Способ стимулирования ангиогенеза с использованием генетически модифицированных клеток крови пуповины




Владельцы патента RU 2663470:

Саматошенков Игорь Валерьевич (RU)
Андреев Сергей Александрович (RU)
Челышев Юрий Александрович (RU)
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Казанский государственный медицинский университет" (RU)

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ стимулирования ангиогенеза, в котором в область ишемии вводят трансдуцированные комбинацией Ad VEGF + Ad Ang мононуклеарные клетки крови пуповины. Изобретение обеспечивает увеличение количества и размеров эндотелиальных клеток и может быть полезно при лечении различных видов ишемических поражений. 1 з.п. ф-лы, 1 пр.

 

Изобретение относится к медицине, касается стимулирования ангиогенеза и может быть использовано в сердечно-сосудистой хирургии для лечения ишемии с использованием генно-клеточного материала.

В настоящее время ишемия, в частности хроническая ишемия нижних конечностей, лечится медикаментозным и оперативным путем, однако ни один из применяемых в практической медицине методов в полной мере не устраняет основную причину и не приводит к полному восстановлению микроциркуляции пораженной ткани. Так, по мнению ряда авторов, улучшение гемодинамики конечности хирургическим путем, возможна лишь в 70% всех случаев [Савельев, 1997].

Известно, что существуют способы введения ангиогенных генов для стимулирования ангиогенеза. Основу лечебной тактики ангиогенеза, предложенной М. в 1993 г. [. М., Schlenger К., Doctrow S. Therapeutic angiogenesis. Arch. Surg. 1993; 128: 423-9.], составляет стимулирование ангиогенеза в ишемизированных тканях под действием ангиогенных факторов роста, например при помощи VEGF. Данный ген можно вводить при помощи аденовируса (Ad VEGF) в виде инъекции в мышечную ткань, испытывающую ишемию, в виде прямой генной терапии. Согласно данным литературы, в условиях прямой генной терапии показано улучшение структуры и функции ишемизированной мышцы [Jazwa A, Tomczyk М, Taha НМ, Hytonen Е, Stoszko М, Zentilin L, Giacca М, Yla-Herttuala S, Emanueli С, Jozkowicz A, Dulak J. Arteriogenic therapy based on simultaneous delivery of VEGF-A and FGF4 genes improves the recovery from acute limb ischemia. Vascular Cell 2013, 5:13. doi: 10.1186/2045-824X-5-13.; Sanada F, Taniyama Y, Azuma J, Yuka I, Kanbara Y, Iwabayashi M, Rakugi H, Morishita R. Therapeutic Angiogenesis by Gene Therapy for Critical Limb Ischemia: Choice of Biological Agent. Immunol Endocr Metab Agents Med Chem. 2014; 14 (1): 32-39].

Известен способ введения комбинации генов в поврежденную нервную ткань. (Патент РФ C12N 15/79 (2006.01) №2459630) путем доставки в область повреждения спинного мозга прямым введением плазмидного вектора на основе двухкассетной плазмиды pBud-VEGF-FGF2, одновременно экспрессирующей комбинацию клонированных генов нейротрофических и ангиогенных факторов человека VEGF и FGF2). Однако этот способ имеет отношение к восстановлению нервной ткани, и не используется для стимулирования ангиогенеза.

Более близких аналогов к заявляемому изобретению обнаружено не было. Обнаруженные изобретения касаются восстановления функции нервной ткани.

Задачей предлагаемого изобретения является создание способа, который бы давал возможность эффективного стимулирования ангиогенеза для формирования нового сосудистого русла.

Поставленная задача решается предлагаемым способом стимулирования ангиогенеза путем введения трансдуцированных Ad VEGF + Ad Ang мононуклеарных клеток крови пуповины (МККП) в область ишемии.

Данные клетки вводят в область ишемии в объеме 0,2 мл клеток, с трансдуцированными генами VEGF + ANG, с общим количеством вирусных частиц в объеме 2×1010.

Заявляемый способ иллюстрируется следующими исследованиями: Данное исследование проводили на 30 особях крыс мужского пола линии Wistar массой 220-280 г. Все вмешательства соответствовали правилам, утвержденным локальным этическим комитетом при Казанском государственном медицинском университете. Животных содержали в пластмассовых клетках при температуре 18-20°C со свободным доступом к воде и пище. Хирургические манипуляции на крысах проводили после их наркотизирования путем внутрибрюшинной инъекции хлоралгидрата (Sigma) (80 мг/мл, 0,4 мл на 100 г). Ишемию задней конечности создавали путем наложения на бедренную артерию сразу у места отхождения от подвздошной артерии двух лигатур, которые плотно затягивали. Участок между лигатурами резецировали. После операции животные получали инъекцию 1 мл разведенного в физиологическом растворе антибиотика гентамицина в мышцу бедра на неоперированной ноге с целью профилактики послеоперационных инфекционных осложнений. Сразу после создания ишемии крысы получали трансдуцированные Ad VEGF + Ad Ang МККП, в объеме 60 мкл, в 4 точки в дистальную часть икроножной мышцы оперированной конечности, по 15 мкл в каждую точку, общая концентрация вирусных частиц, кодирующих VEGF и Ang 2×1010.

