностью, например соединения 5 и 6 [Balzarini J., Aquaro S., Perno C.-F., et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996, V. 219, 337-341; De Clercq E. // Antiviral Res. 2007, V. 75, 1-13].

Данные о противовирусной активности ближайших структурных аналогов соединений (S)-1 и (R)-1, таких как: (3S)-4-[6-(2-аминопурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2H-[1,4]бензоксазин, (3R)-4-[6-(2-аминопурин-6-иламино)-гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2H-[1,4]бензоксазин, (3S)-4-[6-(2-ацетамидопурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2H-[1,4]бензоксазин, (3R)-4-[6-(2-ацетамидопурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2H-[1,4]бензоксазин и родственных соединений общей формулы 7 [Krasnov V.P., Grazdev D.A., Chulakov E.N. et al., Mendeleev Commun. 2015, V. 25, 412-414] в литературе отсутствуют.

Известно, что биологическая активность хиральных соединений существенным образом зависит от их стереоконфигурации [Chiral drugs: chemistry and biological action / Eds.: Guo-Qiang Lin, Qi-Dong You, Jie-Fei Cheng. - Hoboken, New Jersey: John Wiley & Sons, 2011. - 456 p.].

Наиболее близким аналогом (прототипом) заявляемых соединений является известный препарат ацикловир (2), широко использующийся для лечения ГИ уже более 30 лет, с начала 80-х гг. прошлого века и до настоящего времени [Schaeffer H.J., Beauchamp L., de Miranda P., et al. // Nature 1978, V. 272, 583-585; O'Brien J.J., Campoli-Richards D.M. Acyclovir. An updated review of its antiviral activity, pharmacokinetic properties and therapeutic efficacy // Drugs 1989, V. 37, 233-309].

Задача предлагаемого изобретения - новые соединения с высокой противовирусной активностью, в том числе по отношению к штамму вируса герпеса, устойчивого к действию ацикловира, расширяющее арсенал известных противовирусных средств.

Техническим результатом данного изобретения является создание новых химических соединений - (3S)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2H-[1,4]бензоксазина ((S)-1) и (3R)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2H-[1,4]бензоксазина ((R)-1):

Соединения (S)-1 и (R)-1, их физико-химические характеристики, а также способ получения в литературе не описаны.

Соединение формулы ((S)-1) может быть получено в три стадии из доступного 6-хлорпурина (8):

По аналогичной схеме может быть получено соединение формулы ((S)-1).

Соединение 8 вводят в реакцию с (3S)-(6-аминогексаноил)-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2H-[1,4]бензоксазином ((S)-9) или (3R)-(6-аминогексаноил)-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2H-[1,4]бензоксазином ((R)-9), полученными в результате гидразинолиза (3S)-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-4-(6-фталимидогексаноил)-2H-[1,4]-бензоксазина ((S)-12) или (3R)-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-4-(6-фталимидогексаноил)-2H-[1,4]бензоксазина ((R)-12) - продуктов ацилирования (3S)-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2H-[1,4]бензоксазина ((S)-10) или (3R)-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2H-[1,4]бензоксазина ((R)-10), соответственно, хлорангидридом 6-фталимидогексановой кислоты (11). Реакцию между соединениями 8 и 9 проводят в этиловом спирте при температуре 90°С в присутствии триэтиламина, после соответствующей обработки реакционной массы выделяют целевое соединение (S)-1 или (R)-1.

Характеристики новых соединений (S)-1 и (R)-1 и промежуточных продуктов приведены в примерах конкретного выполнения.

Структуры полученных соединений подтверждают методами спектроскопии ЯМР 1Н, 19F и 13C, элементного анализа и масс-спектрометрии высокого разрешения. Индивидуальность соединений подтверждают методами ТСХ и ВЭЖХ.

Оптическую чистоту соединений подтверждают методами ВЭЖХ на хиральной неподвижной фазе и поляриметрии.

Температуры плавления соединений определены на приборе Stuart SMP3 (Barloworld Scientific).

Удельное вращение определено на поляриметре PerkinElmer Model 341.

Элементный анализ выполнен на автоматическом CHNS-0 анализаторе РЕ 2400 серия II (Perkin Elmer).

Спектры ЯМР 1Н, 19F и 13С зарегистрированы на приборе Bruker Avance 500 (рабочая частота 500, 470 и 125 МГц, соответственно) в ДМСО-d6 относительно тетраметилсилана Si(CH3)4 и гексафторбензола (внутренние стандарты). Химические сдвиги (δ) приведены в миллионных долях (м.д.), константы спин-спинового взаимодействия (J) - в герцах (Гц).

Аналитическая ВЭЖХ на хиральной неподвижной фазе выполнена на жидкостном хроматографе Knauer Smartline-1100 (колонка Chiralcel OD-H, 250×4,6 мм, сорбент 5 мкм, детектирование при длине волны 220 нм, элюент гексан-изопропанол 5:1, скорость потока 1 мл/мин) и на жидкостном хроматографе Agilent 1100 (колонка (S,S)-Whelk-O1, 250×4,6 мм, сорбент 5 мкм, детектирование при длине волны 254 нм, элюент 80% метанол, скорость потока 0,8 мл/мин).

Масс-спектр высокого разрешения зарегистрирован на масс-спектрометре Bruker maXis Impact HD, ионизация электрораспылением с прямым вводом образца при положительном режиме, скорость потока N2 4 л/мин, давление распылительного газа 0,4 бар, напряжение 4,5 кВ.

Для ТСХ использованы пластинки Sorbfil (ООО «Имид», Россия). Проявление в УФ свете.

Примеры конкретного выполнения.

Пример 1

Синтез (3S)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2H-[1,4]бензоксазина ((S)-1)

К раствору 1,91 г (10,3 ммоль) (3S)-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2H-[1,4]бензоксазина ((S)-10) в 60 мл сухого дихлорметана при перемешивании прибавляют 1,65 мл (10,3 ммоль) N,N-диэтиланилина, затем 2,88 г (10,3 ммоль) хлорангидрида 6-фталимидогексановой кислоты (11) в 60 мл сухого дихлорметана. Реакционную смесь выдерживают при перемешивании и комнатной температуре 24 ч, после чего последовательно промывают 4 н. HCl (3×30 мл), насыщенным раствором NaCl (6×30 мл), 5% раствором NaHCO3 (3×30 мл), насыщенным раствором NaCl (3×30 мл). Органический слой отделяют и сушат над MgSO4, растворитель упаривают. Остаток очищают флеш-хроматографией на силикагеле (элюент бензол-этилацетат 8:2) и получают 3,38 г (77%) (3S)-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-4-(6-фталимидогексаноил)-2H-[1,4]бензоксазина ((S)-12) в виде светло-желтого масла, промежуточного соединения в синтезе соединения (S)-1. [α]D20 +67.7 (с 0.9, CHCl3). Ее>99%: ВЭЖХ (Chiralcel OD-H, гексан-изопропанол 5:1): τ 26.1 мин. Найдено (%): С 64.34; Н 5.44; F 8.57; N 6.43. Вычислено для C23H22F2N2O4 (%) С 64.48; Н 5.18; F 8.87; N 6.54.

Спектр ЯМР 1Н (500 МГц, ДМСО-d6) δ: 1.10 (д, J=6.2 Гц, 3 Н, Me), 1.27-1.33 (м, 2 H, гексаноил 2×Н-4), 1.53-1.65 (м, 4 Н, гексаноил 2×Н-3 и 2×Н-5), 2.42-2.50 (м, 1 Н, гексаноил Н-2В, перекрывание сигналом ДМСО), 2.61-2.67 (м, 1 Н, гексаноил Н-2А), 3.57 (т, J=7.0 Гц, 2 Н, гексаноил 2×Н-6), 4.13 (дд, J=10.6, 1.8 Гц, 1 Н, Н-2В), 4.34 (дд, J=10.6, 1.2 Гц, 1 Н, Н-2А), 4.50-4.85 (м, 1 Н, Н-3), 6.88-6.94 (м, 1 Н, Н-6), 7.45-7.75 (м, 1 Н, Н-5), 7.82-7.89 (м, 4 Н, Phth).