Примеры выполнения способа. Перед оперативным вмешательством животное наркотизировали внутрибрюшинной инъекции хлоралгидрата (Sigma) (80 мг/мл, 0,4 мл на 100 г). Операционное поле в области медиальной части голени и бедра очищали от шерсти. Ишемию задней конечности создавали путем наложения на бедренную артерию сразу у места отхождения от подвздошной артерии двух лигатур, которые плотно затягивали. Участок между лигатурами резецировали. После операции животные получали инъекцию 1 мл разведенного в физиологическом растворе антибиотика гентамицина в мышцу бедра на неоперированной ноге с целью профилактики послеоперационных инфекционных осложнений. Сразу после оперативного вмешательства после зашивания кожи крысы получали трансдуцированные Ad VEGF + Ad Ang МККП, в объеме 60 мкл, в 4 точки в дистальную часть икроножной мышцы оперированной конечности, по 15 мкл в каждую точку, общая концентрация вирусных частиц, кодирующих VEGF и Ang 2×1010. Результаты работы были оценены по количеству и среднему размеру эндотелиальных клеток, выявляемых на продольных срезах при помощи антител против CD31 и CD34- иммунопозитивных клеток, позволяющие идентифицировать эндотелиальные клетки как маркеры ангиогенеза. По сравнению с контрольной группой животных, получавших 60 мкл NaCl в дистальную часть икроножной мышцы в том же объеме и в те же точки, зарегистрировали значительное увеличение как количества эндотелиальных клеток, так и их размеров. Полученные данные позволяют утверждать, что у животных из группы Ad VEGF + Ad ANG МККП, произошли такие процессы как гипертрофия и гиперплазия эндотелиальных клеток, что можно трактовать как усиление ангиогенеза.

По сравнению с прямой генной терапией, предполагающей непосредственную инъекцию ДНК-содержащих векторов в организм, клеточно-опосредованная доставка терапевтических генов имеет очевидные преимущества. Главное из них, основанное на феномене адресной миграции клеток (хоуминг), состоит в потенциальной возможности обеспечить доставку генов к множественным очагам ишемии, наличие которых характерно для проявления большинства ишемических заболеваний. Другое преимущество генно-клеточной терапии связано с возможностью длительной продукции в области повреждения молекул стимуляторов регенерации в оптимальных дозах. Наконец, сами трансплантируемые клетки служат источником молекул-стимуляторов регенерации и молекул внеклеточного матрикса, поддерживающих рост новых сосудов.

Авторами впервые исследована и показана возможность эффективного стимулирования ангиогенеза для формирования нового сосудистого русла, что позволит эффективнее лечить такие заболевания как ишемия нижних конечностей, а так же в перспективе большинство сосудистых заболеваний, связанных со стенозом или окклюзией артериального русла вследствие атеросклероза- ишемическая болезнь сердца, хроническая ишемия головного мозга, путем создания нового коллатерального русла, или биологического шунтирования, основанного на применении генно-модифицированных стволовых клеток.

1. Способ стимулирования ангиогенеза с использованием генетически модифицированных клеток крови пуповины, заключающийся в том, что в область ишемии вводят трансдуцированные комбинацией Ad VEGF + Ad Ang мононуклеарные клетки крови пуповины.

2. Способ стимулирования ангиогенеза по п. 1, заключающийся в том, что трансдуцированные комбинацией Ad VEGF + Ad Ang мононуклеарные клетки крови пуповины вводят в область ишемии в объеме 0,2 мл клеток с трансдуцированными генами VEGF + ANG с общим количеством вирусных частиц в объеме 2×1010.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению вектора экспрессии, содержащего (а) нуклеотидную последовательность С68 и (б) мультиантигенную конструкцию ДНК, кодирующую иммуногенные полипептиды простатоассоциированных антигенов (РАА), что может быть использовано в медицине.

Предложенное изобретение относится к области биотехнологии. Предложен рекомбинантный аденовирус для обнаружения раковых клеток или диагностики рака, содержащий репликативную кассету, маркерную кассету, ген, который кодирует связывающий CD46 фибриллярный белок.

Предложенное изобретение относится к области биотехнологии. Предложен рекомбинантный аденовирус для обнаружения раковых клеток или диагностики рака, содержащий репликативную кассету, маркерную кассету, ген, который кодирует связывающий CD46 фибриллярный белок.