Спектр ЯМР 19F (470 МГц, ДМSO-d6) δ: 1.83 (м, 1 F, F-8), 19.55 (м, 1 F, F-7).

Спектр ЯМР 13С (125 МГц, ДМSO-d6, 100°С) δ: 15.07, 24.20, 25.74, 27.68, 33.23, 37.22, 44.80, 69.80, 106.72 (д, J=17.8 Гц), 119.20 (м), 121.74, 122.89, 131.52, 134.27, 135.65 (дд, J 9.8, 2.7 Гц), 138.88 (дд, J=243.3, 15.4 Гц), 146.44 (дм, J=241.8 Гц), 167.85, 170.82.

1,16 г (2,71 ммоль) (3S)-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-4-(6-фталимидогексаноил)-2H-[1,4]бензоксазина ((S)-12) растворяют в 25 мл этанола, при перемешивании вносят 0,37 мл (4,87 ммоль, 1,8 экв) 64% раствора гидразин гидрата, смесь кипятят 1 ч. Затем этанол упаривают, к остатку приливают 24 мл 2 н. HCl и выдерживают при температуре +4°С 12 ч. Осадок фталилгидразида отфильтровывают, промывают 1 н. HCl (2×3 мл), к маточному раствору при перемешивании и охлаждении прибавляют твердый NaOH до pH 12. Продукт экстрагируют диэтиловым эфиром (4×10 мл), органический слой сушат над NaOH. Растворитель упаривают, получают 0,59 г (73%) (3S)-(6-аминогексаноил)-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-4-2H-[1,4]бензоксазина ((S)-9) в виде светло-желтого масла.

К раствору 0,20 г (1,32 ммоль) 6-хлорпурина (8) в 10 мл абсолютного этанола при перемешивании прибавляют 0,31 мл (2,24 ммоль; 1,7 экв.) триэтиламина и 0,59 г (1,98 ммоль; 1,5 экв.) (3S)-(6-аминогексаноил)-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-4-2H-[1,4]бензоксазина ((S)-9) в 10 мл абсолютного этанола, реакционную смесь кипятят 12 ч. Затем этанол упаривают, остаток растворяют в 20 мл хлороформа, промывают 1 н. HCl (3×5 мл), насыщенным раствором NaCl (3×5 мл), органический слой сушат над MgSO4, растворитель упаривают. Остаток очищают флеш-хроматографией на силикагеле (элюент хлороформ-этанол 9:1) и получают 0,24 г (44%) целевого соединения (S)-1 в виде светло-желтых кристаллов. Т.пл. 87-89°С (разл.) [α]D20 +57.6 (с 1, МеОН). Ее>99%; ОФ ВЭЖХ ((S,S)-Whelk-O1, 80% МеОН): τ 12.8 мин.

Масс-спектр высокого разрешения. Найдено, m/z: 417.1844 [М+Н]+. C20H23F2N6O2. Вычислено, m/z: 417.1850.

Спектр ЯМР 1Н (500 МГц, ДМСО-d6, 80°С) δ: 1.11 (д, J=6.9 Гц, 3 Н, Me), 1.36-1.40 (м, 2 Н, hexanoyl 2×Н-4), 1.58-1.66 (м, 4 Н, гексаноил 2×Н-3 и 2×Н-5), 2.48-2.52 (м, 1 H, гексаноил Н-2А, перекрывание сигналом ДМСО), 2.59-2.65 (м, 1 Н, гексаноил Н-2В), 3.56 (уш. с, 2 Н, гексаноил 2×Н-6,), 4.13 (дд, J=11.0, 2.6 Гц, 1 Н, Н-2А), 4.33 (дд, J=11.0, 1.2 Гц, 1 Н, Н-2В), 4.70-4.74 (м, 1 Н, Н-3), 6.68 (ддд J=9.8, 9.8, 8.5 Гц, 1 Н, Н-6), 7.21 (уш. с, 1 Н, гексаноил NH-6), 7.58 (уш. с, 1 Н, Н-5), 7.97 (с, 1 Н, пурин Н-8), 8.13 (с, 1 Н, пурин Н-2), 12.63 (уш. с, 1 Н, пурин NH-9).

Спектр ЯМР 19F (470 МГц, ДМСО-d6, 80°С) δ: 1.91-1.97 (м, 1 F, F-8), 20.05 (м, 1 F, F-7).

Спектр ЯМР 13С (125 МГц, ДМСО-d6) δ: 15.08, 24.42, 25.93, 28.93, 33.39, 44.99, 69.83, 79.10, 107.39 (д, J=17.9 Гц), 119.40, 119.97, 122.52, 136.49 (д, J=7.5 Гц), 139.23, 139.75 (дд, J=243.3, 15.4 Гц), 147.49 (дд, J=244.1, 9.5 Гц), 150.22, 152.31, 154.45, 170.95.

Пример 2

Синтез (3R)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2H-[1,4]бензоксазина ((R)-1)

К раствору 0,52 г (2,81 ммоль) (3R)-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2H-[1,4]бензоксазина ((R)-10) в 20 мл сухого дихлорметана при перемешивании прибавляют 0,45 мл (2,81 ммоль) N,N-диэтиланилина, затем 0,79 г (2,81 ммоль) хлорангидрида 6-фталимидогексановой кислоты (11) в 20 мл сухого дихлорметана. Реакционную смесь выдерживают при перемешивании и комнатной температуре 24 ч, после чего последовательно промывают 4 н. HCl (3×10 мл), насыщенным раствором NaCl (6×10 мл), 5% раствором NaHCO3 (3×10 мл), насыщенным раствором NaCl (3×10 мл). Органический слой отделяют и сушат над MgSO4, растворитель упаривают. Остаток очищают флеш-хроматографией на силикагеле (элюент бензол-этилацетат 8:2) и получают 0,75 г (63%) (3R)-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-4-(6-фталимидогексаноил)-2H-[1,4]бензоксазина ((R)-12) в виде светло-желтого масла, промежуточного соединения в синтезе соединения (R)-1. [α]D20 -68.2 (с 1.0, CHCl3). Ее>99%: ВЭЖХ (Chiralcel OD-H, гексан-изопропанол 5:1): τ 20.1 мин. Найдено (%): С 64.54; Н 4.99; F 8.82; N 6.28. Вычислено для C23H22F2N2O4 (%) С 64.48; Н 5.18; F 8.87; N 6.54.

Спектры ЯМР 1Н (500 МГц, ДМСО-d6), 19F (470 МГц, ДMSO-d6) и 13С (125 МГц, ДМSO-d6, 100°С) идентичны спектрам ЯМР 1Н, 19F и 13С соединения (S)-12.

0,70 г (1,63 ммоль) (3R)-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-4-(6-фталимидогексаноил)-2H-[1,4]бензоксазина ((R)-12) растворяют в 18 мл этанола, при перемешивании вносят 0,22 мл (2,94 ммоль, 1,8 экв) 64% раствора гидразин гидрата, смесь кипятят 2 ч. Затем этанол упаривают, к остатку приливают 20 мл 2 н. HCl и выдерживают при температуре +4°С 12 ч. Осадок фталилгидразида отфильтровывают, промывают 1 н. HCl (2×0,5 мл), к маточному раствору при перемешивании и охлаждении прибавляют твердый NaOH до pH 12. Продукт экстрагируют хлороформом (4×5 мл), органический слой сушат над NaOH. Растворитель упаривают, получают 0,28 г (57%) (3R)-(6-аминогексаноил)-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-4-2H-[1,4]бензоксазина ((R)-9) в виде бесцветного масла.