Изобретение относится к области биотехнологии. Описан самокомплементарный аденоассоциированный вирусный вектор для лечения нарушений двигательных нейронов, таких как спинальная мышечная атрофия, боковой амиотрофический склероз, спинобульбарная мышечная атрофия, спиноцеребеллярная атаксия, первичный латеральный склероз и травматическое повреждение спинного мозга.

Изобретение относится к области биотехнологии и вирусологии. Описан способ очистки векторов на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV).

Настоящее изобретение относится к модификациям белков аденовирусов с целью усиления иммунного ответа на трансген рекомбинантного аденовируса и преодоления предсуществующего иммунитета к аденовирусам.

Изобретение относится к области молекулярной биологии. Предложен способ получения постоянной линии клеток-амниоцитов человека, включающий трансфекцию зародышевых клеток-амниоцитов человека молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую продукты генов аденовирусов Е1А и Е1В, причем указанную последовательность нуклеиновой кислоты получают из серотипа 5 аденовируса человека, и последующую трансфекцию постоянной линии клеток-амниоцитов человека, полученной на первом этапе, молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую большой SV40 Т-антиген.

Представленные изобретения относятся к области биотехнологии и, в частности, онкологии и касаются онколитического аденовируса, его применения и фармацевтической композиции, содержащей такой аденовирус.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается кДНК, кодирующей дисферлин человека, генно-инженерной конструкции, в которую клонирована такая кДНК, рекомбинантного аденовируса и фармацевтической композиции.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой онколитический аденовирусный вектор, клетку и фармацевтическую композицию, содержащую указанный вектор, а также применение указанных векторов в производстве лекарственного средства для лечения рака у субъекта и к способу лечения рака у субъекта.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой жидкофазную композицию природных жирных кислот антиатерогенного действия, представляющую собой жидкую смесь жирных кислот, выделяемых из жировой ткани нерпы кольчатой (Phoca Hispida) с содержанием омега-3 полинепредельных жирных кислот 30,8±0,7 мас.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии. Перед эндоваскулярным этапом лечения, включающим эндоваскулярную коронарную ангиопластику и стентирование инфаркт-связанной артерии, у пациента осуществляют забор костного мозга в количестве 120-140 мл из области рукоятки грудины и области передневерхней ости подвздошной кости.

Группа изобретений относится к медицине и касается моноклонального антитела против фактора XII/XIIa или его антигенсвязывающего фрагмента, аффинность связывания с фактором XIIa-бета человека которого в 2 раза больше аффинности связывания с фактором XII человека и которое способно полностью ингибировать амидолитическую активность фактора XIIa человека.

Изобретение относится к эфирам янтарной кислоты 5-гидроксиадамантан-2-она и к их изучению на локальный кровоток в коре большого мозга в условиях глобальной преходящей ишемии.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой новое производное 4-гидроксибензамида, а именно 4-(4-ацетоксибензоиламино)бутаноилглицина: обладающее выраженным церебропротекторным действием, при ишемии головного мозга.

Настоящее изобретение относится к новому дейтерированному соединению хиназолинона формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, обладающим свойствами ингибитора PI3К.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой фармацевтическую композицию для профилактики и лечения атеросклероза, содержащую экстракт красного дрожжевого риса с содержанием монаколина К не менее 4,5 мас.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к кардиотоническому средству при хронической сердечной недостаточности. Предложено применение густого экстракта из травы первоцвета весеннего (Primula veris L.) в качестве кардиотонического средства при хронической сердечной недостаточности.

Изобретение относится к новым производным хиназолин-4(3H)-она общей формулы где R1=Н или СН3; R2=Н, СН3, Сl или Br; R3=Н или Вr; R4=Н или СН3, которые обладают ингибиторной активностью в отношении натрий-водородного обменника первой изоформы.

Изобретение относится к медицине и касается способа лечения геморрагического шока или массивной кровопотери у млекопитающих, который включает введение млекопитающему транексамовой кислоты в количестве от 0,005 до 0,5 г/кг массы тела в комбинации с рекомбинантным полноразмерным SERPING1 или его серпиновым доменом в количестве от 10 до 900 ME/кг массы тела.

Изобретение относится к биотехнологии. Описан способ модифицирования заданного сайта-мишени в последовательности нуклеиновой кислоты-мишени в клетке-хозяине с помощью программируемого нуклеопротеинового молекулярного комплекса.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ стимулирования ангиогенеза, в котором в область ишемии вводят трансдуцированные комбинацией Ad VEGF + Ad Ang мононуклеарные клетки крови пуповины. Изобретение обеспечивает увеличение количества и размеров эндотелиальных клеток и может быть полезно при лечении различных видов ишемических поражений. 1 з.п. ф-лы, 1 пр.

Наверх