К раствору 0,097 г (0,63 ммоль) 6-хлорпурина (8) в 5 мл абсолютного этанола при перемешивании прибавляют 0,15 мл (1,06 ммоль; 1,7 экв.) триэтиламина и 0,28 г (0,94 ммоль; 1,5 экв.) (3R)-(6-аминогексаноил)-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-4-2H-[1,4]бензоксазина ((R)-9) в 5 мл абсолютного этанола, реакционную смесь кипятят 12 ч. Затем этанол упаривают, остаток растворяют в 20 мл хлороформа, промывают 1 н. HCl (3×5 мл), насыщенным раствором NaCl (3×5 мл), органический слой сушат над MgSO4, растворитель упаривают. Остаток очищают флеш-хроматографией на силикагеле (элюент хлороформ-этанол 9:1) и получают 0,12 г (46%) целевого соединения (R)-1 в виде бесцветных кристаллов. Т.пл. 87-89°С (разл.) [α]D20 -59.0 (с 1, МеОН). Ее>99%; ОФ ВЭЖХ ((S,S)-Whelk-O1, 80% МеОН): τ 17.4 мин.

Масс-спектр высокого разрешения. Найдено, m/z: 417.1845 [М+Н]+. C20H23F2N6O2. Вычислено, m/z: 417.1850.

Спектры ЯМР 1Н (500 МГц, ДМСО-d6, 80°С), 19F (470 МГц, ДМСО-d6, 80°С) и 13С (125 МГц, ДМSO-d6) идентичны спектрам ЯМР 1Н, 19F и 13С соединения (S)-1.

Пример 3

Изучение противовирусной активности (3S)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2H-[1,4]бензоксазина и (3R)-4-[6-(пурин-6-иламино)-гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2H-[1,4]бензоксазина в отношении вируса простого герпеса тип 1 (ВПГ-1)

Культуру клеток Vero Е6 (клетки почек африканских зеленых мартышек) поддерживают в среде Игла, содержащей 5% эмбриональной сыворотки телят.

Эталонный штамм вируса герпеса простого ВПГ-1/L2 получен из Государственной коллекции вирусов Института вирусологии им. Д.И. Ивановского (подразделение ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи МЗ РФ). Штамм ВПГ-1/L2/R, глубоко резистентный к ацикловиру, получен нами путем пассирования эталонного штамма в градиенте концентраций ацикловира с последующим троекратным клонированием. Свойства полученного варианта вируса были подробно описаны в ряде публикаций [Гуськова А.А., Загурный А.В., Скоблов М.Ю., Баранова А.В., Андронова В.Л., Янковский Н.К., Галегов Г.А., Скоблов Ю.С. Молекулярно-генетический анализ тимидинкиназы вируса герпеса простого тип 1 // Мол. биол. 2005, Т. 39 (1), 155-158; Gus'kova А.А., Skoblov M.Yu., Korovina A.N., Yasko M.V., Karpenko I.L., Kukhanova M.K., Andronova V.L., Galegov G.A., Skoblov Yu.S. Antiherpetic properties of acyclovir 5'-hydrogenphosphonate and the mutation analysis of herpes virus resistant strains // Chem. Biol. Drug Des. 2009, V. 74, 382-389; Коровина A.H., Гуськова А.А., Скоблов М.Ю., Андронова В.Л., Галегов Г.А., Кочетков С.Н., Куханова М.К., Скоблов Ю.С. Анализ мутаций в генах ДНК-полимераз и тимидинкиназ клинических изолятов вируса простого герпеса, резистентных к антигерпетическим препаратам // Мол. биол. 2010, Т. 44 (3), 488-96; Андронова В.Л., Галегов Г.А., Ясько М.В., Куханова М.К., Скоблов Ю.С. Сравнительное изучение лекарственной устойчивости вируса простого герпеса к ациклогуанозину и Н-фосфонату ациклогуанозина // Вопр. вирусол. 2010, Т. 55 (1), 31-34; Гуськова А.А., Скоблов М.Ю., Андронова В.Л., Галегов Г.А., Кочетков С.Н., Скоблов Ю.С. Ферментативная активность тимидинкиназы штаммов вируса простого герпеса, резистентных к Н-фосфонату ацикловира // Биоорг. химия 2011, Т. 17 (5), 627-630]. Генотипический анализ выявил две мутации в гене ТК, приводящие к аминокислотным заменам W88R, R220H. Фенотипически вирус был охарактеризован как ТК-негативный. ТК-негативный/дефицитный фенотип является самым распространенным в клинической практике: не менее 90% изолятов ВПГ, резистентных к ацикловиру, относятся к этому фенотипу. В качестве контроля используют ацикловир (ациклогуанозин, 9-[(2-гидроксиэтокси)метил]гуанин, acyclovir, зовиракс) производства Sigma Aldrich, США (брутто-формула C8H11N5O3, М 225.20, кат. номер 59277-89-3), тринатриевая соль фосфономуравьиной кислоты гексагидрат (Foscarnet sodium hexahydrate, Sodium phosphonoformate tribasic hexahydrate) производства Sigma Aldrich, США (брутто-формула CNa3O5P⋅6H2O, M 300,04, кат. номер 34156-56-4) и рибавирин (Ribavirin, виразол, 1-β-D-рибофуранозил-1,2,4-триазол-3-карбоксамид) производства Sigma Aldrich, США (брутто-формула C8H12N4O5, М 244.20, кат. номер 36791-04-5).

Вирусы поддерживают путем пассирования в средах Игла и 199, соединенных в соотношении 1:1. Изучение in vitro противогерпетической активности соединений (S)-1 и (R)-1 проводят в соответствии с принятым в международной практике методом СРЕ inhibition assay [De Clerck E., Descamps J., Verheist G., et al. // J. Infect. Dis. 1980, V. 141, 563-573; Gus'kova A.A., Skoblov M.Yu., Korovina A.N., et al. // Chem. Biol. Drug Des. 2009, V. 74, 382-389]. Для этого монослойную 24-часовую культуру клеток, выращенную в 96-луночных пластиковых планшетах, инфицируют с множественностью 0,1 БОЕ/кл. Результаты учитывают через 48 ч, когда в контрольных инфицированных культурах клеток вирус-индуцированый цитопатический эффект (ЦПЭ) развивался на 100%), то есть охватывал весь клеточный монослой. Антивирусное действие оценивают по способности изучаемых соединений ингибировать развитие вирусного ЦПЭ на 50% (ИД50) и 95% (ИД95) по сравнению с контрольными инфицированными культурами.

Цитотоксичность соединений количественно определяют по окрашиванию клеток трипановым синим. За величину ЦД50 принимают концентрацию соединения, при которой выживаемость неинфицированных клеток через 72 ч контакта с изучаемыми соединениями составляет 50%. Индекс селективности (ХТИ) вычисляют как отношение ЦД50 к ИД50.

Для сравнения была изучена противовирусная активность рацемического соединения ((RS)-1) в отношении вируса герпеса простого тип 1 (данные представлены в табл. 1).

Как следует из представленных результатов, испытанные соединения обладают способностью высокоселективно ингибировать репродукцию вируса герпеса простого тип 1 при использовании в нецитотоксических концентрациях в культуре клеток Vero Е6, причем эти соединения одинаково эффективны на обеих вирусных моделях - ВПГ-1/L2 (чувствительном к ацикловиру) и ВПГ-1/L2/R (резистентном к ацикловиру). Наибольшую противогерпетическую активность проявил (S)-изомер (соединение (S)-1, химиотерапевтический индекс, ХТИ 63). Показатель ИД50 для этого соединения превышает аналогичный показатель для (R)-изомера (соединение (R)-1) в 4 раза. Фармацевтические композиции на основе соединений могут быть перспективны для создания новых лекарственных средств, необходимых для лечения герпесвирусных инфекций.

Из данных таблицы 1 следует, что соединение (S)-1 проявляет высокую противовирусную активность как в отношении вируса герпеса простого (химиотерапевтический индекс, ХТИ 63), так и в отношении штамма, устойчивого к ацикловиру (ХТИ 63). Причем активность соединения (S)-1 превосходит активность фосфоноформата (тринатриевой соли фосфономуравьиной кислоты, являющейся в клинической практике препаратом выбора в случае неэффективности ацикловира и родственных соединений, включая случаи развития лекарственной резистентности), а также известного противовирусного препарата рибавирин (ХТИ>4).

Таким образом, применительно к конкретной модели in vitro соединения (S)-1 и (R)-1 могут быть отнесены к категории малотоксичных, учитывая, что 50%-ингибирующая концентрация достигается в присутствии изучаемых соединений в нецитотоксических концентрациях (данные ЦД50). Существенно, что избирательность противогерпесвирусного действия соединений (S)-1 и (R)-1 превосходит активность таких известных используемых в клинической практике препаратов, как фосфономуравьиная кислота или рибавирин. Фармацевтические композиции на основе соединений (S)-1 и (R)-1 могут быть перспективны для создания новых противовирусных средств.

1. (3S)-4-[6-(Пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метал-7,8-дифтор-2H-[1,4]бензоксазин и (3R)-4-[6-(пурин-6-иламино)гексаноил]-3,4-дигидро-3-метил-7,8-дифтор-2H-[1,4]бензоксазин формул:

2. Соединения по п. 1, обладающие избирательной противовирусной активностью в отношении вирусов герпеса простого типа 1 и действующие на вирусные штаммы с лекарственной резистентностью к ацикловиру и родственным соединениям.

3. Фармацевтические композиции, обладающие противовирусным действием в отношении вирусов герпеса простого типа 1, включающие в качестве активной субстанции любое из соединений по п. 1 или их комбинацию в эффективной терапевтической дозе и фармацевтически приемлемые носители.



 

Похожие патенты:

Настоящее изобретение относится к новым соединениям формулы V-A или их фармацевтически приемлемым солям, обладающим свойствами ингибиторов активности PI3-киназы (фосфатидилинозитол-3-киназы).

Изобретение относится к новым сокристаллам теофиллина с дифлунисалом или диклофенаком при молярном соотношении теофиллина с указанными компонентами 1 : 1. Сокристаллы обладают прежде всего противовоспалительным, жаропонижающим и противоболевым действием и пригодны для приготовления фармацевтических препаратов.

Изобретение относится к циклогексиламмониевой соли [3-метил-1-н-пропил-7-(1-оксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты формулы Технический результат - получено и описано новое соединение, которое может найти применение в медицине в качестве антиагрегационного и антикоагуляционного средства.

Изобретение относится к медицине, а именно к фармацевтической химии и фармакологии, и может быть использовано для создания новых лекарственных средств, обладающих проагрегантной активностью.

Изобретение относится к новым производным ксантина формулы I, обладающим ингибирующим действием фосфоенолпируваткарбоксикиназы (ФЕПКК). .

Изобретение относится к новым соединениям формул I и Ia во всех их стереоизомерных формах или их смесях во всех соотношениях и их фармацевтически приемлемым солям, обладающим антагонистической активностью в отношении рецептора витронектина.

Изобретение относится к новым производным пурина формул I, II, III и IV, фармацевтической композиции на их основе и способу лечения болезненного состояния, характеризующегося тромботической активностью.

Изобретение относится к новым производным замещенного пуринила, обладающим иммуномодуляторной, в частности иммуностимуляторной, активностью как in vivo, так и in vitro и не проявляющих токсичности, к фармацевтической композиции и способу замедления роста опухоли.

Изобретение относится к медицине и органической химии и касается проблемы создания новых лекарственных препаратов, ингибирующих пролиферацию лимфоцитов. .

Изобретение относится к аналогам дидезоксикарбоциклических нуклеозидов. .

Изобретение относится к форзициазида сульфату и его производным, представленным следующей формулой, где R представляет собой Na+, K+ или NH+, и способу их получения, а также к противовирусному лекарственному средству на их основе и его применению.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложены рекомбинантный полипептид гемагглютинин (НА) вируса гриппа для вызова иммунного ответа на вирус гриппа H5N1, содержащий аминокислотную последовательность из остатков 2-568 SEQ ID NO: 1, кодирующая его нуклеиновая кислота, содержащие предложенный полипептид слитый белок и вирусоподобная частица (VLP) для вызова ответа на вирус гриппа H5N1, вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту, и выделенная клетка, его содержащая, композиция и способ вызова иммунного ответа против вируса гриппа H5N1, а также способ иммунизации субъекта.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, и может быть использована для лечения пациента, инфицированного вирусом гриппа. Способы по изобретению включают введение инфицированному пациенту терапевтически эффективного количества эриторана или его фармацевтически приемлемой соли.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой средство, обладающее противовирусной активностью в отношении вируса гриппа, представляющее собой бисульфитные производные окисленных линейных или циклических невосстанавливающих олигосахаридов, содержащих до 7 одинаковых моносахаридных остатков глюкозы, имеющее в своем составе бисульфитную группировку, связанную непосредственно с атомом углерода общей формулы [(Gluox)n-Cx]-(SO3M)x, где n=2-7; х=4-14, М = металл натрий или калий) со степенью замещения, в пересчете на количественное содержание серы, 11,5-14,5%.

Изобретение относится к медицине и фармацевтической промышленности и представляет собой интраназальное средство для профилактики гриппа, содержащее окисленный декстран с молекулярной массой 40-70 кДа, бензоат натрия, сорбат калия и фармацевтически приемлемый растворитель, причем компоненты в средстве находятся в определенном соотношении, в мас.%.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к составу лекарственного средства, обладающего противовирусным действием, и способу его получения.

Группа изобретений относится к медицине и касается композиции микрочастиц, включающих сиалидазный слитый белок и сульфат магния или сульфат натрия. Группа изобретений также касается композиции микрочастиц, содержащих сиалидазный слитый белок, полученной способом, включающим добавление противоиона, выбранного из цитрата натрия, сульфата натрия, сульфата кальция, сульфата калия и сульфата магния, к водному раствору, содержащему слитый белок, добавление органического растворителя, выбранного из метанола, этанола, 1-пропанола, изопропанола, трет-бутилового спирта и бутанола, к данному раствору и постепенное охлаждение раствора до температуры ниже 25°С; и касается способа лечения гриппа или парагриппа, включающего введение пациенту указанных композиций.

Изобретения относятся к области медицины и вирусологии. Представлены аттенуированные вирусы гриппа А, векторы на их основе и содержащие их фармацевтические композиции.

Изобретение относится к 2-[5-(2-хлор-4-метилфенил)-4-фенил-4Н-[1,2,4]тризол-3-илмеркапто]-N-(3,5-диметилфенил)ацетамиду, имеющему структурную формулу (I): .Изобретение также относится к применениям соединения, к фармацевтической композиции, к лекарственной форме, к способу профилактики или лечения гриппа.

Изобретение относится к противогриппозному средству, обладающему противовирусной активностью в отношении вирусов гриппа А и действующему на штаммы, резистентные к действию ремантадина и амантадина.

Изобретение относится к фармацевтической химии, фармакологии и медицине. Предложено применение 3-метил-8-(пиперазин-1-ил)-7-(тиетан-3-ил)-1H-пурин-2,6(3H,7H)-диона гидрохлорида, или 1,3-диметил-8-(пиперазин-1-ил)-7-(тиетан-3-ил)-1Н-пурин-2,6(3H,7H)-диона гидрохлорида, или 1-бутил-3-метил-8-(пиперазин-1-ил)-7-(тиетан-3-ил)-1H-пурин-2,6(3H,7H)-диона гидрохлорида, или 1-бензил-3-метил-8-(пиперазин-1-ил)-7-(тиетан-3-ил)-1H-пурин-2,6(3H,7H)-диона гидрохлорида в качестве средства, проявляющего антитромботический эффект посредством блокирования рецепторов тромбоцитов ГП IIb-IIIa.

Изобретение относится к новым производным пурина формул: . Технический результат: получены новые производные, обладающие избирательной противовирусной активностью в отношении вирусов герпеса простого типа 1 и действующие на вирусные штаммы с лекарственной резистентностью к ацикловиру и родственным соединениям. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 1 табл., 3 пр.

Наверх